הבידודשל MSCs גבוהיםMFGE8 של BAMBI, אחת משלוש תת-הקבוצות העיקריות המרכיבות UC-MSCs אנושיים הטרוגניים, מסייע להבנה מלאה של המאפיינים והפונקציות של תת-סוג זה ליישום עתידי שלו לשיפור היעילות הקלינית במחלות ספציפיות. כאן, אנו מציגים שיטה למיון BAMBIגבוהMFGE8 UC-MSCs.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
בידוד של תאי סטרומה מזנכימלייםשמקורםבחבל הטבור גבוה BAMBI גבוה MFGE8
במאמר זה
סיכום
תקציר
תאי סטרומל/גזע מזנכימליים שמקורם בחבל הטבור (UC-MSCs) מציגים אימונוגניות נמוכה והשפעות אימונומודולטוריות חזקות לטיפול במחלות שונות. UC-MSCs אנושיים הם אוכלוסייה הטרוגנית המורכבת משלוש תת-אוכלוסיות עיקריות עם צורות תאים שונות, שיעורי התפשטות, יכולות התמיינות ותפקודי ויסות חיסוני. בעבר, נמצא כי BAMBIHighMFGE8High UC-MSCs, תת-הקבוצה הראשונה שבודדה בהצלחה מ-UC-MSCs, לא הצליחה להקל על דלקת כליות זאבת. לפיכך, התפקוד והמנגנון הבסיסי של תת-קבוצה זו בטיפול MSC במחלות נותר לא ידוע. יש צורך לבודד ולחקור עוד יותר את ה-UC-MSCsהגבוהיםשל BAMBI MFGE8 במונחים של הפנוטיפ, חילוף החומרים והתפקוד שלהם כדי להבין לחלוטין את האופי של תת-קבוצת MSC זו. בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה מפורטת לבידוד תת-האוכלוסייההגבוההשל BAMBI MFGE8 מ-UC-MSCs אנושיים. תת-האוכלוסייה של UC-MSCs מסומנת בשני סמני שטח, BAMBI ו-MFGE8, על ידי מיון ציטומטריית זרימה. התאים המבודדים מתורבתים ומאומתים על ידי ניתוח ציטומטריית זרימה. הגנים הספציפיים המתבטאים ב-BAMBIhighMFGE8 high-MSCs מזוהים על ידי RT-qPCR. פרוטוקול זה מביא למיון תאים יעיל וטהור ביותר ומתאר את פרופילי הסמנים של ה-UC-MSCsהגבוהיםשל BAMBI MFGE8גבוהים.
מבוא
תאי סטרומל/גזע מזנכימליים אנושיים (MSCs) הם אבות סומטיים המסוגלים להתמיין לאוסטאוציטים, אדיפוציטים, כונדרוציטים וסוגי תאים אחרים1. MSCs בודדו לראשונה ממח העצם והם נגזרים באופן נרחב מחבל הטבור, רקמת השומן ורקמות אחרות2. מכיוון ש-UC-MSCs מושגים בקלות ומציגים אימונוגניות נמוכה והשפעות מדכאות חיסון, הם מיושמים באופן נרחב בניסויים קליניים לטיפול במחלות שונות 3,4,5. למרות שטיפול MSC מראה פוטנציאל מבטיח לטיפול במחלות, ההשפעות הטיפוליות אינן עקביות בקרב אנשים6. עם זאת, הסיבה לחוסר היציבות בטיפול MSC עדיין לא ברורה.
תנודות מולקולריות, מורפולוגיה, יכולת התמיינות ותפקוד טיפולי מהווים הטרוגניות של MSC. כמה מחקרים גם הניחו כי MSCs מהווים תת-אוכלוסיות בעלות פונקציות שונות 7,8 וחקרו הטרוגניות של MSC באמצעות ריצוף RNA של תא בודד (scRNA-seq)9,10. התוצאות חשפו כי ל-UC-MSCs אנושיים יש תת-אוכלוסיות נפרדות עם מאפיינים טרנסקריפטומיים ספציפיים, בעוד שמחקרים מעטים בודדו בהצלחה את מה שנקרא תת-אוכלוסיות MSC. בעבר ניתחנו UC-MSCs אנושיים לשלוש תת-קבוצות על פי חתימותיהם באמצעות scRNA-seq וניתוח ביואינפורמטיקה, שבו תת-אוכלוסיית BAMBIגבוההMFGE8UC-MSC גבוהה טוהרה עוד יותר ונבדקה תפקודית11. עם זאת, תת-קבוצה זו לא הצליחה להקל על דלקת כליות זאבת. לפיכך, יש צורך לבדוק את ההשפעות הטיפוליותשל MSCs גבוהיםMFGE8 של BAMBI בהפרעות אחרות כדי להבין את התפקודים האותנטיים שלהם.
פרוטוקול זה מתאר שיטות לבידוד תת-הקבוצההגבוההשל BAMBI MFGE8 מ-UC-MSCs אנושיים באמצעות מיון תאים מופעל פלואורסצנטי (FACS) על ידי ציטומטריית זרימה ואת המאפיינים של תת-הקבוצה הגבוההשל BAMBI MFGE8.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
מחקר זה נערך בהתאם לעקרונות שנקבעו בהצהרת הלסינקי משנת 1989 ואושר על ידי ועדת האתיקה בבית החולים המסונף למגדל התוף של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת נאנג'ינג (מספר אישור: 202019701). חבל הטבור האנושי הושג מאמהות בריאות בבית החולים המסונף למגדל התוף של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת נאנג'ינג לאחר לידה טבעית, שנתנו את הסכמתן מדעת לשימוש בהם בעבודה זו. UC-MSCs ראשוניים בודדו מחבל הטבור האנושי כפי שדווח בעבר11.
1. תרבית UC-MSC וזיהוי לפני בידוד
- לאחר שה-MSCs מגיעים למפגש של 70-80% (P0), שטפו את התאים פעם אחת עם PBS והוסיפו 1 מ"ל של 0.25% טריפסין-EDTA למשך 2 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, הוסף 9 מ"ל של מדיום שלם כדי לנטרל את הטריפסין, העביר את תרחיף התא לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל וצנטריפוגה ב-300 × גרם למשך 5 דקות כדי לאסוף את התאים. השליכו את הסופרנטנט והוסיפו את המדיום השלם המתאים כדי להשהות מחדש את התאים. מעבירים את התאים בכל מנה לשלוש צלוחיות T75 (P1) ותרבית בחממת תאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2.
- לאחר מעבר UC-MSCs פי 2 באמצעות טריפסיניזציה, ב-P3, קצרו את התאים באמצעות אותם שלבים המתוארים בשלב 1.1. לאחר הצנטריפוגה, השליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים במאגר צביעה FACS (1x PBS המכיל 2% FBS) וספרו אותם. הוסף מאגר צביעה FACS לריכוז סופי של 5-10 × 106 תאים/מ"ל ושמור את תרחיף התאים על קרח.
- מחלקים 100 מיקרוליטר לכל צינור של תרחיף תאים זה לצינורות שונים של 1.5 מ"ל. הוסף בקרות איזוטיפ ונוגדני FACS כנגד CD29, CD73, CD90, CD105, CD14, CD34, CD45, CD79 ו-HLA-DR (כולם ב-1:200) לתאים ב-4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
- שטפו את התאים פעמיים עם מאגר הצביעה והצנטריפוגה של FACS בטמפרטורה של 300 × גרם למשך 5 דקות. השליכו את הסופרנטנט והשעו את המשקעים ב-200 מיקרוליטר של מאגר צביעה FACS לניתוח ציטומטריית זרימה לזיהוי סמני MSC.
2. בידוד של BAMBIHigh MFGE8High UC-MSCs על ידי ציטומטריית זרימה
- תרבית UC-MSC לצפיפות של כ-5-10 ×-106 תאים בעת בידוד BAMBIגבוהMFGE8 UC-MSCs. נתק את התאים עם EDTA של 0.5 מ"מ למשך 5 דקות עד שהם מתחילים לקבל מורפולוגיה עגולה, הוסף את המדיום השלם כדי להעביר את התאים לצינור חרוטי של 15 מ"ל, והעבר את תרחיף התא למעלה ולמטה מספר פעמים כדי להכין תרחיף של תא בודד. השתמש ב-10 מיקרוליטר של תרחיף התאים כדי לספור את התאים ולחשב את המספר הכולל של התאים שנקטפו. צנטריפוגה של הצינור החרוטי עם תרחיף התאים ב-300 × גרם למשך 5 דקות כדי לאסוף את התאים.
- השעו מחדש את התאים ב-1 מ"ל של מדיום שלם לריכוז סופי של 5-10 ×-106 תאים/מ"ל ושמרו על תרחיף התאים על קרח.
- חלקו את התאים לארבעה צינורות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל (תאים ריקים בלבד; תאים עם תווית BAMBI; תאים עם תווית MFGE8; ותאים המסומנים ב-BAMBI ו-MFGE8).
- הוסף נוגדנים ראשוניים בריכוזים מתאימים (MFGE8 ו-BAMBI, שניהם ב-1:100) לצינורות, ערבב ודגירה על התאים בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות.
- שטפו את התאים המסומנים פעם אחת עם 1x PBS, וצנטריפוגה בחום של 300× גרם למשך 5 דקות. השליכו את הסופרנטנט. השעו מחדש את התאים ב-1 מ"ל של מדיום שלם, הוסיפו נוגדנים משניים פלואורסצנטיים מצומדים (IgG H&L Alexa Fluor 488 ו-Alexa Fluor 647, כולם ב-1:1,000) לתאים, ערבבו ודגרו על התאים בטמפרטורת החדר למשך 15 דקות בחושך.
- שטפו את התאים המסומנים פעם אחת עם 1x PBS, כמתואר בשלב 2.5. השעו מחדש את התאים ב-500 מיקרוליטר של מדיום שלם, סננו דרך מסננת תאים של 70 מיקרומטר כדי לחסל גושים ופסולת, והעבירו את המסנן לצינור של 15 מ"ל למיון זרימה ציטומטרית.
- הפעל את צינור התא הריק מבלי להוסיף נוגדן (בקרה שלילית) והתאם את הפיזור קדימה (FSC) ופיזור הצד (SSC) כדי להגדיר את קנה המידה של האוכלוסייה השלילית עם צביעת נוגדנים.
- הפעל את צינורות התא היחידים המסומנים בנוגדנים (כלומר, MFGE8 + עז נגד ארנב IgG H&L Alexa Fluor 488, או BAMBI + עז נגד ארנב IgG H&L Alexa Fluor 647) כבקרת שער כדי לקבוע היכן מתחילה החיוביות בעלילה.
- הפעל את צינורות הדגימה הניסיוניים כדי למיין ולאסוף את אוכלוסיית התאיםהגבוההשל BAMBI MFGE8.
- צלחו את ה-MSCs הגבוהים של BAMBIHighMFGE8 בצלחת של 24 בארות וטפחו את התאים בחממת תאים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO 2.
- כאשר ה-MSCsהגבוהים של BAMBIHighMFGE8 גדלו במשך שני מעברים כדי להשיג מספיק תאים, לנתק את התאים ולבצע ניתוח לאחר המיון כדי להבטיח את טוהר אוכלוסיות התאים הממוינות על ידי ציטומטריית זרימה, כמתואר בשלבים 2.1-2.9. לחלופין, בדוק את טוהר התאים הממוינים עם אימונופלואורסצנציה קונבנציונלית כנגד ביטוי BAMBI ו-MFGE8 אנושי אם מספר התאים שנאספו קטן מדי.
3. אפיון ה-MSCsהגבוהים של BAMBI MFGE8
- גדל את ה-MSCsהגבוהים של BAMBIHighMFGE8 הממוינים בצלחת של 12 בארות, בחן את מורפולוגיה התאים שלהם במיקרוסקופ והשווה אותם לזו של MSCs לא ממוינים.
הערה: באופן כללי, תאיםגבוהים של BAMBIעםMFGE8 גדלים מהר יותר מאשר UC-MSCs לא ממוינים. - כאשר התאים מתכנסים בכ-90% בצלחת 12 הבארות, יש לשאוב את מדיום תרבית התאים, לשטוף את התאים פעם אחת עם 1x PBS ולהוסיף 500 מיקרוליטר של מגיב מיצוי RNA לתאים. נענע את הצלחת לאט בטמפרטורת החדר (RT) למשך 5 דקות.
- פיפטו את התערובת והעבירו אותה לצינור נטול RNase ו-DNase. מוסיפים 100 מיקרוליטר כלורופורם, מכסים את הצינור ומנערים את התערובת במרץ על ידי מערבולת במשך 15 שניות. לאחר מכן, אפשר לצינור לעמוד ב-RT למשך 3 דקות.
- צנטריפוגה את הצינור למשך 15 דקות בטמפרטורה של 11,000 × גרם ו-4 מעלות צלזיוס.
- העבירו כ -200 מיקרוליטר מהשכבה המימית העליונה לצינור חדש. הוסף את אותו נפח של איזופרופנול ופיפטה ביסודיות למעלה ולמטה מספר פעמים. לאחר מכן, הניחו לתערובת לעמוד ב-RT למשך 10 דקות.
- צנטריפוגה למשך 15 דקות ב-11,000 × גרם ו-4 מעלות צלזיוס. השליכו את הסופרנטנט.
- הוסף 500 מיקרוליטר של 75% אתנול לגלולה בצינור והפוך את הצינור בעדינות מספר פעמים.
- צנטריפוגה את הצינור למשך 5 דקות בטמפרטורה של 6,000 × גרם ו-4 מעלות צלזיוס. השליכו את הסופרנטנט. חזור על הצנטריפוגה פעם אחת למשך 10 שניות בטמפרטורה של 6,000 × גרם, שאב בזהירות את הנוזל הנותר באמצעות פיפטה וייבש את הצינור ב-RT.
- הוסף 10 מיקרוליטר מים נטולי RNase כדי להמיס את כדור ה-RNA, ומדוד את ריכוז ה-RNA באמצעות ספקטרופוטומטר.
- עקוב אחר הוראות היצרן כדי לסנתז cDNA גדיל ראשון מעד 1 מיקרוגרם של RNA כולל.
- השתמש בערכת qPCR כדי לזהות ולכמת ביטוי גנים, בהתאם להוראות היצרן.
הערה: הרצפים של פריימרים ה-DNA המשמשים מפורטים בטבלה 1.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1 מציג את פרופילי ביטוי סמני פני התא של UC-MSCs אנושיים. MSCs מתורבתים היו חיוביים מאוד לביטוי CD44, CD73, CD90 ו-CD105 ושליליים לביטוי CD14, CD34, CD45, CD79 ו-HLA-DR. ה-MSCsהגבוהיםשל BAMBI MFGE8 מוינו מ-UC-MSCs אנושיים מתורבתים, וביטוי ה-BAMBI וה-MFGE8 שלהם נותח מחדש על ידי ציטומטריית זרימה לאחר הרחבה במשך 3-4 מעברים (איור 2). בתהליך זה, השכיחותשל MSCs גבוהיםMFGE8 גבוהים של BAMBI השתנתה בהתאם לתורם ולשיטת הדיסוצ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
פרוטוקול זה מתאר כיצד לבודד ולהעשיר את תת-האוכלוסייההגבוההשל BAMBI MFGE8 מ-UC-MSCs אנושיים. השיטה חשובה להמשך מחקר של המורפולוגיה, הצמיחה והתפקוד של תת-קבוצת MSC זו. שלבים מסוימים חיוניים לבידוד מוצלח ותפוקה גבוהה של תאיםגבוהים של BAMBIMFGE8.
ראשית, ההיבט הטכני הקריטי ביותר שיש לקחת בחשבון הוא השימוש בפתרון דיסוציאציה תאית מתאים בפרוטוקול הנוכחי. למרות ש-0.25% טריפסין-EDTA קונבנציונלי משמש לניתוק MSCs למעבר, עדיף להש...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין להם ניגודי אינטרסים.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס' 82271843).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צינור מיקרוצנטריפוגה 0.6 מ"ל | קורנינג | Axygen MCT-060-A | |
| 1.5 מ"ל צינורות מיקרוצנטריפוגה | בייג'ינג Labgic Technology | MCT-001-150 | |
| צלחת תרבית תאים 100 מ"מ | בייג'ינג Labgic טכנולוגיה | 12311 | |
| 12 באר צלחת | בייג'ינג Labgic טכנולוגיה | 11210 | |
| 15 מ"ל צינור צנטריפוגה | נאנג'ינג Vazyme חומר טכנולוגיה | TCF00115 | |
| 24 באר צלחת | בייג'ינג Labgic טכנולוגיה | 11310 | |
| 50 מ"ל צינור צנטריפוגה | נאנג'ינג Vazyme חומר טכנולוגיה | TCF00150 | |
| 5 מ"ל צינורות תחתונים עגולים | קורנינג | FALCON 352003 | |
| 70 μ מסננת תאים m | Falcon | 352350 | דילול: 1:1000 |
| APC אנטי אנושי CD79a (Igα) נוגדן | BioLegend | 333505 | 581 דילול: 1:200 |
| APC/Cyanine7 אנטי-אנושי נוגדן CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) | BioLegend | 344022 | G46-6 דילול: 1:200 |
| APC-Cy7 Mouse IgG1, κ בקרת איזוטיפ | BD Bioscience | 557873 | MOPC-31C (בקרת איזוטיפ) דילול: 1:200 |
| נוגדן BAMBI | Bioss | bs-12418R | |
| Brilliant Violet 510 נוגדן CD44 נגד עכברים/אנושי | BioLegend | 103044 | 5E10 דילול: 1:200 |
| Brilliant Violet 510 Rat IgG2b, κ איזוטיפ Ctrl נוגדן | BioLegend | 400646 | MOPC-21 (בקרת איזוטיפ) דילול: 1:200 |
| CD105 (אנדוגלין) נוגדן חד שבטי APC | eBioscience | 17-1057-42 | HM47 דילול: 1:200 |
| שקופיות תא ספירת תאים | שנחאי QIUJING | XB-K-25 | |
| צנטריפוגה | בייג'ינג BAIYANG | BY-320C | |
| ChamQ אוניברסלי SYBR qPCR מאסטר מיקס | Vazyme | Q711-02 | |
| כלורופורם | XILONG 13700908 | ||
| מדעי DMEM/F-12 (1:1) בסיסי (1x) | Gibco | C11330500BT | |
| EDTA (0.5 מ'), pH 8.0, | AM9260G Invitrogen | : 1:1000 | |
| אתנול | XILONG Scientific | 12803405 | |
| סרום בקר עוברי (FBS) | Gibco | 10099-141C | |
| FITC עכבר אנטי אנושי CD34 | BD Bioscience | 555821 | IM7 דילול: 1:200 |
| FITC עכבר אנטי אנושי CD45 | BD Bioscience | 555482 | AD2 דילול: 1:200 |
| עכבר FITC אנטי אנושי HLA-DR | BD Bioscience | 555811 | SN6 דילול: 1:200 |
| זרימה ציטומטר | BD Bioscience | FACSAria™ III Cell SorterAria | |
| Flowjo | BD Bioscience | V10 | |
| מגיב דיסוציאציה עדין של תאים | STEMCELL Technologies | 100-0485 | |
| עיזים נגד עכבר IgG H& L (Alexa Fluor 488) | abcam | ab150113 | HI30 דילול: 1:200 |
| עז נגד ארנב IgG H& L (AlexaFluor 594) | abcam | ab150080 | דילול: 1:1000 |
| HiScript II Q RT SuperMix עבור qPCR (+מגב gDNA) | Vazyme | R223-01 | |
| מיקרוסקופים הפוכים | Nikon | ECLIPSE Ts2 | |
| איזופרופיל אלכוהול | XILONG Scientific | 12802505 | |
| MFGE8 נוגדן | Biorbyt | orb388429 | דילול: 1:100 |
| מיקרוצנטריפוגה | תרמו פישר מדעי | FRESCO 21 | |
| עכבר IgG1 kappa בקרת איזוטיפ APC | eBioscience | 17-4714-42 | P3.6.2.8.1 (בקרת איזוטיפ) דילול: 1:200 |
| עכבר IgG1 kappa בקרת איזוטיפ FITC | eBioscience | 11-4714-42 | eBMG2b (בקרת איזוטיפ) דילול: 1:200 |
| עכבר IgG2b kappa בקרת איזוטיפ FITC | eBioscience | 11-4732-42 | RTK4530 (בקרת איזוטיפ) דילול: 1:200 |
| PBS (פי 10) | סנגון ביוטק (שנחאי) | E607016-0500 | |
| PE-CY5 עכבר אנטי אנושי CD90 | BD Bioscience | 555597 | P3.6.2.8.1 (בקרת איזוטיפ) דילול: 1:200 |
| PE-Cy5 עכבר IgG1 κ בקרת איזוטיפ | BD Bioscience | 550618 | |
| פניצילין-סטרפטומיצין 100x | Cytiva | SV30010 דילול: 1:100 | |
| מערכת PCR בזמן אמת | יישומי ביו-מערכות על ידי Thermo Fisher Scientific | Q6 | |
| מים ללא RNase | QIAGEN | 129112 | |
| ספקטרופוטומטר | תרמו פישר Scientific | NanoDrop One(840-317400) | |
| קצות מיקרופיפטה סטריליים | בייג'ינג Labgic טכנולוגיה | דילול: 1:100 | |
| T75 בקבוק תרבית תאים | בייג'ינג Labgic Technology | 13212A | |
| Thermal Cycler | Applied Biosystems by Thermo Fisher Scientific | Veriti | |
| Tri Reagent | Sigma Aldrich | T9424 | |
| Typsin-EDTA Solution | ביו-ערוץ ביוטכנולוגיה | BC-CE-005 | |
| מעטפת מים CO2 חממת | תרמו פישר סיינטיפיק | 3111 |
מקורות
- Liechty, K. W., et al. Human mesenchymal stem cells engraft and demonstrate site-specific differentiation after in utero transplantation in sheep. Nat Med. 6 (11), 1282-1286 (2000).
- Zhou, T., et al. Challenges and advances in clinical applications of mesenchymal stromal cells. J Hematol Oncol. 14 (1), 24(2021).
- Xie, Z., et al. Tnf-alpha-mediated m(6)a modification of elmo1 triggers directional migration of mesenchymal stem cell in ankylosing spondylitis. Nat Commun. 12 (1), 5373(2021).
- Mcguire, J. J., et al. Mesenchymal stem cell-derived interleukin-28 drives the selection of apoptosis resistant bone metastatic prostate cancer. Nat Commun. 12 (1), 723(2021).
- Yuan, X., et al. Mesenchymal stem cell therapy induces flt3l and cd1c(+) dendritic cells in systemic lupus erythematosus patients. Nat Commun. 10 (1), 2498(2019).
- Wang, D., et al. Umbilical cord mesenchymal stem cell transplantation in active and refractory systemic lupus erythematosus: A multicenter clinical study. Arthritis Res Ther. 16 (2), R79(2014).
- Ortiz, L. A., et al. Mesenchymal stem cell engraftment in lung is enhanced in response to bleomycin exposure and ameliorates its fibrotic effects. Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (14), 8407-8411 (2003).
- Phinney, D. G. Functional heterogeneity of mesenchymal stem cells: Implications for cell therapy. J Cell Biochem. 113 (9), 2806-2812 (2012).
- Wang, Z., et al. Single-cell transcriptome atlas of human mesenchymal stem cells exploring cellular heterogeneity. Clin Transl Med. 11 (12), e650(2021).
- Chen, P., et al. Single-cell and spatial transcriptomics decodes wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells heterogeneity and a subpopulation with wound repair signatures. Adv Sci (Weinh). 10 (4), e2204786(2023).
- Chen, H., et al. Dissecting heterogeneity reveals a unique bambi(high) mfge8(high) subpopulation of human uc-mscs. Adv Sci (Weinh). 10 (1), e2202510(2022).
- Tsuji, K., et al. Effects of different cell-detaching methods on the viability and cell surface antigen expression of synovial mesenchymal stem cells. Cell Transplant. 26 (6), 1089-1102 (2017).
- Lai, T. Y., et al. Different methods of detaching adherent cells and their effects on the cell surface expression of fas receptor and fas ligand. Sci Rep. 12 (1), 5713(2022).
- Avinash, K., Malaippan, S., Dooraiswamy, J. N. Methods of isolation and characterization of stem cells from different regions of oral cavity using markers: A systematic review. Int J Stem Cells. 10 (1), 12-20 (2017).
- Galvao, I., et al. Rock inhibition drives resolution of acute inflammation by enhancing neutrophil apoptosis. Cells. 8 (9), 964(2019).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
