הפרוטוקול מתאר שיטה להזרקת תאי גידול דרך מסלול הניקוב המלעורי לתוך ציסטרנה מגנה הגורמת בעוצמה לגרורות לפטומנינגיאליות בעכברים, ומפחיתה את הטראומה ואת עומס הגידול החוץ-גולגולתי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מודל הזרקת Cisterna Magna זעיר פולשני למחקרי גרורות לפטומנינגיאליות בעכברים
במאמר זה
סיכום
תקציר
גרורות לפטומנינגיאליות (LM), התפשטות תאים סרטניים לתוך לפטומנינגים מלאים בנוזל המוח השדרתי (CSF), היא סיבוך נדיר אך הרסני של גידולים מוצקים מתקדמים. לחולים עם LM יש לעתים קרובות פרוגנוזה גרועה, כאשר ההישרדות נמדדת בשבועות עד חודשים. פיתוח מודלים in vivo המשכפלים במדויק את המורכבות של LM חיוני להבנת המנגנונים התאיים והפתולוגיים שלו ולהערכת טיפולים פוטנציאליים. מודלים של LM עכברים נוצרים בדרך כלל באמצעות הזרקת תאי גידול תוך-לבביים, עורק הצוואר או ציסטרנה מגנה. עם זאת, זריקות תוך לב או קרוטיד גורמות לרוב לעומס משמעותי על גידולים חוץ-גולגולתיים ומוחיים, מה שמסבך את ההדמיה הביולוגית ומוביל לתמותה שאינה קשורה ל-LM. בינתיים, הזרקת סיטרנה מגנה קונבנציונלית דורשת הליכים פולשניים, כגון חתך בעור ודיסקציה של שרירים, מה שהופך אותה לטראומטית ועתירת משאבים. כאן אנו מתארים הליך זעיר פולשני להזרקת תאי גידול לחלל הלפטומנינגיאלי דרך בור המים ללא צורך בחתך בעור. גישה זו מפחיתה היווצרות גידול חוץ-גולגולתי, ממזערת טראומה כירורגית ומקצרת את הזמן והטיפול לאחר הניתוח הנדרשים בהשוואה לשיטות כירורגיות אחרות. חשוב לציין, הוא גורם באופן עקבי ל-LM עם חדירת פרנכימה מוחית מינימלית, כפי שאושר על ידי מיקרוסקופיה דו-פוטונית וניתוח היסטולוגי. גישה יעילה זו מציעה מודל יעיל ואמין לחקר LM במחקר פרה-קליני.
מבוא
המחלה הגרורתית נותרה האתגר הגדול ביותר עבור חולים עם סרטן מתקדם. גרורות לפטומנינגיאליות (LM) מתייחסות להתפשטות של תאים סרטניים ל-pia mater, ל-arachnoid mater ולחלל התת-עכבישי. LM מגידולים מוצקים הופך נפוץ יותר ויותר בסרטן ריאות (9%-25%), סרטן השד (5%-20%) ומלנומה (6%-18%)1,2, בעיקר בשל הישרדות ארוכה יותר וטכניקות אבחון משופרות. תאי סרטן יכולים לפלוש למרחב הלפטומנינגיאלי במספר דרכים, כולל 1) פלישה ישירה דרך מבנים היקפיים כגון דורה, עצם ועצבים; 2) התפשטות המטוגנית דרך מערכת הוורידים; ו-3) כניסה דרך מחזור הדם העורקי, שבו תאים סרטניים מחליקים דרך כלי דם מנופחים לתוך מקלעת הכורואיד ולאחר מכן לחדרים המלאים בנוזל המוחהשדרתי 3,4,5. תאי גידול הנכנסים לחלל הלפטומנינגיאלי נתקלים באתגרים מרובים, כולל מחסור בגורמי גדילה, מתווכים מטבוליים מוגבלים ומצבים היפוקסיים6. עם זאת, בשל היעדר כלים וטכניקות מתאימות, כיצד תאי הגידול מנווטים במסלולים אלה ומתגברים על תנאים לא מסבירי פנים כדי ליישב את המרחב הפטומנינגיאלי אינו מובן היטב. למרות ההתקדמות בטיפולים רב-מודאליים, כולל רדיותרפיה, טיפול מערכתי וטיפול בהזרקה תוך-תקלית, הפרוגנוזה עבור חולי LM נותרה גרועה, כאשר ההישרדות נעה בדרך כלל בין 2 ל-4 חודשים 3,7,8,9. לפיכך, יש צורך דחוף בהבנה עמוקה יותר של הביולוגיה של גרורות לפטומנינגיאליות כדי לשפר את הטיפולים הקיימים ולפתח טיפולים חדשים וממוקדים. השגת מטרה זו דורשת פיתוח של מודלים in vivo המסכמים את התכונות המורכבות של LM.
בניגוד לגרורות באיברים כמו כבד, עצם ומוח, LM מתפתח בדרך כלל שנים לאחר אבחון הגידול הראשוני 10,11,12. באופן דומה, במודלים של עכברים עם גרורות ספונטניות, LM נדיר בשל השכיחות הנמוכה שלו והעובדה שעכברים בדרך כלל נכנעים לגרורות באתרים אחרים. ניתן ליצור מודלים ניסיוניים של LM עכברים בשיטות שונות, כולל עורק תוך-לבבי, עורק תוך-צוואר, או לחילופין, הזרקה ישירה לבור המים או לחדרי המוח. בעוד שהזרקה תוך-קרדיולוגית של תאים סרטניים נמצאת בשימוש נרחב9, היא גורמת לעתים קרובות לעומס גידול חוץ-גולגולתי משמעותי, הגורם לתמותה שאינה קשורה ל-LM. גישות חלופיות, כגון הזרקת תאי גידול דרך עורק הצוואר13,14, דורשות משאבים מיוחדים נרחבים וגורמות לחתכים כירורגיים גדולים, שהם טראומטיים. יתר על כן, שיטה זו מובילה בעיקר לגרורות בתוך רקמות המוח עצמן, ולא לפטומנינג, והיא גוזלת זמן ולא יעילה לביסוס מודלים של LM15. הזרקה לבור המגנה מאפשרת העברה ישירה של תאי הגידול לחלל הלפטומנינגיאל. מספר מחקרים השתמשו בגישה זו כדי לחקור מנגנוני LM ולהעריך טיפולים חדשים 6,16,17.
בכתב יד זה, אנו מציגים פרוטוקול נוח להזרקת מגנה טרנס-ציסטרנה הכולל ניקור מלעורי ישיר כדי ליצור במהירות וביציבות כמות גדולה יותר של עכברים עם LM. שיטה זו עוקפת את מחסום המוח-דם ולכן מאפשרת קסנוגרפט יעיל של תאי הגידול בחלל הלפטומנינג. זה גם מפחית משמעותית את הטראומה הכירורגית ואת זמן ההליך תוך גרימת LM באופן אמין בעכברים. אישרנו את התרחשות LM עם חדירה מינימלית לפרנכימה של המוח, כפי שאומת על ידי מיקרוסקופ דו-פוטוני וניתוח היסטולוגי. לכן, המודל המתקבל משכפל נאמנה את המיקרו-סביבה המורכבת של LM, ומספק כלי רב ערך לחקר מנגנונים תאיים ופתולוגיים הקשורים למחלה ולהערכת טיפולים פוטנציאליים.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
כל ההליכים בבעלי חיים בכתב יד זה נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לסקירת רווחת בעלי חיים ואתיקה במעבדה (ZJU20230155). עכברי C57BL/6J ו-NSG התקבלו ושוכנו בתנאים נטולי פתוגנים ספציפיים במרכז חיות המעבדה של ZJU. פרוטוקול זה משתמש בקו תאי סרטן הריאה של העכברים, קרצינומה של ריאות לואיס (LLC1), וקו תאי סרטן ריאה אנושיים, A549, שניהם מסומנים ב-GFP ובלוציפראז גחלילית. שני קווי התאים מסופקים באדיבות על ידי ד"ר שיאנג ה. פ. ז'אנג (מכללת ביילור לרפואה, ארה"ב)18. כאן, אנו משתמשים בתאי LLC1 כדוגמה. הליך הזרקת תאי A549 כמעט זהה, פרט לכך ש-6 x 104 תאי A549 הוזרקו לעכברי NSG.
1. הכנת תאים סרטניים להזרקה
- תרבית 1.0 x 106 תאי LLC1 ב-DMEM בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-0.1 מ"ג/מ"ל פניצילין-סטרפטומיצין ב-37 מעלות צלזיוס באינקובטור של 5% CO2 . כאשר התאים מגיעים למפגש של 70%-90%, נסה אותם למשך דקה אחת באמצעות 2 מ"ל של תמיסת טריפסין/EDTA של 0.25%. צנטריפוגה של התאים ב-300 x גרם למשך 3 דקות, שטפו אותם פי 2 עם PBS קר כקרח, והשעו אותם מחדש ב-1 מ"ל של מי מלח עם חוצץ פוספט (PBS).
- להעריך את ריכוז התאים ברי קיימא באמצעות תמיסת טריפאן בלו והמוציטומטר19. ודא שחיוניות התא גדולה מ-90%, כאשר רוב התאים הם יחידים. התאם את ריכוז התאים ל-2 x 106 תאים/מ"ל ב-PBS קר כקרח.
- יש לשים 50 מיקרוליטר של תרחיף התא לצינורות מיקרו-צנטריפוגה נפרדים כדי למנוע פיפטינג חוזר ונשנה.
- שמור את תרחיפי התאים על קרח עד שהם מוכנים להזרקה. הזרקו 10 מיקרוליטר של תאי LLC1 עם תווית GFP-Luciferase לכל עכבר בפרוטוקול זה, המתאימים ל-2 x 104 תאים לעכבר.
הערה: התאם את מספר התא לפי הצורך על סמך הקינטיקה הגרורתית של קווי התאים המוזרקים.
2. הכנת עכברים
הערה: במחקר זה נעשה שימוש בעכברי C57BL/6J זכרים, בגילאי 6-8 שבועות.
- חיטוי כל המכשירים הכירורגיים והכפפות ארוזים בווילונות כירורגיים. חטאו את הספסל והציוד הלא כירורגי עם 75% אתנול, ולאחר מכן כסו את אזור העבודה בווילונות עמידים למים.
- הכינו כלוב מגורים נקי לבעלי חיים וכרית חימום להתאוששות לאחר ההליך.
- להרדים את העכבר על ידי הזרקה תת עורית של 2% טריברומו-אתנול (200 מ"ג/ק"ג). בדוק את עומק ההרדמה באמצעות בדיקת צביטה לפני שתמשיך. יש למרוח משחת עיניים סטרילית כדי להגן על העיניים מפני נזק לקרנית לאחר הרדמת העכבר.
- לגלח את הפרווה מאזור העורף האחורי באמצעות קוצץ, ולאחר מכן למרוח קרמים להסרת הפרווה לחלוטין באותו אזור.
- מקם את העכבר על הבטן כשצווארו מונח מעל צינור צנטריפוגה של 15 מ"ל. אבטח את הראש והגב התחתון עם סרט וממשש את הרווח בין העורף לחוליה C1 עם האצבע המורה (איור 1).
- יש לחטא את אזור העורף האחורי בשלושה סבבי ניגוב עם 75% צמר גפן סטרילי ספוג אתנול, ולאחר מכן קרצוף כירורגי בטאדין. מכסים את החלקים הלא סטריליים של החיה בווילון סטרילי.
3. הזרקת Cisterna magna
הערה: טכניקות אספטיות נדרשות לשלבים הבאים, כולל שימוש בציוד מגן אישי וכפפות סטריליות.
- צנרת בעדינות את תרחיף התא ושואבת 10 מיקרוליטר להזרקה עם מזרק אינסולין 31G, 8 מ"מ.
- משש את האזור שבין העורף ל-C1 של העכבר באצבע המורה כדי לאתר את אתר הניקוב המדויק בשוליים החציוניים התחתונים של הגולגולת העורפית האחורית. סמן אתר זה במידת הצורך.
- הכנס את המחט בזווית של 45°-50° לתוך בור המים דרך אתר הניקוב המזוהה, והתקדם לעומק של 4 מ"מ. תחושת פריצת דרך מובהקת מצביעה על כך שהמחט נכנסה בהצלחה לבור המים.
- אם קשה לאתר את אתר הניקוב, בצע חתך קטן של 3-5 מ"מ בגובה האוזן כדי לחשוף את קו האמצע האחורי. אם נדרש חתך כירורגי, יש לתת מלוקסיקם (5 מ"ג/ק"ג/יום) ובופרנורפין (0.1 מ"ג/ק"ג) תת עורית שעה אחת לפני הניתוח.
- הזרקו לאט את מתלה התאים על ידי קידום בוכנת המזרק, תוך שמירה על יציבות המזרק כשהיד מונחת על השולחן.
- לאחר החיסון, החזק את המזרק במקומו למשך 10 שניות נוספות כדי לאפשר ללחץ התוך גולגולתי להתאזן לאחר מכן, משוך את המחט ולחץ על מקום הניקוב בעזרת צמר גפן סטרילי למשך 1-2 דקות.
4. טיפול לאחר הזרקה
- העבירו את בעלי החיים לכלובים נקיים על כרית חימום ועקבו אחריהם מקרוב עד שיתאוששו לחלוטין.
- במקרה שנעשה חתך, סגור את הפצע באמצעות דבק רקמות וקליפסים. יש לתת תרופות נוספות לשיכוך כאבים במשך 2-3 ימים לאחר הניתוח כדי לשלוט בכאב ולסייע בהחלמה.
- יש לעקוב מקרוב אחר העכברים במשך 7 ימים לאחר ההליך ולבדוק את הפעילות הגופנית של בעלי החיים ואת המראה סביב מקום ההזרקה מדי יום.
5. הערכת צמיחת גידול לפטומנינגיאלי
- הדמיית ביולומינסנציה
- להרדים את העכבר ולתת D-לוציפרין (150 מיקרוגרם/גרם) בווריד הרטרואורביטלי. הנח את העכברים בתא ההדמיה, ומקם אותם בקונוס אף ייעודי על סעפת ההרדמה. השתמש בבלבולי אור בין בעלי חיים כדי למזער את הפרעות האות.
- דמיינו את בעלי החיים מיד באמצעות מערכת IVIS עם זמן חשיפה בין 0.5 שניות ל-2 דקות6. אשר חיסון מוצלח של תאי גידול בחלל הלפטומנינגיאלי על ידי אות ביולומינסנט מפוזר על פני הראש וחוט השדרה (איור 2A).
- עקוב אחר התקדמות LM על ידי הדמיית ביולומינסנציה כל 4 ימים. התאמת מרווחי הדמיה על סמך קינטיקה של צמיחת הגידול.
- ניתוח היסטולוגי
- להרדים את העכברים כאשר הם היו פחות פעילים באופן משמעותי או איבדו 20% ממשקל גופם ולחתוך את העור והצלעות כדי לחשוף את חלל בית החזה שלהם. הכנס בזהירות צינורית קהה לחדר השמאלי וקדם את הצינורית לתוך אבי העורקים העולה. החדרו את החיה עם 20 מ"ל PBS דרך הצינורית לאט.
- השתמש במספריים כדי להסיר את הראש ולבצע חתך בקרקפת בקו האמצע כדי לחשוף את הגולגולת. כרתו את הרקמות הרכות שמסביב. חותכים לאורך רכס המסלול, ואז מכניסים מספריים לתוך הפורמן מגנום, ומתקדמים בזהירות לאורך המשטח הפנימי של הגולגולת בלחץ כלפי מעלה כדי למנוע נזק לרקמות.
- הסר את עצמות הגולגולת, ולאחר מכן חלץ בעדינות את המוח. קבע את המוח ב-4% פרפורמלדהיד ב-4 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות ולאחר מכן אזן אותו לתמיסת PBS סוכרוז של 15% למשך 24 שעות, ואחריה תמיסת PBS סוכרוז 30% למשך 24 שעות נוספות ב-4 מעלות צלזיוס.
- הניחו את הטישו בקריומולד מלא בתרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) ולאחר מכן אחסנו אותה על קרח יבש למשך 30 דקות20.
- חותכים את המוח המוטבע ב-OCT למקטעים בעובי 10 מיקרומטר באמצעות קריוסטט. אחסן את החלקים במקפיא של -80 מעלות צלזיוס עד ליישום נוסף.
- בצע צביעת המטוקסילין/אאוזין (H&E) על שקופיות המוח21. נוכחותם של תאי גידול בקצה המוח מצביעה על כך שגרורות מתרחשות אך ורק בחלל הלפטומנינגיאלי (איור 3 וטבלה 1).
- מיקרוסקופיה דו-פוטונית
- להרדים את העכברים עם LM. הסר את הקרקפות המכסות את משטח הגולגולת הגבי בעזרת מלקחיים ומספריים. השתמש בלהב אזמל כדי להסיר את הפריאוסטאום הדק מפני השטח של הגולגולת.
- דק את הגולגולת בעזרת מקדחה שוחקת עד שכלי הפיאל נראים דרך הגולגולת הדלילה. ייצב את אזור התצפית של ראש העכבר עם כיסוי ראש משולש המאובטח על ידי דבק רקמות22,23.
- יש לתת 0.025 מ"ל של 5% (w/v) TRITC-dextan בווריד אינפרא-אורביטלי כדי לסמן את כלי הדם22.
- בצע מיקרוסקופיה דו-פוטונית דרך חלונות ההדמיה ושחזר את המרחב הפטומנינגיאלי (איור 4). זיהוי העצם על ידי פלואורסצנציה הרמונית שנייה בפליטה של 450 ננומטר עם עירור של 900 ננומטר24. דמיין תאי גידול המסומנים ב-GFP וכלי דם מסומנים בדקסטרן על ידי איסוף אותות פלואורסצנטיים בפליטה של 507 ננומטר ו-572 ננומטר עם עירור של 900 ננומטר ו-1000 ננומטר, בהתאמה.
- מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו
- הסר את מוח העכבר והנח אותו מתחת לסטריאומיקרוסקופ. דמיינו תאים עם תווית GFP באמצעות ערכת מסננים ספציפית ל-GFP (איור 5).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
איור 1 ממחיש את מיקום העכבר להזרקה ואת אתר הניקוב ממבט רוחבי וקדמי. איור 2 מציג תמונות ביולומינסנציה מייצגות in vivo של בעלי חיים שנבדקו ליצירת LM באמצעות גישות שונות. תאי LLC1 המסומנים ב-GFP-luciferase הוזרקו לבעלי החיים בדרכים שונות, ואחריהם הדמיה ביולוגית. כפי שמוצג באיור 2A, 10 ימים לאחר הזרקת מגנה תוך-בורית, האות הביולוגי היה נוכח במוח העכבר והופץ לאורך חוט השדרה, מה שמצביע על השתלה מוצלחת של תאי גידו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
LM הוא מצב אגרסיבי וקטלני. ברגע שתאי הגידול שולחים גרורות לחלל המלא בנוזל השדרה, הם מתפשטים במהירות בכל מערכת העצבים המרכזית25. תאים אלה מתיישבים ופולשים לעצבי המוח, חוט השדרה, הגולגולת ועמוד השדרה, מה שמוביל בסופו של דבר להידרדרות נוירולוגית מהירה ובסופו של דבר למוות17. כדי להבין טוב יותר את המנגנונים הפתופיזיולוגיים הבסיסיים ולהעריך אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות, חיוני לפתח מודל יעיל in vivo המסכם את התהליך הגרורתי ואת המיקרו-סב...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים.
תודות
המחברים מודים לחברי מעבדת ג'אנג על הדיונים החשובים והסיוע שלהם לאורך המחקר הזה. WZ נתמך על ידי קרנות המחקר הבסיסיות של האוניברסיטאות המחוזיות של ג'ג'יאנג (2023QZJH60), תוכנית קרן המדע לחוקרים צעירים מצטיינים מהקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (588020-X42306/041), וקרן הסטארט-אפים מהמכון למדעי החיים של אוניברסיטת ג'ג'יאנג.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| צינורות אפנדורף 1.5 מ"ל | ביושארפ | BS-15-M-S | |
| צינור צנטריפוגה 15 מ"ל | מעבדה | CT-002-15A | |
| מזרק אינסולין 31G x 8 מ"מ (0.3 מ"ל) | הבטיח | / | |
| מקדחה שוחקת | גלובלביו | GEGZ-AM1 | |
| מחצלת חום לבעלי חיים | ווג'י | / | |
| קריומולד | סופין | SP-AB-7 x 7 x 5 | |
| קרמים להסרת שיער | נאיר | 1.00023E+11 | |
| די-לוציפרין | ביולוגיה זהב | מזל -1G | |
| DMEM | ג'יבקו | C11995500CP | |
| FBS | ג'יבקו | 10270-106 | |
| ספקטרום IVIS | קליפר | / | |
| קטמין | ג'יאנגסו Hengrui פרמצבטיקה ושות', בע"מ | H20193336 | |
| טמפרטורת חיתוך אופטימלית | סאקורה | 4583-1 | |
| פרפורמלדהיד | SCR | 80096618 | |
| PBS | סרוויסביו | G4202-500 מ"ל | |
| עט/סטרפטוקוס אמפוטריצין B | ג'יבקו | 15140122 | |
| מכונת גילוח | היפידוג | 2103CGMJ3373-GQ22N526 | |
| מיקרוסקופ פלואורסצנטי סטריאו | אולימפוס | / | |
| מלקחיים ישרים | ביוטיים | FS019 | צריך לעבור חיטוי |
| מספריים כירורגיים | ביוטיים | FS001 | צריך לעבור חיטוי |
| חתיכת ראש קיבוע עכבר משולש | התעלה מעל הוויווסקופ | TVS-FDM-027 | |
| TRITC-dextran, MW 70000 | MedChemExpress | HY-158082C | |
| פתרון טריפסין/EDTA | ג'יבקו | 25200056 | |
| מיקרוסקופ סריקת לייזר דו-פוטוני | אולימפוס | / | |
| דבקי רקמות Vetbond | 3 דקות | 1469 ס"ב | |
| קסילזין | סיגמא | X1126 |
מקורות
- Wilcox, J. A., et al. Leptomeningeal metastases from solid tumors: A Society for Neuro-Oncology and American Society of Clinical Oncology consensus review on clinical management and future directions. Neuro Oncol. 26 (10), 1781-1804 (2024).
- Wasserstrom, W. R., Glass, J. P., Posner, J. B. Diagnosis and treatment of leptomeningeal metastases from solid tumors: experience with 90 patients. Cancer. 49 (4), 759-772 (1982).
- Remsik, J., Boire, A. The path to leptomeningeal metastasis. Nat Rev Cancer. 24 (7), 448-460 (2024).
- Kokkoris, C. P. Leptomeningeal carcinomatosis. How does cancer reach the pia-arachnoid. Cancer. 51 (1), 154-160 (1983).
- Remsik, J., et al. Leptomeningeal metastatic cells adopt two phenotypic states. Cancer Rep. 5 (4), e1236(2022).
- Chi, Y., et al. Cancer cells deploy lipocalin-2 to collect limiting iron in leptomeningeal metastasis. Science. 369 (6501), 276-282 (2020).
- Yin, K., et al. A molecular graded prognostic assessment (molGPA) model specific for estimating survival in lung cancer patients with leptomeningeal metastases. Lung Cancer. 131, 134-138 (2019).
- Li, Y. S., et al. Leptomeningeal Metastases in Patients with NSCLC with EGFR Mutations. J Thorac Oncol. 11 (11), 1962-1969 (2016).
- Li, Y. S., et al. Unique genetic profiles from cerebrospinal fluid cell-free DNA in leptomeningeal metastases of EGFR-mutant non-small-cell lung cancer: a new medium of liquid biopsy. Ann Oncol. 29 (4), 945-952 (2018).
- Posner, J. B., Chernik, N. L. Intracranial metastases from systemic cancer. Adv Neurol. 19, 579-592 (1978).
- Kuiper, J. L., et al. Treatment and survival of patients with EGFR-mutated non-small cell lung cancer and leptomeningeal metastasis: A retrospective cohort analysis. Lung Cancer. 89 (3), 255-261 (2015).
- Tsukada, Y., Fouad, A., Pickren, J. W., Lane, W. W. Central nervous system metastasis from breast carcinoma. Autopsy study. Cancer. 52 (12), 2349-2354 (1983).
- Singh, M., Bakhshinyan, D., Venugopal, C., Singh, S. K. Preclinical Modeling and Therapeutic Avenues for Cancer Metastasis to the Central Nervous System. Front Oncol. 7, 220(2017).
- Shi, M. X., et al. PROTAC EZH2 degrader-1 overcomes the resistance of podophyllotoxin derivatives in refractory small cell lung cancer with leptomeningeal metastasis. BMC Cancer. 24 (1), 504(2024).
- Choi, S. A., et al. In vivo bioluminescence imaging for leptomeningeal dissemination of medulloblastoma in mouse models. BMC Cancer. 16 (1), 723(2016).
- Zhao, J., et al. Dura immunity configures leptomeningeal metastasis immunosuppression for cerebrospinal fluid barrier invasion. Nat Cancer. 5 (12), 1940-1961 (2024).
- Boire, A., et al. Complement Component 3 Adapts the Cerebrospinal Fluid for Leptomeningeal Metastasis. Cell. 168 (6), 1101-1113.e13 (2017).
- Zhang, W., et al. Metastasis Initiation Is Coupled with Bone Remodeling through Osteogenic Differentiation of NG2+ Cells. Cancer Discov. 13 (2), 474-495 (2023).
- Louis, K. S., Siegel, A. C. Cell viability analysis using trypan blue: manual and automated methods. Methods Mol Biol. 740, 7-12 (2011).
- Green, T. R. F., Ortiz, J. B., Harrison, J. L., Lifshitz, J., Rowe, R. K. Simultaneous Cryosectioning of Multiple Rodent Brains. J Vis Exp. (139), e58513(2018).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue Processing and Hematoxylin and Eosin Staining. Methods Mol Biol. 1180, 31-43 (2014).
- Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J Vis Exp. (61), e3742(2012).
- Shih, A. Y., et al. Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain. J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).
- Drew, P. J., et al. Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull. Nat Methods. 7 (12), 981-984 (2010).
- Wilcox, J. A., Li, M. J., Boire, A. A. Leptomeningeal Metastases: New Opportunities in the Modern Era. Neurotherapeutics. 19 (6), 1782-1798 (2022).
- Zhang, C., Lowery, F. J., Yu, D. Intracarotid Cancer Cell Injection to Produce Mouse Models of Brain Metastasis. J Vis Exp. (120), e55085(2017).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
