הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

קשירה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי בחולדות לפיתוח מודל אוטם שריר הלב החוסם

1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68143

⸱

3 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Khalsa College of Pharmacy, 2Khalsa College of Veterinary and Animal Sciences, 3Department of Molecular Biology and Biochemistry, Guru Nanak Dev University, 4Universal Diagnostics, 5Histopathology Department, Fortis Memorial Research Institute

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול מראה התפתחות של מודל אוטם שריר הלב (MI) על ידי קשירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי בחולדות. הישרדות בעלי חיים לאחר MI חיונית להצלת קרדיומיוציטים באזור האיסכמי, מניעת התרחבות אוטם והפחתת דלקת ופיברוזיס לאחר שריר הלב.

תקציר

מחלות לב וכלי דם (CVD), כולל מחלת לב איסכמית ושבץ מוחי, הן גורם עיקרי לתמותה ותחלואה ברחבי העולם. אוטם שריר הלב הוא תסמונת קלינית של מחלת לב איסכמית המתרחשת עקב איסכמיה ממושכת. שריר הלב האיסכמי עובר שינויים תפקודיים, מטבוליים ומבניים, המובילים לנזק בלתי הפיך לחלק משריר הלב עקב נמק. מודלים ניסיוניים של אוטם שריר הלב חיוניים להבנת השינויים התאיים, המולקולריים והמורפולוגיים החריפים והכרוניים המתרחשים במהלך ואחרי MI ולפיתוח ואופטימיזציה של מטרות או אסטרטגיות חדשות לטיפול. המודל הכירורגי של MI בבעלי חיים קטנים המשתמש בסגירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי (LAD) כמעט דומה ל-MI אנושי. מטרת מחקר זה היא לבסס מודל MI המושרה בניתוח הכולל סגירת העורק הכלילי LAD באופן בלתי מחיק בחולדות. פרוטוקול הניסוי כולל אינדוקציה ראשונית של הרדמה עם קטמין 80 מ"ג/ק"ג וקסילזין 12 מ"ג/ק"ג i.p., אינטובציה של צינורית אנדוטרכיאלית באמצעות אוטוסקופ ללא ביצוע טרכאוטומיה בהנשמה בעזרת מכונת הנשמה עם שימוש בלחץ נשיפה חיובי חיצוני (PEEP) למניעת קריסה של נאדיות. אומץ הליך כריתת בית החזה המגביל את הנגעים הנגרמים לשרירי השלד במהלך הניתוח. גישה זו היא זעיר פולשנית, ניתנת לחזרה ומורידה את התמותה לאחר הניתוח. במודל זה, בעלי חיים שרדו 4 ימים לאחר MI כדי להבין את השינויים הפתוביולוגיים לטווח הקצר, בעיקר דלקת לאחר MI, אנגיוגנזה כתהליך טבעי של ריפוי אוטם, ובסופו של דבר, פיברוזיס בשריר הלב האוטם.

מבוא

מחלות לב וכלי דם (CVD), הכוללות בעיקר מחלת לב איסכמית (IHD) ושבץ מוחי, הן גורם עיקרי לתמותה ותחלואה ברחבי העולם. על פי פדרציית הלב העולמית, 20.5 מיליון אנשים מתו ממחלות לב וכלי דם בשנת 2021 1,2. אוטם שריר הלב (MI), הידוע גם בשם התקף לב, הוא תסמונת קלינית חריפה של IHD. במהלך MI, רקמת שריר הלב סובלת מנזק בלתי הפיך כתוצאה מאיסכמיה ממושכת, הנגרמת בדרך כלל על ידי פקקת חוסמת שנוצרת על רובד טרשת עורקים קרוע בעורק כלילי3.

רפרפוזיה בזמן באמצעות התערבות כלילית מלעורית (PCI) או חומרים טרומבוליטיים הוא הטיפול העיקרי להצלת שריר הלב האיסכמי מנמק 3,4. במדינות מפותחות, עקב יישום גדול יותר של PCI, התמותה בעקבות MI ירדה, אך שכיחות MI עולה במדינות מתפתחות כמו דרום אסיה5. לאחר MI, חלק משריר הלב שעובר נמק מוקף באזור של תאי שריר הלב שניזוקו באופן הפיך ואזור איסכמי. שריר הלב האיסכמי עובר שיפוץ חדרים לאחר MI שעלול להוביל להרחבת חדרים ולתפקוד לקוי, ובסופו של דבר להתקדם לאי ספיקת לב6.

נכון לעכשיו, מתבצע מחקר נרחב כדי לקדם התחדשות של קרדיומיוציטים פגומים באמצעות טיפול בתאי גזע7 ולהקל על תיקון שריר הלב על ידי גירוי אנגיוגנזה באזור האיסכמי8. עם זאת, נדרשים שיפורים ניכרים באסטרטגיות להצלחה הקלינית של שתי הגישות. לפיכך, מודלים ניסיוניים המחקים אוטם שריר הלב או איסכמיה הם חיוניים להבנת השינויים הפתולוגיים, התאיים, המולקולריים והמורפולוגיים המתרחשים במהלך ואחרי MI, כך שניתן יהיה לזהות מטרות טיפוליות או אסטרטגיות טיפול חדשות ולבצע אופטימיזציה לתרגום קליני. במחקר זה פותח מודל ניסיוני של MI על ידי ביצוע סגירה בלתי הפיכה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי (LAD) בחולדות. ראשית, אינטובציה אנדוטרכיאלית בוצעה בבעלי חיים מורדמים ללא טרכאוטומיה בהנשמה בעזרת מכונת הנשמה על ידי הפעלת לחץ נשיפה חיצוני חיובי (PEEP) למניעת אטלקטזיס (דפלציה/קריסה של שקי אוויר בריאות). אומץ הליך זעיר פולשני לפתיחת חלל החזה, תוך מניעת פגיעה בשרירי השלד במהלך הניתוח. מיקום הקשירה כרוך במקור הענף האלכסוני הראשון של ה-LAD, המייצר אוטם מספיק ומחקה את המצב הקליני של אוטם שריר הלב הסותם (OMI). מכיוון שמיקום הקשירה הוא אזור אמצע ה-LAD, שיעור התמותה לאחר הניתוח, כמו גם סיבוכים לאחר הניתוח, נמוך יותר9. במודל זה, בעלי חיים שרדו 4 ימים לאחר MI כדי להבין את השינויים קצרי הטווח המתרחשים ברקמת שריר הלב לאחר MI וזיהוי מטרות ואסטרטגיות חדשות לטיפול ב-MI.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הליכי הניסוי בוצעו בהתאם לפרוטוקול לאחר אישור ועדת האתיקה המוסדית לבעלי חיים (IAEC) [פרוטוקול מס. (IAEC/KCP/2023/009)]. ההנחיות של הוועדה למטרת בקרה ופיקוח (CCSEA) והמשרד לאיכות הסביבה, היערות ושינויי האקלים, ממשלת הודו, בוצעו בטיפול ובטיפול בחיות ניסוי.

1. הרדמה ואינטובציה של צינורית אנדוטרכיאלית (משך: 10-15 דקות)

  1. השתמש בחולדות וויסטאר משני המינים, במשקל 200 - 240 גרם, בגילאי יותר מ -6 חודשים. רשום את משקל החולדות. להרדים את החולדה על ידי מתן קטמין (80 מ"ג/ק"ג) וקסילזין (12 מ"ג/ק"ג) בהתאם למשקל הגוף דרך המסלול התוך-צפק.
    הערה: קטמין, חומר הרדמה דיסוציאטיבי, מייצר הרדמה מהירה אך קיבוע שרירים חלקי10. לפיכך, הוא משמש בשילוב עם קסילזין כדי לייצר הרפיית שרירים ולהשיג מצב של הרדמה כירורגית11.
  2. צבט את הזנב כדי להבטיח את מידת ההרדמה. אם החולדה מראה רפלקסים, יש לתת 1/3 מהמינון של קטמין. חבר כרית חימום למאוורר כדי להניח מעל שולחן הניתוחים כדי לספק התחממות ביתית.
  3. הניחו את החולדה בתנוחת דקוביטוס גבית על כרית החימום (איור 1A). שמור את החולדה במצב זה על ידי מריחת סרטי דבק והניח את שולחן הניתוחים במצב נוטה.
  4. התאם את פרמטרי הנשימה של מכונת ההנשמה עם נפח הגאות והשפל ב-8 מ"ל/ק"ג (2-3 מ"ל/דקה), קצב הנשימה ב-77 נשימות לדקה (פעימות לדקה) ולחץ שיא (לחץ שאיפה שיא) ב-15 ס"מ H2O. כדי למנוע קריסת הריאות, התאם את לחץ הנשיפה החיובי (PEEP) ל-2 ס"מ H2O.
  5. כדי לבצע אינטובציה אנדוטרכיאלית, אחוז בלשון והרם אותה בעזרת פינצטה קהה. הכניסו אוטוסקופ (איור 1B) לפה כדי לראות את מיתרי הקול ולהכניס את הצינורית האנדוטרכאלית (איור 1B ואיור 2A) דרך מיתרי הקול. כדי לראות בבירור את האפיגלוטיס, השליכו פנס סביב הגרון מלמעלה.
  6. חבר את הצינורית האנדוטרכיאלית עם צינור ההנשמה (איור 1A ואיור 2B) ועקוב אחר תנועות החזה כדי לאשר אינטובציה נכונה. נפיחות בבטן מעידה על חשד לאינטובציה בוושט, חזור על האינטובציה לפי שלב 1.8.
  7. לאחר סיום כל ההגדרה, השתמש בסטריאומיקרוסקופ כירורגי לקשירת LAD (איור 1A), והשתמש במנורת חימום במהלך הניתוח כדי לשמור על טמפרטורת גוף החולדה על 37 מעלות צלזיוס.
  8. מרחו קרם אפילציה על צוואר החולדה ואזור בית החזה והשאירו למשך 10 - 20 דקות. הסר בעדינות את פרוות החולדה מהצוואר לאזור בית החזה.

2. אינדוקציה כירורגית של אוטם שריר הלב (משך: 20 - 25 דקות)

  1. השתמש בפינצטה כדי למרוט את העור בתהליך ה- xiphoid ולבצע חתך קל (כ -1 ס"מ) בעזרת מספריים, ואחריו חיתוך לאורך החל מתהליך ה- xiphoid, המכוון לכיוון שריר הסטרנוקלידומסטואיד.
    1. הימנע מפגיעה בפאשיה כדי למנוע דימום חמור. אם יש דימום, השתמש במגבונים עטופים כדי ללחוץ בעדינות על אזור הדימום.
  2. מבסיס שריר הסטרנוקלידומסטואיד לצלע 5-6, חותכים את הפאשיה ושרירי החזה לאורך הצד השמאלי של עצם החזה.
  3. השתמש במלקחיים כדי לבצע ניקוב בחלל הבין-צלעיהשלישי והרביעי לכיוון הצד השמאלי של עצם החזה. אין לפגוע בלב או בריאות בעת יצירת חור (כ-6-8 מ"מ). החל את ההצצה בשלב זה.
  4. השתמשו בפטמה חתוכה בצלעות כדי לחתוךאת הצלעות הרביעית, החמישית והשישית יחד עם שרירים בין-צלעיים, ונתקו את השרירים הבין-צלעיים הנותרים בעזרת מלקחיים (איור 2C).
  5. הכניסו את מפסק הצלעות בעדינות כדי להחזיק את הצלעות זו מזו ולחשוף את הלב (איור 2D). כדי לראות בבירור את הפרוזדור השמאלי, הפרד את קרום הלב והתימוס מהצד הקדמי של הלב באמצעות פינצטה ומספריים מעוקלים.
  6. זהה את המיקום של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי (LAD) לצורך קשירה על ידי תפר.
    1. לאחר הסרת קרום הלב בזהירות, זהה את LAD כעורק שטחי בולט העובר באלכסון מבסיס הלב לקודקוד לאורך החריץ הבין-חדרי. ה-LAD מתחלק לשתי קבוצות של ענפים: ראשית, ענפי המחיצה (S1 ו-S2) המחוררים את המחיצה הבין חדרית. קבוצת הענפים השנייה, הנקראת ענפים אלכסוניים (D1 ו- D2), מחוררת את החלק הקדמי של החדר השמאלי.
    2. זהה את שלושת האזורים של LAD, כלומר, אזורים פרוקסימליים, בינוניים ודיסטליים. LAD פרוקסימלי: אזור LAD ממקורו ועד הענף הראשון, שיכול להיות מחיצה או אלכסון; אמצע LAD: האזור שבין הענף הראשון לענף האלכסוני השני; LAD דיסטלי: האזור שמעבר לענף האלכסוני השני ידוע כ-LAD דיסטלי (איור 2E).
    3. LAD מופיע כעורק אדמדם פועם עם דפנות עבות יותר. כדי לאשר את מיקומו, לחץ בעדינות עם מיקרו מלקחיים, ומורגש פעימה.
  7. בצע סגירה קבועה של LAD על ידי מעבר 8-0 תפר משי באזור אמצע LAD ליד המקור של הענף האלכסוני הראשון D1 באמצעות מחזיק מחט ומשיכת התפר בעדינות, כדי למנוע כל נזק ללב (איור 2E).
  8. בעזרת מלקחיים יוצרים שני קשרים של קשירה בכיוון זהה (קשר מנתח). הדק את הקשירה על ידי יצירת קשרים מרובים בכיוון דו צדדי בעזרת מלקחיים.

3. ניתוח דמה

  1. בצע את שלבים 2.1-2.6. לאחר ביצוע כריתת בית חזה בצד שמאל, יש לחשוף את הלב, להעביר תפר משי ולמשוך מתחת לעורק הכלילי הראשי השמאלי (LAD) מבלי לקשור אותו.

4. מתן תרופה טיפולית (משך הטיפול: 2-5 דקות)

  1. לאחר קשירת LAD, הזריק מיד Doxazosin 0.06 מ"ג/ק"ג תוך ורידי דרך וריד הזנב בקבוצת הטיפול (איור 3)

5. סגירת חלל החזה לאחר הליך כירורגי (משך: 5 דקות)

  1. הסר את המחזירים כך שהצלעות והשרירים הבין-צלעיים יחזרו למקומם המקורי. סגור את חלל החזה על ידי תפירת השרירים הבין-צלעיים השמאלי והימני באמצעות תפר משי 6-0. בצע תפרים עם תפר פרולן 4-0 כדי לסגור את העור (איור 2F).

6. טיפול וניטור לאחר הניתוח (משך: 40 דקות - 60 דקות)

  1. עקוב אחר החולדה המנותחת להתאוששות מההרדמה למשך 40 דקות או יותר. הבטיחו החלמה מלאה על ידי הרמה או צביטה של הזנב.
  2. הסר את החיבור ממכונת ההנשמה באופן זמני והבטיח את הנשימה המווסתת את עצמה של החולדה על ידי בחינת התנועה הרגילה של אזור בית החזה.
  3. כבה את מכונת ההנשמה והסר את הצינורית האנדוטרכיאלית. נתק את סרטי ההדבקה המהודקים לגפיים.
  4. הזרקת טרמדול (12.5 מ"ג/ק"ג) דרך המסלול התוך-צפקי כדי להקל על כאבים לאחר הניתוח.
  5. שמור את החולדה על כרית החימום כדי לשמור על טמפרטורת הגוף על 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות. עקוב באופן רציף אחר החולדה לאיתור מצבים חולניים, כגון נשימה לא סדירה או קושי, או כל סימן מסוכן של אוטם.
  6. כאשר החולדה מסוגלת לנוע בחופשיות, שקול זאת במצב של החלמה מוחלטת מההרדמה. למרות שהחולדה אינה מסוגלת לנוע מרצונה, שמור אותה בכלוב תוך 45 דקות לאחר הוצאתה ממכונת ההנשמה.
  7. התבוננו בחולדה מדי יום במשך 4 הימים הראשונים. ביום הרביעי, הקריבו את החולדה באמצעות תא המתת חסד CO2 .

7. ניתוח סמנים ביוכימיים של אוטם שריר הלב

  1. להעריך את רמת הטרופונין כסמן ביולוגי של אוטם שריר הלב לאחר 6 שעות ו-4 ימים לאחר הניתוח בדגימות דם של בעלי חיים.
    1. איסוף והכנת דגימות: אסוף דגימת דם (200 מיקרוליטר) מווריד הזנב לאחר 6 שעות של אוטם בצינורות מצופים EDTA או מצופים הפרין ועל ידי ניקוב רטרו-אורביטלי (1 מ"ל) לאחר 4 ימים של MI.
      הערה: דגימת דם מלא נוגדת קרישה עדיפה לבדיקת טרופונין T.
    2. מרחו 150 מיקרוליטר של דגימה על רצועת הבדיקה באמצעות פיפטות לב ומזרקי מינון חד פעמיים המסופקים בערכה.
    3. דגירה בטמפרטורת החדר למשך 15-20 דקות, ולאחר מכן פירוש התוצאות על סמך הופעת קו אות (קו אדמדם) באזור הזיהוי תוך 15-20 דקות. השתמש בפרמטרים הבאים: אין קו זיהוי, רק קו בקרה = שלילי; קו גילוי גלוי וקו בקרה = חיובי (איור 6B).
  2. זיהוי טרופונין I בדגימת סרום באמצעות מנתח F סטנדרטי.
    1. איסוף והכנת דגימות: אסוף דגימות דם (200 מיקרוליטר) מווריד זנב לאחר 6 שעות של אוטם בצינורות מצופים EDTA או מצופים הפרין ועל ידי ניקוב רטרו-אורביטלי (1 מ"ל) לאחר 4 ימים של MI.
    2. אפשר לערכה ולדם דגימה להיות בטמפרטורת החדר לפני הבדיקה. בדוק את תאריך התפוגה בגב נרתיק נייר הכסף. פתח את נרתיק נייר הכסף ובדוק את מכשיר הבדיקה (איור 4).
    3. הכנס את מכשיר הבדיקה לחריץ הבדיקה של המנתח. המנתח קורא את נתוני הברקוד ובודק שהתקן הבדיקה תקין (איור 4).
    4. אסוף 100 מיקרוליטר של דגימה עם טפטפת בנפח קבוע (100 מיקרוליטר). הוצא את הדגימה שנאספה לתוך צינור החיץ של המיצוי. לאחר מכן, השלך את טפטפת הנפח הקבוע המשומשת (100 מיקרוליטר).
    5. מערבבים את הדגימה וחוצצים פי 2x-3x עם הטפטפת החד פעמית (100 מיקרוליטר). לאחר מכן, אסוף 100 מיקרוליטר מתערובת הדגימה.
    6. לאחר החלת הדגימה בבאר הדגימה של מכשיר הבדיקה, לחץ מיד על כפתור TEST START של המנתח. המנתח יציג אוטומטית את תוצאת הבדיקה תוך 10 דקות.
      הערה: אם טרופונין I (TnI) קיים, הוא יהיה קשור למיקרו-חלקיק האירופיום. קומפלקס זה יילכד על ידי נוגדן הלכידה בקו הבדיקה, ועוצמת האור הקרינה תזוהה על ידי המנתח.

8. ניתוח אזור האוטם

  1. לאחר הקרבת החולדות 4 ימים לאחר העבירה, קבע את אזור האוטם בשיטה המקרוסקופית של צבע 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC).
    1. מוציאים את הלב מגוף החיה ושומרים למשך הלילה על 4 מעלות צלזיוס. כרתו גם את האפרכסת, שורש אבי העורקים וגם את החדר הימני. חותכים את החדר השמאלי הקפוא לפרוסות בעובי 2-4 מ"מ בעזרת להב כירורגי. דגרו את פרוסות החדרים ב-37 מעלות צלזיוס בתמיסת TTC 1% (שהוכנה באמצעות מאגר טריס 0.1 M הנשמר ב-pH 7.8) למשך 20 דקות.
    2. נתח את דפוס הצביעה כאשר שריר הלב הבר-קיימא, המכיל אנזים דהידרוגנאז וקופקטור NADH, צבוע באדום לבנים עם TTC עקב היווצרות פורמזן, בעוד שאזור שריר הלב שעובר אוטם נותר לא מוכתם.
  2. קבע את האזור האוטם בשיטת נפח.
    1. מניחים פרוסות חדרים בין שתי שקופיות זכוכית ורשת פלסטיק שקופה עם 100 ריבועים ב -1 ס"מ מונחים מעליה.
    2. חשב את השטח הממוצע של כל פרוסת חדר על ידי ספירת מספר הריבועים משני הצדדים. באופן דומה, חשב את מספר הריבועים הנופלים על אזורים מוכתמים ולא מוכתמים משני הצדדים. האזור הצהוב העמום הלא מוכתם ייצג את החלק האוטם, והאזור האדום ייצג את החלק הבר-קיימא.
    3. בטא את גודל האוטם כאחוז מנפח החדר השמאלי הכולל (%LVV).

9. ניתוח היסטופתולוגי

  1. מכתים המטוקסילין ואאוזין
    1. לממצאים היסטופתולוגיים, יש להקריב את החיה 4 ימים לאחר קשירת LAD, להסיר את הלב, לשטוף עם מאגר פוספט (PBS, pH 7.4), ולשמור בתמיסת פורמלין (10%) באופן מיידי.
    2. בצע עיבוד רקמות על ידי ייבוש הרקמה למשך שעה אחת בסדרה של ריכוזי אלכוהול הולכים וגדלים (70%, 80%, 95%, 95% ואלכוהול מוחלט) כך שהמים מוסרים מהרקמה ואלכוהול נכנס לתוך הרקמה. בצע ניקוי אלכוהול מרקמות על ידי טבילה בקסילן.
    3. לאחר הניקוי, העבירו את הרקמה באמצעות מלקחיים לשעוות פרפין מותכת בתבנית נירוסטה. חומר הניקוי מתפזר החוצה, והשעווה המותכת חודרת לרקמה. מצננים את התבנית על הצלחת הקרה כדי למצק את הפרפין. כאשר השעווה מתקררת ומתקשה לחלוטין (30 דקות), הסר את גוש הפרפין בקלות מהתבנית.
    4. חותכים את גושי הפרפין המכילים רקמה משובצת למקטעים בעובי 4 מיקרומטר באמצעות מיקרוטום. הניחו את סרט קטעי הפרפין באמבט מים בטמפרטורה של 40-45 מעלות צלזיוס. הרכיבו את החלקים על מגלשה וייבשו באוויר או חממו בעדינות את המגלשה. לאחר מכן, הפחיתו את החלקים על ידי שטיפתם בקסילן והחזרתם למים עם אלכוהול ומים מוחלטים.
    5. מכתים עם המטוקסילין למשך 15 דקות. שוטפים את החלקים המוכתמים במים ומטפלים בהם בתערובת אלכוהול חומצה של 1% למשך 20 שניות.
    6. לאחר שטיפה במים, יש להכתים את החלקים בכתם נגד (תמיסה מימית של אאוזין) למשך 2 דקות. התבונן בשקופיות מתחת למיקרוסקופ כדי לדמיין שינויים היסטופתולוגיים בהגדלה של פי 10 ו-40.
  2. צביעת טריכרום מאסון
    1. הכן את הריאגנטים הבאים.
      1. הפתרון של בואין: הוסף 75 מ"ל של חומצה פיקרית רוויה, 25 מ"ל של 40% פורמלדהיד ו-5 מ"ל של חומצה אצטית קרחון. תמיסת המטוקסילין ברזל של Weigert: הכינו תמיסת מלאי A המכילה המטוקסילין 1 גרם ב-100 מ"ל של 95% אלכוהול. הכן תמיסת מלאי B המכילה 29% כלוריד ברזל ב-4 מ"ל מים, 1 מ"ל חומצה הידרוכלורית מרוכזת ו-95 מ"ל מים מזוקקים. הוסף חלקים שווים של תמיסת מלאי A ו-B לשימוש. התערובת יציבה רק לא יותר משלושה חודשים.
      2. תמיסת פושין חומצה ארגמנית של ביבריך: הוסף 90 מ"ל של 1% ארגמן ביבריך מימי, 10 מ"ל של פושין חומצה מימית 1% ו-1 מ"ל של חומצה אצטית קרחון. תמיסת חומצה פוספומוליבדית-פוספוטונגסטית: הוסף 25 מ"ל של 5% חומצה פוספומוליבדית ו-25 מ"ל של 5% חומצה פוספוטונגסטית. תמיסת אנילין כחולה: הוסף 2.5 גרם של כחול אנילין ו-2 מ"ל של חומצה אצטית קרחונית ל-100 מ"ל מים מזוקקים. תמיסת חומצה אצטית קרחונית 1%.
    2. יש להסיר את חלקי הלב המוטבעים בפרפין באמצעות קסילן, ולאחר מכן להחזיר נוזלים בריכוזים שונים של אלכוהול.
    3. דגרו על חלקי הלב עם התמיסה של Bouin למשך 30 דקות בטמפרטורה של 56 מעלות צלזיוס כדי להגביר את עוצמת הצבע הסופית. שוטפים את החלקים במי ברז זורמים עד להסרת הצבע הצהוב.
    4. מכתימים את הרקמה בהמטוקסילין למשך דקה אחת ואז שוטפים במי ברז זורמים למשך 2-3 דקות. מכתימים את החלקים בתמיסת פוקסין חומצה ארגמנית של ביבריך למשך 15 דקות.
    5. להבדיל עם 5% פוספומוליבדי - חומצה פוספוטונטית למשך 5 - 8 דקות. העבירו את החלק ישירות (ללא שטיפה) לתמיסה כחולה אנילין למשך 6-8 דקות.
    6. שוטפים במים מזוקקים. לאחר מכן, יש להבדיל עם תמיסת חומצה אצטית 1%. יש לייבש עם 95% אתנול, לנקות עם קסילן, לעלות על השקופית ולבחון תחת מיקרוסקופ12.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

אינטובציה אנדוטרכיאלית נחוצה כדי לסייע לאוורור במהלך הליך קשירת LAD הכולל הליכי בית חזה פתוח בחולדות. אינטובציה מוצלחת מאושרת על ידי פרמטרים נשימתיים בסיסיים לפני הניתוח ושמירה על נשימה יציבה, נפח גאות ונפח זעיר במהלך ההליך הכירורגי (איור 5).

הצלחת הליך קשירת LAD אושרה על ידי הערכת טרופונין T וטרופונין I לבביים כסמנים ביוכימיים לפגיעה בשריר הלב13, מדידת גודל האוטם והתבוננות בשינויים היסטופתולוגיים. חלבון טרופונין לב (cTn) מקיים אינטראקציה ע...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

המחקר הנוכחי שלנו מייצג את השראת אוטם שריר הלב באמצעות סגירה קבועה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי (LAD) בחולדות. בפרוטוקול כירורגי זה, הרדמה קטמין 80 מ"ג/ק"ג הניתנת בדרך תוך-צפקית השרתה הרדמה מהירה, יחד עם מתן תוך-צפקי של קסילזין 12 מ"ג/ק"ג, הביאו להרפיית שרירים מספקת, ובכך אפשרו את כל ההליך הכירורגי ביעילות כמו גם התאוששות חלקה לאחר הניתוח לאחר פרק זמן קצר עם תופעות לוואי מינימליות. פרוטוקולי הרדמה דומים במינונים שונים של קטמין וקסילזין נקבעו במחקרים קודמים, כגון מתן קטמין 80 מ"ג/ק"...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

כל המחברים חשפו כל ניגוד אינטרסים.

תודות

ד"ר ראווי קומאר דהוואן, מנהל, מכללת חאלסה לרוקחות, אמריצר, על מתן הדרכה ותמיכה לרכישת כל הציוד הכירורגי; ניהול מועצת המנהלים של מכללת חאלסה למתן כספים; ד"ר האריש קומאר ורמה, מנהל, מכללת חאלסה לווטרינריה ומדעי בעלי חיים, אמריצר על מתן דגימת מתנה של קטמין וקסילזין; ד"ר רקה סינג, המחלקה להיסטופתולוגיה, מכון המחקר פורטיס ממוריאל, גורוגרם למתקני היסטופתולוגיה ודירוג; מר המאנט ארורה, ד"ר, Universal Diagnostics המספק מתקן להערכת טרופונין I; ד"ר רחנה הורה, פרופסור חבר, המחלקה לביולוגיה מולקולרית וביוכימיה לטכניקות ספיגה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
צינורית תוך-ורידית 18-GaugeKent scientific, ארה"ב
צינורית תוך-ורידית 20-GaugeKent scientific, ארה"ב
4-0 תפר פוליפרופילןחאנה כירורגית
6-0 תפר משינאנאק כירורגי
8-0 תפר משינאנאק כירורגי
מלקחיים של אדסוןנאנאק כירורגי
מכשיר הרדמהאורכיד סיינטיפיק
תא אינדוקציה להרדמהאורכיד סיינטיפיק
מספריים מעוקליםנאנאק כירורגי
צינור אינטובציה אנדוטרכיאליקנט סיינטיפיק, ארה"ב
קרם להסרת שיערנאנאק כירורגי
כרית חימוםKent scientific, ארה"ב
מלקחיים מחובריםנאנאק כירורגי
קטמיןדוגמת מתנה מ- KVAS, אמריצר
מחזיק מחט מיקרונאנאק כירורגי
כפפות ניטריל נאנאק כירורגי
שולחן ניתוחים
אוטוסקופנאנאק כירורגי
מלקחיים של אפונהנאנאק כירורגי
מפסק צלעותנאנאק כירורגי
פינצטה ישרהנאנאק כירורגי
ציפורן מיצרנאנאק כירורגי
כובע שיער כירורגינאנאק כירורגי
מסכה כירורגיתנאנאק כירורגי
סטריאומיקרוסקופ כירורגיאולימפוס מגנוס24ב1187מיקרוסקופ MSZ-TR זום סטריאו עם מעמד זרוע, יחס זום: 1:7 זום אובייקטיבי: 0.65 - 4.5x עינית 10x/22 מ"מ הגדלה: 6.5 - 45x עם תאורת טבעת LED של עינית 10x
מלקחיים ללא שינייםנאנאק כירורגי
טרמדולדוגמת מתנה מבית החולים אמנדיפ, ASR
פינצטהנאנאק כירורגי
מאווררRoVent (קנט סיינטיפיק,  ארה"ב)RV-04-220מאוורר אוטומטי עם בקרת נפח ולחץ והתחממות וניטור טמפרטורות
קסילזיןדוגמת מתנה מ- KVAS, אמריצר

מקורות

  1. World Heart Report. , World Heart Federation. https://world-heart-federation.org/wp-content/uploads/World-Heart-Report-2023.pdf (2023).
  2. Lindstrom, M., et al. Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risks Collaboration, 1990-2021. J Am Colleg Cardiol. 80 (25), 2372-2425 (2022).
  3. Byrne, R. A., et al. ESC guidelines for the management of acute coronary syndromes. Eur Heart J. 44 (38), 3720-3826 (2023).
  4. Widimsky, P., et al. Long distance transport for primary angioplasty vs immediate thrombolysis in acute myocardial infarction. Final results of the randomized national multi-center trial-PRAGUE-2. Eur Heart J. 24 (1), 94-104 (2003).
  5. Roth, G. A., et al. Global, regional, and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories, 1980-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017. Lancet. 392, 1736-1788 (2018).
  6. Frangogiannis, N. G. The mechanistic basis of infarct healing. Antioxid Redox Signal. 8, 1907-1939 (2006).
  7. Gill, J. K., Rehsia, S. K., Verma, E., Sareen, N., Dhingra, S. Stem cell therapy for cardiac regeneration: past, present, and future. Can J Physiol Pharmacol. 102, 161-179 (2024).
  8. Robich, M. P., et al. Myocardial therapeutic angiogenesis: a review of the state of development and future obstacles. Expert Rev Cardiovasc Ther. 9 (11), 1469-1479 (2011).
  9. Ahn, D., et al. Induction of myocardial infarcts of a predictable size and location by branch pattern probability-assisted coronary ligation in C57BL/6 mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 286, H1201-H1207 (2004).
  10. Domino, E. F. Taming the ketamine tiger. 1965. Anesthesiology. 113, 678-684 (2010).
  11. Van Pelt, L. F. Ketamine and Xylazine for surgical anesthesia in rats. J Am Vet Med Assoc. 171, 842-844 (1977).
  12. Li, C., et al. Silver nanoparticles/chitosan oligosaccharide/ poly(vinyl alcohol) nanofiber promotes wound healing by activating TGFβ1/Smad signaling pathway. Silver nanoparticles/chitosan oligosaccharide/ poly(vinyl alcohol) nanofiber promotes wound healing by activating TGFβ1/Smad signaling pathway. Int J Nanomedicne. 11, 373-387 (2016).
  13. Thygesen, K., et al. Fourth universal definition of myocardial infarction. Eur Heart J. 40, 237-269 (2018).
  14. Radha, R., Shahzadi, S. K., Al-Sayah, M. H. Fluorescent Immunoassays for Detection and Quantification of Cardiac Troponin I: A Short Review. Molecules. 26, 4812(2021).
  15. Srikanth, G. V. N., Parkash, P., Tripathy, N. K., Dixit, M., Nityanand, S. Establishment of a rat model of myocardial infarction with a high survival rate: A suitable model for evaluation of efficacy of stem cell therapy. J Stem Cells Regen Med. 5 (1), 30-36 (2004).
  16. Lugrin, J., Parapanov, R., Kueger, T., Liaudet, L. Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery. J Vis Exp. (150), e59591(2019).
  17. Kast, S., et al. Simplification of rat intubation on inclined metal plate. Adv Physiol Educ. 28, 29-32 (2004).
  18. Maruyama, K., et al. Anterior descending coronary artery in mice to generate a model of myocardial infarction. STAR Protoc. 2, 100775(2021).
  19. Pop, I. C., et al. Induction of a chronic myocardial infarction in the laboratory animal - experimental model. Clujul Medical. 86 (4), 334-339 (2013).
  20. Durant, E., Singh, A. Acute first diagonal artery occlusion: a characteristic pattern of ST elevation in noncontiguous leads. Am J Emerg Med. 33 (9), 1326.e3-1326.e5 (2015).
  21. McLaren, J., et al. From ST-Segment Elevation MI to Occlusion MI: The New Paradigm Shift in Acute Myocardial Infarction. JACC Adv. 3 (11), 101314(2024).
  22. Kasturi, S., Bandimida, S., Gajiwal, N., Thakkar, A. A Challenging Case of Bifurcation Lesion in Left Anterior Descending Artery: Managed Successfully with Everolimus-Eluting Bioresorbable Vascular Scaffold and Kissing Balloon Technique under Optical Coherence Tomography Guidance. Heart India. 3 (3), 79-81 (2015).
  23. Meyers, H. P., et al. Comparison of the ST-elevation myocardial infarction (STEMI) vs. NSTEMI and occlusion MI (OMI) vs. NOMI paradigms of acute MI. J Emerg Med. 60, 273-284 (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.