כאן, אנו מתארים שיטה חדשה לקיבוע חולדות המאפשרת דיקור סיני ומוקסה על גב חולדות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
כאן, אנו מתארים שיטה חדשה לקיבוע חולדות המאפשרת דיקור סיני ומוקסה על גב חולדות.
חוקרים תמיד נתקלים בבעיה שקשה לשלוט בבעלי חיים בניסויים בבעלי חיים הקשורים לדיקור. יש כבר כמה שיטות למנוע מבעלי חיים לברוח מאתרי טיפול. עם זאת, ההשפעה של שיטות קיבוע אלה שונה ממצב הטיפול האנושי. לכן, המצאנו שיטת קיבוע חדשה כדי לשמור על חולדות מועדות, שקטות וערות במהלך הטיפול.
הציוד מורכב מפלטפורמת ריסון מפלסטיק נקבובית, בד כותנה מרובע ומספר רצועות ריסון לקיבוע חולדות. ראשית, השחילו את רצועות הריסון למשטח הריסון. עבור כל רצועה, העבירו אותה דרך שני חורים באותה שורה, והשאירו שני חורים ביניהם. לאחר מיקום הרצועה הראשונה, הכנס את הרצועה השנייה לפלטפורמה באותו אופן, והבטיח מרווח של ארבע שורות בין שתי הרצועות. שנית, תפסו את זנב החולדה והובילו אותה לתוך התעלה שנוצרה על ידי שתי רצועות ריסון. מכסים את ראש החולדה בבד כותנה מרובע. שלישית, הדק את רצועת הריסון על הצוואר כדי לתקן את הראש והגפיים הקדמיות. לאחר מכן החזק את הגפיים האחוריות של החולדה והדק את הרצועה השנייה כדי לתקן את המותניים והגפיים האחוריות.
שיטה זו אינה דורשת הרדמה. המכשיר פשוט וקל לתפעול. כדי להעריך את יעילותו ובטיחותו, ביצענו את ההליך ל-60 חולדות. כולם סיימו את הטיפול בדיקור ללא סיבוכים. בעוד ש-14 חולדות הפגינו תקופות קצרות של מאבק במהלך ההליך, לא נצפו תופעות לוואי. התוצאות מוכיחות כי השיטה יעילה ובטוחה לשימוש.
גם מודלים כירורגיים וגם התערבות חוץ גופית דורשים שיטות קיבוע מתאימות לבעלי חיים. זה מבטיח שבעלי החיים נמצאים במצב התמרון והנוח ביותר יחסית. אנו מתמקדים בשיטת הקיבוע של בעלי החיים להתערבות בדיקור סיני. דיקור סיני יעיל בטיפול במחלות רבות 1,2. חקר מנגנון הדיקור זכה לתשומת לב רבה. נכון לעכשיו, דיקור סיני ומוקסה הם נושאי מחקר חמים בבית ומחוצה לה. יש לחקור עוד יותר את המנגנון הפתולוגי של טיפול בדיקור סיני, ובנוסף לניסויים קליניים, יש צורך גם בתמיכה מחקרית בסיסית 3,4. במחקר הבסיסי על דיקור סיני ומוקסה, קיבוע בעלי חיים הוא צעד טכני חשוב.
נכון לעכשיו, שיטות הקיבוע הנפוצות כוללות קשירה, הרדמה, נדנדה, פלטפורמה גבוהה ושיטות קיבוע אחרות. היתרונות והחסרונות של שיטות אלה מתוארים להלן.
השלב הראשון בביצוע שיטת קיבוע ההרדמה הוא הרדמת החולדות. כאשר משתמשים בשיטה זו, החוקרים מתמודדים עם הסיכון שהחולדות עלולות למות. ניתן גם לנתח ישירות ללא ריסון לאחר הרדמה5. כאשר משתמשים בשיטת קיבוע פלטפורמת הגרב-ארנב, החוקרים מכניסים את ראש החולדה לגרב גזוזה, מרחיבים את הגפיים הקדמיות דרך החורים ומהדקים את רגליהם למשטח הארנב בעזרת גומיות. שיטה זו מקלה על בחירת נקודת הדיקור בגפיים. על החוקרים לקצץ את הגרב בהתאם לאתר הדיקור, אך ההליך מורכב במקצת6. חלק מהחוקרים פיתחו מכשיר לקיבוע מוקסה המורכב משלושה חלקים: מושב קיבוע, קליפ קיבוע ומחזיק מוקסה סטיק. מכשיר זה מאפשר לחוקרים לבצע מוקסה על מספר נקודות דיקור בו זמנית תוך שמירה על טמפרטורה קבועה יחסית. עם זאת, המצב הקבוע של שיטה זו שונה באופן משמעותי מהטיפול הקליני בבני אדם7. עטיפת החולדות בבד והשעייתן באמצעות מלחציים עשויה להפחית משמעותית את השפעת האיפוק. עם זאת, יש לחתוך את הבד התלוי מראש כדי לחשוף נקודות דיקור, מה שהופך את זה לא נוח לחשוף את אתר הטיפול8. חלק מהחוקרים משתמשים ברצועות, חבלים וז'קט קטן עם רצועת סקוטש הננעלת מעצמה כדי לאבטח חולדות על כיסוי כלוב דמוי רשת. המכשיר מציע עלויות ייצור נמוכות, מעשיות גבוהה ותפעול פשוט. אבל יש צורך ביותר מאדם אחד כדי להשלים את תהליך הריסון9. חלק מהחוקרים בונים גליל מחזיק גוף עם רשת תיל, מאבטחים את רגלי החולדות עם מהדקי אחיזה ומקבעים את צווארן באמצעות מקל אחיזה. שיטה זו מספקת איפוק איתן. באמצעות שיטה זו, חוקרים יכולים לנתח טוב יותר חולדות מכיוון שנקודות הדיקור בכל הגוף חשופות. הבעיה היא שהגליל עשוי להיות לא תואם לגודל החולדה. בנוסף, שיטה זו מפעילה יותר לחץ בהשוואה לטכניקות אחרות, כך שחולדות עשויות להיות רגישות יותר לחנק10. שיטת הקיבוע בפלטפורמה גבוהה מנצלת את פחד הגובה של החולדות חוקרים מניחים חולדות על דוושת הפלטפורמה הגבוהה 50 ס"מ מעל הקרקע. החולדות נשארות במצב נטייה טבעי ללא צורך במעצורים נוספים. שיטה זו מאפשרת דיקור ראש וגב של חולדות. שיטה זו מדמה באופן אותנטי את סביבת הטיפול, כך שלתוצאות הניסוי יש ערך ייחוס טוב. מכיוון שחולדות מפחדות מגבהים, מצבן הנפשי הופך לחריג כאשר הן ממוקמות בגבהים כאלה. זה הופך את השיטה לבלתי מתאימה למחקר על מחלות נפש ויכול להשפיע על תוצאות הניסוי11. חלק מהחוקרים משתמשים בפלטפורמת ריסון מתכווננת ורצועות כדי לתקן חולדות, וחושפים אזור טיפול גדול. עם זאת, שכפול התרחיש הקליני נותר מאתגר12.
יש צורך דחוף לטפל בבעיה ששיטות קיבוע אינן יכולות לדמות במדויק מצבי טיפול קליניים. עשינו כל מאמץ לשכפל את התנאים של טיפול קליני בבני אדם. השיטה המתוארת במאמר זה נופלת תחת קטגוריית שיטת השעבוד. הציוד המשמש בשיטה זו כולל פלטפורמת ריסון ורצועות ריסון, יחד עם בד כותנה המסייע בהליך. הציוד פשוט יחסית לתפעול. בהשוואה לשיטות אחרות, שיטה זו חושפת טוב יותר את נקודות הדיקור בגב החולדות ומשפרת את יעילות הטיפול.
כדי לבחון את אמינות המכשיר, נעשה שימוש בסך הכל ב-60 חולדות לניסוי. כל 60 החולדות חולקו לשתי קבוצות, כל אחת מכילה 30 חולדות: קבוצת הדיקור האלקטרו-אקופונקטורה וקבוצת הדיקור החם. החולדות נשארו רגועות במהלך תהליך הטיפול, ולתנועתן הייתה השפעה מינימלית על ההליך. בקבוצת האלקטרו-אקופונקטורה, 22 חולדות סיימו את הטיפול ברוגע מבלי להיאבק. בסך הכל 8 חולדות נאבקו במהלך הניתוח, ו-6 עקרו את המחטים. בסך הכל 24 חולדות בקבוצת הדיקור החם נותרו רגועות במהלך הטיפול. 6 החולדות האחרות הפגינו התנהגות נאבקת, אך אף אחת מהן לא עקרה את כדורי המוקסה. החולדות הללו שנאבקו יכלו גם להירגע לאחר שכוסו וניחמו. בסופו של דבר, כל החולדות השלימו את הטיפול בהצלחה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82205287). פרוטוקולי הניסוי ששימשו במחקר זה נבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה לניסויים ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת בייג'ינג לרפואה סינית (No BUCM-2024052704-2223) לפני ביצוע הניסויים. כל ההליכים המוכחים חייבים להיות מאושרים על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC).
פרטי הציוד ששימש במחקר מפורטים בטבלת החומרים. ניתן לחלק את הפרוטוקול לארבעה חלקים: הכנת ניסוי, תהליך קיבוע, פעולת טיפול ופירוק הציוד.
1. הכנת ניסוי (איור 1)

איור 1: התקנים הנדרשים עבור הפעולה. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.
2. תהליך תיקון

איור 2: הרכבה של פלטפורמת ריסון ורצועת ריסון. משטח הריסון עם רצועות הריסון המוכנסות מוצג באיור. כל רצועה מוכנסת דרך שני חורים באותה שורה, במרווח של שני חורים זה מזה, כאשר הרצועות מרוחקות ארבע שורות זו מזו. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 3: תהליך הקיבוע של חולדה. (A) החזיקו את הזנב של החולדה. (B) תנו לחולדה לברוח קדימה לתוך התעלה. (C) כסו את ראש החולדה בבד כותנה. לחץ על צווארו ותפס את זנבו ואת גפיו האחוריות. (ד,ה) הדק את הרצועה על גבו. (ו,ז) הדק את הרצועה על מותניו. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.

איור 4: פעולת דיקור סיני בחולדה. DU20, BL17 ו-BL23 נבחרו כנקודות הדיקור להליך דיקור זה. (A) סובב את המחט לתוך נקודות הדיקור. (ב,ג) החולדה משלימה את הטיפול מוצגת כאן. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
3. טיפול באלקטרו אקופונקטורה

איור 5: פעולת דיקור חשמלי על חולדה. (א) הגדר את הפרמטר לגל רציף, והתאם את עוצמת הזרם ואת התדר. (ב,ג) זוג BL17 ו- BL23 באותו צד. (ד,ה) עטפו את הזנב בגזה ספוגה במי מלח וחברו אותו ל- DU20. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
4. טיפול בדיקור חם

איור 6: פעולת דיקור חם על חולדה. (A) קח נייר מרובע ונקב את מרכזו עם מחט. (B) הכנס מחטים לנקודות דיקור. (C) הניחו את כדורי המוקסה על המחטים. (ד,ה) החולדה משלימה את הטיפול מוצגת כאן. אנא לחץ כאן לצפייה בגרסה גדולה יותר של איור זה.
5. פירוק הציוד
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כדי להעריך את יעילות שיטת הקיבוע, ערכנו ניסוי על 60 חולדות בסך הכל, שחולקו לשתי קבוצות: 30 חולדות בקבוצת האלקטרו-אקופונקטורה ו-30 חולדות בקבוצת הדיקור החם. פעולות הטיפול כללו דיקור חשמלי ודיקור חם, בהתאמה.
לאחר החדרת מחטים לנקודות דיקור, הדיקור ביצע מניפולציות הרמה, דחיפה וסיבוב על כל מחט כדי להשיג דקי. במהלך ההליך נצפה מאבק ב-20 חולדות, מתוכן 7 ניערו את המחטים. חולדות עם מאבק קל חזרו לרוגע מהר יותר באמצעות ניחום, בשילוב עם כיסוי בד כותנה. עבור חולדות שהפגינו ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חולדות נוטות לאכלס סביבות חשוכות. הם מרגישים בטוחים כשהם מוגנים ומגיבים בשלווה לגירויים, ומפגינים רמות מתח נמוכות יותר. השיטה המתוארת כאן ממנפת את מאפייני החולדות הללו. ניתן לסכם את היתרונות של שיטת קיבוע זו באופן הבא: (i) שיטה זו יכולה למזער את תגובת הסטרס והכאב שחווים חיות ניסוי. זה מתיישב עם עקרונות 3R של אתיקה של בעלי חיים, כלומר הפחתה, עידון והחלפה13. (ii) המקלט מפחית את הלחץ של החולדות ומבטיח ריסון בטוח, ומונע ביעילות נשיכות חולדות למפעילים. (iii) השיטה חוש...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל המחברים לא הצהירו על ניגודי אינטרסים פוטנציאליים.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82205287).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| מחטי דיקור סיני | בייג'ינג ZhongYan TaiHe מכשיר רפואי ושות', בע"מ | 20222200133 | המפרט של מחטי הדיקור הוא בקוטר 0.25 מ"מ ואורך 25 מ"מ. |
| כפפות נגד חיתוך | מפעל מוצרי הגנת העבודה של Lvdazhou במחוז לנשאן, ליניי סיטי | H0315103941 | נועד להגן על חוקרים מפני עקיצות חולדות במהלך הניסוי. |
| מכשיר דיקור אלקטרו-סיני | מפעל מכשירים רפואיים סוג'ואו בע"מ | 20172200675 | מכשיר זה משמש לביצוע הליכי דיקור אלקטרו-סיני. |
| כפפות לטקס בדרגת מעבדה | Zhonghong Pulin Medical Products Co., Ltd. | 268237719221 | כפפות אלו מהוות את אמצעי ההגנה הבסיסי של הניסוי. |
| מוקסה | בייג'ינג Tongrentang Xing'an בריאות טכנולוגיה ושות', בע"מ | 152200000000613 | Moxa משמש כחומר ליצירת כדורי מוקסה בקוטר 5 מ"מ, המשמשים לטיפול מוקסה לאחר מכן. |
| פלטפורמת ריסון פלסטיק נקבובית | Chuzhou Huaxin VinyIIndustry Co., Ltd. | 341124000005877 | פלטפורמת הריסון היא 500 מ"מ אורך, 300 מ"מ רוחב ו-5 מ"מ גובה. החור עליו הוא באורך 7 מ"מ ורוחב 3.2 מ"מ. המרחק בין שני חורים סמוכים הוא 7 מ"מ. ציוד זה משמש כפלטפורמה לתיקון חולדות. |
| רצועות ריסון | Zhejiang Litai פלסטיק ושות', בע"מ | 331003000001553 | אורך כל רצועת ריסון הוא 300 מ"מ ורוחב 4.8 מ"מ. רצועת הריסון משוננת וכוללת אבזם בקצהו, הניתן לנעילה לאחר הכנסתה. |
| בד כותנה מרובע | MUJI (SHANGHAI) חברה בע"מ | WYLP20241105_1 | בד הכותנה המרובע מודד 30 ס"מ וחריף; 30 ס"מ. הוא משמש לחסימת הראייה של חיות הניסוי. |
| ניירות מרובעים | DELI Group Co., Ltd. | 7752-1114 | כדי למנוע כוויה של החולדות, החוקרים חתכו כמה ניירות מרובעים שגודלם 2 ס"מ ו-2 ס"מ |
| גזה סטרילית | ג'יאנגשי Zhonggan מכשירים רפואיים ושות', בע"מ | 20172140084 | הגזה הסטרילית מוחלת כדי לעטוף את זנב החולדה, ומבטיחה מוליכות חשמלית במהלך הטיפול בדיקור אלקטרו-אקופונקטורה. |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
