מאמר שיטה

מתן חומרי הרדמה נדיפים לזחלי דג הזברה לתצפית התנהגותית

957 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/67896

⸱

6 ביוני 2025

 ,  , 
1Perelman School of Medicine, Department of Anesthesiology and Critical Care, University of Pennsylvania

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מציג שיטה נגישה ליצירת סביבה אטומה לגז למתן חומרי הרדמה נדיפים לזחלי דגי זברה לניסויים התנהגותיים.

תקציר

מחקר זה מתאר שיטה ייחודית למתן חומרי הרדמה נדיפים, כגון איזופלורן וסבופלורן, לזחלי דגי זברה במהלך ניסויים התנהגותיים. בעוד שדגי הזברה מציעים יתרונות רבים כאורגניזם מודל של בעלי חוליות - כולל התנהגויות מורכבות, יכולת גנטית, עוברים שקופים והתפתחות מהירה - השימוש בהם בחקר חומרי הרדמה נדיפים היה מוגבל. מתן חומרי הרדמה נדיפים דורש לעתים קרובות מכשירים מורכבים או מסורבלים שעשויים שלא להיות נגישים באופן נרחב, מה שיוצר מחסומים למחקר פרמקולוגי של חומרי הרדמה נדיפים באורגניזמים מודלים מימיים. שיטה זו מציגה טכניקה פשוטה המשתמשת ביריעות סיליקון דביקות ליצירת אטימה אטומה לגז על לוחות זכוכית של 96 בארות. התיקוף בוצע באמצעות הערכת תנועה ספונטנית, שלא הראתה הבדלים משמעותיים בין בארות אטומות לפתוחות לאורך תקופה של 90 דקות. בנוסף, ריכוז חומרי ההרדמה נשאר יציב לאורך זמן, כפי שנמדד על ידי HPLC. התוצאות המייצגות כוללות קביעה ניסויית של ערכי ריכוז אפקטיבי חציוני (EC50) עבור סבופלורן. מחקר זה מספק גישה פשוטה ונגישה לניסויים פרמקולוגיים באמצעות חומרי הרדמה נדיפים, שניתן להתאים בקלות לחקר חומרים נדיפים אחרים ונקודות קצה ניסיוניות.

מבוא

מודלים של בעלי חיים שאינם מימיים (תולעים, זבובים, מכרסמים, ארנבות, פרימטים וכו') היו מבחינה היסטורית המודלים הנפוצים ביותר לחקר פרמקולוגיה של הרדמה. בכל אחד מהמינים הללו, חומרי הרדמה נדיפים (הניתנים באמצעות שאיפת גז) מאתגרים הרבה פחות ממתן חומרי הרדמה תוך ורידיים (הניתנים בנתיבים תוך-ורידיים או תוך-צפקיים)1. בנוסף לאתגר הטכני של מתן התרופות התוך-ורידיות, השגת מצב יציב של הרדמה היא הרבה יותר קלה עם חומרים נדיפים מאשר חומרים תוך-ורידיים2.

מתן חומרי הרדמה תוך ורידיים למינים מימיים של זחלים יכול להיות מושג על ידי דיפוזיה מהמדיום המימי הסובב אותם 3,4, ולכן הוא דומה יותר למתן חומרי הרדמה נדיפים למינים שאינם מימיים. במשך שנים רבות, ראשנים (Xenopus laevis) היו המודל הנבחר לחקר חומרי הרדמה בשל קלות מתן התרופות ופרמקוקינטיקה במצב יציב שהושגה על ידי הוספת אמבטיה פשוטה של חומר ההרדמה למי הבריכה המלאכותית שלהם 5,6. עם זאת, ישנן דוגמאות מעטות יחסית לחקר חומרי הרדמה נדיפים במודל זה בשל הדרישה למכשירים אטומים לגז שלעתים קרובות בנויים במיוחד ויכולים להיות מסורבלים לשימוש 7,8.

בשנים האחרונות הפך דג הזברה למודל מועדף לחקר חומרי הרדמה תוך ורידיים בשל אותה קלות במתן תרופות בנוסף ליתרונות אחרים כמו ההתנהגויות המורכבות המתוארות היטב שלהם וזמינות יחידות מסחריות לצפייה בהתנהגויות אלה9. מחקרים רבים שנערכו לאחרונה השתמשו ביחידות תצפית זמינות מסחריות כאלה כדי לסנן תרכובות נוירואקטיביות, כולל חומרי הרדמה, תוך שימוש בפורמטים של צלחות של 96 בארות ו-24 בארות כדי לכמת את התנהגות זחלי דג הזברה 4,10,11,12,13,14,15 . שלבי הזחל מתאימים במיוחד למחקרי פרמקולוגיה בשל יכולתם להעריך תגובות התנהגותיות רבות, גודלם הקטן, תאימות התפוקה הגבוהה והמעגלים העצביים המאופיינים היטב 9,16,17. עם זאת, מגבלה משמעותית אחת במחקרים אלה של חומרי הרדמה במודל דג הזברה היא הקושי היחסי במתן חומרי הרדמה נדיפים. מגבלה זו הובילה לדוגמאות מועטות להשוואה בין חומרים נדיפים לוורידים 4,15,18. היכולת ללמוד ולהשוות בקלות את שני סוגי חומרי ההרדמה במודל של חיה אחת מוסיפה כלי חשוב להקל על חקר פרמקולוגיה מרדימה בכל המחלקות.

באופן מסורתי, חקר חומרי הרדמה תוך ורידיים במין מימי דרש ציוד מיוחד, לעתים קרובות מותאם אישית, שיכול להיות קשה לשימוש או שאינו אטום מספיק לגז כדי למנוע אובדן חומר ההרדמה למשך הניסוי. ההליך המתואר כאן מציג אמצעי חלופי נגיש לייצור אטימה אטומה לגז בתא זכוכית המתאים לתצפית על התנהגות דג הזברה באמצעות יחידת תצפית מסחרית (ראה טבלת חומרים).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים בדגי הזברה נערכו בהתאם לפרוטוקולי שימוש בבעלי חיים שאושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC). דגי זברה בוגרים הוחזקו במתקן הימי של אוניברסיטת פנסילבניה תחת פיקוח המעבדה האוניברסיטאית למשאבי בעלי חיים (ULAR). דגי זברה ארוכי סנפיר מסוג טובינגן גודלו בבית לכל הניסויים ונשמרו בתנאי גידול סטנדרטיים עם מחזור אור/חושך של 13/11 שעות עד שהגיעו ל-5 ימים לאחר ההפריה (dpf). הניסויים נערכו באמצעות שכפולים ביולוגיים, עם מצמדים שמקורם בזוגות הזדווגות נפרדים כדי להבטיח מגוון ביולוגי הולם. פרטים על הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. ייצור יריעות סיליקון דביקות

הערה: ניתן להשיג מקבילות לחומר זה (יריעת סיליקון בתוספת דבק) ממקור מסחרי, אך לעתים קרובות בהוצאה גדולה יותר ובזמינות פחותה.

  1. הניחו את יריעת הסיליקון 0.5 מ"מ על משטח נקי וישר.
  2. בדוק את הסדינים לאיתור קמטים והימנע מהם במידת האפשר.
    הערה: יריעות סיליקון עם קמטים עשויות שלא להיצמד כראוי לסרט ועלולות לגרום לאיטום לא מספק של הבארות ו/או להדמיה לקויה של דג הזברה.
  3. נקו את הסדינים עם 70% אלכוהול כדי להסיר שמן או פסולת והניחו להם להתייבש.
  4. בעזרת מוליך, כגון מברשת, מרחו שכבה דקה ואחידה של פריימר דבק על יריעת הסיליקון. כדי למנוע מריחת יתר, עבדו בחלקים קטנים יותר מכיוון שמקדם הדבק מתייבש במהירות (מתייצב תוך 1-5 שניות).
    הערה: ללא מקדם הדבקה זה, הסרט לא יידבק כראוי ליריעת הסיליקון.
  5. לאחר מריחת מקדם הדבק, יישר את הסרט המצופה כפול עם יריעת הסיליקון כשגב הנייר פונה כלפי מעלה.
  6. מרחו את הסרט בהדרגה על הסיליקון באמצעות רולר כדי להחליק את פני השטח ולהסיר בועות אוויר (לאחר המריחה הראשונית, עבודה עם סיליקון כלפי מעלה תסייע בהדמיה והסרה של בועות אוויר).
  7. אפשר למקדם הדבק להתרפא לחלוטין למשך 24 שעות על משטח ישר.
  8. חותכים את הסיליקון הדביק לרצועות ברוחב 10 מ"מ לפחות (קוטר באר 7.5 מ"מ בתוספת חפיפה מכל צד).
    הערה: בעת שימוש בכל שורה שנייה של לוחית הבאר, שונות רחבה יותר ברצועות לא תשפיע לרעה על בארות בשורות סמוכות, מה שעשוי לא רק להקל על היישום אלא גם להיות הכרחי כדי להשיג איטום סביב כל היקף הבאר.
    1. ודא שהרצועות ארוכות מספיק כדי לכסות לפחות את רוחב שורה אחת של צלחת הבאר.
      הערה: אם משתמשים בצלחת באר שאינה 96 באר, כגון צלחת 24 באר או 48 בארות, ניתן לכוונן או לחתוך את גדלי הרצועות כך שיתאימו למידות הספציפיות של הצלחת, מה שמבטיח כיסוי נכון ללא קשר לגודל הצלחת.

2. הכנת פתרונות

הערה: כל תמיסות המלאי והבדיקה של חומרי הרדמה נדיפים נעשו ממש לפני הניסוי כדי למנוע אובדן ריכוז התרכובות הנדיפות .

  1. עבור כל תמיסה (מלאי או תמיסת עבודה), הוסף נפח של ממס לא נדיף (מי עובר E3, DMSO וכו') לבקבוקון HPLC או נצנוץ שבשילוב עם הדילול הסופי של חומר הרדמה נדיף, הנפח הכולל ימלא את הבקבוקון במידה מספקת וישאיר מרווח ראש מינימלי (ראה איור 1A).
  2. הוסיפו חומר הרדמה נדיף עם מזרק אטום לגז של המילטון ואטמו במהירות את הבקבוקון.
    הערה: ניתן להשתמש בתמיסות מלאי בבקבוקונים עם מכסי מחיצה כדי להקל על דילולים נוספים באמצעות העברת תמיסה עם מזרקים אטומים לגז.
  3. לאחר מכן, מערבבים את הבקבוקונים (מערבולת, סוניקציה) לפי הצורך ומאחסנים אותם באופן זמני תוך כדי הכנת צלחות דג הזברה.

3. הגדרת הניסוי ההתנהגותי

הערה: שלב זה של הפרוטוקול עשוי לדרוש תרגול מסוים. מומלץ לעבוד ללא דגים או תמיסות המכילות חומר יקר עד שנוח עם הטכניקה.

  1. מעבירים דג זברה אחד (5 dpf) לכל שורה שנייה של צלחת הזכוכית בת 96 בארות.
    הערה: השארת כל שורה שנייה ריקה מאפשרת פוטנציאל מופחת לזיהום בארות סמוכות מזליגה מכיוון שהבארות אטומות בשלב 3.4.
  2. הסר בזהירות את תמיסת E3 מכל באר. ניתן לעשות זאת שורה אחת בכל פעם או על הצלחת כולה אם היא מסוגלת לעבוד במהירות.
    הערה: משך הזמן שבו הזחלים היו מחוץ לתמיסה צומצם כדי להפחית את הלחץ הפוטנציאלי. ניתן להשתמש בהליכים חלופיים על סמך צרכים ניסיוניים שונים, כולל הסרה חלקית בלבד של התמיסה לפני הוספת התמיסה המכילה תרופה כדי למזער את הלחץ. יש להתאים את הפרוטוקול לצרכי הניסוי, כולל זמן שיווי משקל שניתן לבעלי החיים כדי לפצות על כל לחץ פוטנציאלי, יעילות ערבוב תמיסות ודיוק הריכוזים של תמיסה המכילה תרופה, אם לא כל ה-E3 מוסר לפני הוספת תמיסת העבודה.
  3. לאחר מכן, השתמש בפיפטה העברה כדי למלא כל באר בשורה בתמיסה הניסיונית. הקפד לא להכניס בועות. מילוי יתר של כל באר (איור 1B).
  4. בעזרת רצועות הסיליקון הדביקות המיוצרות בשלב 1, לחץ את הרצועה כלפי מטה במהירות (איור 1C). זה עוזר למנוע היווצרות בועות ומונע מדגים לעלות על גדותיהם לבארות סמוכות.
  5. לחץ בחוזקה על החלק העליון של הצלחת כדי להבטיח שכל באר אטומה.
  6. חזור על שלבים 2-5 עד להחלפת התמיסה ואטימות הבארות עבור כל שורה שנייה של לוחית הבאר (איור 1D).
  7. הפוך בעדינות את הצלחת ובדוק אם יש בועות אוויר.
    הערה: נוכחותן של בועות אוויר תטשטש את ההדמיה של תנועת דג הזברה.
  8. הנח את הצלחת ביחידת תצפית ההתנהגות (צד דבק הסיליקון כלפי מטה) ובצע את הניסוי ההתנהגותי (ראה סעיף תוצאות לפרטים).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השוואה לתצפית מסורתית על בארות פתוחות
על מנת להעריך האם לאיטום דבק יש השפעה כלשהי על תנועה ספונטנית, נעשתה השוואה בין הבקרות בבארות פתוחות לעומת בארות אטומות. כפי שניתן לראות באיור 2A, לא נצפה הבדל מובהק סטטיסטית בתנועה בין הקבוצות האלה למשך הזמן הסטנדרטי של ~30 דקות ששימש בניסויים המתוארים במאמר זה. מתוך הכרה בכך שפרדיגמות ניסוי אחרות עשויות להזדקק לחשיפה ניסויית ארוכה יותר, בוצע קורס זמן של שעתיים, שלא חשף הבדל סטטיסטי בתנועה עד לציון השעתיים (ראה א...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מאמר זה מתאר שיטה למתן חומרי הרדמה נדיפים, כמו סבופלורן, לדגי זברה זחלים, ששימשה לכימות עוצמת ההרדמה הנדיפה בדגים מסוג בר. למרות שטכניקה זו פשוטה מבחינה רעיונית, ניתן לדרוש תרגול כדי להבטיח שורת בארות אטומה כראוי ונטולת בועות במסגרת זמן קצרה כדי למזער את אובדן החומרים הנדיפים. מכיוון ששיטה זו מיועדת לתרכובות נדיפות, היא דורשת לא רק מריחה זהירה של דבק הסיליקון על צלחת הבאר אלא גם הכנה מדוקדקת של פתרונות ניסיוניים כדי לייעל את הדיוק של ריכוזי תרכובות נדיפות.

לכי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין קונפליקטים לחשוף.

תודות

עבודה זו מומנה על ידי הקרן לחינוך ומחקר הרדמה (FAER). איור 1 נוצר בשנת BioRender.com.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
96 באר מיקרו-פלטות זכוכיתZinsser צפון אמריקה3600500"מיקרו-לוחות זכוכית אלה עשויים מזכוכית בורוסיליקט מיוחדת בטוהר גבוה ועמידה בטמפרטורה והמשטחים מלוטשים בחומצה. הלוחות מלבניים בטביעת הרגל הסטנדרטית של SBS microplate (85 x 127 מ"מ). מיקרו-לוחות כורי זכוכית אלה מיועדים בעיקר לשימוש עם יישומי כימיה ועמידים לטמפרטורות של עד 530 מעלות; ג. ניתן לבצע חיטוי. הם מיוצרים מיריעת זכוכית הומוגנית וכוללים גיאומטריה וצורה אחידות כדי לספק טמפרטורות עקביות מבאר לבאר (בטווח של 0.2 מעלות צלזיוס אופייני)."
2.0 מ"ל שקוף, פתח גדול, בקבוקוני חוט 9 מ"מ מדעי החיים של ChemglassCV-1150-1232"עם פתח גדול יותר ב-40%, הבקבוקונים הללו תוכננו במיוחד לעבודה בדוגמים אוטומטיים של זרועות רובוטיות. הם גם משלבים את העיצוב הייחודי של בקבוקון המדרגות שמרכז במדויק תוספת נפח מוגבלת בצוואר הבקבוקון. "
סרט מצופה כפול 3M 9490LEAbbVie בע"מ24WG90"סרט מצופה כפול 3M 9490LE עם דבק למינציה 3M 300LSE מספק חוזק קשר גבוה לרוב המשטחים, כולל פלסטיק רב בעל אנרגיה נמוכה כגון פוליפרופילן וצבעים מצופים אבקה. הדבק האקרילי מספק גם הידבקות מצוינת למשטחים מזוהמים קלות בשמן המשמש בדרך כלל עם חלקי מכונה. סרט מצופה כפול 3M 9490LE מציע את התכונה הנוספת של דבק למינציה 3M 300MP בצד אחד כדי לספק חוזק חיבור מעולה למגוון חומרי קצף ובד (6 אינץ' x 5 יארד)"
תא תצפית DanioVisionנולדוסDVOC-0041"DanioVision היא מערכת שלמה, המיועדת לבדיקה בתפוקה גבוהה של זחלי דג הזברה בצלחות מרובות בארות. הוא כולל את תא התצפית ואת תוכנת מעקב הווידאו המפורסמת EthoVision XT."
יחידת בקרת טמפרטורה DanioVisionנולדוסDVTCU-0011"יחידת בקרת הטמפרטורה של DanioVision היא מערכת זרימה: מים זורמים באופן שווה מתחת ללוח הבאר בטמפרטורה שתבחרו. הטמפרטורה זהה בכל צלחת הבאר."
תוכנת Ethovision XT16נולדוסבסיס NSE-EV"EthoVision XT היא תוכנת מעקב הווידאו המיושמת ביותר העוקבת ומנתחת את ההתנהגות, התנועה והפעילות של כל בעל חיים, הרשומה כסימן מסחרי על ידי Noldus"
איזופלורןטיפול נמרץ בפיראמלNDC # 66794-017-10נוזל לשאיפה, חומר הרדמה שאינו דליק שאינו נפיץ, המכיל 100 מ"ל איזופלורן. מאוחסן בטמפרטורת חדר מבוקרת 20&; ל-25º C
פריימר דבק מיידי Scotch-Weld AC79 שקוף3 דקות"62-3916-0860-1 (מזהה מוצר) C2103N (מגרש)""3M Scotch-Weld Instant Adhesive Primer AC79 מיועד לשימוש על אלסטומרים קשים להדבקה באנרגיה נמוכה של פני השטח, כגון EPDM, סיליקון וגומי אחרים. הכנת פני השטח ויישומם פשוטים והפריימר הדביק מתייבש במהירות כדי לשמור על עבודות במהירות."
יריעות סיליקון בעובי 0.5 מ"מספקים שוניםלא ישיםיריעות סיליקון שקופות נרכשו ממספר ספקים
ספידבול פופ-אין גומי קשיח עם מסגרת פלסטיק, 4 אינץ'כדור מהירות793728"ל-Speedball Pop-In Hard Brayer יש רולר שננעל החוצה לניקוי קל. מסגרת פלסטיק, מקשה אחת עם רולר ניתן להסרה ברוחב 4 אינץ'. עשוי מגומי גומי טבעי טהור בגימור טחון. משטח הגומי הקשיח הוא ברוחב 4 אינץ' עם מסגרת פלסטיק יציבה ונהדר למריחת דבק"
מכסי בורג SureSTART 9 מ"מ, יישומי תפוקה גבוהה ברמה 2, סוג: מכסה בורג AVCS שחור PP, סיליקון לבן/אדום PTFE מחיצה 1.0 מ"מתרמו סיינטיפיק6ASC9ST1B"השתמש במכסי בורג SureSTART 9 מ"מ של Thermo Scientific עם בקבוקוני בורג בעלי פתח של 9 מ"מ. מכסי הביצועים ברמה 2 מיוצרים ונבדקים כדי להבטיח דימום נמוך, חוסן ושחזור של תוצאות עבור ניתוחי GC-MS ו-LC-MS שגרתיים. בחר מתוך מכסי פוליפרופילן עם מחיצות סיליקון/PTFE לכל מטרה בערכי קשיות שונים שנועדו להפחית בעיות מחט דגימה אוטומטית. מכסי ה-AVCS שלנו משלבים טכנולוגיית מערכת סגירת בקבוקון מתקדמת כדי להבטיח דחיסת איטום אופטימלית בעת סגירת בקבוקון."
Ultane SevofluraneAbbVie בע"מNDC # 0074-4456-04נוזל נדיף לשאיפה, נארז בבקבוקים בצבע ענבר המכילים 250 מ"ל סבופלורן. מאוחסן בטמפרטורת חדר מבוקרת 15&; עד 30º C
בקבוקוני נצנוץ נוזלי של Wheaton, פקקים המחוברים לבקבוקונים, זכוכית, נייר כסף / עיסת מתכת, 24-400, 20 מ"ל DWK מדעי החיים986561בקבוקוני נצנוץ של 20 מ"ל שהומרו מצינורות זכוכית בורוסיליקט מסוג I, PET או HDPE. זמין עם מכסה מחובר.

מקורות

  1. Wasilczuk, A. Z., Maier, K. L., Kelz, M. B. The mouse as a model organism for assessing anesthetic sensitivity. Methods Enzymol. 602, 211-228 (2018).
  2. Shortal, B. P., et al. Development and validation of brain target-controlled infusion of propofol in mice. PLoS One. 13, 1-14 (2018).
  3. Halbach, K., et al. Yolk sac of zebrafish embryos as backpack for chemicals. Environ Sci Technol. 54 (16), 10159-10169 (2020).
  4. Bedell, V. M., Meng, Q. C., Pack, M. A., Eckenhoff, R. G. A vertebrate model to reveal neural substrates underlying the transitions between conscious and unconscious states. Sci Rep. 10, 1-10 (2020).
  5. Stetter, M. D., et al. Isoflurane anesthesia in amphibians: Comparison of five application methods. In American Association of Zoo Veterinarians. , Puerto Vallarta, Mexico. 255-257 (1996).
  6. Woll, K. A., Eckenhoff, R. G. High-throughput screening to identify anesthetic ligands using Xenopus laevis tadpoles. Methods Enzymol. 602, 177-187 (2018).
  7. Meyer, H. Zur Theorie der Alkoholnarkose. Arch Exp Pathol Pharmakol. 46, 338-346 (1901).
  8. Downes, H., Courogen, P. M. Contrasting effects of anesthetics in tadpole bioassays. J Pharmacol Exp Ther. 278, 284-296 (1996).
  9. Kalueff, A. V., et al. Towards a comprehensive catalog of zebrafish behavior 1.0 and beyond. Zebrafish. 10, 70-86 (2013).
  10. Abramova, V., et al. Effects of pregnanolone glutamate and its metabolites on GABAA and NMDA receptors and zebrafish behavior. ACS Chem Neurosci. 14, 1870-1883 (2023).
  11. Germann, A. L., et al. Comparison of behavioral effects of GABAergic low-and high-efficacy neuroactive steroids in the zebrafish larvae assay. ACS Chem Neurosci. 15, 909-915 (2024).
  12. Hoyt, H., et al. Photomotor responses in zebrafish and electrophysiology reveal varying interactions of anesthetics targeting distinct sites on gamma-aminobutyric acid type A receptors. Anesthesiology. 137, 568(2022).
  13. Li, F., et al. Characterization of the locomotor activities of zebrafish larvae under the influence of various neuroactive drugs. Annals Trans Med. 6, 173(2018).
  14. McCarroll, M. N., Gendelev, L., Kinser, R. Zebrafish behavioural profiling identifies GABA and serotonin receptor ligands related to sedation and paradoxical excitation. Nat Commun. 10, 4078(2019).
  15. Plasencia, D. M., Rodgers, L. H., Knighton, A. R., Eckenhoff, R. G., White, E. R. Antagonism of propofol anesthesia by alkyl-fluorobenzene derivatives. Sci Rep. 14, 15943(2024).
  16. Dash, S. N., Lipika, P. Flight for fish in drug discovery: A review of zebrafish-based screening of molecules. Biology Lett. 19, 20220541(2023).
  17. Nelson, J. C., Michael, G. Zebrafish behavior as a gateway to nervous system assembly and plasticity. Development. 149, 177998(2022).
  18. Zhang, L., et al. Sevoflurane postconditioning ameliorates cerebral hypoxia/reoxygenation injury in zebrafish involving the Akt/GSK-3β pathway activation and the microtubule-associated protein 2 promotion. Biomed Pharmacother. 175, 116693(2024).
  19. Abdallah, S. J., Thomas, B. S., Jonz, M. G. Aquatic surface respiration and swimming behaviour in adult and developing zebrafish exposed to hypoxia. J Exp Biol. 218, 1777-1786 (2015).
  20. Targ, A. G., Yasuda, N., Eger, E. I. Solubility of I-653, sevoflurane, isoflurane, and halothane in plastics and rubber composing a conventional anesthetic circuit. Anesth Analg. 69, 218-225 (1989).
  21. Yang, X., et al. Drug-selective Anesthetic insensitivity of zebrafish lacking γ-aminobutyric acid Type A receptor β3 subunits. Anesthesiology. 131, 1276-1291 (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים