הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ריסון בעלי חיים לא מרתיע המאפשר רישום של רפלקס אופטוטורי בסנאים קרקעיים

2.1K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68335

⸱

25 ביולי 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Retinal Neurophysiology Section, National Eye Institute, National Institutes of Health, 2Department of Ophthalmology, Faculty of Medicine, University of Murcia and Biomedical Research Institute of Murcia (IMIB-Pascual Parrilla), 3Striatech GmbH

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול מתאר כיצד למדוד את התגובה האופטו-מוטורית בסנאים קרקעיים בעלי 13 שורות, מין דומיננטי בחרוט עם תכונות רשתית הדומות למקולה האנושית. עיצוב הפלטפורמה משפר את הטיפול ומפחית חרדה, משפר את יכולתו של בעל החיים להישאר על המשטח המוגבה, ומאפשר הערכה לא פולשנית של שינויים בתפקוד הראייה.

תקציר

הרפלקס האופטו-מוטורי (OMR) מספק הערכה התנהגותית של רגישות הניגודיות וחדות הראייה של בעל החיים. עכברים או חולדות מונחים בדרך כלל ישירות על משטח עגול קטן ביד; עם זאת, טיפול בבעלי חיים כאלה יכול לעורר מתח וחרדה, שמציגים גורמים מבלבלים בעת פירוש נתונים. הוכח ששיטות טיפול לא מרתיעות, כמו איסוף עכברים או חולדות במנהרה/צינור מוכר, יכולות להפחית חרדה. זה מעניין במיוחד במחקרים שבהם בעלי חיים מציגים מתח מוגבר, פעילות יתר או תפקוד מוטורי לקוי, וכתוצאה מכך חוסר יכולת להישאר על הרציף. צוות בראשות ד"ר קיוהארו ג'יי מיאגישימה ופרנסיסקו מ. נדאל-ניקולס עיצב מחדש את פלטפורמת ה-OMR הקונבנציונלית כדי לספק בלימה סגורה למחצה. זה מאפשר לראשונה לתעד את הרפלקס האופטו-מוטורי בסנאי הקרקע בעל 13 הקווים, שהוא אחד היונקים הבודדים שיכולים לראות צבע. יש לו פס חזותי עם צפיפות גבוהה של קונוסים בדומה למקולה האנושית המספקת מודל אטרקטיבי לחקר השפעות על מערכת הראייה של החרוט.

מבוא

סנאי קרקע מציעים מודל ייחודי ובעל ערך לחקר תפקוד הראייה בשל אורח חייהם היומי והרשתית הנשלטת על ידי חרוטים, המחקה מקרוב את הראייה האנושית1. זה, יחד עם היתרונות המעשיים של השימוש בהם (גודל קטן יותר, עלות גידול נמוכה יותר) בהשוואה לפרימטים, הופכים אותם למודל אידיאלי למחקר תרגומי על פגיעה ברשתית, מחלות או תופעות לוואי בעיניים של תרופות על שינויים בראיית צבעים 2,3,4,5,6. מחקר פרה-קליני על מחלות רשתית מסתמך על היכולת להעריך אם בעל חיים יכול לראות. הרפלקס האופטו-מוטורי (OMR) מציע שיטה רלוונטית קלינית להערכת תפקוד הראייה בבעלי חיים ללא צורך בהרדמה, המאפשרת מדידה מדויקת של חדות הראייה 7,8. במבחן זה, החיה עוקבת אחר דפוס פסים מסתובב עם מבטה. הפסים המסתובבים גורמים לתפיסת תנועה גלובלית בסביבה, ומפעילים תנועת ראש לא רצונית - ה-OMR. רפלקס זה משמש לייצוב חזותי של הסביבה וניתן להשתמש בו כדי לכמת עד כמה בעל חיים יכול לראות על ידי התאמה הדרגתית של התדירות המרחבית או הניגודיות של הגירוי. ככל שהגירוי הופך קשה יותר לתפיסה, ה-OMR בסופו של דבר אינו מופעל, מה שמאפשר קביעת חדות הראייה או סף הניגודיות. היתרון של ה-OMR הוא שהוא רפלקס. לפיכך, אין צורך בהכשרה וקיבוע ראש או ניתוח מיותרים. הרפלקס קיים אפילו בבעלי חיים צעירים מאוד (עם פקיחת העין)9,10, מה שמאפשר לחקור מחלות המופיעות מוקדם. בנוסף, מכיוון שהיא אינה פולשנית, ניתן לבצע מדידות אורך המאפשרות מעקב אחר התקדמות המחלה.

רוב בדיקות ה-OMR מבוצעות באמצעות מערכות מותאמות אישית או מסחריות המורכבות מפלטפורמה מוגבהת שבה ממוקם בעל החיים, מוקף בארבעה מסכים המציגים דפוסי פסים מסתובבים בשחור ולבן. הפסים נעים בכיוון אחד (עם כיוון השעון או נגד כיוון השעון), ויוצרים גירוי תנועה שמעורר תגובת מעקב חזותית מהחיה 10,11,12,13,14,15,16. מצלמה מותקנת מעל זירת הבדיקה כדי ללכוד את תנועות הראש המעוררות ויזואלית של החיה בתגובה לגירוי המסתובב. תנועות הראש הללו עוקבות ומנותחות כדי לקבוע את יכולתו של בעל החיים לתפוס ולהגיב לתנועה, ובכך להעריך את חדות הראייה שלו.

למרות שה-OMR משמש באופן שגרתי בעכברים וחולדות, מדידת התגובה האופטו-מוטורית בסנאים קרקעיים בעלי 13 שורות הייתה מאתגרת בשל ההיפראקטיביות שלהם וחוסר היכולת להישאר על פלטפורמות מוגבהות, אפילו עם התניה מוקדמת. כדי לעקוף זאת, פיתחנו פלטפורמה המספקת הכלה למחצה, המאפשרת את העברת בעלי החיים לזירה. מטרת שיטה זו היא לצמצם את זמן ההסתגלות של בעלי החיים לסביבת הניסוי, לאפשר תיעוד של בעלי חיים המפגינים התנהגות לא משתפת פעולה או מתקשים להישאר על הפלטפורמה ולשפר את הכללת בעלי החיים במחקרים. הגדרנו גם פרוטוקול למדידת חדות הראייה בסנאים באמצעות הגדרת ניגודיות מוגדרת בניסוי והתאמנו את הגדרות המצלמה לתוצאות הדמיה משופרות, מה שמאפשר ניתוח ומעקב אוטומטיים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

ההליכים הנוגעים לבעלי חיים נערכו בהתאם לחוקי ארצות הברית ולתקנות משרד החקלאות. כל הניסויים בבעלי חיים נערכו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי הוועדה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המכון הלאומי לעיניים במכונים הלאומיים לבריאות. זכר ונקבה של סנאי קרקע 13 קווים (גילאי 6-8 חודשים) ששימשו במחקר זה נרכשו ממושבת סנאי אושקוש באוניברסיטת ויסקונסין. עכברים (rd10: חודש אחד, CX3CR1GFP/+: 6.5 חודשים) ששימשו במחקר זה גודלו במתקן בעלי החיים שלנו. בעלי חיים והכלובים שלהם נבחרו באופן אקראי והוקצו לקבוצות ניסוי.

1. הכנת פלטפורמת האב-טיפוס ומנהרת הטיפול המותאמת

הערה: פלטפורמות שטוחות עגולות משמשות בדרך כלל במערכות שנועדו למדוד את התגובה האופטו-מוטורית13. עם זאת, מודלים היפראקטיביים של מכרסמים, כגון סנאים, מתקשים לעתים קרובות לשמור על יציבות בפלטפורמות אלה. עיצוב זה מספק חלל סגור למחצה, המסייע לבעלי החיים להתרגל במהירות ומפחית התנהגויות דמויות חרדה. שיפור זה משפר את יכולת המיקוד של בעל החיים וממזער מקרים של חוסר איזון או נפילות במהלך ההקלטות.

  1. בתוכנת ציור CAD (למשל, OpenSCAD או FreeCAD), תכנן את הפלטפורמה (אפור) ואת המארז (אדום) כפי שמוצג באיור 1.
    1. ודא שמידות המפתח של פלטפורמת הסנאי נשמרות כאורך ורוחב (L x W): 129 מ"מ x 81 מ"מ, העובי: 7 מ"מ וגובה הקיר המשתרע סביב ההיקף: 8 מ"מ. השתמש בקובץ המסמך הסטנדרטי של CAD שסופק בחינם עבור פלטפורמת האב-טיפוס (סנאי) ששימשה במחקר הוכחת היתכנות זה (קובץ קידוד משלים 1).
    2. ודא שמידות המפתח עבור המארז העליון הנשלף (מבט מלמעלה למטה) נשמרות כאורך (119.5 ס"מ) ורוחב (76.2 ס"מ), גובה הדפנות (50.8 מ"מ) ועובי החלק (3 מ"מ). השתמש בקובץ המסמך הסטנדרטי של CAD החינמי שסופק כדי לשכפל את המארז העליון הנשלף (סנאי) המשמש במחקר הוכחת היתכנות זה (קובץ קידוד משלים 2).
  2. התאם את קוטר החור העובר בבסיס הפלטפורמה לפי הצורך כדי להתאים את הכן המשמש להגבהת הרציף. הקוטר בתמונה הוא 40 מ"מ.
  3. הדפס את הפלטפורמה באמצעות נימה אטומה לבנה. זה מספק ניגודיות מקסימלית למצלמה, ומאפשר לתוכנת המעקב לזהות נכון את קווי המתאר של החיה על הרציף.
  4. הדפס את המארז העליון הנשלף עם נימה כהה אטומה (למשל, אדום). זה מספק תחושת מחסה למכרסמים, מה שמקל על הדרכתם לתוך המנהרה לפני שהם מורמים ומועברים לזירה.
  5. בקש ממכונאי לחתוך את הצינור המרובע השקוף שחולל באקריליק באמצעות מסור שולחן כך שהקצה הארוך יהיה באורך ~ 101.6 מ"מ. הקפד להשתמש במשקפי מגן ובמקל דחיפה כדי להנחות את האקריליק דרך הלהב תוך שמירה על הידיים מפני פציעה אפשרית.
  6. בעזרת מסור השולחן או כלי סיבובי כף יד המצויד בגלגל חיתוך שוחק, הסר את אחד הפנים המלבניים הארוכים. זה יוצר גג פתוח שדרכו למצלמה המותקנת למעלה תהיה תצוגה ללא הפרעה של מיקום החיה ותנועות הראש.
  7. נקה את כל הקצוות בעזרת קובץ יד או נייר זכוכית. הרכיבו את מנהרת הטיפול שהשתנתה באמצעות הצינור המרובע השקוף האקרילי שנחתך לאורך עם המארז העליון הנשלף המודפס בתלת מימד על ידי הנחת המארז על גבי הפנים הפתוחות.

2. הקמת זירת OMR

  1. חטא את הפלטפורמה ואת מכלול מארז הצינור המרובע עם חומר ניקוי/חיטוי לפני ובין בעלי חיים כדי להסיר רמזי ריח לא רצויים.
    הערה: בעוד שכפפות עור משמשות לטיפול בבעלי החיים ולמגע ישיר איתם, הן אינן נלבשות במהלך ההקלטות ואינן גורמות להשפעות מבלבלות מתמשכות או נראות לעין.
  2. קרעו פיסת נייר קטנה בגודל של כ-50 מ"מ על 50 מ"מ וקפלו אותה כך שתכסה את המשטח העליון של הכן. הנח את הפלטפורמה המודפסת בתלת מימד על הכן (גובה 14 אינץ') כשפיסת מגבת הנייר במקומה.
    הערה: הנייר מתאים את התאמת מכונת הדפוס של הפלטפורמה, מונע תנועה לא מכוונת, מספק רקע לבן אחיד להדמיה (אם פני השטח של הכן אינם לבנים), ומשמש כשכבת סופגת למקרה שהחיה משתינה במהלך ההקלטה, ומונעת מהפלטפורמה להיות חלקלקה.
  3. לובש כפפות עבודה מעור, הנח בעדינות את החיה לתוך מכלול מארז הצינור המרובע.
  4. העבירו את החיה לזירה על ידי הנחת מכלול המתחם על הפלטפורמה (איור 1J).
  5. נתק בזהירות את המארז העליון הנשלף והשאיר את החיה בצינור המרובע השקוף האקרילי על הרציף. סגור את הדלת למערכת OMR

3. הגדרת פרמטרי תוכנת OMR

הערה: מערכת ה-OMR המצולמת משתמשת במצלמה תעשייתית קומפקטית הכוללת חיישן CMOS רגיש ל-IR בגודל 1/3 אינץ' עם תריס גלובלי ב-25 פריימים לשנייה (fps). המצלמה מצוידת בעדשת זווית רחבה F1.6, המאפשרת מבט מלא מלמעלה למטה על הזירה. בדיקות ראשוניות של חדות הראייה שנערכו על סנאים באמצעות הגדרת הניגודיות הסטנדרטית של 100% גילו כי חדות הראייה של הסנאים חרגה ממגבלות הרזולוציה של החומרה. מסכי ה-23.8 אינץ' Full HD In-Plane Switching המשמשים בהתקנה הם בעלי רזולוציה של 1920 פיקסלים בלבד ברוחב, ולכן התוכנה מקודדת באופן קשיח בתדר מרחבי מקסימלי של 2 cyc/°. לשם השוואה, חדות הראייה של עכברי C57Bl/6 היא כ-0.3-0.5 cyc/°. ברוחב של 2 צילימטרים/מעלות, רוחב כל פס הוא 5.3 פיקסלים בממוצע. עם מהירות סיבוב של 12°/s וקצב מסגרות של 60 פריימים לשנייה, התבנית משתנה ב-0.2° למסגרת, שווה ערך ל-4.2 פיקסלים למסגרת, בהנחה של מהירות פיקסלים אחידה. בתדרים מרחביים הקרובים ל-2 cyc/°, דפוס הפס מתקרב לגבול הרזולוציה שבו עשוי להתרחש כינוי, מה שגורם לתבנית להיראות כאילו היא נעה אחורה. כדי למנוע חפץ זה, התוכנה מקודדת באופן קשיח כדי לכסות את התדר המרחבי ב-2 cyc/°.

לפיכך, עבור סנאים פיתחנו פרוטוקול שבו אנו מבצעים את מבחן החדות אך בניגודיות נמוכה בהרבה. בחרנו הגדרת ניגודיות (12.78%) שבה הסנאים לא הצליחו לראות את תבנית הפסים ב-2 מחזורים/מעלות.

  1. בלוח הווידאו החי, ודא שהחיה מסתגלת היטב לסביבה החדשה ומתחילה לזוז פחות ולהירגע.
    1. ברוחב של 2 צילימטרים/מעלות, רוחב כל פס הוא 5.3 פיקסלים בממוצע. הגדר את מהירות הסיבוב ל-12°/s וקצב פריימים של 60 פריימים לשנייה; דוגמת המילוי משתנה ב- 0.2° למסגרת, שווה ערך ל- 4.2 פיקסלים למסגרת, בהנחה של מהירות פיקסלים אחידה. הגדר את התדרים המרחביים קרוב ל-2 cyc/° כך שתבנית הפס מתקרבת לגבול הרזולוציה שבה עשוי להתרחש כינוי, מה שגורם לתבנית להיראות כאילו היא נעה אחורה. כדי למנוע חפץ זה, קודד קשיח את התוכנה כדי לכסות את התדר המרחבי ב-2 cyc/°.
      הערה: עבור סנאים, פיתחנו פרוטוקול שבו אנו מבצעים את מבחן החדות אך בניגודיות נמוכה בהרבה. בחרנו הגדרת ניגודיות (12.78%) שבה הסנאים לא הצליחו לראות את תבנית הפסים ב-2 מחזורים/מעלות.
  2. הורד קובץ קידוד משלים 3. פתח את תוכנת OptoDrum.
  3. תחת הכרטיסייה הגדרות, לחץ על הגדרות ייבוא. טען את קובץ הקידוד המשלים 3.
  4. תחת הכרטיסייה Settings, הגדר את היסט סף הרקע ל-17, את גודל החיה המינימלי [px] ל-30 ואת רוחב הזנב המרבי [% מהגודל] ל-1.
  5. תחת הגדרות המצלמה, השאר את היפוך וידאו ובקרת מצלמה ידנית לא מסומנת ואת נורית האינפרא-אדום כבויה.
  6. הרחב את המיקום והגודל של אזור העניין למעקב כדי להתאים את הסנאי אם הוא נוטה מחוץ לפתח הצינור. הערכים המוצעים הם מיקום: X: 359, Y: 237, גודל: X: 570, Y: 455. אל תרחיב את ההחזר על ההשקעה על פני מסך הגירויים, מכיוון שהוא עלול להוביל לתוצאות חיוביות כוזבות.
  7. בחר תצורת הפעלה מהפאנל העליון (איור 2A).
    1. עבור גרם המדרגות, הגדר את החדות המרחבית המשוערת באופן הבא. הגדר את החדות הצפויה ל-1.800 cyc/° (648 מחזורים); הגדר רזולוציית גירוי אופטימלית ל-0.5 cyc/° (180 מחזורים); הגדר את רזולוציית המדידה ל-0.100 cyc/° (36 מחזורים).
    2. עבור גרם המדרגות, הגדר את מספר האישורים הנדרשים כדלקמן. מוגדר לניסויים שנכשלו ל-3; מוגדר לגירסאות ניסיון מוצלחות ל-2.
      הערה: ניתן להגדיל את מספר הניסויים המוצלחים כדי להפחית עוד יותר את התרחשותם של אישורים חיוביים כוזבים. עם זאת, עם השימוש בפלטפורמה זו ובמנהרת טיפול שונה, שיעור השגיאות נשאר נמוך באופן מקובל. זה נובע בעיקר מהשקט היחסי של הסנאים וחוסר התדירות של תנועות ראש סיבוביות מלבד אלה הנגרמות על ידי גירויים מעוררים חזותית.
  8. תחת הכרטיסייה גרם מדרגות (איור 2B), הגדר את ההחלקה לרוחב ל-3 פיקסלים והשאיר את הסינוסואיד לא מסומן.
  9. עבור קריטריוני הבדיקה, נעל את הניגודיות על 12.78% ונעל את מהירות הסיבוב על 12 מעלות לשנייה.
    הערה: בהגדרת הניגודיות של 12.78%, החדות המרחבית של הסנאים מוגבלת לכ-1.5-1.8 cyc/°. תצורה זו אינה חורגת עוד מהגדרות החומרה המקסימליות, ומאפשרת להעריך את החדות המרחבית בתגובה למחלה או לפציעה.
  10. לאחר נעילת שניים משלושת הפרמטרים, האפשרות הגדר אוטומטית את הפרמטרים תהפוך לפעילה (כבר לא אפורה). סמן את התיבה לצד הגדר אוטומטית את הפרמטרים.
  11. הגדר את כיוון הסיבוב בהתאם לשאלה אם ליקוי הראייה צפוי להיות בעין אחת או בשתיהן. שימו לב שעבור כל עין, רק תנועה בכיוון הזמן לאף מעוררת מעקב. כתוצאה מכך, העריכו את הפגיעה בעין שמאל באמצעות גירוי עם כיוון השעון (CW), שכן גירוי נגד כיוון השעון (CCW) צפוי לעורר תגובות נורמליות. לניוון או לפציעה הצפויים בשתי העיניים, ניתן להשתמש בסיבוב הגירוי לשני הכיוונים.
  12. לחץ על התחל ניסוי כדי להתחיל בהצגת הגירוי. המצלמה למעלה תתחיל להקליט ולעקוב אחר תנועות הראש של החיות. בזמן הצגת הגירוי, לחץ על לשונית הניתוח לצפייה בזמן אמת בפרמטרים של מהירויות זוויתיות (סיבוב ראש), איכות מסלול וציון בסוף כל מצגת גירוי, התוכנה תקבע אוטומטית אם להתקדם (המסומן בסימן הירוק) ל-Cyc/° הבא, לחזור על הניסוי או להפחית את ה-Cyc/° (מסומן ב-X האדום).
  13. במהלך ההקלטה, אם תוכנת המעקב הופכת באופן שגוי את סמני האף (אדום) והזנב (ירוק), הקש Ctrl במקלדת כדי לאפשר עקיפה ידנית לתיקון כיוון ראש-זנב.
  14. אם החיה נופלת מהפלטפורמה, השהה את הניסוי על ידי לחיצה על השהה הערכה או לחיצה על מקש הרווח. הסר את מנהרת הטיפול מהפלטפורמה והשתמש בה עם המכסה לטיפול בטוח בבעל החיים כדי להחזיר אותו לפלטפורמה. לאחר שהחיה מוכנה, לחץ על הערכת קורות חיים כדי להמשיך בניסוי.
  15. לאחר השלמת כל הניסויים, לחץ על הכרטיסייה סיכום כדי להציג את הניסויים המוצלחים בירוק ואת הניסויים שלא הצליחו באדום. הניסוי המוקף בעיגול ירוק מציין את סף חדות הראייה של הסנאי באמצעות ניגודיות של 12.78%. החזירו את החיה בזהירות לכלוב הביתי שלה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

OMR נחשב למוצלח ברגע שהתוכנה מזהה את הסף החזותי שנקבע על ידי ביצועי החיה בניסויי אפליה בתדרים מרחביים. באופן ספציפי, הסף מוגדר כדלקמן: שני ניסויים מוצלחים בתדר מרחבי נתון (נמדד ב-cyc/°), ואחריהם שלושה ניסויים כושלים בתדר המרחבי הגבוה הבא. OMR בוצע על סנאי קרקע בעלי 13 קווים (בני 6-8 חודשים) באמצעות הפלטפורמה השטוחה העגולה הסטנדרטית (איור 3A) כדי להשוות עם הפלטפורמה הלא מרתיעה ומנהרת הטיפול (איור 3B). כאשר בעלי חיים הונחו על הפלטפורמה השטוחה העגולה הסטנדרטית, הם ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שלבים קריטיים

הקלה על כניסת מנהרה - נקודה חשובה אחת שיש לקחת בחשבון היא שהסנאים דורשים ממכלול המארז המודפס בתלת מימד לשמש כמכסה זמני למנהרה המלבנית האקרילית; בלעדיו, הם לא ייכנסו בקלות. במתקן שלנו, סנאי הקרקע בעלי 13 השורות שוכנים באופן קבוע עם גליל אדום בגודל חולדה (אורך: 15.24 ס"מ, קוטר: 7.62 ס"מ). מטרת המארז המודפס בתלת מימד היא להקנות היכרות עם מנהרות ההעשרה שלהם, ולהקל על הטיפול בהם. חשוב ללבוש כפפות עור כבדות בעת הטיפול בסנאים, שכן למרות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

קיוהארו מיאגישימה, פרנסיסקו נדאל-ניקולס, ג'ון בול וויי לי מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים. תומאס מונק הוא הבעלים ומנהל המחקר והפיתוח ב-Striatech GmbH. בוריס בנקנר הוא המייסד והמנכ"ל של Striatech GmbH.

תודות

מחקר זה נתמך [בחלקו] על ידי תוכנית המחקר התוך-כיתתית של ה-NIH, המכון הלאומי לעיניים. עבודה זו נתמכה גם על ידי משרד עוזר מזכיר ההגנה לענייני בריאות וסוכנות הבריאות הביטחונית J9, מנהלת המחקר והפיתוח, באמצעות תוכנית מחקר הראייה תחת פרס מס. (CDMRPL-18-0-VR180205). דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות הן של המחבר ואינן בהכרח מאושרות על ידי משרד ההגנה. המחברים מודים לד"ר וונשין מא על מתן עכברי RD10 ו-CX3CR1GFP/+ , לד"ר Haohua Qian (Visual Function Core, NEI, NIH) על דיון מעמיק וסיוע טכני עם OMR, לחנות המכונות NIMH/NINDS/NICHD על העזרה בייצור רכיבים, ולצ'ארלס קינג (ספריית NIH) על סיוע בהדפסת תלת מימד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת כלים סיבובית אלחוטית 12V Max ליתיום-יוןדרמל 8220F0138220JAלחתוך וללטש את הצינור המרובע האקרילי.
https://www.dremel.com/us/en/p/8220-1-28-f0138220aa
6-0 תפר מצופה VICRYL (פוליגלקטין 910)אתיקוןJ670Gלתפירת העפעף.
https://www.ethicon.com/na/epc/code/j670g?lang=en-default
צינור מרובע אקרילי חסר צבע שקוף (2 אינץ' x 12 אינץ')מרכז קאנאל פלסטיקRT-300161מנהרה מלבנית שקופה (לעכבר).
https://www.canalplastic.com/products/clear-colorless-acrylic-square-tube
צינור מרובע אקרילי חסר צבע שקוף (3 אינץ' x 12 אינץ')מרכז קאנאל פלסטיקRT-300168מנהרה מלבנית שקופה (לסנאי).
https://www.canalplastic.com/products/clear-colorless-acrylic-square-tube
DREMEL EZ SpeedClic: גלגלי חיתוך מפלסטיקדרמלSC476לחיתוך הצינור המרובע האקרילי
מדפסת תלת מימד F270סטרטסיסלהדפסת מודלים תלת מימדיים בדרגה הנדסית של הפלטפורמות.
https://support.stratasys.com/en/printers/fdm-legacy/uprint
פלוריסו (איזופלורן)VetOne 502017הרדמה כללית. נוזל לשאיפה.
http://vetone.net/Default/GetFile?id=7dda0c60-45fa-e711-bf2e-0024e8785118
FreeCAD 1.0 מודלים תלת מימדיים פרמטריים בקוד פתוח
תוכנת איגור פרו גרסה 6.3.7.2WaveMetrics, Incלשרטוט הגרפים. https://www.wavemetrics.com/
מסכות הרדמה בפרופיל נמוך לוופורייזרים מסורתיים
  עבור SomnoFlo. אקסטרה לארג' (בעלי חיים מעל 300 גרם) 		תאגיד קנט סיינטיפיקסומנו-0804למתן הרדמה כללית.
https://www.kentscientific.com/products/low-profile-anesthesia-masks-for-somnosuite/
MakerBot Print עבור Windows גרסה 4.10.1.2056MakerBot תעשיות, LLCתוכנה להכוונת החלקים להדפסה
מדפסת תלת מימד שולחנית MakerBot Replicator (דור 5)MakerBot תעשיות, LLCMP05825להדפסת תלת מימד גרסאות אב טיפוס של הפלטפורמות.
https://www.rnd-tech.com/product/makerbot-replicator-desktop-3d-printer-5th-gen/
מיקרוסופט אקסלמיקרוסופטתוכנת גיליון אלקטרוני לניתוח הנתונים. microsoft.com/en-us/microsoft-365/excel
כפפות עבודה מעור רב תכליתיותשטיינר תעשיותSPC02כדי לטפל בסנאים.
https://www.steinerindustries.com/leather-palm/product/steiner-spc02-leather-palm-work-glove
OptoDrum פלוססטריה. טקמכשיר מסחרי למדידת הרפלקס האופטו-מוטורי (חדות ראייה ורגישות לניגודיות) https://stria.tech/products/optodrum/ 
תוכנת OptoDrum גרסה 1.7.3סטריה. טקתוכנה לביצוע מדידות אוטומטיות של הרפלקס האופטומוטורי
פרוקסיגרד מוכן לשימוש (חומר ניקוי/חיטוי) פרוקסיגרדPRTU242101כדי לנקות/לחטא את הפלטפורמה ואת הצינור המרובע האקריליד בין הניסויים.
https://peroxigard.com/product-information/rtu/
מכונת הרדמה Pureline M6000
עם רכז O2		פן אספקה וטרינרית, בע"מSUPM6000להרדמת בעלי חיים.
https://www.pennvet.com/customer/portal/catalog/home?urile=wcm:path%3APennVet+Catalog/Product+Catalog/SUPM6000/Pureline+M6000+Anesthesia+Mach+w_O2+Conc
מדפסת תלת מימד uPrint SE Plusסטרטסיסלהדפסת מודלים תלת מימדיים בדרגה הנדסית של הפלטפורמות.
https://www.makerbot.com/makerbot-print/
חוט MakerBot PLA אטום לבן, סליל גדול
למשכפל + (0.9 ק"ג, 2 פאונד)		MakerBot תעשיות, LLCMP05780נימה להדפסת תלת מימד של הפלטפורמות.
https://store.ultimaker.com/3d-printer-materials/replicator-series-materials/makerbot-pla-material-large-spool-for-replicator
טיפול תרופתי
ניאומיצין ופולימיקסין B סולפטים
ובציטראצין משחת עיניים אבץ, USP		באוש & לומבRX-0069אנטיביוטיקה עיניים משולשת למניעת זיהומים בעיניים
פרופרקאין הידרוכלוריד 0.5%אקורן17478-263-12הרדמה מקומית להחדרת עיניים

מקורות

  1. Ferguson, R., Miyagishima, K. J., Nadal-Nicolas, F. M., Li, W. Characterizing the rod pathway in cone-dominated thirteen-lined ground squirrels. Front Ophthalmol. 3, 1271882(2023).
  2. Nadal-Nicolas, F. M., Miyagishima, K. J., Li, W. In search for the "idyllic" animal model to evaluate ocular pathologies and translate new therapies to improve human health. Neural Regen Res. 17 (12), 2697-2699 (2022).
  3. Xiao, X., et al. Establishing the ground squirrel as a superb model for retinal ganglion cell disorders and optic neuropathies. Lab Invest. 101 (9), 1289-1303 (2021).
  4. Yanoga, F., et al. Sildenafil citrate induced retinal toxicity-electroretinogram, optical coherence tomography, and adaptive optics findings. Retin Cases Brief Rep. 12 (Suppl 1), S33-S40 (2018).
  5. Drug-induced colour vision disorders. Prescrire Int. 21 (127), 126-128 (2012).
  6. Widengard, I., Mandahl, A., Tornquist, P., Wistrand, P. J. Colour vision and side-effects during treatment with methazolamide. Eye. 9 (Pt 1), 130-135 (1995).
  7. Benkner, B., Mutter, M., Ecke, G., Munch, T. A. Characterizing visual performance in mice: An objective and automated system based on the optokinetic reflex. Behav Neurosci. 127 (5), 788-796 (2013).
  8. Chang, K., Chen, J., Rajagopalan, A., Chen, D. F., Cho, K. S. Testing visual function by assessment of the optomotor reflex in glaucoma. Methods Mol Biol. 2858, 219-227 (2025).
  9. Mui, A. M., et al. Daily visual stimulation in the critical period enhances multiple aspects of vision through bdnf-mediated pathways in the mouse retina. PLoS One. 13 (2), e0192435(2018).
  10. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (12), 4611-4616 (2004).
  11. Shi, C., et al. Optimization of optomotor response-based visual function assessment in mice. Sci Rep. 8 (1), 9708(2018).
  12. Kretschmer, F., Tariq, M., Chatila, W., Wu, B., Badea, T. C. Comparison of optomotor and optokinetic reflexes in mice. J Neurophysiol. 118 (1), 300-316 (2017).
  13. Kretschmer, F., Kretschmer, V., Kunze, V. P., Kretzberg, J. Omr-arena: Automated measurement and stimulation system to determine mouse visual thresholds based on optomotor responses. PLoS One. 8 (11), e78058(2013).
  14. Kretschmer, F., Sajgo, S., Kretschmer, V., Badea, T. C. A system to measure the optokinetic and optomotor response in mice. J Neurosci Methods. 256, 91-105 (2015).
  15. Abdeljalil, J., et al. The optomotor response: A robust first-line visual screening method for mice. Vision Res. 45 (11), 1439-1446 (2005).
  16. Thaung, C., Arnold, K., Jackson, I. J., Coffey, P. J. Presence of visual head tracking differentiates normal sighted from retinal degenerate mice. Neurosci Lett. 325 (1), 21-24 (2002).
  17. Jecrois, E. S., et al. Treatment during a developmental window prevents nf1-associated optic pathway gliomas by targeting erk-dependent migrating glial progenitors. Dev Cell. 56 (20), 2871-2885.e6 (2021).
  18. Kandoi, S., Martinez, C., Merriman, D. K., Lamba, D. A. Characterization of retinal development in 13-lined ground squirrels. Transl Vis Sci Technol. 11 (11), 17(2022).
  19. Kryger, Z., Galli-Resta, L., Jacobs, G. H., Reese, B. E. The topography of rod and cone photoreceptors in the retina of the ground squirrel. Vis Neurosci. 15 (4), 685-691 (1998).
  20. Savignac, H. M., Dinan, T. G., Cryan, J. F. Resistance to early-life stress in mice: Effects of genetic background and stress duration. Front Behav Neurosci. 5, 13(2011).
  21. Hulliger, E. C., Hostettler, S. M., Kleinlogel, S. Empowering retinal gene therapy with a specific promoter for human rod and cone on-bipolar cells. Mol Ther Methods Clin Dev. 17, 505-519 (2020).
  22. Zhao, L., et al. Microglial phagocytosis of living photoreceptors contributes to inherited retinal degeneration. EMBO Mol Med. 7 (9), 1179-1197 (2015).
  23. Wang, T., et al. The pde6 mutation in the rd10 retinal degeneration mouse model causes protein mislocalization and instability and promotes cell death through increased ion influx. J Biol Chem. 293 (40), 15332-15346 (2018).
  24. Hwang, C. K., et al. Circadian rhythm of contrast sensitivity is regulated by a dopamine-neuronal pas-domain protein 2-adenylyl cyclase 1 signaling pathway in retinal ganglion cells. J Neurosci. 33 (38), 14989-14997 (2013).
  25. Merriman, D. K., Lahvis, G., Jooss, M., Gesicki, J. A., Schill, K. Current practices in a captive breeding colony of 13-lined ground squirrels (Ictidomys tridecemlineatus). Lab Anim. 41 (11), 315-325 (2012).
  26. Li, W. Ground squirrel - a cool model for a bright vision. Semin Cell Dev Biol. 106, 127-134 (2020).
  27. Gudapati, K., et al. Behavioral assessment of visual function via optomotor response and cognitive function via y-maze in diabetic rats. J Vis Exp. (164), e61806(2020).
  28. Stojcev, M., Radtke, N., D'amaro, D., Dyer, A. G., Neumeyer, C. General principles in motion vision: Color blindness of object motion depends on pattern velocity in honeybee and goldfish. Vis Neurosci. 28 (4), 361-370 (2011).
  29. Sajdak, B. S., et al. Noninvasive imaging of the tree shrew eye: Wavefront analysis and retinal imaging with correlative histology. Exp Eye Res. 185, 107683(2019).
  30. Okawa, H., et al. Optimal processing of photoreceptor signals is required to maximize behavioural sensitivity. J Physiol. 588 (Pt 11), 1947-1960 (2010).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ריסון בעלי חיים לא מרתיע המאפשר רישום של רפלקס אופטוטורי בסנאים קרקעיים
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.