הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

מניעת אלודיניה והיפרלגזיה על ידי קנבידיול במודל עכברוש של נוירופתיה היקפית הנגרמת על ידי כימותרפיה

856 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68079

⸱

20 ביוני 2025

 ,  ,  ,  , 
1Center for Substance Abuse Research, Department of Neural Sciences, Temple University, 2Department of Psychology, Program in Neuroscience Temple University

במאמר זה

סיכום

מתן משותף של CBD עם פקליטקסל מונע התפתחות של נוירופתיה היקפית הנגרמת על ידי כימותרפיה בחולדות. פרוטוקול זה מתאר טיפול בקנבינואידים, השראת פנוטיפ אלודיני בחולדות באמצעות מתן כימותרפיה, הערכת אלודיניה מכנית ותרמית, ושימוש בווידיאו במהירות גבוהה כדי להבחין בין אלודיניה להיפרלגזיה.

תקציר

מחקר זה מדגים את התועלת של מודל עכברוש של נוירופתיה היקפית הנגרמת על ידי כימותרפיה (CIPN) כדי להעריך את יכולתו של הקנבינואיד הלא פסיכואקטיבי (CBD) לווסת את התפתחות תסמונת זו in vivo. השיטה משתמשת בחומר הכימותרפי פקליטקסל כדי ליצור פנוטיפ אלודיני בבעלי החיים. מחקר זה מתאר כיצד לטפל ולהמיס CBD, לתת את החומר הכימותרפי, להעריך רגישות מכנית וקור וליישם צילום וידאו במהירות גבוהה למדידת התנהגות נוציפנסיבית בבעלי חיים. באמצעות ההליכים המתוארים, הנתונים תומכים בכך ש- CBD מונע את התפתחות הפנוטיפ האלודיני בבעלי החיים המטופלים. לא נצפה הבדל בבעלי החיים שטופלו ב-CBD מהיום ה-0 (קו הבסיס של טרום פקליטקסל) ליום השביעי (לאחר הרגישות) ברגישות מכנית או תרמית, בעוד שבעלי החיים שטופלו ברכב הפכו לרגישים יותר באופן משמעותי. תגובה זו לטיפול עמידה עד לנקודת הזמן המאוחרת ביותר בה נאספו הנתונים (7 שבועות). התוספת של צילום וידאו במהירות גבוהה מאפשרת הערכה פרטנית ובלתי משוחדת יותר של פנוטיפ התנהגותי זה (למשל, סיווג של משככי כאבים ואנטי-אלודיניה). זה מדגים הן את התועלת של מודל זה לאפיון תרופות קנבינואידיות והן את התפקיד הפוטנציאלי של CBD בהקלה על כאב נוירופתי.

מבוא

נוירופתיה היקפית הנגרמת על ידי כימותרפיה (CIPN) היא סוג של נוירופתיה חושית. זוהי תופעת לוואי שכיחה של טיפול כימותרפי והיא נפוצה במיוחד עם תרופות מבוססות טקסן ופלטינום 1,2. חלק מהתסמינים של CIPN כוללים כאב כרוני, חוסר תחושה, עקצוץ ורגישות קיצונית למגע ולטמפרטורה 1,2. תסמינים כואבים אלה לא רק מפריעים לחיי היומיום של המטופל אלא גם לטיפול בסרטן. חלק מחולי הסרטן מבקשים הפחתה במינון או הפסקה מוחלטת של הכימותרפיה כדי להיות מסוגלים לנהל את הירידה באיכות החיים הקשורה לתסמונת זו3. נכון לעכשיו, הטיפולים הנפוצים בשימוש קליני ל-CIPN אינם יעילים לחלוטין בהקלה סימפטומטית וכוללים אופיואידים, המהווים פוטנציאל שימוש משמעותיב-4. אין תרופה ל-CIPN עד כה, לכן, מציאת חלופה בטוחה ויעילה היא חיונית 5,6.

קנבידיול (CBD) הוכח בעבר כיעיל במניעת התפתחות CIPN כפי שמודל בעכברים 7,8. זה מדגים מסלול מבטיח להימנעות מהתסמינים האלודיניים ארוכי הטווח של CIPN עבור חולים ללא צורך בהקלה באמצעות תרופות יעילות באופן חד משמעי או אופיואידים שעלולים להזיק. רוב האנשים המשתמשים ב- CBD, במיוחד למטרות טיפוליות כמו ניהול התקפים, חווים תופעות לוואי קלות, והתרופה בדרך כלל נסבלת היטב9. רוב תופעות הלוואי תלויות במינון ולעתים קרובות משתפרות ככל שהגוף מסתגל.

במודל נפוץ זה של CIPN10, חולדות מקבלות פקליטקסל כדי לגרום לנוירופתיה, המסכמת את הפנוטיפ האלודיני שנצפה בחלק מהחולים לאחר התערבות כימותרפית, כפי שדווח קודם לכן11. מטרת האינדוקציה הזו היא לקבל פלטפורמה רלוונטית לתרגום להערכת סוג זה של נוירופתיה חושית in vivo, המתאימה לחוקרים החוקרים מנגנונים או התערבויות לתסמונת זו. רגישות מכנית נמדדת באמצעות מבחן פון פריי, ואתגרי טמפרטורה קרה משמשים למדידת רגישות תרמית10,11. זה מאפשר לכמת את הפוטנציאל המונע של CBD בהפחתת CIPN בשתי נקודות הקצה החשובות ביותר מבחינה קלינית לאיכות חיים עבור חולים. הערכה נוספת כללה ניתוח בסיוע וידאו מהיר של התנהגויות נוציפנסיביות12,13. ניתוח מורחב זה של תגובות התנהגותיות לגירויים תמימים ומזיקים מאפשר להבחין בין השפעות אלודיניות והיפר-משככות כאבים של מתן כימותרפיה, כמו גם את יכולתו של CBD לווסת את ההשפעות הללו.

פרוטוקול זה מתאר כיצד לגרום לפנוטיפ CIPN, להעריך ולכמת רגישות יתר מכנית ותרמית בחולדות, וליישם צילום וידאו להערכה בלתי משוחדת ופרטנית יותר של אלודיניה והיפרלגזיה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

פרוטוקול זה אושר ועוקב אחר ההנחיות של הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת טמפל תחת פרוטוקולים מאושרים למחקר בבעלי חיים. במחקר זה נעשה שימוש בחולדות Sprague-Dawley זכרים בוגרים (250-300 גרם). פרטים לגבי הריאגנטים והציוד המשמשים מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנת קנבינואידים וחומרים כימותרפיים לאינדוקציה של CIPN

הערה: איור 1 מציג את תהליך המסה של קנבידיול.

  1. הרכיבו את החומרים הבאים להמסת CBD ודילול פקליטקסל.
    1. 100% אתנול (EtOH), כרמופור (שמן קיק אתוקסילטי), מי מלח רגילים, בקבוקוני זכוכית ענבר (x2), 50 מ"ל שפופרת חרוטית (x2), מלאי אבקת CBD, מלאי קליני של פקליטקסל (6 מ"ג/מ"ל).
  2. הוסף נפח מתאים של EtOH לכל צינור חרוטי של 50 מ"ל להכנת ממס סופי של 1:1:18 EtOH: שמן קיק אתוקסילטי: מי מלח רגילים.
  3. המסה את הכמות המתאימה של CBD כדי ליצור ריכוז של 5 מ"ג/ק"ג למספר בעלי החיים שייבדקו.
  4. ממיסים CBD ב- EtOH באחד משני הצינורות החרוטיים המוכנים של 50 מ"ל.
  5. מערבולת תערובת CBD-EtOH במהירות גבוהה עד להמסה מלאה של CBD.
  6. הוסף נפח שווה ערך של שמן קיק אתוקסילי לכל צינור חרוטי של 50 מ"ל.
  7. מערבולת כל צינור במהירות גבוהה עד ששמן הקיק האתוקסילט נמצא בתמיסה עם EtOH.
  8. הוסף נפח מתאים של מי מלח רגילים לכל צינור חרוטי של 50 מ"ל ליחס סופי של 1:1:18.
  9. מערבולת עד למי מלח בתמיסה.
  10. העבירו את פתרון בקרת הרכב ותמיסת ה-CBD לבקבוקוני זכוכית ענבר.
  11. יש לדלל תמיסת פקליטקסל 1:6 בתמיסת מלח רגילה כדי להביא את הריכוז הסופי ל-1 מ"ג/מ"ל בבקבוקוני ענבר בנפח המתאים למספר בעלי החיים שייבדקו.
  12. אטמו את בקבוקוני הענבר עם מכסי בקבוקוני גומי עם צווארון אלומיניום.
    הערה: אם מכינים אותם לפני תחילת הניסוי, ניתן לאחסן בקבוקונים של רכב, רכב + CBD ופקליטקסל בטמפרטורה של 4-8 מעלות צלזיוס למשך עד 7 ימים. אפשר לבקבוקונים בקירור להתייצב לטמפרטורת החדר לפני ההזרקה. כמו כן, שימו לב שחשוב ביותר לאחסן ריאגנטים קנבינואידים מוכנים בזכוכית, אם לא לשימוש מיידי, כדי למנוע הידבקות לכלי או משקעים מחוץ לתמיסה.

2. השראת פנוטיפ אלודיני בחולדות

  1. הרכיבו את החומרים הדרושים להזרקת פקליטקסל כמפורט להלן:
    1. הכנת תמיסת מלאי פקליטקסל של 1 מ"ג/מ"ל, מזרקים חד פעמיים של 1 מ"ל (x n חולדות), מחטי מזרק 25 גרם (x n חולדות), מיכל חד פסולת כימותרפית וקנה מידה לאיסוף משקל בעלי חיים.
  2. מספר או תייג את החולדות עם מזהים ייחודיים.
    הערה: בעלי החיים צריכים להתאקלם בביתם לפחות שבוע לפני תחילת הניסוי.
  3. אוספים את המשקולות של כל בעל חיים.
  4. הכינו מזרקים עם הנפח המתאים של פקליטקסל (כל בעלי החיים) ורכב או CBD (לפי קבוצת טיפול). במקרה זה, נפח ההזרקה מתאים למשקל של 1 מיקרוליטר / גרם של בעלי החיים.
  5. הזרקת פקליטקסל ורכב או פקליטקסל ו- CBD באופן אינטרפריטוני.
    1. כדי לרסן את החולדה להזרקה, תפסו את החולדה עם לא דומיננטי מאחור, כאשר האצבע המורה פוגשת את האגודל סביב הצוואר והאצבע האמצעית פוגשת את האגודל מתחת לכתף, תוך שימוש באצבעות הקמיצה והזרת כדי לאחוז בגוף.
    2. ייצב את רגליה האחוריות של החולדה כנגד הגוף.
    3. היזהר לא להפעיל רמת לחץ לא נוחה על החיה כדי למנוע פציעה.
      הערה: תמיד קיים סיכון לנשיכה או שריטות בעת טיפול בחולדות. כדי להפחית סיכון זה, הנסיין עשוי ללבוש PPE נוסף בצורת כפפות עמידות בפני נשיכה.
    4. תוך כדי ריסון ומיוצב ידנית, הטה את בעל החיים כך שהבטן שלו תהיה נגישה בקלות למזרק.
    5. יש להזריק 1 מ"ג/מ"ל פקליטקסל לרבע הימני התחתון של החיה ולהשליך את המזרק למיכל פסולת הכימותרפיה.
    6. הזריק את הרכב או ה-CBD במשקל של 1 מיקרוליטר/גרם לרבע השמאלי התחתון של החיה והשליך את המזרק למיכל החדים הרגיל.
      הערה: החלפת אתרי ההזרקה מקלה על מצוקת בעלי חיים וגירוי פוטנציאלי של אתר ההזרקה.
    7. זה מסמן את היום הראשון של הניסוי. חזור על תהליך זה בימים 2-4 כדי לגרום לפנוטיפ האלודיני. עקוב אחר פרוטוקולי הטיפול המוסדיים לכלובים מזוהמים כימותרפיים במהלך תקופה זו.
    8. בצע מדידות אלודיניה מכניות ותרמיות בסיסיות ביום 0, כמתואר בשלב 3. כלול גירויים נוספים ביצירת הבסיס כמתואר בשלב 4. ניתוח ערכי יום 0 עבור גירויים אלה יהיה הכרחי כדי ליצור ציוני כאב.
    9. חזור על שלב 2.5.8 עד שבעלי חיים מפגינים קו בסיס יציב וניתן לחזרה כדי למנוע הטרוגניות בתגובה הנגרמת על ידי טיפול לא מספיק.
      הערה: אל תפריע לתהליך השראת הפנוטיפ האלודיני. אם הנסיין אינו מסוגל לבצע זריקות ב-4 ימים רצופים, לוחות זמנים חלופיים של מינון יכולים להשיג אינדוקציה דומה של הפנוטיפ. כמו כן, ניתן ואולי מומלץ לשלב הזרקת פקליטקסל ורכב או CBD בהזרקה אחת במקום 2 על ידי התאמת נפח הרכב הראשוני או תמיסת ה-CBD כראוי כדי להתאים לדילול של פקליטקסל בתערובות אלו תוך שמירה על ריכוז סופי של 5 מ"ג/מ"ל של CBD וריכוז של 1 מ"ג/מ"ל של פקליטקסל. נקוט בזהירות מתאימה בעת טיפול בכימותרפיה כדי למנוע חשיפה מקרית לנסיין.

3. הערכת רגישות מכנית ותרמית לאחר רגישות

הערה: איור 2 מציג את המנגנון הסכמטי ששימש למחקר זה.

  1. הרכיבו את החומרים הבאים לבדיקות רגישות מכניות וקור:
    1. חוטי פון פריי (4-100 גרם), קרח יבש, צינור חרוטי 15 מ"ל, תאי בידוד, רשת רצפת תיל, לוח זכוכית בגודל 1/4 אינץ' ושעון עצר.
  2. התחל את ההערכה ביום הניסוי השביעי (למשל, 3 ימים לאחר הזרקת הכימותרפיה/הטיפול הסופי).
  3. הרכיבו תאי בידוד תרמי של פון פריי ותרמי.
    1. הנח את תאי הבידוד לרגישות מכנית (6 תאים מופרדים על ידי מחיצות פלסטיק) על רשת רצפת תיל 20 ס"מ מעל הספסל.
    2. הנח את תאי הבידוד לבדיקת רגישות תרמית (תא יחיד) על משטח זכוכית בגודל 1/4 אינץ' 20 ס"מ מעל הספסל.
  4. הנח את בעלי החיים בנפרד בתאי בידוד לאלודיניה מכנית.
  5. יש לאפשר התאקלמות בתאי הבידוד למשך 15 דקות לפני תחילת הבדיקה.
  6. בצע בדיקות פון פריי ידניות לרגישות מכנית. שיטה זו מתארת בדיקת פון פריי ידנית, אך ניתן להחליף את בדיקת פון פריי האלקטרונית בבדיקה ידנית14.
    1. התחל עם החוט המתאים לגרם הכוח הנמוך ביותר (למשל, 4 גרם) והפעל לחץ על המשטח האמצעי של הכף האחורית הימנית כך שהחוט מוחזק בצורת C למשך 6 שניות.
      הערה: חוקרים מדווחים על הבדל קטן בין כפות אחוריות ימין ושמאל, אך הנסיינים צריכים להיות עקביים בין בעלי חיים). חזור על 5 ניסיונות לכל גירוי.
    2. יש לחזור על הפעולה עבור כל בעל חיים לבדיקה.
    3. העלה את גודל החוט ברצף וחזור על שלבים 3.5.1-3.5.2 עד שנצפתה תגובת כאב (למשל, נסיגת כפות) לפחות ב-2 מתוך 5 הניסויים.
    4. רשום גרם נימה של כוח שעורר את תגובת הכפות שנצפתה.
    5. בדוק מחדש את החוט התחתון הבא כדי לראות אם נצפתה נסיגת כפות. אם לא נצפתה תגובה, גרם הכוח המתועד הוא סופי.
    6. אם החיה מגיבה בשלב זה, רשום גרם נימה חדש של כוח ובדוק מחדש את החוט התחתון הבא. חזור על הפעולה עד שהחוטים התחתונים כבר לא יעוררו תגובה. נתונים מייצגים מוצגים באיור 3A,C.
  7. ערכו בדיקות רגישות לקור.
    1. הסר את החיה מתא בידוד הרגישות המכנית והנח אותה בתא בידוד רגישות תרמית.
    2. אורזים צינור חרוטי של 15 מ"ל עם קרח יבש כך שהגלולה הסופית משתרעת מהחלק העליון של הצינור.
    3. הניחו את הקרח היבש על הזכוכית הפרוקסימלית לכפה האחורית הימנית של החיה.
    4. בעזרת שעון עצר, רשום את הזמן עד שהחיה תדגים נסיגת כפות בתגובה לטמפרטורה. נתונים מייצגים מוצגים באיור 3B.
    5. שכן מחדש את החולדה בכלוב הביתי שלה.
    6. חזור על כל השלבים של 3.7 עד שכל בעלי החיים נבדקו וחזרו לכלוב הביתי שלהם.
      הערה: חשוב גם לציין כי יש לעקוב אחר התנהגות בעלי החיים ומשקלם לאיתור סימני מצוקה בשלב זה. אם בעלי החיים מפתחים התנהגות כאב בסיסית או מאבדים משקל גוף במהלך קורסים ממושכים, יש להפסיק את המחקר ולהמית בעלי חיים על פי טכניקת טיפול נכונה בבעלי חיים. אם החיות אינן מראות מצוקה במהלך הניסוי, יש להמית את החיות לאחר יום הניסוי האחרון.

4. הערכת רגישות מכנית באמצעות צילום וידאו במהירות גבוהה

  1. הרכיבו את החומרים הבאים כאמור להלן לבדיקת רגישות מכנית וצילום וידאו:
    1. תאי בידוד, רשת רצפת תיל, צמר גפן, מברשת איפור, סיכות, מצלמה מהירה, אורות אינפרא אדום, מחשב נייד עם תוכנת ניתוח תואמת.
  2. הערך בשילוב עם בדיקת רגישות מכנית שתוארה קודם לכן11או כבדיקה עצמאית כמתואר להלן.
  3. הרכיבו את תאי הבידוד לרגישות מכנית (תא יחיד) על ידי הנחתם על רשת רצפת תיל 20 ס"מ מעל הספסל.
  4. הנח את המצלמה על חצובה בזווית של 45 מעלות בערך בין 1 ל-2 מטר מתא הבידוד.
  5. מקם את נורות האינפרא אדום על חצובות כדי להאיר את החדר לצורך ניסויים וניקוד לאחר מכן.
  6. הנח את בעלי החיים בנפרד בתא הבידוד להערכת גירוי מכני.
  7. אפשר התאקלמות לתאי בידוד למשך 15 מ' לפני תחילת הבדיקה.
  8. ערכו בדיקות סומטוסנסוריות, לרגישות מכנית עם גירויים שונים (איור 4).
    1. השתמש במחשב נייד עם תוכנת Photron FastCAM Analysis כדי להקליט את תא הבידוד ב-2000 פריימים לשנייה עבור כל גירוי (לחץ על הכפתור המתאים כדי להתחיל בהקלטה).
    2. השתמש בצמר גפן כדי ליצור מגע עדין בין קצה הכותנה לכפה האחורית של החולדה בזמן ההקלטה, והפסק לאחר השלמת ההקלטה.
    3. יש להשתמש במברשת האיפור כדי לנגב את כף הרגל האחורית מאחור לפנים ולהפסיק לאחר השלמת הבנייה.
    4. השתמש בסיכה כדי לבצע דקירות סיכה בלחץ נמוך וגבוה על הכפה האחורית של החולדה. לדקירות בלחץ נמוך, גע בעדינות בסיכה בכפה האחורית, משוך לאחר מגע בזמן ההקלטה ועצור לאחר השלמתו.
    5. לדקירות סיכה בלחץ גבוה, לחץ בחדות על הסיכה לתוך הכפה האחורית, ומשוך לאחר מגע תוך כדי הקלטה ועצור לאחר השלמתו.
    6. החזירו את החיה לכלוב הביתי.
    7. יש לחזור על הפעולה עבור כל בעל חיים לבדיקה.
  9. הערכה ידנית של התנהגות נוציפנסיבית שתועדה via צילום וידאו במהירות גבוהה באמצעות סרטוני וידאו המעובדים באמצעות תוכנת FastCAM15כפי שמודגם ב איור 5אב.
    1. מדוד את גובה הכפה (בס"מ) מרצפת הרשת לנקודה הגבוהה ביותר שלה לאחר גירוי הכפות. כדי לעשות זאת בתוכנה, נווט אל מידות > מדידות ובחר שתי נקודות.
      1. הפעל את הסרטון לאורך כל תנועת הכפות כדי לקבוע את הרגע שבו הכפה מגיעה לשיאה במהלך התנועה הראשונית כלפי מעלה. בחר אזור הניתן לזיהוי ברור של הכפה (למשל, מרכז המשטח הכף, הצטלבות של ספרה עם הכף, העקב וכו') והגדר אותו כנקודת ההתחלה.
      2. החזר את הסרטון לאחור כדי לאתר את המיקום של אותו אזור לפני הגירוי וסמן את הנקודה השנייה במיקום זה לאורך ציר ה-y. ודא שקו המדידה נשאר מקביל לציר ה-y ולא בזווית. הגובה יוצג בפינה הימנית העליונה של המסך15.
    2. קבע את מהירות הכפה על ידי חישוב המרחק (בס"מ) מההרמה הראשונית לנקודה הגבוהה ביותר, חלקי הזמן (בשניות) בין שתי הנקודות הללו. ניתן לבצע מדידה זו בתוכנה על ידי בחירת מידות > מדידות ובחירה בשתי נקודות.
    3. הפעל את הסרטון לאורך כל תנועת הכפות כדי לזהות את הפריימים שבהם הכפה יוזמת את התנועה הראשונה שלה כלפי מעלה. מדוד את מהירות הכפות על ידי בחירת שתי נקודות במסגרות שונות בתוך תנועה זו וחישוב המרחק חלקי מספר הפריימים או הזמן שחלף בין פריימים ההתחלה והסיום15.
    4. העריכו את הסרטונים עבור הידוק מסלול, טלטול כפות, מגן כפות והתנהגויות קפיצה. לדוגמה, אם בעל חיים היה מציג אחת מההתנהגויות הללו במהלך הפעלת גירוי, ציון ההתנהגות הנוציפנסיבית שלו היה 1.
      הערה: הידוק המסלול נרשם כאשר העיניים עברו מעיניים פתוחות לחלוטין לעצירה חלקית או מלאה במהלך הפעלת הגירוי. טלטול כפות הושג כאשר נצפתה רתיעה בכפות בתדירות גבוהה במהלך הפעלת גירוי. הקפיצה נרשמה כאשר שלוש כפות או יותר היו מחוץ לרצפת רשת התיל במהלך הפעלת הגירוי.
    5. השתמש בנתוני בסיס מהגירויים כדי ליצור הערכות התפלגות ושגיאות עבור קבוצת בעלי חיים זו כפי שתואר קודם לכן15. בקצרה, הקלט סרטונים של כל בעל חיים ששימש במחקרים בתגובה למגע סטטי, מגע דינמי, דקירה קלה ודקירה כבדה בקו הבסיס לפני הטיפול כדי ללכוד את כל מגוון המאפיינים ההתנהגותיים האפשריים.
      1. חשב את הממוצע וסטיית התקן של כל תכונה התנהגותית (מהירות, גובה, ציון כאב) עבור הקבוצה על פני כל הגירויים (מגע סטטי, צמר גפן, דקירה קלה, דקירה כבדה).
    6. צור ציוני z מנתונים גולמיים שנצפו בכל סרטון באמצעות משתנים שנוצרו בשלב 4.9.4 וההליכים שתוארו קודם לכן16.
    7. שלב את כל ציוני ה-z לערך עצמי חד-ממדי באמצעות ניתוח רכיבים עיקריים באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטי17. זה מאפשר לחשב את השילוב של ציוני z שעברו טרנספורמציה ממערך הנתונים התלת מימדי כערך כולל משוקלל יחיד16.
    8. שרטוט ציוני כאב שנוצרו על ידי PCA המקיפים את הממדים ההתנהגותיים המרובים הללו כדי להפריד התנהגויות הקשורות לגירויים מזיקים ותמימים (איור 5C) באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטי.
      הערה: בדיקות מכניות בסיוע וידאוגרפיה חוזרות על בדיקות פון פריי על ידי שילוב מימד מוגבר. בהקשר של CIPN, הוא מאפשר תיאור והבחנה בין אנטי-אלודיניה לשיכוך כאבים. ניקוד וידאו יכול להתבצע גם על ידי גורמים שאינם תלויים בנסיין שערך את הבדיקה החושית. זהו כלי רב עוצמה שיכול גם להפחית את הטיית הנסיינים וגם להגדיל את עומק המידע שנאסף. חשוב לציין ששיטה זו מסתמכת על חומרה, תוכנה וטכניקות סטטיסטיות מיוחדות. הוא משמש כתוספת לשיטה הנגישה יותר שתוארה בסעיפים הקודמים. יתר על כן, יש לציין שאיסוף נתונים גוזל זמן בשל גודל הקבצים שנוצרו על ידי המצלמה וכי שטח אחסון קבצים יכול להוות גורם מגביל. יש לקחת בחשבון גורמים אלה בתחילת הניסוי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

התוצאות ההתנהגותיות שנוצרו על ידי מודל CIPN זה בחולדות ניתנות לשחזור ועקביות מאוד. איור 3A מציג תוצאות רגישות מכנית של רגישות בסיסית ופוסט-פקליטקסל בבעלי חיים שטופלו ב-CBD. בנקודת ההתחלה, חולדות ספראג-דולי בדרך כלל מתחילות להפגין נסיגת כפות בכוח של 26-60 גרם כפי שמופעל על ידי חוטי פון פריי. ניתן להבחין בכך בשתי קבוצות הטיפול ביום האפס. לאחר מתן פקליטקסל, בעלי חיים שטופלו ברכב הופכים רגישים לגרם הנמוך ביותר של חוטי כוח המופעלים (למשל, 4-6 גרם). זה נצפה במחקר זה כמו גם פורסם בעבר

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מודל העכברושים של נוירופתיה היקפית הנגרמת על ידי כימותרפיה מסכם שתיים מבעיות איכות החיים המדווחות ביותר עבור חולים המקבלים סוגים מסוימים של כימותרפיה ברגישות מכנית ותרמית. בעזרת מודל זה, שיטות זולות ויעילות יחסית יכולות לכמת את הרגישויות הללו באמצעות בדיקת נימה של פון פריי ורגישות תרמית באמצעות חשיפה לקרח יבש. שיטה זו מספקת גם שיטה נוספת לבדיקות מיוחדות יותר באמצעות צילום וידאו במהירות גבוהה, שניתן להשתמש בה לניתוח מפורט וחסר פניות יותר מהשיטות הניתנות להתאמה בקלות יותר...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

המחברים מבקשים להודות למעבדות וורד ווימר על תמיכתן בפרויקט זה. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ מוחי [Grant R42 NS120548-02].

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
CannabidiolCaymen Chemical90080Ann Arbor, MI
ChremophorMillipore-Sigma238470St. Lous, MO
אתנולMillipore-SigmaE7023St. Lous, MO
תוכנת ניתוח FastCAM https://photron.com פוטון,
מצלמת קוד פתוח במהירותגבוהה Photron AX 50 
נורות אינפרא אדום CMVision IP65 
תמיסת מלח רגילהMillipore-SigmaS0817סנט לוס, MO
מרקחת בית החולים האוניברסיטאיפקליטקסלטמפל N/Aפילדלפיה, פנסילבניה
חולדות Sprague-Dawley (250– 300 גרם) מעבדות טאקוניק, קרנברי, ניו ג'רזי
בית

מקורות

  1. Zhang, X., Chen, W. W., Huang, W. J. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Biomed Rep. 6 (3), 267-271 (2017).
  2. Sałat, K. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy: part 1-current state of knowledge and perspectives for pharmacotherapy. Pharmacol Rep. 72 (3), 486-507 (2020).
  3. Velasco, R., Bruna, J. Chemotherapy-induced peripheral neuropathy: An unresolved issue. Neurología (English Edition). 25 (2), 116-131 (2010).
  4. Zajaczkowską, R., et al. Mechanisms of chemotherapy-induced peripheral neuropathy. Int J Mol Sci. 20 (6), 1451(2019).
  5. Cavaletti, G., et al. Cannabinoids: An effective treatment for chemotherapy-induced peripheral neurotoxicity. Neurother. 18 (4), 2324(2021).
  6. Lowe, H., Toyang, N., Steele, B., Bryant, J., Ngwa, W. The endocannabinoid system: A potential target for the treatment of various diseases. Int J Mol Sci. 22 (17), 9472(2021).
  7. Ward, S. J., Ramirez, M. D., Neelakantan, H., Walker, E. A. Cannabidiol prevents the development of cold and mechanical allodynia in paclitaxel-treated female C57Bl6 mice. Anesth Analg. 113 (4), 947-950 (2011).
  8. Ward, S. J., et al. Cannabidiol inhibits paclitaxel-induced neuropathic pain through 5-HT(1A) receptors without diminishing nervous system function or chemotherapy efficacy. Br J Pharmacol. 171 (3), 636-645 (2014).
  9. Iffland, K., Grotenhermen, F. An update on safety and side effects of cannabidiol: A review of clinical data and relevant animal studies. Cannabis Cannabinoid Res. 2 (1), 139(2017).
  10. Bacalhau, C., Costa-Pereira, J. T., Tavares, I. Preclinical research in paclitaxel-induced neuropathic pain: A systematic review. Front Vet Sci. 10, 1-17 (2023).
  11. Ippolito, M. J., Hayduk, S. A., Kinney, W., Brenneman, D. E., Ward, S. J. KLS-13019, a novel structural analogue of cannabidiol (CBD) and GPR55 receptor antagonist, prevents and reverses chemotherapy-induced peripheral neuropathy (CIPN) in rats. J Pharmacol Exp Ther. 391 (2), 231-240 (2024).
  12. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. IV A novel behavioral assay for measuring cold sensation in mice. PLoS ONE. 7 (6), 1-08 (2012).
  13. Zeid, D., et al. Paternal morphine exposure in rats reduces social play in adolescent male progeny without affecting drug-taking behavior in juvenile males or female offspring. Mol Cell Neurosci. 126, 103877(2023).
  14. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Front Mol Neurosci. 10 (284), 1-17 (2017).
  15. Burdge, J., Fried, N. T., Abdus-Saboor, I. Using high-speed videography for objective and reproducible pain measurement on a mouse pain scale. STAR Protoc. 2 (1), 1-16 (2021).
  16. Toussaint, A. B., et al. Chronic paternal morphine exposure increases sensitivity to morphine-derived pain relief in male progeny. Sci Adv. 8 (7), 1-17 (2022).
  17. Abdus-Saboor, I., et al. Development of a mouse pain scale using sub-second behavioral mapping and statistical modeling. Cell Rep. 28 (6), 1-33 (2019).
  18. Faraji, J., et al. Sex-specific stress and biobehavioral responses to human experimenters in rats. Front Neurosci. 16, 1-14 (2022).
  19. Bigelow, L. J., Pope, E. K., MacDonald, D. S., Rock, J. E., Bernard, P. B. Getting a handle on rat familiarization: The impact of handling protocols on classic tests of stress in Rattus norvegicus. Lab Anim. 57 (3), 259-269 (2023).
  20. Bryda, E. C. The mighty mouse: The impact of rodents on advances in biomedical research. Missouri Med. 110 (3), 207-211 (2013).
  21. Gadgil, S., et al. A systematic summary and comparison of animal models for chemotherapy induced (peripheral) neuropathy (CIPN). PLoS One. 14 (8), 1-17 (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

נוירופתיה מושרית כימותרפיהטיפול בקנבידיולמודל נוירופתיה בחולדותמתן פקליטקסלרגישות מכניתרגישות לקורוידאוגרפיה במהירות גבוהההתנהגות נוציפנסיביתכאב נוירופתימניעת אלודניה

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.