מאמר שיטה

חקר מוות תאי מתוכנת המושרה על ידי ננו-חלקיקי נחושת בחיידקים

DOI:

10.3791/67951

⸱

16 במאי 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Laboratory Medicine and Biotechnology, College of Medicine, Tzu Chi University, 2Graduate Institute of Microbiology, College of Medicine, National Taiwan University, 3Department of Biological Sciences, Missouri University of Science and Technology

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ננו-חלקיקי נחושת פועלים כחומרים אנטי-מיקרוביאליים על ידי יצירת מיני חמצן תגובתיים. כאן, מוצגים נהלים המדגימים כי ננו-חלקיקי נחושת יעילים כנגד שלושה פתוגנים רלוונטיים מבחינה קלינית וכי מסלולי מוות תאי מתוכנתים מסוימים מעורבים בתהליך קוטל חיידקים זה.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לאחרונה, החששות מפני פתוגנים עמידים לתרופות מרובות וזיהומים חשוכי מרפא גברו עקב שימוש יתר ושימוש לרעה באנטיביוטיקה. ננו-חומרים, כגון ננו-חלקיקי תחמוצת מתכתיים ומתכתיים, צברו פופולריות בתחום הביו-רפואי כאסטרטגיות חדשות פוטנציאליות למאבק בפתוגנים עמידים לתרופות מרובות. מחקר זה חקר את השימוש בננו-חלקיקי נחושת (CuNPs) כקוטל חיידקים כנגד שלושה פתוגנים אופורטוניסטיים נפוצים שנרכשו בבתי חולים - Escherichia coli (E. coli), Acinetobacter baumannii (A. baumannii) ו-Staphylococcus aureus (S. aureus) - המפתחים יותר ויותר עמידות לתרופות. מוצגים פרוטוקולים מפורטים לסינתזה של CuNPs בשני גדלים (20 ננומטר ו-60 ננומטר) ולהערכת יעילותם קוטל החיידקים באמצעות מבחני מושבה. מנגנוני הפעולה האנטי-מיקרוביאלית העומדים בבסיס CuNPs נחקרו על ידי הערכת שינויים בייצור מיני חמצן תגובתיים. בנוסף, ארבעה מודולטורים המעכבים את תפקודי החלבון האנושי יושמו כדי לחקור את המעורבות הפוטנציאלית של מסלולי מוות תאי מתוכנת (PCD) בהרג חיידקים. באמצעות גישה זו, מוצעת הופעתם הפוטנציאלית של זנים עמידים לנחושת, תוך התבססות על מחקר על חלבוני הומאוסטזיס נחושת, כולל מווסתי שעתוק תלויי נחושת. ממצאים אלה מספקים מתודולוגיה מקיפה לחקר ההשפעות החיידקיות של CuNPs ותפקידם הפוטנציאלי בהתמודדות עם עמידות לאנטיביוטיקה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חיידקים עמידים לתרופות הם סיבה רצינית לדאגה ברפואה. הופעתם המהירה הפחיתה את היעילות של אנטיביוטיקה קונבנציונלית, וכתוצאה מכך סיבוכים קליניים נוספים. הם מהווים איום גדול על בריאות הציבור ויוצרים צורך דחוף בתרופות אנטי-מיקרוביאליות חדשות. אחד מאפיקי המחקר הוא ננו-חומרים. לננו-חומרים יש תכונות פיזיקו-כימיות ייחודיות המאפשרות להם לקיים אינטראקציה עם חיידקים בדרכים הפוגעות בכדאיותם. לדוגמה, ננו-חלקיקי כסף (AgNPs) גורמים למתח חמצוני בחיידקים, וכתוצאה מכך לתפקוד לקוי של חלבונים, הפרעה בקרום, נזק ל-DNA ובסופו של דבר מוות של תאים1. ננו-חלקיקי זהב (AuNPs), לעומת זאת, ידועים בתכונותיהם האנטי-פטרייתיות ויכולים לשפר את ההשפעה החיידקית של אנטיביוטיקה על ידי שימוש כנשאים2.

בנוסף, ננו-חלקיקי נחושת (CuNPs) משכו גם הם תשומת לב רבה בשל השפעתם האנטי-מיקרוביאלית החזקה ועלות הייצור הנמוכה שלהם. מחקרים מצביעים על כך ש-CuNPs מציגים פעילות חיידקית רחבת טווח על ידי שיבוש הפעילות האנזימטית ויצירת מיני חמצן תגובתיים (ROS)3. המטען החיובי של CuNPs מקל על חדירתם לחיידקים, ומשפר את ספיגתם התאית4. מנגנון זה הופך את CuNPs לאופציה מבטיחה לציפוי פני השטח, כגון על שתלים, למניעת זיהומים3. עם זאת, ממצא מעניין אחד הוא שההשפעה החיידקית של CuNPs נראית תלויה בגודל. כמה מחקרים מצאו ש-CuNPs קטנים יותר מציגים פעילות אנטיבקטריאלית גבוהה יותר, כנראה בשל יחס שטח הפנים לנפח המעולה שלהם5.

יצירת ROS גורמת לנזק נרחב לתאים ולחיידקים, כולל חמצון שומנים, תפקוד לקוי של חלבונים, פיצול DNA ועיכוב גלוקונאוגנזה/גליקוגנוליזה, ומעורב בנמק או מוות תאי מתוכנת (PCD)6,7,8. מחקרים אחרונים גילו כי מערכות PCD קיימות בחיידקים, עם מצבי פעולה ואפקטורים דומים לאלה במערכות איקריוטיות9. קהילות חיידקים יכולות לגרום ל-PCD בתגובה ללחץ, כולל מתח חמצוני, באמצעות מערכת רעלן-אנטי-רעלן (TA)10. במילים פשוטות, מערכת הרעלנים-אנטי-רעלנים מורכבת מרעלנים שיכולים לשבש תהליכים תאיים חיוניים ואנטי-רעלנים שיכולים ליצור קומפלקסים יציבים עם הרעלים כדי לעכב את רעילותם בתנאי גידול רגילים. רוב החיידקים והארכאות מכילים מיקומי TA בגנום שלהם, הנמצאים לעתים קרובות בעותקים מרובים של DNA חוץ-כרומוזומלי וכרומוזומי. ישנם מספר סוגים של מערכות TA, כאשר TA מסוג II (המכונה מודול MazE/MazF) מעניין במיוחד. בתנאי עקה, נוגדי רעלנים מתפרקים, מה שמאפשר לרעלנים לעכב את המטרות התאיות שלהם. ב-E. coli ו-S. aureus, הרעלן MazF מופעל בתגובה למצבי עקה כגון מתח חמצוני, טמפרטורה גבוהה ורעב של חומצות אמינו. כתוצאה מכך, הביטוי של נוגד הרעלן MazE מצטמצם, ומשחרר את הרעלן MazF10. מחקרים מצאו כי MazF מאפשר סינתזה של חלבונים המאפשרים לתת-אוכלוסייה קטנה לשרוד בתנאים קשים, בעוד שרוב האוכלוסייה עוברת מוות תאי בתיווך mazEF. מוות תאים זה יכול להיות תלוי ROS, כאשר ROS גורם לעיכוב שעתוק או תרגום, או בלתי תלוי ב-ROS, כאשר נזק ל-DNA מפעיל את מסלולי המוות11.

מחקר זה בוחן את המנגנונים שבאמצעותם CuNPs גורמים למוות חיידקי. במקום להתמקד אך ורק במערכת TA, נעשה שימוש בארבעה מאפנני PCD, ששימשו בעבר במחקר שלנו 7,12, כדי לחקור מסלולי PCD פוטנציאליים בחיידקים.

על ידי בחינת ההשפעות החיידקיות של CuNPs בשני גדלים שונים (20 ו-60 ננומטר) בריכוזים משתנים, ושימוש בשיטות כגון מבחני מושבה, זיהוי ROS ומודולטורים של PCD (SBI, Z-VAD, NSA ו-Wortmannin), מחקר זה מדגיש כי PCD אינו בלעדי לאורגניזמים רב-תאיים אלא מתרחש גם בקהילות חיידקים תחת לחץ. על ידי מתן פרוטוקולים מפורטים, עבודה זו נועדה לאפשר לחוקרים להעריך את יעילות CuNP ומנגנוני קוטלי חיידקים במערכות שלהם. יתר על כן, ממצאים אלה מקדמים את ההבנה של PCD חיידקי ותומכים בפיתוח טיפולים מבוססי CuNP למאבק בחיידקים עמידים לאנטיביוטיקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנת ננו-חלקיקי נחושת

  1. השג ננו-אבקות נחושת מסחריות (25 ננומטר ו-60-80 ננומטר) ממקור מסחרי.
  2. השתמש ב-1.0 מ"מ נתרן דודציל סולפט (SDS) כחומר מפזר לשני גדלים של ננו-חלקיקים של 1 מ"ג/מ"ל.
  3. פזרו את הננו-חלקיקים באמצעות אמבט קולי למשך 30 דקות לפחות בטמפרטורת החדר. הננו-חלקיקים המפוזרים במלואם מוכנים לשימוש בניסויים הבאים.

2. הכנת חיידקים

  1. השג E . coli (Migula) Castellani and Chalmers strain 25922 ו-A. baumannii Bouvet ו-Grimont מאוסף תרבות הטיפוס האמריקאי. השיגו את S. aureus ממרכז האיסוף והמחקר של המשאבים הביולוגיים.
  2. תרבית החיידקים במרק לוריא-ברטאני (LB) בתנאים אירוביים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  3. לדלל את תרביות החיידקים במדיום LB לצפיפות אופטית ב-600 ננומטר (OD600) של כ-0.5.

3. הערכת כדאיות התאים

  1. מבחן מושבה
    1. השתמש בתמיסות CuNP מלאי (1 מ"ג/מ"ל) כדי להכין ריכוזים שונים של שני גדלים של CuNPs, כולל 0 מיקרוגרם/מ"ל, 1 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל, 10 מיקרוגרם/מ"ל, 50 מיקרוגרם/מ"ל ו-100 מיקרוגרם/מ"ל.
    2. מפצלים את תרביות החיידקים שהוכנו בשלב 2.3 לצינורות מיקרו-צנטריפוגה וצנטריפוגה בטמפרטורה של 3300 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר.
    3. שמור על כדורי החיידקים והוסף ריכוזים שונים של שני גדלים של CuNPs, בהתאמה, עם פיפטינג עדין.
    4. טפל בכדורי חיידקים עם PBS ו-70% אלכוהול כבקרות שליליות וחיוביות, בהתאמה.
    5. דגרו על כל החיידקים המטופלים בניעור ב-200 סל"ד ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.
    6. לאחר הדגירה יש לשטוף את כל החיידקים המטופלים עם PBS ולפזר אותם על צלחות אגר LB. מניחים את הצלחות באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.
    7. ספרו את מספרי המושבות בכל קבוצת טיפול למחרת ובצעו ניתוח סטטיסטי. מומלץ לבצע זאת בשלוש עותקים לדיוק סטטיסטי.
  2. מחקר מנגנון קוטל חיידקים
    1. הכן חיידקים כמתואר בשלב 3.1.2 וטפל בהם ב-5 מיקרומטר של SBI-0206965 (SBI) למשך שעתיים, 0.5 מיקרומטר של נקרוסולפונמיד (NSA) למשך שעה, 100 ננומטר של וורטמנין (וורט) למשך 30 דקות, או 100 ננומטר של Z-VAD-FMK (Z-VAD) למשך 30 דקות.
    2. לטפל בחיידקים בריכוזים שונים של שני גדלים של תמיסות CuNP, כמתואר בשלב 3.1.1, בנוכחות או היעדר 5 מיקרומטר של SBI, 0.5 מיקרומטר של NSA, 100 ננומטר של וורט ו-100 ננומטר של Z-VAD.
    3. צנטריפוגה של החיידקים לאחר טיפולי מודולטור (שלב 3.2.1) והסר את הסופרנטנטים.
    4. השעו מחדש את כדורי החיידקים בתמיסות שהוכנו בשלב 3.2.2 ודגרו אותם בניעור ב-200 סל"ד ב-37 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות.
    5. טפל בחיידקים עם 70% אתנול ו-PBS כבקרות חיוביות ושליליות, בהתאמה. השתמש בפתרון ללא CuNPs כפקד הריק של CuNP (0 μg/mL; מדומה) תחת אותם תנאי מעכב עבור כל קבוצה. דגרו על כל הדגימות למשך 24 שעות נוספות.
    6. לאחר הדגירה, הוסף מגיב כדאיות תאים לתרבויות ביחס נפח של 1:10. דגרו על התרביות למשך שעתיים נוספות עם טלטול בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
    7. צנטריפוגה את התרבויות (שלב 3.1.2) לאחר הדגירה של שעתיים. העבירו את הסופרנטנטים הפלואורסצנטיים לצלחות של 96 בארות. מדוד פלואורסצנטיות באמצעות אורך גל עירור של 560 ננומטר ואורך גל פליטה של 590 ננומטר עם קורא מיקרו-פלטות.
    8. מדללים את הסופרנטנט הנותר ל-10-5 ו-10-4 ומורחים אותו על צלחות אגר LB לצורך תרבית.
    9. ספרו מושבות בודדות למחרת.

4. איתור מיני חמצן תגובתיים

  1. הכינו תרביות חיידקים כמתואר בשלב 2.3 ופצלו אותן לצינורות מיקרו-צנטריפוגה.
  2. טפל בחיידקים עם מצבי עקה שונים כקבוצות ביקורת חיוביות הגורמות ל-ROS (נתונים אינם מוצגים בתוצאות). הטיפולים מתוארים בשלבים 4.2.1-4.2.4.
    1. חשוף את החיידקים לאור UV של 405 ננומטר למשך 3 שעות. דגרו על חיידקים בטמפרטורה של 45 מעלות צלזיוס למשך שעתיים.
    2. לאחר מכן, דגרו על חיידקים בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך שעתיים.
    3. טפל בחיידקים עם 3% H2O2 למשך 30 דקות.
    4. שמור על החיידקים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס במרק LB כבקרה שלילית.
  3. הכינו ריכוזים שונים של CuNPs כמתואר בשלב 3.1.1, וטפלו בחיידקים עם CuNPs של 20 ננומטר או 60 ננומטר בריכוזים של 1 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל, 10 מיקרוגרם/מ"ל ו-100 מיקרוגרם/מ"ל למשך 24 שעות.
  4. שטפו את החיידקים המודגרים פעמיים עם PBS כדי להסיר את כל הננו-חלקיקים שנותרו.
  5. הכן צבע 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (H2DCFDA) ב-PBS בריכוז סופי של 5 מיקרומטר.
  6. השעו מחדש את כדורי החיידקים ב-5 מיקרומטר של H2DCFDA ומדדו את עוצמת הקרינה בפליטה של 520/30 ננומטר באמצעות ציטומטר זרימה.
    הערה: עוצמת הקרינה הירוקה FL1 נמצאת בקורלציה עם רמת ה-ROS בתרבית המטופלת. מומלץ לבצע זאת בשלוש עותקים לדיוק סטטיסטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פעילויות אנטי-מיקרוביאליות של CuNPs בשני גדלים בשלושה פתוגנים
שלושה פתוגנים אופורטוניסטיים (E. coli, S. aureus ו-A. baumannii) שימשו לבדיקת הפעילות החיידקית של CuNPs. החיידקים טופלו ב-0 מיקרוגרם/מ"ל, 1 מיקרוגרם/מ"ל, 5 מיקרוגרם/מ"ל, 10 מיקרוגרם/מ"ל, 50 מיקרוגרם/מ"ל ו-100 מיקרוגרם/מ"ל של 20 ננומטר או 60 ננומטר CuNPs, והפעילויות קוטלי החיידקים נקבעו באמצעות ריכוז החיידקים המינימלי (MBC) שנגזר מספירת המושבות. התוצאות שלנו הראו השפעות חיידקיות חיוביות בשני הגדלים של

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה חקר את ההשפעות והמנגנונים האנטי-מיקרוביאליים של CuNPs בשני גדלים וריכוזים שונים כנגד E. coli, S. aureus ו-A. baumannii. באמצעות הפרוטוקולים שנקבעו, נצפה כי השפעות חיידקיות הנגרמות על ידי CuNP כוללות מתח חמצוני והפעלת PCD פוטנציאלית. עם זאת, יחסי הגומלין בין הומאוסטזיס מתכתי לתגובות עקה חיידקיות נותרו ברובם לא נחקרים. מחקרים קודמים זיהו אסטרטגיות עמידות חיידקים, כגון משאבות פליטת נחושת וחלבונים קושרי מתכת, שעשויות להשפיע על רגישות CuNP1...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחבר אינו מצהיר על ניגוד עניינים, כספי או אחר.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו אסירי תודה על התמיכה ממרכז מתקני הליבה, אוניברסיטת צו צ'י, טייוואן.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
Acinetobacter baumannii זן Bouvet ו-Grimont אוסף תרביות סוג אמריקאי (ATCC), מנסס, וירג'יניה, ארה"17978חיידקים לניסוי טוקסוסיטי CuNP
Bio-Rad iMark Microplate Readerמעבדות Bio-Rad, הרקולס, קליפורניה, ארה"168-1130משמש למדידת ספיגה במבחני כדאיות חיידקים.
תא פרום 2',7'-דיכלורודיהידרופלואורסצאין דיאצטט  (H2DCFDA)סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בD6883משמש לאיתור מיני חמצן תגובתיים (ROS) בתאי חיידקים מטופלים.
ננו-חלקיקי נחושת (CuNPs) 25 ננומטרסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב774081משמש להכנת תמיסת מלאי CuNP
ננו-חלקיקי נחושת (CuNPs) 60-80 ננומטרסיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב774103משמש להכנת תמיסת מלאי CuNP
Escherichia coli (Migula) Castellani and ChalmersAmerican Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USA25922חיידקים לניסוי טוקסוסיטי CuNP
ציטומטר זרימהגליוס בקמן קולטר, בריאה, קליפורניה, ארה"ב משמש לניתוח זרימה ציטומטרית בניסויים מרובים, כולל זיהוי מיני חמצן תגובתיים.
LB אגרFocusBio, Miaoli, טייוואןLBA500משמש לתרבית חיידקים
מרק לוריא-ברטאני (LB)Becton, Dickinson and Company, Sparks, MD, USA244620משמש לטיפוח חיידקים
Necrosulfonamide (NSA)Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA480073משמש כמודולטור לטיפול מקדים במחקרי מסלול מוות חיידקים.
מגיב כדאיות תאים PrestoBlueInvitrogen, קרלסבד, קליפורניה, ארה"בP50200משמש להערכת כדאיות התא באמצעות פלואורסצנטיות.
SBI-0206965 (SBI)BioVision, מילפיטאס, קליפורניה, ארה"9580משמש כמודולטור לטיפול מקדים במחקרי מסלול מוות חיידקים.
נתרן דודציל סולפט (SDS)סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בL4509משמש כחומר מפזר לננו-חלקיקי נחושת להפחתת הצבירה.
Staphylococcus aureusAmerican Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA, USA
Bioresource Collection and Research Center (BCRC), Hsinchu, Taiwan		13567חיידקים לניסוי טוקסוסיטי CuNP
Varioskan LUX multimode microplate readerThermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USAVLBLATGD2משמש למדידת פלואורסצנטיות במבחני כדאיות תאים
Wortmannin (Wort)Abcam, MA, ארה"ab120148משמש כמודולטור לטיפול מקדים במחקרי מסלול מוות חיידקים.
Z-VAD-FMK (Z-VAD)סיגמא-אולדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"V116משמש כמודולטור לטיפול מקדים במחקרי מסלול מוות חיידקים.
ב ב ב ב ב

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Anees Ahmad, S., et al. Bactericidal activity of silver nanoparticles: A mechanistic review. Mater Sci Energy Technol. 3, 756-769 (2020).
  2. Zhang, Y., Shareena Dasari, T. P., Deng, H., Yu, H. Antimicrobial activity of gold nanoparticles and ionic gold. J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev. 33 (3), 286-327 (2015).
  3. Solioz, M. Copper and Bacteria: Evolution, Homeostasis and ToxicitySpringerBriefs in Molecular Science. Ch 2, Springer Cham. 11-19 (2018).
  4. Ma, X., Zhou, S., Xu, X., Du, Q. Copper-containing nanoparticles: Mechanism of antimicrobial effect and application in dentistry-a narrative review. Front Surg. 9, 905892(2022).
  5. Draviana, H. T., et al. Size and charge effects of metal nanoclusters on antibacterial mechanisms. J Nanobiotechnology. 21 (1), 428(2023).
  6. Hasanuzzaman, M., et al. Regulation of ROS metabolism in plants under environmental stress: A review of recent experimental evidence. Int J Mol Sci. 21 (22), ijms21228695(2020).
  7. Lai, M. J., et al. Effect of size and concentration of copper nanoparticles on the antimicrobial activity in Escherichia coli through multiple mechanisms. Nanomaterials (Basel). 12 (21), 12213715(2022).
  8. Sai, D. L., Lee, J., Nguyen, D. L., Kim, Y. P. Tailoring photosensitive ROS for advanced photodynamic therapy. Exp Mol Med. 53 (4), 495-504 (2021).
  9. Peeters, S. H., de Jonge, M. I. For the greater good: Programmed cell death in bacterial communities. Microbiol Res. 207, 161-169 (2018).
  10. Allocati, N., Masulli, M., Di Ilio, C., De Laurenzi, V. Die for the community: An overview of programmed cell death in bacteria. Cell Death Dis. 6 (1), e1609(2015).
  11. Kolodkin-Gal, I., Sat, B., Keshet, A., Engelberg-Kulka, H. The communication factor EDF and the toxin-antitoxin module mazEF determine the mode of action of antibiotics. PLoS Biol. 6 (12), e319(2008).
  12. Lai, M. J., Huang, Y. W., Wijaya, J., Liu, B. R. Copper Overview. Fernández, G. D. Ch 4, IntechOpen. (2024).
  13. Macomber, L., Imlay, J. A. The iron-sulfur clusters of dehydratases are primary intracellular targets of copper toxicity. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (20), 8344-8349 (2009).
  14. Ramos-Zúñiga, J., Bruna, N., Pérez-Donoso, J. M. Toxicity mechanisms of copper nanoparticles and copper surfaces on bacterial cells and viruses. Int J Mol Sci. 24 (13), ijms241310503(2023).
  15. Ihara, M., Shichijo, K., Takeshita, S., Kudo, T. Wortmannin, a specific inhibitor of phosphatidylinositol-3-kinase, induces accumulation of DNA double-strand breaks. J Radiat Res. 61 (2), 171-176 (2020).
  16. Yang, Y. P., et al. Application and interpretation of current autophagy inhibitors and activators. Acta Pharmacol Sin. 34 (5), 625-635 (2013).
  17. Li, X., et al. The caspase inhibitor Z-VAD-FMK alleviates endotoxic shock via inducing macrophages necroptosis and promoting MDSCs-mediated inhibition of macrophages activation. Front Immunol. 10, 1824(2019).
  18. Solioz, M. Copper and Bacteria: Evolution, Homeostasis and ToxicitySpringerBriefs in Molecular Science. Chapter 3, Springer. Cham. 21-48 (2018).
  19. Greene, N. P., Koronakis, V. Bacterial metal resistance: Coping with copper without cooperativity. mBio. 12 (3), e0065321(2021).
  20. Butsyk, A., et al. Copper nanoparticle loaded electrospun patches for infected wound treatment: from development to in-vivo application. Polymers (Basel). 16 (19), polym16192733(2024).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Escherichia ColiStaphylococcus AureusAcinetobacter Baumannii

מאמרים קשורים