הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

זיהוי מהיר של Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis ו-Ureaplasma urealyticum על ידי בדיקת זרימה רוחבית להגברת RNA

698 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68413

⸱

20 ביוני 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First People's Hospital of Foshan

במאמר זה

סיכום

כאן, אנו מציגים פרוטוקול המדגים בדיקת זרימה רוחבית של הגברת RNA ומעריכים את היעילות לזיהוי מהיר של Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis ו-Ureaplasmaurealyticum.

תקציר

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (CT) ו-Ureaplasma urealyticum (UU) הם פתוגנים נפוצים הקשורים למחלות המועברות במגע מיני (STDs). NG הוא הגורם הסיבתי לזיבה, מה שעלול לגרום להפרעות שונות במערכת אברי המין, כולל אפידידימיטיס, דלקת הערמונית, דלקת צוואר הרחם ואי פוריות. CT הוא מיקרואורגניזם האחראי לדלקת שופכה שאינה גונוקוקלית ולמחלות דלקתיות באגן. UU קשור לדלקת שופכה שאינה גונוקוקלית, דלקת צוואר הרחם, דלקת הערמונית ואי פוריות. הטכנולוגיות המולקולריות הנוכחיות לניתוח NG, CT ו-UU הן לרוב מורכבות וגוזלות זמן. בדיקות מולקולריות מהירות לפתוגנים אלה עשויות להקל על אבחון מוקדם של מחלות מין. בדיקת הזרימה הרוחבית של הגברת RNA (RGT) היא שיטה שאינה דורשת מיצוי חומצות גרעין. בתהליך זה, דגימות עוברות ליזה כדי לשחרר שברי חומצות גרעין, אשר לאחר מכן מוגברים באמצעות שעתוק ושעתוק הפוך. תוצר ה-RNA המוגבר מזוהה ונלכד על ידי בדיקות ספציפיות, ויוצר קומפלקס בדיקה לזיהוי RNA-זהב שניתן לשתק על קרום ניטרוצלולוז באמצעות זרימה רוחבית ליצירת רצועות גלויות. ההליך כולו אורך פחות משעה. מטרת מחקר זה הייתה להעריך את היעילות של RGT לזיהוי מהיר של NG, CT ו-UU. בסך הכל נכללו 1,416 דגימות. העקביות של NG, CT ו-UU כאשר נותחה על ידי RGT בהשוואה לשיטת בדיקת הקרינה של תגובת שרשרת פולימראז (PCR) הייתה 99.03% (307/310), 99.38% (159/160) ו-99.02% (303/306), בהתאמה. העקביות של NG, CT ו-UU כאשר נותחו על ידי RGT בהשוואה לריצוף גנים הייתה 99.17% (238/240), 98.95% (188/190) ו-98.30% (173/176), בהתאמה. בהשוואה לשיטת תרבית בידוד פתוגנים, שיעורי הזיהוי עבור בדיקות NG, CT ו-UU היו 100.00% (9/9, 17/17, 8/8). הרגישות והספציפיות הגבוהות, קלות השימוש ודרישות הזמן המופחתות הופכות את הבדיקה הזו לאידיאלית עבור זיהוי מהיר ומדויק של NG, CT ו-UU.

מבוא

זיהומים המועברים במגע מיני (STIs) מייצגים אתגרים גלובליים משמעותיים לבריאות הציבור, המובילים לתחלואה ותמותה חמורה באברי המין והרבייה1. Neisseria gonorrhoeae (NG) הוא הגורם לזיבה, עם כ-87 מיליון מקרים חדשים המדווחים מדי שנה ברחבי העולם2. פתוגן זה גורם בעיקר לדלקת על ידי פלישה לאפיתל העמודים של מערכת השתן3. כלמידיה טרכומטיס (CT), מיקרואורגניזם נוסף, אחראי לדלקת שופכה שאינה גונוקוקלית ולזיהומים באגן, ומהווה כ-130 מיליון מקרים חדשים מדי שנה4. Ureaplasma urealyticum (UU), התא הפשוט והקטן ביותר המשכפל את עצמו, פולש בקלות לרקמת צוואר הרחם הפגועה וקשור לדלקת שופכה שאינה גונוקוקלית, דלקת צוואר הרחם, דלקת הערמונית ואי פוריות5. כל הזיהומים הללו הם לרוב אסימפטומטיים אצל נשים וגברים כאחד, אך הם עלולים להוביל לסיבוכים חמורים אם לא מטפלים בהם במהירות. זיהומים אימהיים עלולים לגרום לתוצאות הריון שליליות חמורות, כולל לידה שקטה, הפלה, לידה מוקדמת וזיהום עוברי ישיר6. לכן, יש חשיבות עליונה לפיתוח שיטה מהירה, רגישה, ספציפית וידידותית למשתמש לזיהוי פתוגנים.

זיהוי מהיר ומדויק של פתוגנים הוא קריטי לאבחון וניהול יעיל של מחלות. לשיטות גידול מסורתיות, הדורשות בידוד, תרבית וזיהוי של פתוגנים, יש חסרונות משמעותיים, כולל היותן גוזלות זמן ובעלות רגישות נמוכה. למרות שריצוף גנים מתהדר בשיעור דיוק גבוה, הוא מחייב סביבה וציוד מורכבים, מה שהופך אותו ליקר וגם גוזל זמן. טכנולוגיות מולקולריות קונבנציונליות לניתוח NG, CT ו-UU התקבלו באופן נרחב; עם זאת, שיטות אלו הן לרוב מסובכות וגוזלות זמן, ודורשות מכשור מתוחכם, טכנאים מיומנים וזמני עיבוד ארוכים. לכן, יש צורך דחוף בשיטת אבחון מולקולרית פשוטה ואמינה כדי להתמודד עם המגבלות של גישות קונבנציונליות. בדיקת הזרימה הרוחבית של הגברת RNA (RGT) מציעה אלטרנטיבה מהירה, רגישה וספציפית ללא צורך בהליכים מורכבים 7,8. בשיטה זו, דגימות עוברות ליזה ישירה כדי לשחרר שברי חומצות גרעין ללא מיצוי חומצות גרעין, ושברים אלה מוגברים באמצעות שעתוק ושעתוק הפוך. תוצר ה-RNA המוגבר מזוהה ונלכד על ידי בדיקות ספציפיות, ויוצר קומפלקס בדיקה לזיהוי RNA-זהב, שניתן לשתק על קרום ניטרוצלולוז באמצעות זרימה רוחבית ליצירת רצועות גלויות9. התהליך כולו אורך פחות משעה, מה שהופך אותו למתאים ביותר לבדיקות מעבדה חירום.

במחקר זה, גייסנו 1,416 דגימות כדי להעריך את השימוש ב-RGT לזיהוי NG, CT ו-UU. הדגימות נותחו באמצעות RGT, בדיקת פלואורסצנטיות PCR, ריצוף גנים ושיטות תרבית בידוד פתוגנים. התוצאות הצביעו על כך ששיטת RGT הייתה מדויקת ותואמת לשיטות אבחון קונבנציונליות. לסיכום, הרגישות והספציפיות הגבוהות, קלות השימוש ודרישות הזמן המופחתות הופכות את הבדיקה הזו לאידיאלית לזיהוי מהיר ומדויק של NG, CT ו-UU, מה שמרמז על יישומה המבטיח באבחון רפואי ראשוני של מחלות מין.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נערך בהתאם להנחיות האתיות והאישור שניתן על ידי מועצת הביקורת המוסדית של בית החולים העממי הראשון בפושאן, מחוז גואנגדונג, סין (מסמך סקירה אתית מס'. LR (2025) 136). בסך הכל נאספו 1,416 דגימות מטוש איברי המין (716 ממטופלות נשים, 700 ממטופלים גברים) מאנשים החשודים קלינית במחלות מין שלא עברו טיפול אנטיביוטי במהלך 14 הימים שקדמו לכך (טבלה משלימה 1). עבור כל משתתף, מטושים זוגיים התקבלו בו זמנית ונותחו במקביל: האחד בשיטת הבדיקה (RGT) והשני בשיטת הייחוס (בדיקת פלואורסצנטיות PCR, ריצוף גנים ותרבית בידוד פתוגנים, בהתאמה). ההסכמה הבין-מתודית כומתה באמצעות מקדם קאפה של כהן (κ), כאשר הפרשנות מונחית על ידי הקריטריונים של לנדיס וקוך.

הערה: פרוטוקול הבדיקה עבור CT ו-UU עוקב אחר שלבים פרוצדורליים זהים לאלה המתוארים עבור NG, עם שינויים מוגבלים לריאגנטים ספציפיים לפתוגן. ניסוחים של ריאגנטים מפורטים מסופקים בשלב 2.1 (טבלה משלימה 2, טבלה משלימה 3 וטבלה משלימה 4).

1. איסוף דוגמאות

  1. סוג דגימה ישים: אסוף ספוגיות איברי מין (ספוגית צוואר הרחם הנשית, ספוגית השופכה הגברית).
  2. אסיפת דגימות
    1. הכנס את ספוגית איברי המין לפתח השופכה הגברי למשך 2-3 ס"מ או לפתח צוואר הרחם הנשי למשך כ-1-2 ס"מ.
    2. סובב פעם אחת והחזק למשך 10 שניות.
    3. הסר את הספוגית והכנס אותה לצינור האיסוף המכיל 1 מ"ל של מי מלח רגילים.
    4. נתק והשליך את זנב הספוגית, ולאחר מכן הדק את מכסה הצינור.
    5. רשום את זמן האיסוף ובצע את הבדיקה במהירות.
  3. אחסון והובלת דגימות
    1. הובלת דגימות בטמפרטורת החדר (RT) תוך 4 שעות או בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס עם שקית קרח תוך 24 שעות.
    2. אחסן את כדורי התאים הנותרים של דגימות מעובדות בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס למשך 3 חודשים או -80 מעלות צלזיוס עד 6 חודשים אם לא ניתן לבצע את הבדיקות בזמן.

2. הכנה

  1. ריאגנטים
    1. לריאגנטים של בדיקת חומצות גרעין NG, עיין בטבלה משלימה 2.
    2. לריאגנטים של בדיקת חומצת גרעין CT, עיין בטבלה משלימה 3.
    3. לריאגנטים של בדיקת חומצת גרעין UU, עיין בטבלה משלימה 4.
    4. אחסון: אחסן את כל הריאגנטים בטמפרטורות הנעות בין -40 מעלות צלזיוס ל-15 מעלות צלזיוס ואת כרטיסי הזיהוי בטמפרטורות שבין 2 מעלות צלזיוס ל-30 מעלות צלזיוס.
      הערה: יש לאזן את מאגר ההגברה ופתרון הזיהוי ל-RT לפני השימוש, בהתבסס על דרישות הזיהוי היומיות. לאחר שהגיעו ל-RT, יש לאחסן אותם ב-4 מעלות צלזיוס וניתן להשתמש בהם לגילוי הבא. הימנע מהקפאה והפשרה חוזרות ונשנות. יש לאחסן את אנזים ההגברה בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס למעט במהלך תהליך הניסוי. עלייה בטמפרטורת האחסון עלולה להוביל לירידה או לאובדן פעילות האנזים.
  2. דרישות סביבת הניסוי
    1. ערכו את הניסוי בארבעה אזורים מופרדים פיזית:
      1. אזור הכנת ריאגנטים: שמור על 22 ±-1 מעלות צלזיוס עם לחץ אוויר חיובי (קצב זרימת אוויר מסונן ביעילות גבוהה (HEPA) ≥ 0.3 מ' לשנייה). אחסן ריאגנטים שצוינו מראש בארונות מעוקרים ב-UV.
      2. אזור הכנת דגימה: בצע את כל הטיפול בדגימה בארון בטיחות ביולוגי Class II שטופל מראש ב-70% אתנול.
      3. אזור הגברה: הפעל מחזורים תרמיים על שולחנות נגד רעידות.
      4. אזור ניתוח מוצר: השתמש בספסל מעוקר UV (חשיפה של 30 דקות לפני/אחרי השימוש).
    2. לווסת את כוח האדם וזרימת האוויר בכל קטע כדי למנוע זיהום צולב באופן הבא:
      1. שמור על זרימת אוויר חד כיוונית מהכנת ריאגנטים לאזורי ניתוח מוצרים.
      2. ודא לחץ שלילי באזור הכנת הדגימה (-5 Pa ביחס לאזורים סמוכים).
      3. להגביל את תנועת העובדים; לטהר כפפות עם 75% אתנול לפני מעברי אזור.
      4. התקן דלתות נעילת אוויר עם מערכות נעילה (עיכוב מינימלי של 30 שניות בין הפתחים).
    3. השתמש בחומרים מתכלים ספציפיים לאזור (למשל, צינורות צנטריפוגה, קצות פיפטה וכו') והשליך חומרים מתכלים לאחר שימוש חד פעמי.
    4. שמירה על ניקיון ובקרת איכות:
      1. נקו ספסלים מדי יום עם 10% נתרן היפוכלוריט ואחריו 75% אתנול או מים מזוקקים.
      2. אמת סטריליות מתכלה באמצעות בדיקת אנדוטוקסין (בדיקת לימולוס אמבוציט ליזאט, <0.25 EU/mL).
      3. עקוב אחר איכות האוויר מדי שבוע באמצעות פלטות שיקוע (אגר סויה טריפטי [TSA] אגר, ≤5 יחידות יוצרות מושבה (CFU)/צלחת לאחר חשיפה של 4 שעות).
  3. כישורי כוח אדם
    1. בעל תעודות או כישורים הקשורים לטכנולוגיית PCR כדי להבטיח את הדיוק והאמינות של ניסוי זה.

3. לייז את התאים כדי לחלץ RNA

  1. עיבוד דגימות
    1. מערבולת את צינור איסוף הדגימה במהירות של 2,600 פעמים לדקה למשך 10 שניות כדי לעקור את התאים מראש הספוגית לתמיסה.
    2. העבירו 1 מ"ל מהתמיסה לצינור מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 מ"ל באמצעות פיפטה מכוילת המוגדרת ל-1000 מיקרוליטר.
    3. צנטריפוגה בטמפרטורה של 12,000 × גרם למשך 2 דקות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.
    4. שאפו 950 מיקרוליטר של הסופרנטנט מבלי להפריע לגלולה. השעו מחדש את הכדורים ב-25 מיקרוליטר של תמיסה שיורית על ידי פיפטה למעלה ולמטה 10 פעמים באמצעות פיפטה מכוילת של 200 מיקרוליטר המוגדרת ל-50 מיקרוליטר.
  2. ליזה של דגימות וחומרי בקרת איכות
    1. שיווי משקל מראש של מאגר ליזה של תאים ובקרה שלילית ב-25 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
    2. צנטריפוגה של חומרי בקרת האיכות ב-1000 × גרם למשך 10 שניות ב-25 מעלות צלזיוס כדי להבטיח שכל האבקות ישקעו בתחתית הצינור.
    3. הוסף 30 מיקרוליטר של מאגר ליזה לחומרי בקרת האיכות ו-20 מיקרוליטר לדגימות.
    4. יש לדגור למשך 10 דקות בחום של 25 מעלות צלזיוס.
      הערה: בעת שימוש במאגר הליזיס של התאים, חיוני לערבב אותו היטב. מערבבים על ידי פיפטינג 15 פעמים (קצה 200 מיקרוליטר) ומוסיפים גם את החלקיקים וגם את הנוזל למשקעים. טפל בבקרה חיובית בארון בטיחות ביולוגית Class II שטופל ב-UV ואחריו טיהור 10% נתרן היפוכלוריט.

4. הגברה איזותרמית של RNA

  1. שיווי משקל מקדים של מאגר ההגברה
    1. הפשירו את מאגר ההגברה ושיווי משקל ב-25 מעלות צלזיוס ±-1 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.
  2. הגדרת בקרה
    1. כלול בקרה חיובית ושלילית בכל ריצת ניסוי.
  3. תיוג צינורות
    1. סמן צינורות הגברה בהתאם למספר הדגימות.
  4. הרכבת תגובה
    1. פיפטה 17 מיקרוליטר של מאגר הגברה לכל צינור באמצעות פיפטה מכוילת של 20 מיקרוליטר הוסף 2 מיקרוליטר מהדגימה או ליזט בקרה ישירות לתוך טיפת המאגר.
      הערה: ודא שהליזאט נכנס למאגר מבלי לגעת בדופן הצינור (צנטריפוגה קצרה ב-500 × גרם למשך 5 שניות במידת הצורך). יש לסגור מיד את הצינורות כדי למנוע זיהום בתרסיס.
  5. הפעלה תרמית
    1. דגירה של צינורות במחזור תרמי שחומם מראש במסגרת התוכנית הבאה:
      שלב 1: 95 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות (דנטורציה)
      שלב 2: 42 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות (חישול פריימר).
  6. הגברה אנזימטית
    1. הוסף 1 מיקרוליטר של אנזים הגברה לכל צינור וערבב על ידי החלקת הצינור 5 פעמים ולאחר מכן צנטריפוגה קצרה (500 × גרם למשך 5 שניות). העבירו את הצינורות למחזור תרמי שני שחומם מראש ב-42 מעלות צלזיוס למשך 45 דקות באופן מיידי.
      הערה: השתמש בחממות נפרדות כדי למנוע תנודות טמפרטורה, האחת מוגדרת ל-95 מעלות צלזיוס והשנייה ל-42 מעלות צלזיוס. עבור ריצות מרובות דגימות, שמור על צינורות ההגברה הנותרים ב-42 מעלות צלזיוס תוך הוספת אנזים ההגברה לצינור ההגברה האחרון.

5. בדיקת זרימה רוחבית

  1. פתרון זיהוי לפני שיווי משקל
    1. העבירו את תמיסת הזיהוי לחממה בטמפרטורה של 42 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.
  2. הומוגניזציה
    1. מערבולת את תמיסת הזיהוי במהירות של 2,600 פעמים לדקה למשך 15 שניות עד שהצבע אחיד.
  3. שמירה על טמפרטורה
    1. שמור את תמיסת הזיהוי בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס ± 2 מעלות צלזיוס למשך ≤30 דקות לפני השימוש.
  4. התחלת תגובה
    1. הוסף 30 מיקרוליטר של תמיסת זיהוי לכל צינור הגברה באמצעות פיפטה מכוילת של 20-200 מיקרוליטר
      הערה: קצה הפיפטה חייב ליצור קשר עם דופן הצינור בזווית של 45° במהלך החלוקה כדי למנוע היווצרות בועות.
  5. הכלאה
    1. מערבבים את התמיסה על ידי פיפטינג למעלה ולמטה 5 פעמים ודוגרים באינקובטור שחומם מראש ל-53 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.
  6. הכנת מכשיר בדיקה
    1. הסר את כרטיסי הזיהוי משקיקי נייר הכסף.
      הערה: הימנע מלגעת באזור היישום לדוגמה.
  7. יישום לדוגמה
    1. העבירו את כל התערובת ליציאת הדגימה של כרטיס הזיהוי באמצעות פיפטה של 20-200 מיקרוליטר.
    2. הנח מיד את כרטיס הזיהוי באינקובטור של 42 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות.

6. ניתוח תוצאות

  1. סביבה מבוקרת לקריאה
    1. שמור על כרטיסי הזיהוי בחממה שחוממת מראש ב-53 מעלות צלזיוס במהלך פרשנות חזותית כדי לייצב את עוצמת האות.
  2. פרוטוקול פרשנות חזותית
    1. קרא את תוצאות הבדיקה ישירות על ידי בדיקה ויזואלית של הרצועות בכרטיסי הזיהוי תוך 10-20 דקות.
      הערה: התוצאה הופכת ללא חוקית לאחר 20 דקות.
  3. למטריצת הפרשנות לפירוש תוצאות RGT, עיין בטבלה משלימה 5.
    הערה: פרשנות חזותית של התוצאה מוצגת באיור 1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

עקביות שיטות בדיקת הקרינה RGT ו-PCR
בסך הכל נותחו 310 דגימות עבור גז טבעי, המורכבות מ-161 נקבות ו-149 גברים. שיעור צירוף המקרים החיובי היה 98.78% (95%CI: 93.39%-99.97%), בעוד ששיעור צירוף המקרים השלילי היה 99.12% (95% CI: 96.87%-99.89%). שיעור צירוף המקרים הכולל היה 99.03% (רווח בר-סמך 95%: 97.20%-99.80%). ערך העקביות של קאפה היה 0.975 (רווח בר-סמך 95%: 0.947-1.003, Z = 17.171, P < 0.05) (טבלה 1). היו שלוש דגימות עם תוצאות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

במחקר זה, נעשה שימוש ב-RGT לאיתור פתוגנים של מחלות מין, כולל NG, CT ו-UU. כאשר בוצעה תחת פרוטוקולים תפעוליים מחמירים, בדיקת ה-RGT הראתה התאמה חזקה לשיטות אבחון מבוססות כגון בדיקת פלואורסצנטיות PCR, ריצוף גנים וטכניקות תרבית בידוד פתוגנים. הרגישות והספציפיות של בדיקת RGT היו דומות או עלו על אלו של מתודולוגיות שדווחו בעבר, כפי שמעידים ניתוחים השוואתיים עם אמות מידה מבוססות10,11.

האמינות של מתודולוגיית RG...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

אנו מודים ל-Wuhan Zhongzhi Bio-Technologies Inc. על הריאגנטים וההדרכה הטכנית שהוצעו למחקר זה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
10% (w/v)  נתרן היפוכלוריטהכנה במעבדה.הכנה במעבדה.תמיסת אקונומיקה מדוללת לטיהור והשבתה של פתוגנים על ציוד או משטחים.
75% (v/v) אתנולAnte Food Co., Ltd (אנהוי, סין)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlתמיסת אתנול מימית המשמשת לחיטוי פני השטח
פיפטה בנפח מתכוונן (0.5– 10 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101004מיקרופיפטה חד-ערוצית לטיפול מדויק בנפחים בקנה מידה של מיקרוליטר.
פיפטה מתכווננת בנפח (100– 1000 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101014פיפטה חד-ערוצית מכוילת לטיפול בנוזלים בנפח גדול.
פיפטה מתכווננת בעוצמת קול (10– 100 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101008פיפטה חד-ערוצית המותאמת לנפחי ביניים, הנפוצה בפרוטוקולים של ביולוגיה מולקולרית.
פיפטה מתכווננת בנפח (20– 200 μ L)DLAB Scientific Co., Ltd.7010101009פיפטה חד-ערוצית להעברות בנפח בינוני, מתאימה להצעה מדויקת של ריאגנטים.
ארון בטיחות ביולוגית (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (הונג קונג, סין)HF Safe-1200A Class II ארון בטיחות ביולוגית המבטיח כוח אדם, דגימה והגנה על הסביבה במהלך טיפול במיקרואורגניזמים פתוגניים או תרביות תאים.
צינורות צנטריפוגהHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (גואנגג'ואו, סין)גואנגג'ואו Yuexiu הגשת מכשירים רפואיים מס' 20210414למיצוי חומצות גרעין, כדורי תאים והליכי מעבדה אחרים.
בדיקת חומצת גרעין Chamydia trachomatis (CT) (בדיקת הגברת RNA-זרימה לרוחב)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ווהאן, סין)A.10.309-STD-RG-002לזיהוי איכותי של RNA חומצת גרעין Chamydia trachomatis בדגימות ספוגית באברי המין ודרכי השתן.
CO2 IncubatorThermo Fisher Scientific(Asheville, USA) LLCSN:300504406משמש לתרבית תאים, מספק סביבה יציבה עם טמפרטורה מבוקרת (37° C), לחות וריכוז CO2 (בדרך כלל 5%) כדי להבטיח צמיחה אופטימלית של תאים.
צלחת תרבות Corning Incorporated (קורנינג, ארה"ב)50 מ"מ ואקוטי; 9 מ"מלתרבית תאים דביקים והרחבתם.
ערכת זיהוי עבור חומצת גרעין ל-Chamydia trachomatis (CT) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (שנחאי, סין) Co., Ltdסין תעודת רישום מכשור רפואי מס' 20143402234לזיהוי איכותי של חומצת גרעין של Chamydia trachomatis בדגימות ספוגית באברי המין ובדרכי השתן.
ערכת זיהוי של חומצת גרעין ל-Neisseria Gonorrhoeae (NG) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (Shanghai, China) Co., Ltdסין תעודת רישום מכשור רפואי מס' 20173401080לזיהוי איכותי של חומצת גרעין של Neisseria gonorrhoeae בדגימות ספוגית באברי המין ובדרכי השתן.
ערכת זיהוי עבור חומצת גרעין ל-Ureaplasma urealyticum (UU) (PCR-Fluorescence Probing)Fosun Diagnostics (שנחאי, סין) Co., Ltdסין תעודת רישום מכשור רפואי מס' 20173400536לזיהוי איכותי של חומצת גרעין של Ureaplasma Urealyticum בדגימות ספוגית באברי המין ודרכי השתן.
DMEM בינוניתרמו פישר סיינטיפיק בע"מ (וולת'ם, ארה"ב)11965092לתרבית כלמידיה טרכומטיס.
קצות פיפטות מסנן (10 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (גואנגג'ואו, סין)TF-10-BXLלפיפטינג מדויק בניסויים.
קצות פיפטות מסנן (200 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (גואנגג'ואו, סין)TF-200-BXLלפיפטינג מדויק בניסויים.
ספוגית איברי המיןHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (גואנגג'ואו, סין)Hz112ספוגיות סטריליות עם קצה כותנה לאיסוף דגימות קליניות ממשטחי רירית איברי המין.
סרום בקר עוברי של Gibco (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (וולת'אם, ארה"ב)10270106לתרבית כלמידיה טרכומטיס.
שקופיות זכוכיתHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (גואנגג'ואו, סין)גואנגג'ואו Yuexiu הגשת מכשירים רפואיים מס' 20210414שקופיות זכוכית סטנדרטיות עם טיפול נגד דהייה להכנת מריחות תאים או קטעי רקמות, תואמות לפרוטוקולי צביעת גרם.
ערכת סינתזה של Goldenstar RT6 cDNA Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (בייג'ינג, סין)TSK302Sלסינתזה של הגדיל הראשון של cDNA בשלב הראשון של RT-PCR הדו-שלבי. הוא מכיל את כל הריאגנטים הנדרשים לסינתזה של cDNA מ- RNA.
ערכת צביעה גרםBaso Diagnostics, Inc. (ג'וחאי, סין)BA4012ערכת צביעה המכילה קריסטל סגול, יוד, מסיר צבע וספרנין להבדיל בין Neisseria Gonorrhoeae. 
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (ניו יורק, ארה"ב)גרסה 25.0לניתוח נתונים.
מעקר אינפרא אדוםHuaxixinrui (צ'ינגדאו) מכשירים אנליטיים ושות', בע"מMJ-200Wלטיהור מיידי של לולאות חיסון או מלקחיים, מזעור זיהום צולב בארונות בטיחות ביולוגית.
לולאת חיסוןBKMAM Biotechnology Co., Ltd. (הונאן, סין)110306002להעברת דגימות מיקרוביאליות, פסים או חיסון.
מיקרוסקופ הפוך (IX-51)תאגיד אולימפוס (טוקיו, יפן)קוד נכס של מעבדה:  71807101להתבוננות בתאים דבקים או בדינמיקה של תאים חיים בצלחות תרבית.
מערכת ספקטרומטריית מסה מיקרוביאלית אוטומטית MALDI BiotyperBruker Daltonics GmbH & Co. KG (ברמן, גרמניה)רישום יבוא מכשור רפואי לאומי מס' 20182222017מערכת מבוססת ספקטרומטריית מסה של MALDI-TOF לזיהוי מיקרוביאלי מהיר באמצעות פרופיל חלבונים, המאפשרת זיהוי מינים של חיידקים ופטריות במעבדות מיקרוביולוגיה קלינית.
קווי תאים של מקוינשמרו במעבדה.נשמר במעבדה.לתרבית כלמידיה טרכומטיס.
חממה תרמוסטטית Microplate Leopard70-4 (קיבולת 4 צלחות)Leaptec Scientific Instruments (בייג'ינג) ושות', בע"מLeopard70-4אינקובטור מיקרו-פלטות המכיל עד 4 מיקרו-פלטות סטנדרטיות, עם טווח טמפרטורות מסביבה עד 70 מעלות; ג,  משמש לשלבי הדגירה.
מיקרוסקופ (OLYMPUS CX43)תאגיד אולימפוס (טוקיו, יפן)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/לתצפית על דגימה קלינית (למשל, מורפולוגיה של תאים, דגימות מוכתמות).
מיני מתכת אמבטיה MiniG-R100Leaptec Scientific Instruments (בייג'ינג) ושות', בע"מMiniG-R100לוויסות טמפרטורה מהיר במהלך הניסוי, כגון חימום, דגירה או סיום תגובות בדגימות בנפח קטן.
בדיקת חומצות גרעין Neisseria gonorrhoeae (NG) (בדיקת הגברת RNA-זרימה רוחבית)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ווהאן, סין)A.10.309-STD-RG-001לזיהוי איכותי של RNA של חומצת גרעין Neisseria gonorrhoeae בדגימות ספוגית באברי המין ודרכי השתן.
מגיב מיצוי חומצות גרעיןWuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ווהאן, סין)A.10.105-SC-001למיצוי, העשרה וטיהור של חומצות גרעין.
מדיום הובלת דגימותQIAGEN N.V. (ונלו, הולנד)5128-1220מדיום זה פותח במיוחד לאיסוף, שימור והובלה של דגימות קליניות, מה שמבטיח את הכדאיות של כלמידיה טרכומטיס  ו  Neisseria gonorrhoeae  לבדיקות אבחון עוקבות.
צנטריפוגה תרמוסטטיתבקמן קולטר, בע"מ (בריאה, ארה"ב)SN: MRZ21L037לכדורי תאים, חיידקים או חומצות גרעין.
TM בינונישנחאי Yihua מדע רפואי & טכנולוגיה ושות', בע"מ (שנגחאי, סין)שנחאי Pu מכשירים רפואיים הגשת מס' 20140081מדיום TM יכול לשמש לבידוד, טיפוח וזיהוי של Neisseria gonorrhoeae מדגימות קליניות כדי לסייע באבחון זיבה.
טריפסין-EDTA (0.25%)Thermo Fisher Scientific Inc. (וולת'אם, ארה"ב)25200072לדיסוציאציה עדינה של תאים דבקים במהלך תת-תרבות או הליכים ניסיוניים.
בדיקת חומצת גרעין של Ureaplasma urealyticum (UU) (בדיקת הגברת RNA-זרימה לרוחב)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (ווהאן, סין)A.10.309-STD-RG-003לזיהוי איכותי של RNA של חומצת גרעין Ureaplasma urealyticum בדגימות ספוגית באברי המין ודרכי השתן.
Ureaplasma urealyticum ו-Mycoplasma hominis ערכת תרבית, זיהוי ורגישות לתרופותHebei Zhongaisheng Biotechnology Co., Ltd. (הביי, סין)רישום מכשור רפואי מס' 20152400168לבידוד סלקטיבי, תרבית, זיהוי וקביעת רגישות לתרופות של Ureaplasma urealyticum ו-Mycoplasma hominis.
מערבל מערבולתXinkang Medical Instrument Co. Ltd (ג'יאנגסו, סין)XK80-Aמכשיר מעבדה להומוגניזציה של דגימות נוזליות על ידי תסיסה מהירה.

מקורות

  1. Hufstetler, K., Llata, E., Miele, K., Quilter, L. A. S. Clinical updates in sexually transmitted infections, 2024. J Womens Health (Larchmt). 33 (6), 827-837 (2024).
  2. Sunkavalli, A., McClure, R., Genco, C. Molecular regulatory mechanisms drive emergent pathogenetic properties of Neisseria gonorrhoeae. Microorganisms. 10 (5), 922(2022).
  3. Quillin, S. J., Seifert, H. S. Neisseria gonorrhoeae host adaptation and pathogenesis. Nat Rev Microbiol. 16 (4), 226-240 (2018).
  4. Rowley, J., et al. Chlamydia, gonorrhoea, trichomoniasis, and syphilis: global prevalence and incidence estimates, 2016. Bull World Health Organ. 97 (8), 548-562 (2016).
  5. Rittenschober-Boehm, J., et al. Intrauterine detection of Ureaplasma species after vaginal colonization in pregnancy and neonatal outcome. Neonatology. 121 (2), 187-194 (2024).
  6. Liu, T., et al. Analysis of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae infections among obstetrics and gynecological outpatients in southwest China: a retrospective study. BMC Infect Dis. 22 (1), 283(2022).
  7. Song, J., Zhang, L., Zeng, L., Xu, X. Visualized lateral flow assay for dual viral RNA fragment detection. Anal Chem. 95 (30), 11187-11192 (2023).
  8. Dighe, K., Moitra, P., Alafeef, M., Gunaseelan, N., Pan, D. A rapid RNA extraction-free lateral flow assay for molecular point-of-care detection of SARS-CoV-2 augmented by chemical probes. Biosens Bioelectron. 200, 113900(2002).
  9. Liu, C. C., Yeung, C. Y., Chen, P. H., Yeh, M. K., Hou, S. Y. Salmonella detection using 16S ribosomal DNA/RNA probe-gold nanoparticles and lateral flow immunoassay. Food Chem. 141 (3), 2526-2532 (2013).
  10. Pereyre, S., Caméléna, F., Hénin, N., Berçot, B., Bébéar, C. Clinical performance of four multiplex real-time PCR kits detecting urogenital and sexually transmitted pathogens. Clin Microbiol Infect. 28 (5), 733.e7-733.e13 (2022).
  11. Morris, S. R., Bristow, C. C., Wierzbicki, M. R., et al. Performance of a single-use, rapid, point-of-care PCR device for the detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, and Trichomonas vaginalis: a cross-sectional study. Lancet Infect Dis. 21 (5), 668-676 (2021).
  12. Pflüger, L. S., Nörz, D., Grunwald, M., et al. Analytical and clinical validation of a multiplex PCR assay for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis including simultaneous LGV serotyping on an automated high-throughput PCR system. Microbiol Spectr. 12 (3), e0275623(2024).
  13. Huang, Y., et al. Droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 21 (1), 804(2021).
  14. Ma, Y., et al. Comparison of analytical sensitivity of DNA-based and RNA-based nucleic acid amplification tests for reproductive tract infection pathogens: implications for clinical applications. Microbiol Spectr. 11 (5), e0149723(2023).
  15. Van Der Pol, B., et al. Multicenter comparison of nucleic acid amplification tests for the diagnosis of rectal and oropharyngeal Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. J Clin Microbiol. 60 (1), e0136321(2022).
  16. Luo, H., et al. An isothermal CRISPR-based diagnostic assay for Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis detection. Microbiol Spectr. 11 (6), e0046423(2023).
  17. Tu, Q., et al. Point-of-care detection of Neisseria gonorrhoeae based on RPA-CRISPR/Cas12a. AMB Express. 13 (1), 50(2023).
  18. Caruso, G., Giammanco, A., Virruso, R., Fasciana, T. Current and future trends in the laboratory diagnosis of sexually transmitted infections. Int J Environ Res Public Health. 18 (3), 1038(2021).
  19. Yang, J. L., et al. Comparison of an rRNA-based and DNA-based nucleic acid amplification test for the detection of Chlamydia trachomatis in trachoma. Br J Ophthalmol. 91 (3), 293-295 (2007).
  20. Luo, Z. G., Li, R. P., Wang, Y. B., Shang, X. J., Zhu, J. Y. Real-time fluorescence constant-temperature simultaneous amplification and testing of nucleic acid for detection of Mycoplasma genitalium infection in the genitourinary tract. Zhonghua Nan Ke Xue. 25 (6), Chinese 535-538 (2019).
  21. Zhang, T., et al. Light-up RNA aptamer signaling-CRISPR-Cas13a-based mix-and-read assays for profiling viable pathogenic bacteria. Biosens Bioelectron. 176, 112906(2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

הסרטון יגיע בקרוב
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.