הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
כאן, אנו מציגים פרוטוקול להמחשה וסטנדרטיזציה של בדיקת מיקרוטיטר רזזורין (REMA) ווריאציית לוח השחמט שלה להערכת הרגישות לתרופות ופרופילי האינטראקציה של Mycobacterium tuberculosis. שיטה זו מספקת תובנות, במבחנה, לאופטימיזציה של שילובי תרופות לשימוש במשטרי טיפול ומלחמה בשחפת עמידה לתרופות מרובות.
הופעתה של שחפת עמידה לתרופות מרובות (MDR-TB) מחייבת שיטות מהירות ומדויקות לבדיקת רגישות לתרופות (DST) כדי להנחות טיפול יעיל. מחקר זה מציג מתודולוגיה המשלבת את בדיקת המיקרוטיטר של רסזורין (REMA) ובדיקת לוח שחמט כדי לקבוע ריכוז מעכב מינימלי (MIC) ולהעריך אינטראקציות בין תרופות של תרופות נגד שחפת נגד Mycobacterium tuberculosis. ה-REMA, המותאם לפורמט של 96 בארות, ממנף את הפחתת צבע הרזזורין על ידי M. tuberculosis פעיל מטבולית כאינדיקטור חזותי לרגישות לתרופות. ריכוזים משתנים של תרופות נגד שחפת נבדקים כנגד מבודדים של M. tuberculosis , ונצפים שינויי צבע כדי לקבוע את ה-MIC. לאחר מכן, נעשה שימוש בבדיקת לוח שחמט כדי להעריך השפעות סינרגטיות, תוספות או אנטגוניסטיות פוטנציאליות בין שילובי תרופות. שיטה פשוטה וזולה זו מניבה תוצאות תוך שבעה ימים, ומציעה יתרון משמעותי על פני שיטות שעון קיץ מסורתיות. שיטה זו מספקת תובנות חשובות לגבי שעון הקיץ של מבודדי M. tuberculosis ומאפשרת זיהוי של שילובי תרופות מבטיחים לשיפור תוצאות הטיפול נגד MDR-TB.
שחפת, הנגרמת על ידי Mycobacterium tuberculosis, נותרה אתגר בריאותי עולמי אדיר, המחמיר עם הופעתם של זנים עמידים לתרופות. על פי ארגון הבריאות העולמי (WHO), בשנת 2023 היו כ-10.6 מיליון מקרי שחפת חדשים ו-1.3 מיליון מקרי מוות, מה שמדגיש את הצורך הדחוף באסטרטגיות אבחון וטיפול יעילות יותר1. שחפת עמידה לתרופות מרובות (MDR-TB) ושחפת עמידה לתרופות (XDR-TB) מהוות אתגרים גדולים לבקרת מחלות בשל המורכבות, הרעילות ומשך הזמן הממושך של משטרי הטיפול הנוכחיים 2,3.
ההשקה האחרונה של חומרים חדשים נגד שחפת, כגון בדקווילין ודלמניד, המכוונים....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הערה: כימיקלים וחומרים המשמשים בניסויים לדוגמה זמינים בטבלת החומרים file.
1. הכנת מדיה 7H9-S
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
קביעת MIC של תרופות נגד שחפת על ידי בדיקת REMA
פעילותם של Bedaquiline, Delamanid, Moxifloxacin ו-Isoniazid הוערכה באמצעות REMA כנגד H37RV רגיש לתרופות ומבודד קליני עמיד לתרופות של M. tuberculosis. בדקווילין, דלמאניד ואיזוניאזיד שימשו בטווח הריכוזים של (1 מיקרוגרם/מ"ל עד 0.03 מיקרוגרם/מ"ל) ומוקסיפלוקסצין היה בטווח של (2 מיקרוגרם/מ"ל עד 0.06 מיקרוגרם/מ"ל). תרחיפי החיידקים של מבודדים קליניים עמידים לתרופות של M. tuberculosis ו-H37Rv חוסנו והודגרו במשך 7 ימים בנוכחות ריכוזי תרופות שונים........
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
האיום העולמי הנשקף משחפת עמידה לתרופות (DR-TB) הפך לנושא דחוף 1,19. זה יצר צורך דחוף בפיתוח שיטות משופרות ומהירות לבדיקת רגישות לתרופות (DST), במיוחד עבור תרופות קו שני וחדשות יותר נגד שחפת. שיטות כאלה חיוניות לשיפור אסטרטגיות הטיפול, ניהול יעיל של תרופות נגד שחפת והפחתת הסיכונים להתקדמות המחלה ועמידות נוספת20. שיטה המעריכה הן את הרגישות לתרופות והן את פרופילי האינטראקציה תספק יתרונות משמעותיים בהקשר זה, ת.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין מה לחשוף.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בקבוק מרובע 250 מ"ל עם פקק | שוט דוראן | 218203655 | הכנת מדיה |
| מרק 7H9 | בקטון דיקינסון | 271310 | מצעי גידול ל-M. tuberculosis (טמפרטורת החדר) |
| צלחת 96 באר עם מכסה | קורנינג | 3596 | 96 בארות מיקרו-פלטות פוליסטירן שטוחות שטופלו TC, עטופות בנפרד, עם מכסה, סטריליות (טמפרטורת החדר) |
| טיפים לאמנות (1000 μ L) | טרסונס | 528106 | מסנני פוליאתילן הידרופוביים עם קצה מסנן מתלה מפוליפרופילן-סטרילי (טמפרטורת החדר) |
| טיפים לאמנות (200 μ L) | טרסונס | 528104 | מסנני פוליאתילן הידרופוביים עם קצה מסנן מתלה מפוליפרופילן-סטרילי (טמפרטורת החדר) |
| בריום כלוריד דיהידראט | מרק | 217565 | הכנה סטנדרטית של מקפרלנד (טמפרטורת החדר) |
| בדקווילין (BDQ) | יאנסן וג'נסן | מתנה מג'נסן וג'נסן | תרופה נגד שחפת (4 מעלות; C) |
| קזיטון | בקטון דיקינסון | 225930 | תוסף לתרבית חיידקים (טמפרטורת החדר) |
| Delamanid (DEL) | אוטסוקה פרמצבטיקה | מתנה מ-Otsuka Pharmaceuticals | תרופה נגד שחפת (4 מעלות; C) |
| דימתיל סולפוקסיד | סיגמא-אולדריץ' | 67-68-5 | הכנת מלאי תרופות (טמפרטורת החדר) |
| סנן 0.2 μ m | מיליפור | SLGVR33RS | 0.22 μ m PVDF, מסנן מזרק חד פעמי, סטרילי (טמפרטורת החדר) |
| גליצרול | מרק | 356350 | נוסף למדיה תרבותית (טמפרטורת החדר) |
| לולאת חיסון | סיגמא-אולדריץ' | I8263 | להכנת תרחיף תרבות (טמפרטורת החדר) |
| איזוניאזיד (INH) | סיגמא-אולדריץ' | I3377-5G | תרופה נגד שחפת (4 מעלות; C) |
| LJ בינוני נטוי | מיקובקטוסל BD | 221414 | מצעי גידול עבור M. tuberculosis (4 & deg; C) |
| בקבוק McCartney Bijou Narrow Mouth, 14 מ"ל | סופרטק | 12.124.0014 | להכנת תרחיף תרבות (טמפרטורת החדר) |
| בקבוק McCartney Bijou Narrow Mouth, 7 מ"ל | סופרטק | 12.124.0007 | להכנת תרחיף תרבות (טמפרטורת החדר) |
| מיקרופיפטות (1000 μ L) | גילסון | F144059M | לטיפול מדויק בנוזלים (טמפרטורת החדר) |
| מיקרופיפטות (200 μ L) | גילסון | FA10005M | לטיפול מדויק בנוזלים (טמפרטורת החדר) |
| מוקסיפלוקסצין (MOX) | סיגמא-אולדריץ' | SML1581-50 מ"ג | תרופה נגד שחפת (4 מעלות; C) |
| פיפטה רב-ערוצית (20– 200 μ L) | VWR | 849070024 | לפיפטינג סימולטני על פני בארות |
| OADC | בקטון דיקינסון | 211886 | תוסף לתרבית חיידקים (4 מעלות; C) |
| מילוי פיפטות | מרק | Z333980 | לטיפול מדויק בנוזלים (טמפרטורת החדר) |
| מלח נתרן רזזורין | סיגמא-אולדריץ' | 62758-13-8 | מחוון חמצון חיזור עבור מבחני REMA (טמפרטורת החדר) |
| פיפטות סרולוגיות, 10 מ"ל | קורנינג | CLS4100 | נעשה שימוש בפיפטות חד פעמיות סטריליות מפוליסטירן (טמפרטורת החדר) |
| חרוזי זכוכית מוצקה, קוטר 6 מ"מ | סיגמא-אולדריץ' | Z265950 | להכנת תרחיף תרבות (טמפרטורת החדר) |
| חומצה גופרתית 95– 97% | מרק | 100731 | הכנה סטנדרטית של מקפרלנד (טמפרטורת החדר) |
| מזרקים לפילטר | דיספו ואן | 100032 | לשימוש עם מסנני מזרק |
| מערבל מערבולת | רמי | CM-101 פלוס | להכנת תרחיף תרבות |
| תיק פולי עם רוכסן | סיגמא-אולדריץ' | Z162949 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה פורסם
הסרטון יגיע בקרוב