פרוטוקול זה מציג שיטות להערכת התפלגות וכמות שקיעת הברזל ברקמות, במיוחד במוח. הפרוטוקול מפרט את הנהלים להכנת דגימה, צביעת Perls/DAB, לכידת תמונה וניתוח נתונים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הערכת שקיעת ברזל במוחם של עכברי 5xFAD על ידי צביעת Perls/DAB
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מחלת אלצהיימר (AD), מחלה ניוונית נפוצה, היא הגורם המוביל לדמנציה בקרב קשישים. שקיעת ברזל קשורה קשר הדוק לפתוגנזה של אלצהיימר. במוח אלצהיימר, רמות ברזל גבוהות קשורות מאוד לפתולוגיות אופייניות של אלצהיימר, כולל פלאק β-עמילואיד, סבכים נוירו-פיברילריים של טאו ואפופטוזיס. עדויות הולכות וגדלות מצביעות על כך שמתח חמצוני, עקב חילוף חומרים לא מווסת של ברזל, ממלא תפקיד חשוב בפתופיזיולוגיה של אלצהיימר. הבנת תפקידה של הצטברות ברזל בפתולוגיה של אלצהיימר היא, אם כן, קריטית לטיפול במחלת אלצהיימר. פרוטוקול צביעת ברזל מקיף חיוני לאיתור ביטוי ופיזור ברזל במוח. פרוטוקול זה נועד לתאר שיטה להערכת הכמות וההתפלגות של שקיעת ברזל במוח. אנו מתארים את התהליכים שמעורבים בהכנת ריאגנטים, טיפול בעכברים והכנת חתכים במוח. בנוסף, אנו מציגים פרוטוקול מפורט שלב אחר שלב לזיהוי ברזל היסטוכימי בקטעי רקמת מוח, מלווה במסגרת אנליטית שיטתית המשלבת הן הערכה כמותית והן הערכה מורפולוגית כדי להבטיח פרשנות מקיפה של תוצאות הצביעה. פרוטוקול ניסיוני זה יעזור לחוקרים להבין את שקיעות הברזל במוח ולתמוך במחקר אלצהיימר.
מבוא
מחלת אלצהיימר (AD) היא המחלה הנוירודגנרטיבית הנפוצה ביותר והפכה לבעיה רצינית עבור החברה. השכיחות של אלצהיימר עולה באופן דרמטי עם גיל 1,2,3,4. סימני ההיכר הפתולוגיים העיקריים של מחלת אלצהיימר (AD) כוללים שקיעה של פלאק β-עמילואיד (Aβ) וסבכים נוירו-פיברילריים (NFTs) עקב זרחון חריג של חלבוני טאו. Aβ נוצר באמצעות פיצול רציף של חלבון מבשר עמילואיד (APP) על ידי אנזימי β-secretase ו-γ-secretase. חוסר ויסות בייצור או בפינוי Aβ מוביל להצטברותו במוח, ויוצר פלאק עמילואיד, המוכר כאחד הסמנים הפתולוגיים המוקדמים ביותר של אלצהיימר. הפלאק הזה לא רק גורם לנזק ישיר לתאי העצב, אלא גם גורם לשרשרת של השפעות מזיקות, כולל דלקת עצבית, עקה חמצונית והפרעות בתפקוד הסינפטי. באופן קולקטיבי, תהליכים אלה תורמים למוות עצבי ולירידה הקוגניטיבית המתקדמת שנצפתהב-AD5. למרות עשרות שנים של מחקר המתמקד בעיקר בסימני ההיכר הפתולוגיים של מחלת אלצהיימר (AD), כולל שקיעת פלאק β עמילואיד וצבירת חלבון טאו היפר-זרחני, פריצות דרך טיפוליות משמעותיות מבחינה קלינית נותרו חמקמקות, כאשר התערבויות קיימות מוכיחות יעילות מוגבלת בשינוי התקדמות המחלה6.
ברזל הוא מתכת חשובה לשמירה על תפקוד המוח ומעורב בהובלת חמצן, סינתזת DNA, נשימה מיטוכונדריאלית, סינתזת מיאלין, סינתזת מוליכים עצביים וחילוף חומרים. עם זאת, ברזל הופך למזיק כאשר הריכוזים חורגים מיכולת הקיבוע התאית 6,7,8. שקיעת ברזל מוגברת, בדרך כלל במקביל לפלאק Aβ, נצפתה הן בקליפת המוח והן בהיפוקמפוס בחולים עם AD 9,10. באמצעות תגובת פנטון11, ברזל חופשי תוך-תאי יכול לייצר רדיקלים הידרוקסיליים (•OH) כמו גם מיני חמצן תגובתיים. חומרים מזיקים אלה לא רק גורמים לדלקת עצבית על ידי הפעלת תאי גליה, אלא גם תוקפים את הביו-מולקולות של התא באמצעות עקה חמצונית, משבשים את תפקוד התאים התקין ומובילים לתפקוד סינפטילקוי. יתר על כן, עלייה בברזל מעורבת ישירות בהתפתחות סימנים פתולוגיים של אלצהיימר: ברזל תורם לייצור Aβ12 וגם מגביר את תפקוד חלבון הטאו, מה שמוביל לסבכים נוירו-פיברילריים13.
פותחו מספר טכניקות להערכת תכולת הברזל במוח, כולל הדמיית תהודה מגנטית (MRI), כמו גם שיטות כימיות והיסטוכימיות14. כימות in vivo של רמות הברזל התוך מוחי באמצעות MRI חשוב מבחינה קלינית לחולי הזדקנות וניוון עצבי15. ל-MRI יש יתרון בכך שהוא לא פולשני ורגיש מאוד: הוא יכול לזהות שקיעת ברזל בשלבים המוקדמים של המחלה. בפרט, טכניקת הגדלת R2 תלוית שדה (FDRI) יכולה להבחין בין צורות שונות של ברזל, כגון ברזל פריטין וברזל הם16. עם זאת, MRI אינו יכול לזהות הצטברות ברזל ברמה התאית, והוא יקר, ולכן הוא משמש בעיקר במחקרים קליניים17.
מדידה קולורימטרית היא שיטה כימית הקובעת את ריכוז החומר (כגון ברזל) על ידי מדידת עוצמת הצבע המופק מתגובת החומר בתמיסה עם חומר כרומוגני18. שיטה זו קלה לביצוע ומשתמשת בריאגנטים ומכשור בעלות נמוכה, מה שהופך אותה למתאימה למעבדות עם תקציבים מוגבלים18. עם זאת, הדיוק והרגישות של שיטה זו מוגבלים מאוד, שכן התוצאות נתונות להשפעה של גורמים סביבתיים, זמן התפתחות הצבע והשיפוט הסובייקטיבי של המפעיל. ספקטרומטריית ספיגה אטומית להבה (FAAS) היא שיטה נוספת שניתן להשתמש בה כדי להעריך את רמות הברזל19. בשיטה זו מתקבלת תמיסת דגימה מובהרת על ידי שריפת הרקמה המעניינת בתנור בטמפרטורה גבוהה. לאחר מכן הדגימה מומסת באמצעות חומצה הידרוכלורית, וריכוז הברזל בתמיסה נקבע באמצעות ספקטרומטריית ספיגה אטומית. שיטה זו רגישה ביותר ומתאימה לכל סוגי הדגימות הביולוגיות19. עם זאת, התהליך גוזל זמן ודורש ציוד יקר, ולכן השימוש בו מוגבל.
צביעת Perls/DAB לזיהוי ברזל ברזל שאינו הם היא שיטת זיהוי הברזל הנפוצה ביותר בגלל הספציפיות הגבוהה וקלות היישום שלה בהשוואה לשיטות היסטוכימיות אחרות14. בניגוד לניתוח קולורימטרי, הצביעה של פרלס היא שיטת צביעה היסטוכימית איכותית המסתמכת על התגובה בין יוני ברזל לאשלגן פרוציאניד ליצירת משקעים כחולים. הוא משמש להמחשה מיקרוסקופית של נוכחות והפצה של ברזל ברקמות. יתר על כן, שיטה זו מאפשרת לנו להבחין בשקיעת ברזל בסוגי תאים שונים ולצפות בהתפלגות התת-תאית של שקיעת ברזל, ומספקת שיטה לחקר AD20. הכתם של פרלס מזהה בעיקר ברזל ברזל שאינו הם ותלוי בהיווצרות הקומפלקס הכחול הפרוסי:
(כחול פרוסי)
עם זאת, כתם פרלס המסורתי אינו יעיל לזיהוי לוקליזציה של ברזל ברמות ברזל נמוכות. כאשר מוסיפים diaminobenzidine (DAB), הוא מגיב עם ברזל hexacyanoferrate ליצירת תרכובת חומה, מה שמגדיל את הספציפיות של הבדיקה21.
מטרת הפרוטוקול הזה היא לתאר כיצד להעריך את הכמות וההתפלגות של שקיעת ברזל במוח של מודל עכבר אלצהיימר. בפרוטוקול זה, עכברים טרנסגניים בני 8 חודשים 5×FAD (C57BL/6J) שימשו כמודל עכברי AD והושוו לעכברים מסוג בר באותו גיל. פרטים על ההליכים להכנת המגיב הכימי, חתך המוח, ביצוע צביעת Perls/DAB וניתוח תמונות שצולמו לאחר הצביעה מוצגים כאן.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית שוג'ואו והתקנות הממשלתיות הסיניות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה.
1. זלוף של בעלי חיים
- הכן את הקיבוע: ממיסים 4% פרפורמלדהיד (PFA) ב-1× מי מלח עם חוצץ פוספט (PBS) (ראה טבלה 1).
- להרדים את העכבר על ידי הזרקה תוך-צפקית עם קטמין (100 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (15 מ"ג/ק"ג). לאחר שהעכבר מורדם, קבע אותו למגש ניתוח הזלוף עם ארבעה סיכות כדי לאבטח את הגפיים.
זהירות: כדי להבטיח הרדמה תקינה, בדוק אם יש אובדן תגובות לצביטה באצבעות, הרפיית שרירי הגפיים ונשימה עמוקה, איטית ויציבה. - חותכים את החזה במספריים כדי לחשוף את הלב ולחתוך את הפרוזדור הימני. הזריק 20 מ"ל של 1× PBS לחדר השמאלי עם מזרק כדי לשטוף את הדם. לאחר מכן, הזרקו 20 מ"ל של 4% PFA לקיבוע.
הערה: שלוט בעומק ובכיוון המחט כדי למנוע ניקוב המחיצה הבין חדרית. זכור כי זלוף אופטימלי כולל כבד חיוור וגפיים נוקשות לאחר הרעד הראשוני. - ערפו את ראשו של העכבר המנופח, חתכו את העצם סביב הגולגולת בעזרת מספריים עדינים, הרימו את הגולגולת בזהירות באמצעות מלקחיים קהים וחלצו את המוח. לאחר מכן, השרו את המוח ב-4% PFA ב-4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
אזהרה: היזהר עם 4% PFA, שהוא מגרה נשימתי חזק. חבשו מסכה מתאימה ובצעו שלב זה במכסה אדים.
הערה: שיטת המתת החסד אושרה על ידי IACUC של התוכנית לטיפול ושימוש בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית Xuzhou הנחיות המתת חסד: עכברים / חולדות.
2. הקפאת מוח
- יבשו את המוח עם תמיסות סוכרוז מדורגות (15% ו-30%) בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות לכל שלב. המוח אמור סוף סוף לשקוע לתחתית תמיסת הסוכרוז.
- חתכו את המוח לאורך הסדק הבין-המיספרי בעזרת אזמל. הכניסו את החצי השמאלי לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה של 5 מ"ל מלא ב-1 מ"ל של תמיסת סוכרוז של 30% ונפח שווה של תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) כדי לשפר את המגע בין ה-OCT למוח.
- חתוך רקמה זרה מחצי הכדור השמאלי בעזרת סכין גילוח והעבר אותה לפלטפורמת OCT.
- הטמע את הרקמה ב-OCT בתמיכת קיר עגול עשוי נייר אלומיניום.
- הקפיאו את הרקמה במיקרוטום קריוסטט בטמפרטורה של -22 מעלות צלזיוס למשך שעה אחת לפחות והגדירו את טמפרטורת ראש החיתוך ל-19 מעלות צלזיוס.
הערה: זכור לקרר מראש את הזכוכית והמברשות נגד גלגול בקריוסטט יחד עם הדגימה. - הרכיב את גוש הרקמות הקפוא. חתוך שוב את גוש הרקמה למיקום מתאים בהתאם לאזור העניין ואז התחל לחתוך את המוח למקטעים סגיטליים בעובי 20 מיקרומטר.
הערה: אם החלקים מתקפלים, השתמש במברשות רכות כדי לפרוש את החלקים. - אוספים כל חלק על השקופיות המצופות ג'לטין ומורחים עליו טיפה של 1× PBS. הפוך את חלק המוח באמצעות מברשת עדינה ולאחר מכן הרכיב במהירות את החלק על המגלשה.
- יבש את החלקים שנאספו בטמפרטורת החדר למשך הלילה ואחסן אותם בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס.
הערה: ניתן להשהות את הפרוטוקול כאן עד שבועיים. זמן אחסון ארוך יותר עלול להפריע לאיכות הרקמה ובכך להשפיע על תוצאות הניסוי.
3. צביעה של Perls/DAB
- הכן את התמיסות הבאות: 2% אשלגן פרוציאניד (K4[Fe(CN)6]·3H2O), 2% חומצה הידרוכלורית (HCI) ו-20× תמיסת DAB (ראה טבלה 1).
- הכניסו שקופית המכילה חלקים לצנצנת מכתים מלאה ב-1× PBS והניחו את הצנצנת על שייקר אורביטלי למשך 5 דקות כדי לשטוף את ה-OCT מהרקמה.
הערה: כוונן את מהירות שייקר המסלול בזהירות (מהירות מומלצת: 20 סל"ד) כדי למנוע נפילת רקמות מהמגלשה במהירויות גבוהות. - מערבבים 20 מ"ל של תמיסת אשלגן פרוציאניד 2% ונפח שווה של 2% חומצה הידרוכלורית בצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל.
- השתמש במלקחיים מפלסטיק כדי להעביר את המגלשה לצינור של 50 מ"ל ולאחר מכן לחמם את הצינור באמבט מים בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
- שטפו את השקופית עם 1× PBS ומחקו כל תמיסה עודפת בנייר טישו.
- השתמש בפיפטה כדי להוסיף 50 מיקרוליטר של תמיסת DAB לכל חלק במוח ולדגור במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
- שאפו את תמיסת ה-DAB העודפת בעזרת פיפטה ולאחר מכן שטפו את השקופית 3 פעמים ב-PBS.
- יבשו את החלקים בתמיסות אלכוהול מדורגות (50%, 70%, 95%, 100%) וקסילן (100%, 100%). דגרו את השקופיות למשך 3 דקות כל אחת.
- אטום את החלקים עם מסטיק ניטרלי22 ולאחר מכן הנח את הכיסוי.
- יבש את השקופיות במכסה אדים למשך 24 שעות לפני אחסונן בקופסת שקופיות מיקרוסקופ.
4. הדמיה
- הפעל את המיקרוסקופ, כוונן את בהירות מקור האור והתמקד בחלק המוח תחת יעד הגדלה של 4×.
- צלם את התמונה עם תוכנת בקרת מצלמה והתאם את הגדרות הפרמטרים כדי למנוע חשיפת יתר. ההגדרות הספציפיות (10×, 40× מטרה) מוצגות באיור 1.
הערה: הימנע משימוש באיזון לבן אוטומטי כדי להבטיח זמן חשיפה זהה לכל תמונה. - עברו למטרת הגדלה של 10×, הזיזו את שלב המיקרוסקופ כדי להתמקד באזורים עם אותות צביעה גבוהים של Perls/DAB, במיוחד ההיפוקמפוס וקליפת המוח, וצלמו תמונות (איור 1A).
- עבור למטרת הגדלה של פי 40 כדי לצלם תמונות עם אותות מכתים ברורים.
- שמרו כל תמונה כ-TIFF של 8 סיביות וייצאו את התמונות להמשך ניתוח.
5. ניתוח תמונות
- ב-ImageJ/Fiji, בחר תוספים > תפירה > תפירת רשת/אוסף בתפריט, ולאחר מכן בחר מיקום לא ידוע כדי לבחור את התמונות המיועדות לתפירה (איור 2A).
- בחר File > Save As > Tiff כדי לשמור את התמונה המוגמרת כ-TIFF (איור 2B).
- השתמש ב-ImageJ/Fiji כדי לפתוח תמונה ולוודא שפורמט התמונה הוא צבע RGB (איור 2C).
- בחר תוספים > IHC Profiler Image בתפריט, ולאחר מכן בחר מצב > תמונה מוכתמת ציטופלזמית ואת ברירת המחדל של Color Deconvolution H DAB (איור 2D). לאחר מכן המר את פורמט התמונה לגווני אפור של 8 סיביות.
- המר את ערכי האפור של התמונה לערכי OD על-ידי בחירה באפשרות נתח > כיול > OD לא מכויל (איור 2E).
- השתמש בפונקציית הסף כדי לבחור את האזור של צביעה חיובית של Perls/DAB, ולאחר מכן כוונן את פסי הגלילה האופקיים עד שכל כתמי האות החומים מכוסים באדום (איור 2F).
- לחץ על נתח > הגדר מדידות, ולאחר מכן בחר את האפשרויות אזור, ערך אפור ממוצע, צפיפות משולבת, והכי חשוב, הגבל לסף כדי לא לכלול רעשי רקע (איור 2G).
- בחר נתח > מדידה כדי לקבל את טבלת התוצאות (איור 2H).
- קבץ את התוצאות והשתמש בתוכנה סטטיסטית לביצוע ניתוח סטטיסטי. במקרה שלנו, השווינו הצטברות ברזל בהיפוקמפוס ובקליפת המוח של עכברים טרנסגניים 5xFAD לזו שבביקורת השלילית (עכברים מסוג בר). עבור השוואות בין שלוש קבוצות, נעשה שימוש בניתוח שונות חד-כיווני (ANOVA) עבור נתונים מהתפלגות גאוס עם אותה סטיית תקן.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
כדי לחקור את התפלגות והצטברות הברזל במודל עכבר של אלצהיימר, ביצענו צביעה של Perls/DAB בפרוסות סגיטליות של עכברי 5xFAD בני 8 חודשים. כפי שמוצג באיור 3, אותות הצביעה של Perls/DAB נצפו בעכברים בני 8 חודשים 5xFAD ובעכברים מסוג פרא ובעכברים בני חודשיים. בעכברי 5xFAD נצפו אותות צביעה גבוהים של Perls/DAB בהיפוקמפוס ובקליפת המוח, במיוחד בתת-ההיפוקמפוס. עכברים מסוג בר שימשו כבקרות שליליות מאומתות; שתי הקבוצות בנות 2 ו-8 חודשים הראו אותות שקיעת ברזל מוחלשים באופן משמעותי (איור 3A<...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שקיעת ברזל קשורה קשר הדוק למחלת אלצהיימר. מצד אחד, זה יכול להוביל לייצור Aβ באמצעות מנגנונים מרובים, כולל ביטוי מוגבר של חלבון מבשר עמילואיד{הערה:20}23, וגם פעילות מוגברת של γ-secretase, מה שיכול להוביל לייצור Aβ מואץ24; מצד שני, חמצון שומנים המושרה על ידי ברזל מוגבר יכול לקדם פילמור טאו, מה שיכול גם להוביל לזרחון חריג מוגבר של חלבון טאו בתאי עצב25. הצביעה הכחולה הפרוסית של פרלס היא טכניקה היסטוכימית מבוססת היטב להדמ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
מחקר זה נתמך על ידי פרויקט כללי של הקרן למדעי הטבע של סין (מספר מענק: 32271010).
תודות
במהלך הכנת עבודה זו המחברים השתמשו ב-DeepSeek על מנת לשפר את השפה והקריאות. לאחר השימוש בכלי/שירות זה, המחברים בדקו וערכו את התוכן לפי הצורך ולוקחים אחריות מלאה על תוכן הפרסום.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.1 M PBS | biosharp | BL601A | הוסף מים נטולי יונים ליצירת תמיסה |
| 4% PFA | שחזור Beyotime | P0099 | ב-4 מעלות; C לשימוש |
| 20X תמיסת DAB | Bioss | C-0003 | Mix 10 μ l פתרון A, 10 ו-mu; l פתרון B ו-180 μ l אלכוהול PBS |
| Supelco | 107017 | ||
| HCL | Sigma | 7647-01-0 | הוסף מים מזוקקים ל 50 מ"ל |
| קטמין | תרופות לאומיות | בסין H20193336 | 100 מ"ג/ק"ג להרדמה |
| מיקרוסקופ | אולימפוס | CX43 | |
| תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) | Sakura Finetek | 4583 | |
| תמיסת אשלגן פרוציניד | סיגמא | 14038-43-8 | הוסף מים מזוקקים ל-50 מ"ל |
| סוכרוז | סיגמא | 57-50-1 | |
| קסילזין& נ.ב.פ; | Y-S ביוטכנולוגיה | YS-(BC)-2842 | 15 מ"ג/ק"ג להרדמת |
| קסילנים | סיגמא | 1330-20-7 |
מקורות
- Karlawish, J., Jack, C. R., Rocca, W. A., Snyder, H. M., Carrillo, M. C. Alzheimer's disease: The next frontier-special report 2017. Alzheimer's Dement. 13 (4), 374-380 (2017).
- Praticò, D. Oxidative stress hypothesis in Alzheimer's disease: A reappraisal. Trends in Pharmacol Sci. 29 (12), 609-615 (2008).
- Sayre, L. M., et al. In situ oxidative catalysis by neurofibrillary tangles and senile plaques in alzheimer's disease. J. Neurochem. 74 (1), 270-279 (2001).
- Urrutia, P., et al. Inflammation alters the expression of dmt1, fpn1 and hepcidin, and it causes iron accumulation in central nervous system cells. J. Neurochem. 126 (4), 541-549 (2013).
- Hardy, J., Selkoe, D. J. The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: Progress and problems on the road to therapeutics. Science. 297 (5580), 353-356 (2002).
- Scheltens, P., et al. Alzheimer's disease. Lancet. 397 (10284), 1577-1590 (2021).
- Ficiarà, E., Munir, Z., Boschi, S., Caligiuri, M. E., Guiot, C. Alteration of iron concentration in alzheimer's disease as a possible diagnostic biomarker unveiling ferroptosis. Int J Mol Sci. 22 (9), 4479(2021).
- Yang, W. S., Stockwell, B. R. Ferroptosis: Death by lipid peroxidation. Trends in Cell Biol. 26 (3), 165-176 (2016).
- Lane, D. J. R., et al. Iron and Alzheimer's disease: An update on emerging mechanisms. J Alzheimers Dis. 64 (s1), S379-S395 (2018).
- Meadowcroft, M. D., Connor, J. R., Smith, M. B., Yang, Q. X. Mri and histological analysis of beta-amyloid plaques in both human Alzheimer's disease and app/ps1 transgenic mice. J Magn Reson Imaging. 29 (5), 997-1007 (2009).
- Winterbourn, C. C. Toxicity of iron and hydrogen peroxide: The Fenton reaction. Toxicol Lett. 82-83, 969-974 (1995).
- Silvestri, L., Camaschella, C. A potential pathogenetic role of iron in Alzheimer's disease. J Cell Mol Med. 12 (5a), 1548-1550 (2008).
- Gamblin, T. C., King, M. E., Kuret, J., Berry, R. W., Binder, L. I. Oxidative regulation of fatty acid-induced tau polymerization. Biochemistry. 39 (46), 14203-14210 (2000).
- Meguro, R., et al. Nonheme-iron histochemistry for light and electron microscopy: A historical, theoretical and technical review. Arch Histol Cytol. 70 (1), 1-19 (2007).
- Lehéricy, S., Roze, E., Goizet, C., Mochel, F. Mri of neurodegeneration with brain iron accumulation. Curr Opin Neurol. 33 (4), 462-473 (2020).
- Nabuurs, R. J. A., et al. High-field MRI of single histological slices using an inductively coupled, self-resonant microcoil: Application to ex vivo samples of patients with Alzheimer's disease. NMR Biomed. 24 (4), 351-357 (2010).
- Perl, D. P., Good, P. F. Comparative techniques for determining cellular iron distribution in brain tissues. Ann Neurol. 32 (S1), S76-S81 (1992).
- Riemer, J., Hoepken, H. H., Czerwinska, H., Robinson, S. R., Dringen, R. Colorimetric ferrozine-based assay for the quantitation of iron in cultured cells. Anal Biochem. 331 (2), 370-375 (2004).
- Luterotti, S., Kordić, T., Dodig, S. Simultaneous determination of iron and copper in children's sera by FAAS. Acta Pharm. 61 (1), 93-102 (2011).
- Hill, J. M., Switzer, R. C. The regional distribution and cellular localization of iron in the rat brain. Neuroscience. 11 (3), 595-603 (1984).
- Meguro, R., Asano, Y., Iwatsuki, H., Shoumura, K. Perfusion-perls and -turnbull methods supplemented by dab intensification for nonheme iron histochemistry: Demonstration of the superior sensitivity of the methods in the liver, spleen, and stomach of the rat. Histochem Cell Biol. 120 (1), 73-82 (2003).
- Liu, C., et al. S-nitrosylation of divalent metal transporter 1 enhances iron uptake to mediate loss of dopaminergic neurons and motoric deficit. J Neurosci. 38 (39), 8364-8377 (2018).
- Guillemot, J., Canuel, M., Essalmani, R., Prat, A., Seidah, N. G. Implication of the proprotein convertases in iron homeostasis: Proprotein convertase 7 sheds human transferrin receptor 1 and furin activates hepcidin. Hepatology. 57 (6), 2514-2524 (2013).
- Li, X., et al. Ferritin light chain interacts with pen-2 and affects γ-secretase activity. Neurosci Lett. 548, 90-94 (2013).
- Jin Jung, K., et al. Oxidative stress induces inactivation of protein phosphatase 2a, promoting proinflammatory nf-κb in aged rat kidney. Free Radic Biol Med. 61, 206-217 (2013).
- Connor, J. R., Menzies, S. L., Martin, S. M. S., Mufson, E. J. Cellular distribution of transferrin, ferritin, and iron in normal and aged human brains. J Neurosci Res. 27 (4), 595-611 (2004).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
