Typha latifolia, המתפשט בעיקר באופן א-מיני באמצעות קני שורש, מציב אתגרי איסוף בשל מערכת השורשים הנרחבת שלו. מאמר זה מציג שיטה לגידול T. latifolia מזרעים, המאפשרת גידול מעבדה קל יותר ומציעה פוטנציאל לגידול צמחים סטרילי והגדלה ביולוגית מיקרוביאלית מוקדמת.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שיטה אופטימלית לגידול והגדלה ביולוגית מיקרוביאלית של Typha latifolia (זנב חתול)
במאמר זה
סיכום
תקציר
Typha latifolia, הידוע יותר בשם זנב חתול רחב עלים או בולוש מצוי, הוא בעל טווח עולמי ושולט במערכות אקולוגיות ביצות בצפון אמריקה. בעוד שמינים שונים של זנב חתול נחשבים לעתים קרובות לפולשים בצפון אמריקה, T. latifolia נחשב למין המקומי באזור ונמצא בכל היבשת כמין הטיפוס הדומיננטי. מבחינה היסטורית, טיפא שימש פונקציות שונות, ממקורות מזון ועד חומרי בניין. לאחרונה, T. latifolia התגלה כמין בולט המסייע למאמצי הטיפול הביולוגי. עם העניין הגובר בפיתוח מערכות בנויות לטיפול בביצות (CWTS) לתיקון מזהמים, יש צורך בטכניקות הניתנות לשחזור לגידול זנב חתול בסביבת מעבדה. העבודה המוצגת כאן בחנה ובדקה פרמטרי גידול שונים לגידול מוצלח של T. latifolia מזרעים. נביטה מוצלחת של מיני טיפה כרוכה בהצטלקות (קרע של מעטפת הזרע), שהושגה באמצעות טכניקות מכניות לייצור בקנה מידה גדול. הוכח כי הקמת זרעים מוקדמת מעדיפה תנאי גידול נמוכים בחומרים מזינים בשבוע הראשון, ואחריו הכנסת דשן בשבועות שלאחר מכן כדי לשפר את ההישרדות לאחר ההשתלה. עבור הגדלה ביולוגית מיקרוביאלית של מערכת הצמח, התוצאות הראו כי השריית הזרעים בחיסון מובילה להתיישבות נרחבת יותר של רקמת השורש ולהתמדה חיידקית לטווח ארוך. נעשה שימוש בטכניקת עיקור זרעים אופטימלית באמצעות שילוב של אקונומיקה וחומר ניקוי כדי לשפר את הצלחת ההתיישבות של מיקרואורגניזמים. כלי הגידול, סטריליים ולא סטריליים, שתוכננו במחקר זה תומכים בצמיחה ארוכת טווח של T. latifolia בתנאים שונים.
מבוא
כטכנולוגיה חסכונית באנרגיה, מערכות טיפול ביצות בנויות (CWTS) זכו לפופולריות משמעותית לתיקון מזהמים סביבתיים 1,2,3. CWTS משתמש בתהליכים פיזיקליים, כימיים וביולוגיים כדי להסיר, לשנות או לייצב מזהמים. בעוד שהתהליכים הפיזיקליים והכימיים המעורבים בתחלופה כימית אופיינו היטב מאז היווצרות ה-CWTS, השפעת הצמחייה נותרה במידה רבה חידתית2. בשנים האחרונות חלה התמקדות מוגברת בהבנת המנגנונים שבאמצעותם צמחים הופכים מזהמים אורגניים ואי-אורגניים בעלי חשש פוטנציאלי בשפכים 2,4,5. עם זאת, מחקרים מכניסטיים כמו אלה מסתמכים על היכולת לטפח מספר גדול של מקרופיטים ולהעדיף צמיחה מזרע כדי להבטיח שכל צמח נמצא באותו שלב של צמיחה והתפתחות.
CWTS בצפון אמריקה מבוססים לעתים קרובות באמצעות צמחייה שמקורה בביצות טבעיות באזור, כגון מיני Typha, Scirpus, Juncus ו-Phragmites 6,7. בחירת הצמחייה תלויה גם בביצות הבנויות המועסקות, שיכולות להשתנות בעומק, בזרימת המים, במקור המצע ובמקור המים (עם או בלי מחזור)2. לבסוף, האקלים משפיע גם על צמחיית הביצות, כאשר אקלים קריר יותר מעדיף צמחים שקועים בשל יכולת ההסתגלות המוגברת שלהם8. מיני טיפוס מעניינים במיוחד באזורי ביצות עמוקים הבנויים על פני השטח בשל יכולתם ליישב במהירות סביבה ולהסתגל לתנאים סביבתיים מגוונים 9,10.
סקירה עדכנית של התוצאות דיווחה כי מתוך 87 בדיקות פיטוטוקסיות באמצעות מיני טייפה , רק 15 מחקרים התחילו את צמחי הבדיקה מזרעים, ומתוכם, רק מחקר אחד בדק צמיחה בצמחים בוגרים11. תת-ייצוג זה של ניסויים בזנב חתול מזרע מצביע על פער בספרות הנוגעת לפרוטוקולים שמטרתם לתאר את גידול זנב החתול למחקרי מעבדה. הפרוטוקולים המתוארים כאן נועדו לגשר על פער זה על ידי הצגת פרוטוקול מעמיק לגידול Typha latifolia מזרע לצמח בוגר בתנאים סטריליים ולא סטריליים. בנוסף, מאמר זה דן בטכניקה להגדלה ביולוגית של חיידקים של מיני זנב חתול בשלב הזרע שבו חיסון מוקדם יכול לסייע בשמירה על התמדה ארוכת טווח של חיידקים בעלי קנה שורש ואנדו-פיטים שהוכנסו למקום.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. צלקת זרעים
- זרעי זנב חתול מקורם בביצות בקלגרי, AB, קנדה, בסתיו 2023 (51.11312° N, 114.39381°W). אוספים את תפרחת זנב החתול בסתיו ומאחסנים בשקית נייר בחושך עד לשימוש. אם עדיין על הגבעול, אסוף את התפרחת באביב, אך התאוששות הזרעים תפחת.
- בעזרת מספריים לגינה חותכים את גזע הצמח ~2 ס"מ מבסיס התפרחת. משוכים את הזרעים מהתפרחת ומכניסים לבלנדר מעבדה עד שנפח הבלנדר מלא כרבע. מדובר בכ -250 מ"ל זרעים לא דחוסים.
- מלאו את הבלנדר ב -500 מ"ל מי ברז. שמרו על מרווח ראש של 10 ס"מ בבלנדר. מערבבים במהירות בינונית-נמוכה במשך 20 שניות ומעבירים מיד לכוס גדולה של 1 ליטר. הפתרון המתקבל צריך להיות צמיג.
- העבירו כ-100 מ"ל מבוצת מי הזרעים הזו בחזרה לבלנדר ומלאו את הבלנדר ב-400-600 מ"ל מי ברז טריים. מערבבים במהירות בינונית-גבוהה במשך 20 שניות ומעבירים מיד לכוס טרייה של 1 ליטר.
- מלאו את הכוס במי ברז עד 800 מ"ל ותנו לה לשבת לפחות 60 שניות. זרעי זנב חתול מצולקים וברי-קיימא ישקעו לתחתית הכוס, והפלומה והמקור (ראו איור 1 לתיאור מבנה זרעי הזנב) יצופו למעלה. גורפים את הבוצה בחלק העליון של הכוס ויוצקים לאט את המים מהכוס מבלי להפריע לזרעים בתחתית. מעבירים את הזרעים לכוס של 100 מ"ל.
- חזור על תהליך המיזוג על שארית בוצת זנב החתול משלב 1.5.
- מניחים את הכוס המכילה את הזרעים על צלחת ערבוב ומסובבים במהירות בינונית למשך שעה. לאחר שעה גרפו את כל החומר הצמחי הצף בחלק העליון של הכוס.
- שופכים את הזרעים למשפך Büchner עם נייר פילטר המחובר לוואקום לייבוש הזרעים למשך הלילה. ניתן לאחסן זרעים יבשים בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס בצינורות פוליפרופילן חרוטיים של 15 מ"ל.
2. נביטה בטכניקה לא סטרילית
- הכן לוחות מדיה Murashige ו-Skoog (MS) בחצי חוזק עם 1% פיטואגר12.
- מניחים כ -1 מ"ל זרעים יבשים לצינור פוליפרופילן חרוטי של 15 מ"ל וממלאים ב -10 מ"ל מי ברז. סובב על שייקר מסלולי במהירות נמוכה למשך 24 שעות כדי לגרום לנביטה.
- הסר עודפי מים כך שיישארו 3 מ"ל בצינור הפוליפרופילן החרוטי של 15 מ"ל.
- חותכים את הקצה של קצה פיפטה מפלסטיק בנפח 1000 מיקרוליטר כדי להגדיל את גודל הקדח ופיפטה את תמיסת הזרעים במרץ כדי לתלות זרעים בתוך קצה הפיפטה.
- מניחים זרעים ומים על צלחות אגר MS בחצי חוזק. סובבו את הצלחת כדי להפיץ את הזרעים באופן שווה.
- עטפו את הלוחות בסרט איטום מעבדה והניחו אותם בתא גידול עם מחזור אור-חושך של 16 שעות ו-8 שעות ב-23 מעלות צלזיוס ו-70% לחות. דגרו על הצלחות למשך שבוע (עד שבועיים) כדי לגרום לנביטת זרעים.
3. נביטה בטכניקה סטרילית
הערה: פרוטוקולי עיקור זרעים שונים נבדקו והושוו. הטכניקה שהפיקה את שיעורי הנביטה הגבוהים ביותר תוך ייצור זרעים מעוקרים לחלוטין שונתה מפרוטוקולקודם 13 ומתוארת כאן.
- הכן לוחות מדיה MS בחצי חוזק עם 1% פיטואגר12.
- מניחים נפח של כ -1 מ"ל זרעים לתוך צינור פוליפרופילן חרוטי של 15 מ"ל וממלאים ב -10 מ"ל של ddH2O. מניחים על שייקר אורביטלי במהירות בינונית-גבוהה למשך 10 דקות.
- הסר את המים והוסף 5 מ"ל של תמיסת פוליסורבט 0.1% 20 (שהוכנה ב-ddH2O סטרילי) לצינור הפוליפרופילן החרוטי של 15 מ"ל. מניחים על שייקר אורביטלי במהירות בינונית-גבוהה למשך 10 דקות.
- הסר את התמיסה והוסף 5 מ"ל של אקונומיקה מסחרית של 30% ותמיסת פוליסורבט 20 של 0.025% (שהוכנה ב-ddH2O סטרילי) לצינור הפוליפרופילן החרוטי של 15 מ"ל. יש לנער במהירות בינונית-גבוהה למשך 30 דקות.
- הסר את התמיסה והחלף אותה בסטרילי ddH2O. נער במהירות בינונית-גבוהה למשך 5 דקות. חזור על הפעולה בסך הכל 3 שטיפות מים.
- מלאו את צינור הפוליפרופילן החרוטי בנפח 15 מ"ל ב-ddH2O סטרילי וסובבו במהירות נמוכה למשך 24 שעות כדי לגרום לנביטה. לאחר 24 שעות, הסר את עודפי המים כך שיישארו 3 מ"ל בצינור הפלסטיק.
- חותכים אספטית את קצה הפיפטה מפלסטיק של 1000 מיקרוליטר ומכניסים במרץ פיפטה כדי לתלות זרעים בתוך הקצה.
- זרעי צלחת ונוזל על צלחות אגר MS בחצי חוזק. מערבבים את הצלחת לפיזור זרעים באופן שווה.
- עטפו את הלוחות בסרט איטום מעבדה והניחו בתא גידול עם מחזור אור-חושך של 16 שעות/8 שעות ב-23 מעלות צלזיוס ו-70% לחות. השאירו צלחות למשך שבוע (עד שבועיים) כדי לאפשר לנביטה.
4. חיסון זרעים עם חיידקים נבחרים
- כדי לחסן זרעי זנב חתול, עקוב תחילה אחר פרוטוקול נביטת הזרעים הסטרילי לעיל עד שלב 3.6 לייצור זרעים סטריליים. הסר את שטיפת המים הסופית מצינור הפוליפרופילן החרוטי בנפח 15 מ"ל כמתואר בשלב 3.6 לעיל.
- באמצעות תרביות מיקרוביאליות שגדלו בלילה מחוסנות מבודד או קהילה בודדת, מדדו את ה-OD600 ונרמלו לערך ספיגה של 1.0 על ידי דילול במדיום תרבית. דגירה על תרביות לפרק זמן ארוך יותר אם לא מושג OD600 של 1.0.
הערה: כאן, תרביות הוקמו מ-Luteimonas sp. שבודד משורשי צמחים בצפון אלברטה וצומד כדי לבטא חלבון פלואורסצנטי DsRed להדמיה מיקרוסקופית. - סובב 1 מ"ל תרבית ב 9300 x גרם למשך 2 דקות. הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הגלולה ב-1 מ"ל של מי מלח 1x פוספט. סובב ב 9300 x גרם למשך 2 דקות.
- הסר את הסופרנטנט והשהה מחדש את הכדור החיידקי ב-1 מ"ל של ddH2O סטרילי.
- בצינור פוליפרופילן חרוטי בנפח 15 מ"ל, יש לנער כ-1 מ"ל זרעים במהירות נמוכה למשך 24 שעות ב-10 מ"ל של דילול של 1:10 של החיסון המוכן עם חומר פעילי שטח אורגנו-סיליקון של 0.025%.
- עקוב אחר שאר פרוטוקול נביטת הזרעים הסטרילי החל משלב 3.8.
5. גידול לא סטרילי של זנב חתול על אדמה
- מלאו עציצים באדמה דלת חומר אורגני לבחירתכם, והשאירו מרווח של 1 ס"מ מהחלק העליון של העציץ. הרטיבו מראש את האדמה במי ברז ותקעו חורים של 1 ס"מ באדמה.
- בעזרת פינצטה, הסר בעדינות את השתילים שנבטו במשך שבוע מצלחות האגר MS הגדלות כמתואר בשלב 3 לעיל, תוך הקפדה לא לפגוע בשורשים. מניחים בעדינות שתיל בכל חור באדמה ומכסים אותו באדמה.
- מניחים את הסירים במגש וממלאים אותם במי ברז עד לגובה האדמה. על כל 10 עציצים, הוסף 100 מ"ל של 0.5% דשן NPK 20/20/20.
- לכל סט של עשרה סירים, הוסף דשן באופן הבא: שבוע 2 - 100 מ"ל של 0.5% דשן, שבוע 3 - 100 מ"ל של 1.0% דשן, שבוע 4 - 100 מ"ל של 1.0% דשן.
- לאחר 4 שבועות יש להפסיק את ההפריה השבועית ולהפרות רק פעם בחודש עם 100 מ"ל תמיסת דשן של 1.0%. לאחר 4 שבועות, השתל בעציצים גדולים יותר, במידת הצורך. הצמחים פחות רגישים לסוג האדמה בשלב זה, לכן השתמש בכל תערובת.
- המשיכו להשתיל זנבות חתולים כשהם גדלים מעבר למיכל שלהם. הסר עלווה מתה בעזרת מזמרה. דשן זנבות פעם בחודש.
- לצורך ניסויים, השתלו שתילים בסיר קטן שכאשר הוא מונח בתחתית קופסת קצה פיפטה ריקה, מעוגן בצידי הקופסה. זה מאפשר הצפה נכונה של האדמה, ובכך מחקה את תנאי הביצות. אם עורכים ניסויים על זנבות חתולים מבוגרים יותר משתנים באופן דומה כך שניתן לטבול את העציץ כמעט כולו במים.
6. גידול שתילים סטרילי
- עיצוב תא גידול שתילים
הערה: הרכבה של כל יחידת תא גידול שתילים דורשת שתי קופסאות תרבית, מזרק אחד עם קצה נעילת לואר, מסנן סטרילי חד פעמי של 0.2 מיקרומטר וסיליקון עמיד בחום. ראה איור 2 לייצוג חזותי של מערך החדר.- הסר את המכסים מקופסאות התרבות והשתמש במקדחה ידנית ליצירת חורים בקוטר 3.5 ס"מ במרכז המכסים. השתמש בסיליקון עמיד בחום כדי להדביק את החלק העליון של שני המכסים זה לזה.
- קדחו חור בגודל קצה המזרק (קוטר ~ 1 ס"מ) בפינה התחתונה של אחת מקופסאות התרבות. חותכים את קצה המזרק וזורקים את גוף המזרק.
- השתמש בסיליקון עמיד בחום כדי לקבע את קצה המזרק לתוך קופסת התרבות עם חוט מנעול Luer בחלק החיצוני של הקופסה.
- יש לאפשר לסיליקון להתרפא לפחות 24 שעות לפני השימוש.
- גידול סטרילי באדמה
- עקוב אחר פרוטוקול נביטת הזרעים הסטרילי המתואר בשלב 3 כדי להשיג זרעים סטריליים.
- מלאו את יחידת תא הגידול הסטרילית באדמה לבחירה, רטובה במי ברז.
- חיטוי על מחזור נוזלי של 20 דקות, מכסה את קצה נעילת הפיתוי בנייר אלומיניום. לאחר 24 שעות, חיטוי המערכת שוב במחזור נוזלי של 20 דקות. בצע את כל השלבים הבאים במכסה מנוע זרימה למינרית.
- חבר יחידת מסנן של 0.2 μm לחיבור נעילת Luer בתא הגידול (איור 2). פתח את תא הגידול והוסף לאדמה 500 מיקרוליטר של דשן מעוקר בפילטר 1% 20/20/20. מערבבים את האדמה בעזרת מרית סטרילית. בזמן ערבוב האדמה, הוסף ddH2O סטרילי כדי להבטיח שהיא רוויה כראוי ללא רוויה יתר.
- השתמש בסכין גילוח סטרילי כדי לחתוך את אגר MS מצלחות המכילות שתילים בני שבוע לרבעים. השתמש במרית סטרילית כדי להניח את חתיכת האגר על האדמה.
- הנח את יחידת תא הגידול בחממת גידול צמחים במחזור יום-לילה של 16 שעות/8 שעות ב-23 מעלות צלזיוס ו-70% לחות.
- גידול סטרילי בתמיסה הידרופונית
- עקוב אחר פרוטוקול הנביטה הסטרילי המתואר בשלב 3 כדי להשיג זרעים סטריליים.
- חיטוי קופסת קצה פיפטה ואגר MS בחצי חוזק על מחזור נוזלי של 20 דקות. במכסה זרימה למינרית, עטפו את החלק התחתון של תוספת הקצה בסרט איטום מעבדה סטרילי. מלאו כל פתח קצה פיפטה באגר כמעט עד למעלה.
- הוסף את תוספת הקצה בחזרה לקופסת הקצה וממלא את תחתית הקופסה בתמיסת הצמיחה ההידרופונית של Hoagland בחצי חוזק (0.5 מ"מ NH4H2PO4, 3 מ"מ KNO3, 2 מ"מ Ca (NO3) 2, 1 מ"מ MgSO4, 0.023 מ"מ H3BO3, 0.005 מ"מ MnCl2·4H2O, 0.0004 מ"מ ZnSO4·7H2O, 0.0002 מ"מ CuSO4.5H 2O, 0.00007 mM H2MoO4·1H2O, ו-0.045 מ"מ FeSO 4.7H2O, מותאם ל-pH 7.0).
- הסר בזהירות שתילים מצלחות אגר MS והנח אותם על אגר MS על גבי האגר בפתח הפיפטה בתוספת תיבת הקצה.
- סגרו את מכסה קופסת הקצה והניחו בתא גידול במחזור יום-לילה של 16 שעות/8 שעות בטמפרטורה של 23 מעלות צלזיוס ו-70% לחות.
- כאשר הצמחים גדולים מדי עבור קופסת הקצה, השתלו אותם בתא גידול התרבות המתואר בשלב 5.1. כדי להעביר, הסר את כל תקע האגר עם הצמח והעביר אותו לפקק קצף עם חתך רדיאלי. ניתן למקם את פקק הקצף בין שתי קופסאות התרבית, ואת קופסת התרבות התחתונה ניתן למלא בחצי חוזק של הוגלנד.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1 מראה ייצוג של זרע טיפוס שעבר את תהליך הצלקת, יחד עם זרע מצולק שלא לגמרי עם המקור שהוסר, וזרע לא מצולק. ודא שזמן המיזוג מספיק כדי לייצר בעיקר זרעים מצולקים לחלוטין.
לאחר צלקת וייבוש הזרעים, יש לבדוק את כדאיות הזרעים בטכניקת הנביטה הלא סטרילית. בתום 7 ימים, לפחות 20% מהזרעים צריכים להיות בעלי רדיקל מתהווה עם רקמת יורה. שיעורי נביטה נמוכים יותר עשויים להצביע על כדאיות זרעים ירודה או תנאי גידול לא מספקים. עיקור זרעים נוטה לייצר שיעורי נביטה גבוהים יותר...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הפרוטוקול המוצג כאן מספק מדריך מפורט לגידול מיני זנב חתול מזרע ליישומי מעבדה. בעוד שניתן להפיץ בקלות את זנב החתול מייחורי קנה שורש, התחלת צמחים מזרע מאפשרת שונות גנטית בתוך קבוצת דגימה, מבטיחה שהצמחים נמצאים בשלבי צמיחה שווים, ומספקת הזדמנות להתיישבות מוקדמת לניסויי הגדלה ביולוגית מיקרוביאלית. חשוב לזהות נכון את המינים הנאספים, שכן ריבוי של מינים פולשים יותר של זנב חתול עשוי לקדם את העקירה של מינים מקומיים14. יתר על כן, למינים היברידיים פולשים יש לעתים קרובות פורי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
AZ מומן על ידי פרס CGS-M של מועצת המחקר למדעי הטבע וההנדסה של קנדה (NSERC). מחקר על CWTS במעבדת Muench נתמך על ידי Genome Canada באמצעות מענק פרויקט מחקר יישומי בקנה מידה גדול (LSARP) (#18207) בשותפות עם Genome Alberta ו-Genome Quebec.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.2 ומיקרו; מסנן סטרילי M | VWR | 514-4126 | |
| 3&פריים;5&פריים;-דימתוקסי-4&פריים;-הידרוקסיאצטופנון | מעבדות פיטוטק | S7777 | |
| קופסאות גידול עם מכסים (77 מ"מ &פעם; 77 מ"מ &פי 97 מ"מ) | מיליפור סיגמא | V8505 | |
| אטם סיליקון עמיד לחום בטמפרטורה גבוהה | קבוצת הייצור האימפריאלית | KK0205 | |
| סרט איטום במעבדה | מיליפור סיגמא | P7793 | |
| Murashige ו-Skoog media | מעבדות פיטוטק | M401 | |
| אורגנוסיליקון סורפקטנט | מעבדות פיטוטק | S7777 | |
| פיטואגר | ביוטכנולוגיה זהב | P1003 | |
| פוליסורבט 20 | רוש | 11332465001 |
מקורות
- Ciria, M. P., Solano, M. L., Soriano, P. Role of Macrophyte Typha latifolia in a Constructed Wetland for Wastewater Treatment and Assessment of Its Potential as a Biomass Fuel. Biosys Eng. 92 (4), 535-544 (2005).
- Shelef, O., Gross, A., Rachmilevitch, S. Role of Plants in a Constructed Wetland: Current and New Perspectives. Water. 5 (2), 405-419 (2013).
- Parde, D., et al. A review of constructed wetland on type, treatment and technology of wastewater. Environ Tech Innovation. 21, 101261(2021).
- Abdullah, S. R. S., et al. Plant-assisted remediation of hydrocarbons in water and soil: Application, mechanisms, challenges and opportunities. Chemosphere. 247, 125932(2020).
- Noor, I., et al. Heavy metal and metalloid toxicity in horticultural plants: Tolerance mechanism and remediation strategies. Chemosphere. 303, 135196(2022).
- Vymazal, J. Plants used in constructed wetlands with horizontal subsurface flow: A review. Hydrobiologia. 674 (1), 133-156 (2011).
- Sandoval, L., Zamora-Castro, S. A., Vidal-Álvarez, M., Marín-Muñiz, J. L. Role of Wetland Plants and Use of Ornamental Flowering Plants in Constructed Wetlands for Wastewater Treatment: A Review. Appl Sci. 9 (4), 685(2019).
- Wu, H., et al. Constructed wetlands for pollution control. Nat Rev Earth Environ. 4, 218-234 (2023).
- Yang, Y., Shen, Q. Phytoremediation of cadmium-contaminated wetland soil with Typha latifolia L. and the underlying mechanisms involved in the heavy-metal uptake and removal. Environ Sci Pollution Res. 27 (5), 4905-4916 (2020).
- Leto, C., Tuttolomondo, T., La Bella, S., Leone, R., Licata, M. Effects of plant species in a horizontal subsurface flow constructed wetland - phytoremediation of treated urban wastewater with Cyperus alternifolius L. and Typha latifolia L. in the West of Sicily (Italy). Ecol Eng. 61, 282-291 (2013).
- Sesin, V., Davy, C. M., Freeland, J. R. Review of Typha spp. (cattails) as toxicity test species for the risk assessment of environmental contaminants on emergent macrophytes. Environ Pollution. 284, 117105(2021).
- Murashige, T., Skoog, F. A Revised Medium for Rapid Growth and Bio Assays with Tobacco Tissue Cultures. Physiol Plantarum. 15 (3), 473-497 (1962).
- Rogers, S., Beech, J., Sarma, K. S. Shoot regeneration and plant acclimatization of the wetland monocot cattail (Typha latifolia). Plant Cell Rep. 18 (1), 71-75 (1998).
- Tangen, B. A., et al. Distributions of native and invasive Typha (cattail) throughout the Prairie Pothole Region of North America. Wetlands Ecol Management. 30 (1), 1-17 (2022).
- Pieper, S. J., Nicholls, A. A., Freeland, J. R., Dorken, M. E. Asymmetric Hybridization in Cattails (Typha spp.) and Its Implications for the Evolutionary Maintenance of Native Typha latifolia. J Heredity. 108 (5), 479-487 (2017).
- Lansdown, R. V. Typha latifolia. The IUCN Red List of Threatened Species 2017. , (2017).
- Bedish, J. W. Cattail Moisture Requirements and their Significance to Marsh Management. Am Midland Naturalist. 78 (2), 288(1967).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
