כאן, אנו מציגים פרוטוקול לייצור רפידות אגר מתועלות באמצעות תבניות PDMS שנוצרו מתקליטי ויניל. הערוצים מאפשרים למשתמשים לכוון בעדינות את Caenorhabditis elegans כדי לשפר את ניגודיות ההדמיה ולהקל על השוואת המבנים. יכולות אלה שימושיות במיוחד במחקרי התחדשות עצבית.
מאמר שיטה
התאמה עדינה של אוריינטציה של Caenorhabditis elegans על רפידות אגר מתועלות להדמיה של התחדשות עצבית
במאמר זה
סיכום
תקציר
Caenorhabditis elegans הוא אורגניזם מודל הנמצא בשימוש נרחב לחקר תהליכים ביולוגיים. השקיפות והגודל הקטן שלו הופכים אותו לאידיאלי להדמיית רקמות, תאים ומבנים תת-תאיים. רפידות אגר שטוחות מסורתיות להדמיה C. elegans מגבילות את השליטה על כיוון החיה, ומגבילות את המבט בעיקר לפרספקטיבות רוחביות. מגבלה זו מסבכת את ההדמיה של מבנים גביים-גחוניים ומפחיתה את בהירות התמונה, במיוחד בבעלי חיים מבוגרים עם פיגמנטציה מוגברת וקטרים גדולים יותר. כדי להתגבר על אתגרים אלה, פיתחנו רפידות אגרוז מתועלות המאפשרות שליטה מדויקת בהתמצאות בעלי החיים. ערוצים אלה מאפשרים לחוקרים לסובב ולתקן C . elegans במיקומים מוגדרים, מה שמקל על הדמיה בו זמנית של מבנים מרובים ומשפר את רזולוציית התמונה על ידי קירוב תאי מטרה למטרת המיקרוסקופ. זה שימושי במיוחד להדמיית סיבים עצביים מחודשים לאחר הניתוח, שעלולים לצמוח בכיוונים שקשה ללכוד עם רפידות אגר שטוחות מסורתיות. שיטה זו נגישה, שכן ייצור רפידות אגר מתועלות דורש את אותו זמן וחומרים כמו רפידות שטוחות, מה שהופך אותה לאופציה מעשית עבור רוב המעבדות.
מבוא
הנמטודה Caenorhabditis elegans (C. elegans) היא אורגניזם מודל בשימוש נרחב לחקר תהליכים ביולוגיים כגון התפתחות והתנהגות בשל הגנטיקה השמורה מאוד שלו עם עמיתים יונקים1. חוקרים מטפחים C. elegans על צלחת מדיום גידול נמטודות (NGM) בסביבה מבוקרת היטב המתקננת את תנאי הניסוי ומאפשרת ייחוס מדויק יותר של התוצאות למשתנים ניסיוניים. החיה שקופה, ומאפשרת הדמיה ברורה של רקמות, תאים ומבנים תת-תאיים. C. elegans הם קטנים, כאשר החיות הבוגרות הן באורך של ~1 מ"מ ובקוטר של 80 מיקרומטר, מה שמאפשר למקם מספר בעלי חיים על תושבת שקופית אחת להדמיה1. גודלם הקטן מאפשר גם לתמונה בודדת ללכוד את האורגניזם כולו תוך פירוק תאים בודדים, דבר חיוני להדמיית התחדשות סיבי הנוירונים. סינרגטי ליתרונות אלה למיקרוסקופיה, ההתפתחות המהירה, האנטומיה הסטריאוטיפית והגנטיקה הקלה של C. elegans מאפשרים מחקרים בקנה מידה גדול1.
ההליך האופייני להדמיה של תאים ב - C. elegans הוקם לפני עשרות שנים ונותר ברובו ללא שינוי. חוקרים משתמשים ברפידות אגר שטוחות על מגלשות כדי להרכיב ולשתק את בעלי החיים להדמיה של התאים שלהם2. כיסוי על גבי הכרית מחזיק את בעלי החיים במקומם ומגן על עדשת המיקרוסקופ. חשוב לציין, לכיסוי יש מקדם שבירה גבוה שמגדיל את הצמצם המספרי של האור שנלכד ומשפר את רזולוציית ההדמיה. בנוסף, החלקת הכיסוי מפחיתה עיוות בהעברת האור. לפיכך, כיסוי משפר את ההדמיה של תאי מטרה ומבנים.
עם זאת, כאשר משתמשים בהם עם כיסוי, רפידות אגר שטוחות מגבילות לעתים קרובות את התמצאות בעלי החיים. C. elegans מתכופפים לאורך כיוון הגב-גחון (DV) שלהם ולכן הם מאמצים אוריינטציה רוחבית על כרית אגר שטוחה. עם זאת, גם לאחר קיבוע, יישור וסיבוב מראש לכיוון DV, מיקום החלקת הכיסוי מחזיר כמעט את כל החיות לראייה רוחבית (איור 1). אנו מאמינים ששינוי כיוון זה מתרחש מכיוון שהחלקת הכיסוי דוחפת את הפות הבולטת של C. elegans הצידה. בעלי חיים צעירים יותר ללא פות הם בעלי אוריינטציה אקראית יותר. שליטה מוגבלת זו על ההתמצאות היא בעייתית משתי סיבות לפחות. ראשית, ייתכן שהוא לא יתיר להציב שני מבנים בשדה ראייה אחד (למשל, דו-צדדי) מה שמקשה על ההשוואה ביניהם. שנית, הגדרת הכיוון חשובה לאופטימיזציה של איכות ההדמיה, מכיוון שמבנים מעניינים בדרך כלל מצולמים בצורה הטובה ביותר כשהם קרובים למטרה. הסיבה לכך היא שהמטרות מדמות עומק מוגבל בתוך המדגם (כלומר, מרחק עבודה) ומכיוון שהאור ממקומות עמוקים יותר חווה יותר פיזור וספיגה.
עבור C. elegans, השליטה המוגבלת על ההתמצאות היא בדרך כלל חמורה יותר אצל בעלי חיים מבוגרים. בעלי חיים בגילאי L1 עד L4 קטנים יותר בקוטר, מה שהופך חלק גדול יותר של התולעת להדמיה. לזחלים אלו יש גם פחות פיגמנטציה, וכתוצאה מכך ספיגה מופחתת של אור נראה ופיזור פוטונים, מה שמשפר את בהירות התמונה והרזולוציה. לעומת זאת, לבעלי חיים בוגרים יש קוטר גדול יותר ויותר פיגמנטציה, מה שמציב אתגרים להדמיה במישורי z עמוקים יותר מכיוון שהחלקת הכיסוי משפיעה על הכיוון הראשוני.
בשנת 2008 הצגנו אסטרטגיה המשתמשת ברפידות אגר עם תעלות כדי להתגבר על אתגרים אלה על ידי שמירה על האוריינטציה של בעלי חיים 3,4. כפי שמתואר להלן, משתמשים מסובבים בעלי חיים משותקים בערוצים לכיוון הרצוי על ידי ציון ציוני דרך אנטומיים. התעלות מחזיקות בעלי חיים בשקעים בין משטחי אגר מוגבהים, ממזערות את הכוח על החיה במהלך הנחת הכיסוי ומבטלות את סיבוב החיה. מכיוון שייצור רפידות מתועלות ורפידות שטוחות נפוצות עוקב אחר כמעט אותו הליך ודורש את אותו זמן, הטכניקה שלנו נגישה מאוד. מעבדות רבות משתמשות בטכניקה שלנו כדי לשתק את C. elegans לחקר תכונות אנטומיות, התבוננות בהתפתחות וניתוח תרומות עצביות להתנהגות 5,6,7,8. החלק הבא מתאר את כל התהליך להכנת אגר מתועל, החל מתקליט ויניל שנחתך לרבעים בעזרת סכין חמה. ראשית, אנו מתארים את ייצור תבנית הפולידימתילסילוקסן (PDMS) המשמשת ליציקת אגר מתועל. לאחר מכן, אנו מראים כיצד לייצר את האגר המתועל צעד אחר צעד. ההליך כולו צפוי להימשך 3 שעות ללא מומחיות. בעקבות הליך ייצור ה-PDMS, רפידות המיוצרות עם התבנית ייקח את אותו זמן להכין כמו רפידות אגר טיפוסיות (מספר דקות).
פרוטוקול
1. הכנת פולידימתילסילוקסן (PDMS) לייצור
- יוצקים יחס של 1:10 של חומר הריפוי המהיר לבסיס לכלי שקילה חד פעמי. מערבבים את הנוזל הלא נרפא במשך 45 שניות עד שהנוזל נטמע במלואו ומלא בבועות.
- הנח את המגש במייבש ואקום בהטיה. מחזור את הלחץ בין -0.09 ל-0.1 kPa 3x כדי לאפשר לבועות אוויר לעלות על פני השטח.
- שמור את הוואקום דולק כשעה בטווח לחץ של -0.09 עד -0.1 kPa עד שנותרו מעט בועות גלויות, הניתנות להסרה ידנית.
2. ייצור תבנית PDMS של תקליט ויניל
- שטפו את תקליט הוויניל וצלחת הזכוכית במים נטולי יונים (DI). ודא היעדר אבק כדי להשיג את התבנית הטובה ביותר. הניחו לתקליט הוויניל להתייבש באוויר עד לשימוש.
- הניחו יריעת נייר אלומיניום על גבי הפלטה החמה כדי לתפוס עודפי PDMS.
- שים שקופית זכוכית בכל קצה של תקליט הוויניל כדי להגדיר את עובי התבנית לרוחב שקופיות הזכוכית. זה מבטיח גובה אחיד בעת לחיצה על זכוכית הזכוכית על ה-PDMS הלא מעובד.
- יוצקים את נוזל ה-PDMS הלא נרפא בצד אחד של תקליט הוויניל.
- התבונן בבועות באמצעות השתקפות אור ממשטח הנוזל והסר אותן בעזרת קצה פיפטה. הטה את לוחית הזכוכית והורד את הצלחת לאט לאט ואפשר לאוויר לברוח, ומונע הכנסת בועות.
- רפאו את ה-PDMS ב-80 מעלות צלזיוס למשך 35 דקות.
- הסר את תקליט הוויניל מהפלטה החמה ותן לו להתקרר. קלף בזהירות את ה-PDMS מתקליט הוויניל כדי למנוע קריעה.
- השתמש בשקופית זכוכית חדשה כמדריך לחיתוך ה-PDMS עם סכין גילוח חד ליצירת תבנית אגר מתועלת.
3. ייצור רפידות אגר מתועלות עם NaN3
הערה: הנוהל והחומרים עבור רפידות אגר שטוחות נקבעו בעבר9. הליך זה דומה מאוד.
- הוסף 0.6 גרם אגר ו -30 מ"ל נוזלNGM 9 לבקבוק. מוסיפים מוט ערבוב ומחממים על פלטה חמה בחום של 120 מעלות צלזיוס.
- הוסף 120 מיקרוליטר של מלאי NaN3 (ריכוז מלאי של 1 M) לאחר המסת הג'ל.
- שטפו את תבנית ה-PDMS במים ותנו לה להתייבש באוויר. הנח את תבנית ה-PDMS בין שתי קבוצות של זוגות שקופיות.
- פיפטה אגר למעלה ולמטה כדי לחמם את קצה הפיפטה. פיפטה 300 מיקרוליטר של אגר מומס על תבנית ה-PDMS, מפזרת ידנית אגר על פני ערוצים, שכן מיקום השקופיות יפזר אגר לאורך הערוצים.
- הנח שקופית מיקרוסקופ ישירות על האגר, מונח על השקופיות בצדדים. הסר את השקופית לאחר שהאגר מתקרר.
4. הרכבה של C. elegans
- לאחר שהמגלשות מתקררות, הרם את המגלשה ישר מהתבנית ללא גזירה.
- העבר בעלי חיים לתעלות לאחר שהם משותקים על ידי NaN3
- סובבו את בעלי החיים לכיוון הרצוי.
- הנח כיסוי על הכרית. הטה את הכרית ודחף קלות כלפי מטה מצד אחד לצד השני כדי לדחוף אוויר הצידה ולהימנע מיצירת בועות.
תוצאות
ייצור תבנית PDMS
רכיבה על לחץ הוואקום במהלך ייצור התבנית מנקבת ומסירה בועות אוויר מה-PDMS הלא נרפאים, מה שמבטיח עובש נטול בועות. כפי שמוצג באיור 3D , בועות עולות אל פני השטח ומנקבות. תבניות נטולות בועות יכולות לייצר תעלות נקיות.
התמצקות תבנית PDMS
בעת הנחת זגוגית הזכוכית על תקליט הוויניל, הימנע מיצירת פערי אוויר. פערים אלה עלולים להוביל לעובי לא אחיד או לפגמים במשטח. בועות, אם קיימות, ניתנות לזיהוי חזותי. לחיצה על זגוגית הזכוכית מצד אחד לצד השני מעבירה אוויר, ממזערת את היווצרות הבועות ומבטיחה עובי תבנית אחיד המוצג באיור 4A.
שימוש ברפידות אגר מתועלות להתמצאות עדינה של C. elegans
רפידות האגר המתועלות מאפשרות התמצאות מדויקת של C. elegans. אנו מגדירים את הכיוון של החיה על ידי גלגול קל של החיה עם קיסם פלטינה, תוך אימות הכיוון באמצעות ציוני דרך כמו למשל הפות או המעי בצורת S (איור 5A,C). אנו מאשרים את הכיוון תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי לפני העברת חיות למיקרוסקופ הפוך שמוצג באיור 5B,D.
הערכת התחדשות של סיבי נוירונים עם רפידות אגר מתועלות
רפידות אגר מתועלות משפרות את איכות ההדמיה של התחדשות עצבית על ידי כיוון אופטימלי של החיה. מיקום סיבי נוירונים מחודשים קרוב יותר לעדשת המטרה מפחית את פיזור האור וספיגתו, ומשפר את בהירות התמונה. איור 5E,F מראה כי הצבת אתר ההתחדשות קרוב יותר למטרה משפרת את איכות ההדמיה, ומאפשרת ניתוח מדויק יותר של צמיחה מחודשת של עצבים.
איור 1: Caenorhabditis elegans על רפידות שטוחות ומתועלות. (A) בעל חיים על משטח אגר שטוח בכיוון DV; הפות פונה לכיסוי. (B) החדרת הכיסוי דוחפת את הפות הצידה, ומאלצת את החיה לכיוון רוחבי. (C) בעל חיים על כרית אגר מתועלת בכיוון DV. (D) בעל חיים נשאר בכיוון DV לאחר הכנסת הכיסוי. (E) תמונת שדה בהיר של מוטנט רולר על כרית אגר מתועלת בכיוון DV. (F) תמונת שדה בהיר עם כריכה, אותה חיה כמו E נשארת בכיוון DV. קיצורים: DV = גבי-גחון; lat = לרוחב. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2: חומרים וציוד עבור ייצור PDMS. (A) ערכת אלסטומר סיליקון SYLCAP 284-F. (ב) קנה מידה. (ג) מזרק פלסטיק. (ד) מייבש ואקום. (ה) פלטה חשמלית. (F) תקליט ויניל ארוך בגודל 12 אינץ', מתפרק לפי הצורך. (ז) זגוגית זכוכית. קיצור: PDMS = פולידימתילסילוקסן. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3: ערבוב ושאיבת PDMS לא נרפאים. (א) מערבבים את הבסיס וחומר הריפוי במגש. (ב) הנח את המגש בתא ואקום. (ג) מחזור ואקום שלוש פעמים כדי לאפשר לבועות לעלות על פני השטח. (D) אחרי שעה אחת, רוב הבועות התפוצצו. שים לב לשידור משופר באמצעות PDMS. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 4: הצגת חלונית זכוכית ל-PDMS לא-מרפא ללא בועות. (א) הכנסת זכוכית על תקליט ויניל ללא בועות. (ב) תבנית PDMS מוצקה שהוסרה מהרשומה, עם ערוצי פירוט משובצים. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
איור 5: תמונות שדה בהירות ופלואורסצנטיות של C. elegans המותקנות על אגר מתועל. (A) תמונת שדה בהיר של חיה בכיוון DV דו-צדדי. ציון דרך אנטומי לכיוון DV: מעי ספירלי בצורת S (רקמה כהה יותר מסומנת על ידי חץ) חוצה את קו האמצע ~60% מהמרחק מהאף לזנב. (B) תמונה פלואורסצנטית של תאי עצב בכיוון DV, אותה חיה כמו A. (C) תמונת שדה בהיר של חיה בכיוון רוחב. נקודת ציון אנטומית לכיוון הרוחב: הצד הפונה לפות. (D) תמונה פלואורסצנטית של תאי עצב בכיוון לאט, אותה חיה כמו C. (E) התמצאות עם התחדשות (חץ) בצד העמוק (הרחוק) של החיה. (F) אוריינטציה עם התחדשות בבעל חיים רדוד יותר קרוב יותר למטרה; התחדשות ברורה יותר (חץ). פסי קנה מידה = 20 מיקרומטר. קיצורים: DV = גבי-גחון; lat = לרוחב. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
דיון
היתרון העיקרי של רפידות אגר מתועלות הוא יכולתן לשמור על אוריינטציה של בעלי חיים להדמיה. התעלות מתאימות לבעלי חיים בוגרים, ומאפשרות סיבוב מבוקר שנשמר עם החדרת הכיסוי. הצלחנו לצלם חיות פראיות, רולר וזבל. אנו מכוונים נכון בעלי חיים באמצעות ציוני דרך אנטומיים, המאפשרים הדמיה והשוואה של מבנים מרובים בשדה ראייה אחד ומקרבים את תאי המטרה לפני השטח. בפרט, סיבוב זה מקל על הדמיה בגב או בגחון (תצוגות דו-צדדיות), המאפשרות השוואה בין הצד השמאלי והימני של החיה.
בעבר, הדמיה והשוואה של מבנים דו-צדדיים אלה היו דורשים ערימות z תלת מימדיות ונורמליזציה פוטנציאלית של אותות כדי להסביר שידור מופחת בעומקים גדולים יותר. לפיכך, הכיוון המוגדר המתאפשר על ידי אגר מתועל מאפשר הדמיה עקבית יותר על פני תולעים מרובות ואמור לאפשר מדידות משופרות. זה מועיל במיוחד להערכה לאחר ניתוח של סיבים עצביים מחודשים, שיכולים לצמוח בכיוונים שקשה לדמיין, כגוןהיקפי 2.
בנוסף, האגר המתועל מפחית את הלחץ על בעלי חיים מכיוון שהם ממוקמים בשקע המקל על לחץ הכיסוי ומקדם פיזיולוגיה תקינה5. בעוד שזנים רפויים עשויים להתפתל במהלך ההרכבה, התעלות מעודדות תצורה ליניארית של בעלי חיים וסיבוב של החיה כולה. ביישום אחר, הדפוס יכול גם להגביל את תנועת בעלי החיים כדי להפחית את כמות חומר ההרדמה הנדרשת כדי לצלם או לצפות בבעל החיים8.
לבסוף, טכניקת האגר המתועלת נגישה גם היא. לאחר ייצור תבניות, יצירת רפידות אגר מתועלות דורשת בערך את אותה כמות זמן, מומחיות ועלות כמו הכנת רפידות אגר שטוחות רגילות. כל הרכיבים הדרושים ליצירת תבנית PDMS משותפים למעבדות אקדמיות רבות או נקנים באינטרנט. העמידות של תבניות PDMS הופכת אותן לאופציה חסכונית עבור מעבדות, המסוגלות לעמוד בשימוש נרחב לאורך זמן. תבניות PDMS יכולות להחזיק מעמד שנים ומאות שימושים. אנו ממשיכים להשתמש בתבנית בת 17 שנה עם השפלה בינונית. אנו ממליצים לאחסן את התבניות בטמפרטורת החדר במיכל כדי לשמור עליהן נקיות מפסולת, אותה ניתן לשטוף במים נטולי יונים במידת הצורך.
למרות היתרונות הללו, ישנן מספר מגבלות הקשורות לטכניקה שלנו. כוח הפיק המשמש להצבת בעלי חיים על הכרית יכול לעוות את התעלות, מה שעלול להשפיע על מיקום החיה. כמו בכל מניפולציה עדינה, מיקום וסיבוב החיה לכיוון הרצוי יכול להיות גוזל זמן, מה שמגביר את החשיפה של החיה לחומר הרדמה ועלול לגרום ללחץ. תעלות יכולות גם ללכוד אוויר וליצור בועות במהלך מיקום הכיסוי, מה שעלול להפריע לבהירות התמונה על ידי פיזור אור. אנו דנים בדרכים למזער בועות בפרוטוקול. הניסיון שלנו מצביע על כך שרוב החסרונות של אגר מתוקשר נמנעים במידה רבה על ידי מעט אימון ותרגול.
כיוונים עתידיים לאופטימיזציה של ערוצים אלה כוללים פיתוח עיצובים המותאמים לצרכי ניסוי ספציפיים, כולל גדלים וצורות שונות לגילאים ופנוטיפים שונים של C. elegans. ייצור גדלי תעלות מותאמים אישית על ידי ננו-ייצור10 עשוי להפחית את ההשפעה הפיזיולוגית על בעלי חיים בהשוואה לתעלות גנריות5. לסיכום, היישום של רפידות אגר מתועלות מאפשר הדמיה ברזולוציה גבוהה של מבנים לא ברורים בבעלי חיים מבוגרים. רפידות אלו שומרות על הכיוון של C. elegans, מה שמוביל לאיכות הדמיה משופרת והדמיה מפורטת, תוך הפחתת הלחץ על בעלי החיים בשל המבנה התומך של התעלות.
גילויים
למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.
תודות
המימון ניתן על ידי NIH R56NS128413. אנו מודים לנוח ג'וזף (המחלקה הביו-הנדסית הצפון-מזרחית) על הסיוע בעיבוד תקליטי ויניל. אנו מודים לחברי מעבדת צ'ונג על הערות מאירות עיניים על כתב היד.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| בקבוק ארלנמאייר 125 מ"ל | קורנינג | 4980-125 | |
| 33 1/2 סל"ד או 12 אינץ' תקליט ויניל (LP) נגינה ארוכה | לא ישים | עומק ערוץ בודד: 50 ומיקרו; מ ', רוחב: 200 ומיקרו; מזרק | |
| פלסטיק m 30 מ"ל | פישר סיינטיפיק | 50-793-817 | |
| 90% פלטינה, 10% חוט אירידיום | Tritech Research | PT-9010 | המשמש ליצירת |
| רדיד אלומיניום פיק פלטינה | אמזון | N/A | |
| סידן כלוריד | פישר סיינטיפיק | AAL131910B | |
| זכוכית | זכוכית N/A | N/A | 7 אינץ' x 5 בזכוכית נלקחה ממסגרת |
| פיפטה מזכוכית | פישר סיינטיפיק | 13-678-20A | המשמשת ליצירת |
| פלטה חמה לפיק פלטינה | Thermofisher | SP88857104 | |
| מגנזיום גופרתי | פישר AA3333736 | ||
| שקופיות מיקרוסקופ | Mckesson | 938360 | |
| אגר בדרגת ביולוגיה מולקולרית | Benchmark Scientific | A1705 | |
| אשלגן פוספט דו-בסיסי | פישר סיינטיפיק | P290-500 | |
| אשלגן פוספט מונובסיסי | פישר סיינטיפיק | P285-500 | |
| נתרן אזיד | פישר סיינטיפיק | AAJ2161022 | |
| נתרן כלורי | Fisher Scientific | BP358-212 | |
| זכוכית כיסוי מרובע | Fisher Scientific | 12-541-016 | |
| SYLCAP 284-F (ריפוי מהיר) ערכת מעטפת אלסטומר סיליקון, שקופה, שקופה אופטית, תערובת 10:1, 500 גרם/מ"ל (0.5 ק"ג), מהירה יותר מ-Sylgard 184 ודומה | מייבש ואקום MicroLubrol | N/A | |
| פישר סיינטיפיק | 08-648-100 | ||
| צלחת שקילה | פישר סיינטיפיק | 01-549-750 |
מקורות
- Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).
- Bargmann, C. I., Avery, L. Laser killing of cells in Caenorhabditis elegans. Methods Cell Biol. 48, 225-250 (1995).
- Zhang, M., et al. A self-regulating feed-forward circuit controlling C-elegans egg-laying behavior. Curr Biol. 18 (19), 1445-1455 (2008).
- Chung, S. H., Mazur, E. Femtosecond laser ablation of neurons in C. elegans for behavioral studies. Appl Phys A-Mater Sci Process. 96 (2), 335-341 (2009).
- Zellag, R. M., et al. CentTracker: a trainable, machine-learning-based tool for large-scale analyses of Caenorhabditis elegans germline stem cell mitosis. Mol Biol Cell. 32 (9), 915-930 (2021).
- Huang, Y. C., et al. A single neuron in C. elegans orchestrates multiple motor outputs through parallel modes of transmission. Curr Biol. 33 (20), 4430-4445.e6 (2023).
- Rasmussen, N. R., Dickinson, D. J., Reiner, D. J. Ras-dependent cell fate decisions are reinforced by the RAP-1 small GTPase in Caenorhabditis elegans. Genetics. 210 (4), 1339-1354 (2018).
- Rivera Gomez, K., Schvarzstein, M. Immobilization of nematodes for live imaging using an agarose pad produced with a vinyl record. MicroPubl Biol. 2018, (2018).
- Chung, S. H., Clark, D. A., Gabel, C. V., Mazur, E., Samuel, A. D. T. The role of the AFD neuron in C. elegans thermotaxis analyzed using femtosecond laser ablation. BMC Neuroscience. 7 (1), 30(2006).
- Gerhold Abigail, R., et al. Investigating the regulation of stem and progenitor cell mitotic progression by in situ imaging. Curr Biol. 25 (9), 1123-1134 (2015).
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
