הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

איסוף נוזלי שטיפת אף של עכברים ללא זיהום דם

3.7K צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68451

⸱

11 ביולי 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology, Kindai University Faculty of Medicine, 2Department of Arts and Sciences, Kindai University Faculty of Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הפרוטוקול הנוכחי מתאר שיטה חדשה למניעת זיהום דם בנוזל שטיפת האף של העכברים (NLF). מכיוון ששיטה זו מבטיחה איסוף NLF ללא זיהום דם, היא מאפשרת זיהוי מדויק יותר של רכיבים אימונולוגיים ופתוגנים נשימתיים שונים.

תקציר

דגימות דרכי הנשימה העליונות, כולל נוזל שטיפת האף (NLF) וספוגיות אף, שימושיות באיתור פתוגנים, כולל וירוסים וחיידקים, שעלולים לגרום למחלות בדרכי הנשימה. NLF שימש לבחינת רכיבים תאיים והומומורליים במערכת הנשימה, למשל, בהערכת השראת אימונוגלובולין (Ig) A לאחר חיסונים ברירית. במכרסמים ניסיוניים, ניתן לאסוף את דגימות ה-NLF במסלול הטרנס-לוע או הטרנס-טרכאלי. למרות שהמסלול הטרנס-לוע דווח כיעיל יותר באיסוף דגימות ה-NLF מאשר המסלול הטרנס-טררכיאלי, דגימות ה-NLF שנאספו במסלול הטרנס-לוע היו מזוהמות לעתים קרובות בדם, מה שהשפיע על רמות התוכן התאי וההומורלי בדגימות ה-NLF המקוריות. לפיכך, מחקר זה נועד לבסס שיטת איסוף NLF חדשה בעכברי ניסוי כדי למזער את זיהום הדם. לזמן קצר, לפני הפרדת הלסת התחתונה של העכבר, הונחו כדורי צמר גפן בפה כדי לספוג דם. כאשר הדימום הופסק, דגימות ה-NLF נאספו על ידי החדרת מיקרו-פיפטה לתוך הצ'ואנה ושטיפה עם 200 מיקרוליטר של מי מלח עם פוספט פעמיים (נפח סופי: 400 מיקרוליטר לעכבר). כדי לזהות זיהום בדם, נעשה שימוש בבדיקת לומינול משפטית פשוטה ורגישה המזהה המוגלובין. בדיקת הלומינול הראתה כי ניתן לזהות זיהום דם בדגימות NLF שנקטפו בשיטה הקונבנציונלית (ללא צמר גפן), אך לא באלו שנקטפו בשיטה החדשנית (עם כדורי צמר גפן). בשל זיהום הדם, ריכוזי ה-IgA וה-IgG הכוללים בדגימות ה-NLF היו גבוהים יותר בשיטה הקונבנציונלית מאשר בשיטה החדשה; ידוע כי דם מכיל רמות גבוהות בהרבה של IgA ו-IgG מאשר NLF. לכן, שיטה ייחודית זו יכולה לשמש כשיטה פשוטה ורגישה לאיסוף דגימות NLF מעכברי ניסוי למניעת זיהום דם.

מבוא

במחקר קליני ובסיסי כאחד, שיטות איסוף דגימות מתאימות הן החיוניות ביותר להערכת התוצאות. שטיפת אף היא טכניקת השקיה המשמשת לניתוח המרכיבים התאיים וההומורליים בדרכי הנשימה 1,2,3. מבחינה קלינית, נוזל שטיפת האף (NLF) שימש כדגימה לא פולשנית יעילה לגילוי סמנים ביולוגיים, עם מספר מחקרים התומכים בשימוש בו במחלות נשימה שונות, כולל סינוסיטיס, סיסטיק פיברוזיס והפרעות נשימה כלליות 4,5,6,7. בחיות ניסוי, NLF שימש גם לחקר מודלים של מחלות נשימה, כולל שפעת, מחלת קורונה-2019 (COVID-19) ומחלות אלרגיות 3,8,9. שיטה זו נמצאת בשימוש נרחב לקביעת סמנים ביולוגיים דלקתיים מרכזיים, כגון תאים פולימורפו-גרעיניים וציטוקינים, הנבדקים לעתים קרובות כאינדיקטורים לתגובות לאלרגנים, אסתמה וזיהומים בדרכי הנשימה 10,11,12. לאחרונה, כדי לחקור את היעילות והבטיחות של מועמדים פוטנציאליים לחיסון תוך-אף, נאספו לעתים קרובות דגימות NLF מחיות ניסוי, ורמות הפתוגן והאימונוגלובולין (Ig) בדגימות NLF כומתו כאינדיקטורים13.

בעכברי ניסוי, ניתן לאסוף NLF בשיטה טרנס-לוע או טרנס-קנה הנשימה. בשיטה הטרנס-לועית, ראש העכבר, כולל אזור ה-palatopharyngeal, הופרד מהגרון, ולאחר מכן הוכנס קטטר דרך פתח הלוע לתוך הצ'ואנה כדי להזריק מי מלח עם חוצץ פוספט (PBS) ולאסוף NLF מהנחיר14. השיטה הטרנס-טרכאלית קיבלה גישה לדרכי הנשימה דרך קנה הנשימה מבלי לחתוך את הראש, ו-NLF נאסף מהנחיר, מה שממזער את הסיכון לזיהום דם. למרות ששתי השיטות העיקריות הללו שימשו לאיסוף NLF בעכברי ניסוי, לשתי השיטות הקונבנציונליות יש מגבלות משלהן. השיטה הטרנס-טרכאלית הוכחה כמניבה כמויות נמוכות יותר של NLF מאשר השיטה הטרנס-לועית עקב דליפת נוזל שטיפה טרנס-קנה לחלל הפה. המחקר הקודם הראה כי לאחר הזרקת PBS, נפחי הנוזלים המוחזרים ב-NLF היו 70%-80% ו-90%-100% בשיטות טרנס-קנה וטרנס-לוע, בהתאמה. למרות שהשיטה הטרנס-לועית יכולה להיחשב טובה יותר עם כמויות גדולות יותר של NLF מאשר השיטה הטרנס-טרכאלית, זיהום הדם במהלך ההליך היה בלתי נמנע במידה מסוימת14,15. באופן דומה, מספר מחקרים דיווחו כי דגימות NLF היו מזוהמות לעתים קרובות ברמות גבוהות של חלבוני סרום דם 16,17,18. זה יכול להפריע לאיתור וכימות של סמנים ביולוגיים ספציפיים ל-NLF למחלות נשימה19. זה עשוי להשפיע גם על ריכוזי ה-Ig, במיוחד IgA ו-IgG, בדגימות NLF מכיוון שהדם מכיל כמויות גדולות יותר של IgA ו-IgG מאשר NLF.

כדי להתמודד עם אתגרים אלה, מחקר זה נועד לבסס שיטה טרנס-לועית ייחודית, פשוטה ואמינה לאיסוף דגימות NLF מעכברי ניסוי, מקסום תפוקת הדגימה ומזעור זיהום הדם. במהלך תהליכי הניסוי, כדורי צמר גפן הוכנסו לפה של העכבר כדי לעכב זיהום דם, ולאחר מכן הוזרקו PBS כדי לאסוף דגימות NLF מהנחיר. רמות זיהום הדם ב-NLF נקבעו בטכניקה פורנזית, כימילומינסנציה מבוססת לומינול, המאפשרת כימות למחצה של רמות ההמוגלובין (Hb) בדגימות NLF; תגובת הלומינול ב-NLF שנאספה בשיטה החדשה הייתה שלילית. לפיכך, השיטה החדשנית הנוכחית יכולה לשפר את איכות דגימת ה-NLF עבור ניסויים ביולוגיים שונים, כגון מבחני אימונוסורבנט מקושרים לאנזים נוגדנים (ELISAs), פרופילי ציטוקינים, קביעות סמנים ביולוגיים אימונולוגיים ורפואיים ומודלים של מחלות נשימה בעכברים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הליכי הניסוי אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של הפקולטה לרפואה של אוניברסיטת קינדאי ובוצעו על פי הקריטריונים שהותוו על ידי המכונים הלאומיים לבריאות (NIH)20. במחקר זה נעשה שימוש בעכברי C57BL/6 זכרים בני 4 חודשים. מידע על ריאגנטים וציוד המשמש במחקר זה מפורט בטבלת החומרים.

1. אוסף NLF

  1. המתת חסד של עכבר עם 5% איזופלורן21 בהתאם לפרוטוקולים שאושרו על ידי המוסד.
  2. הנח את העכבר על גבו על צלחת כירורגית ותקן אותו על ידי הצמדת כל ארבעת הגפיים.
  3. קח דם מהלב באמצעות מזרק של 1 מ"ל.
  4. פתח את חלל הבטן בעזרת מספריים כדי לחשוף את האיברים הקרביים והסרעפת.
  5. חתכו את הסרעפת והצלעות בעזרת מספריים כדי להפוך את האטריום הימני לגלוי.
  6. נקב את האטריום הימני בעזרת מספריים כדי להסיר דם עוד יותר.
  7. הכניסו שלושה כדורי צמר גפן לפה של החיה תוך כדי משיכת הלשון.
  8. הפרד את הלסת התחתונה באמצעות מספריים תוך הרמת הראש (תנוחת האף למעלה) כדי לעכב זיהום דם ב- NLF.
  9. החלף את כדורי הצמר גפן בחדשים כדי למנוע זיהום דם.
  10. לאחר הפסקת הדימום, יש להזריק 200 מיקרוליטר של PBS סטרילי לתוך הצ'ואנה ולאסוף NLF שנפלט מהנחיריים לתוך צינור של 1.5 מ"ל.
  11. חזור על שלב 1.10 פעם נוספת.

2. איתור זיהום דם על ידי כימילומינסנציה לומינול

  1. ממיסים 1 מ"ג לומינול ו-5 מ"ג נתרן מי חמצן (Na2O2) עם 1 מ"ל מים סטריליים באמצעות צינור של 1.5 מ"ל להכנת תמיסת המלאי.
    הערה: הריכוז הסופי הוא 1 מ"ג/מ"ל לומינול ו-5 מ"ג/מ"ל Na2O2.
  2. מכסים את הצינור בנייר אלומיניום ושומרים אותו בחום של 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש.
  3. יש לדלל את תמיסת המלאי פי 10 במים נטולי יונים כדי ליצור פיתרון עובד.
    הערה: הריכוז הסופי הוא 0.1 מ"ג/מ"ל לומינול ו-0.5 מ"ג/מ"ל Na2O2.
  4. פיפטה 2 מיקרוליטר של ה-NLF דגימות לבארות של צלחת של 96 בארות.
  5. הוסף 100 מיקרוליטר מתמיסת הלומינול המדוללת לכל באר.
  6. נער בקצרה את צלחת 96 הבארות כדי לערבב את הדגימות עם תמיסת הלומינול.
  7. התבונן ישירות בכימילומינציה של לומינול בחושך.
  8. כמת למחצה את ריכוז ה- Hb באמצעות לומינומטר, במידת הצורך.

3. כימות של IgA ו-IgG על ידי ELISAs

  1. מצפים בארות של צלחות של 96 בארות עם 100 מיקרוליטר לבאר של נוגדן IgA כולל נגד עכבר (20 ננוגרם/באר; 200 ננוגרם/מ"ל) או IgG (10 ננוגרם/באר; 100 ננוגרם/מ"ל) (ראה טבלת חומרים).
  2. אוטמים את הצלחות ומדגרים אותן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  3. שטפו את הצלחות שלוש פעמים עם 300 מיקרוליטר/באר של מאגר כביסה המכיל 0.05% Tween 20 ב-PBS בכל פעם, ולאחר מכן נגבו את הצלחות על מגבות נייר.
  4. הוסף 200 מיקרוליטר של מדלל בדיקה המכיל 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-0.2% טווין 20 ב-PBS לכל באר.
  5. דגרו את הצלחות בטמפרטורת החדר (RT) למשך 60 דקות.
  6. שאפו את מדלל הבדיקה ולאחר מכן כתם את הצלחות על מגבות נייר.
  7. הכן 100 ננוגרם/מ"ל של תקן IgA או IgG של עכבר עם מדלל הבדיקה ובצע דילולים טוריים כפולים: 50 ננוגרם/מ"ל, 25 ננוגרם/מ"ל, 12.5 ננוגרם/מ"ל, 6.25 ננוגרם/מ"ל, 3.13 ננוגרם/מ"ל, 1.56 ננוגרם/מ"ל ו-0.78 ננוגרם/מ"ל.
    הערה: הנפח הנדרש של כל תקן הוא 100 מיקרוליטר לבאר.
  8. יש לדלל את הדגימות עם מדלל הבדיקה בדילולים המתאימים: סרום (104 עד 106), NLF (10, 50, 200 ו-500) ו-BALF (101 עד 104).
    הערה: הנפח הנדרש של כל דגימה הוא 100 מיקרוליטר לבאר.
  9. הוסף 100 מיקרוליטר של תקני IgA או IgG ודגימות לבארות המתאימות.
  10. דגרו את הצלחות ב- RT למשך 75 דקות.
  11. שטפו את הצלחות שלוש פעמים עם 300 מיקרוליטר/באר של מאגר הכביסה בכל פעם, ולאחר מכן נגבו את הצלחות על מגבות נייר.
  12. לדלל נוגדן נגד עכבר מצומד פרוקסידאז F(ab')2 (ראה טבלת חומרים) עם מדלל הבדיקה בדילול המתאים: דילול פי 10 פי4.
    הערה: הנפח הנדרש הוא 100 מיקרוליטר לבאר.
  13. הוסף 100 מיקרוליטר של נוגדן F(ab')2 מצומד פרוקסידאז מדולל לכל באר.
  14. דגרו את הצלחות ב- RT למשך 75 דקות.
  15. שטפו את הצלחות חמש פעמים עם 300 מיקרוליטר/באר של מאגר הכביסה בכל פעם, ולאחר מכן נגבו את הצלחות על מגדלי נייר.
  16. הוסף 100 מיקרוליטר של תמיסת מצע המכילה טטרמתיל-בנזידין (TMB) ומי חמצן לכל באר.
  17. דגרו את הצלחות ב- RT למשך 5 דקות.
  18. הוסף 50 מיקרוליטר של תמיסת עצירה, 2 N חומצה גופרתית (2N H2SO4), לכל באר.
  19. מדוד את הספיגה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות.
  20. קבע את הריכוזים של IgA ו-IgG בכל דגימה על ידי שימוש בעקומות הסטנדרטיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

באמצעות השיטה הקונבנציונלית או החדשנית, נאספו דגימות NLF מעכברי C57BL/6 דרך המסלול הטרנס-לוע. כפי שמוצג באיור 1, דגימות ה-NLF שנאספו בשיטה הקונבנציונלית היו מעט ורודות (איור 1A); דגימות ה-NLF שנאספו בשיטה החדשה היו ברורות (איור 1B). מכיוון שנראה שההבדל נובע מזיהום הדם בדגימות ה-NLF בשיטה הקונבנציונלית, זיהום הדם בדגימות ה-NLF נבדק באמצעות תגובת לומינול. כפי שמוצג באיור 2, הכימילומינסנציה בדגימות ה-NLF ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

שטיפת אף היא טכניקה רבת ערך לרכישת מידע ביוכימי, ציטולוגי וביולוגי במחלות נשימה, כגון שפעת ו-COVID-1923. מלבד זיהוי תאים חודרים שונים, ניתן לבחון את ההרכב הלא תאי של דרכי הנשימה מדגימות ה-NLF בשיטות שונות, כגון ELISAs, אימונובלוט ותגובת שרשרת פולימראז כמותית 1,19,24. כאן, נערך מחקר השוואתי באמצעות שתי שיטות איסוף NLF שונות: שיטות קונבנציונליות וחדשניות. המחקר הנוכחי הראה ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

אנו מודים ל-Seiichi Omura, Ph.D., Cong Thanh Nguyen, M.D., Ph.D., Kota Moriguchi, M.D., Ph.D., Reona Shiro, M.D., ו-Sandesh Rimal, M.S., המחלקה למיקרוביולוגיה, הפקולטה לרפואה של אוניברסיטת קינדאי, ו-Hirotaka Ebina, Ph.D., Shinya Okamura, Ph.D., ו-Yasuo Yoshioka, Ph.D., Virus Vaccine Group, BIKEN Innovative Vaccine Research Alliance, מכון המחקר למחלות מיקרוביאליות, אוניברסיטת אוסקה, לדיונים מועילים. אנו גם מביעים את תודתנו לחברי המכון לחקר מדעי החיים, אוניברסיטת קינדאי, על הסיוע הטכני המצוין שלהם. עבודה זו נתמכה על ידי משרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה, יפן, באמצעות מלגת Monbukagakusho (MEXT, 2021-2025) (I.A.), מענק סיוע למחקר מדעי KAKENHI מהאגודה היפנית לקידום המדע (JSPS) JP23K06493 (F.S.), JP21K07287/JP24K10500 (A.-M. P.), ו-JP22K18378/JP24K10163 (I.T.), ומענק לשיפור המחקר של אוניברסיטת קינדאי KD2406 (FS) ו-KD2506 (I.T).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחט קיבוע בעלי חייםNatsume Seisakusho Co., Ltd., טוקיו, יפןKN-358-Aתיקנו עכבר עם מחטי קיבוע של בעלי חיים. נירוסטה; אורך כולל, 23 מ"מ; וקצה מחט, 15 מ"מ.
BD OptEIATM  סט ריאגנטים מצע TMBBD Biosciences, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב555214הוספנו 100 μ L של תמיסת מצע TMB לבאר.
צנצנת פעמוןNANAהשתמשנו בצנצנת פעמון להרדמה.
צלחות אימונוניות לא סטריליות שקופות עם תחתית שטוחה 96 בארות ThermoFisher Scientific, רוצ'סטר, ניו יורק, ארה"ב442404השתמשנו בצלחות אימונוניות לא סטריליות שקופות עם תחתית שטוחה 96 בארות עם טיפול פני השטח של MaxiSorp לבדיקות אימונוסורבנט המקושרות לאנזים.
כדור כותנהSansho Co., Ltd., טוקיו, יפן94-1951השתמשנו בכדורי כותנה כדי למנוע זיהום דם. קוטר כדורי הצמר גפן היה 7 מ"מ.
סרום בקר עובריSigma-Aldrich Co., סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב172012-500 מ"להוספנו 10% מסרום בקר עוברי לדילול הבדיקה.
מלקחיים (מיקרו פינצטה לניסויי מחקר, קצה מעוקל)Sansho Co., Ltd., טוקיו, יפן91-1506השתמשנו במלקחיים לדיסקציה. דגם, HSC 551-10; ולכל אורכו, 105 מ"מ.
מלקחיים (פינצטה מדויקת)Sansho Co., Ltd., טוקיו, יפן91-2772השתמשנו במלקחיים לדיסקציה. דגם, HSC 607-12; מעל לכל אורך, 120 מ"מ; וקוטר הקצה, 0.3 מ"מ.
עז נגד עכבר IgA-UNLBSouthernBiotech, ברמינגהאם, AL, ארה"ב1040-01ציפינו צלחות חיסון לא סטריליות שקופות עם תחתית שטוחה 96 בארות עם 100 μ L/באר (20 ננוגרם/באר) של סך האימונוגלובולין A.
איזופלורן Viatris Inc., Canonsburg, PA, ארה"בהשתמשנו באיזופלורן להרדמה.
סט ריאגנטים לתיקון לומינולFUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, אוסקה, יפן124-06511השתמשנו בסט ריאגנטים של תגובת לומינול כדי לזהות המוגלובין בדגימות NLF.
MicrotubeWatson Co., Ltd., טוקיו, יפן131-7155Cהשתמשנו במיקרו-צינורות לאיסוף NLF ו-BALF (מיקרו-צינור 1.5 מ"ל עם מכסה נעילה, תחתית עגולה, כובע מגע רך).
Milli-Q מיםMerck KGaA, דרמשטדט, גרמניהMilli-Q Direct 8השתמשנו במי MilliQ כדי ליצור תמיסת תיקון לומינול.
Mini-Shaker PSU-2TBiosan Ltd., ריגה, לטביהPSU-2Tניערנו צלחות של 96 בארות באמצעות ה-Mini-Shaler PSU-2T.
זן עכברCLEA Japan, Inc., טוקיו, יפןNAהשתמשנו בעכברים זכרים בני 4 חודשים C57BL/6
Nunc MicroWell 96-well, Nunclon Delta-מטופל, מיקרופלייט תחתון שטוחThermo Fisher Scientific Nunc A/S. Kamstrupvej,Roskilde, דנמרק136101השתמשנו ב-NuncTM MicroWellTM 96-Well, Nunclon Delta-Careated, Flat-Bottom Microplate לבדיקת הלומינול.
מצומד פרוקסידאז AffiniPure F(ab')2 שבר עז אנטי-עכבר IgG, F(ab')2 שבר ספציפי (תגובה צולבת מינימלית לחלבוני סרום אדם, בקר וסוסים)Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, USA115-036-072הוספנו 100 μ L של שבר AffiniPure F(ab')2 מצומד פרוקסידאז נגד עכברים IgG, F(ab')2 ספציפי לשבר, כנוגדנים לזיהוי (דילול פי 10,000) לכל באר.
תמיסת מלח חוצצת פוספטSigma-Aldrich Co., סנט לואיס, מיזורי, ארה"בD8537-500MLהשתמשנו בתמיסת מלח פוספט של Dulbecco (שונה ללא סידן כלוריד ומגנזיום כלוריד, נוזלי, מסונן סטרילי, מתאים לאיסוף תאים) לאיסוף NLF ו-BALF.
פיפטה Watson Co., Ltd., טוקיו, יפןNAהשתמשנו ב-200-μ L פיפטה לשטיפת אף.
טיפ פיפטהווטסון ושות', בע"מ, טוקיו, יפןNAהשתמשנו ב-200-μ L קצה פיפטה מולטיפיט לשטיפת אף.
פוליאוקסיאתילן (20) סורביטן מונולאורט (Tween 20)FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation, אוסקה, יפן167-11515הוספנו 0.05% מ-Tween 20 למאגר הכביסה ו-0.2% מ-Tween 20 לדילול הבדיקה.
עז מטוהרת נגד עכבר IgG (תגובתיות x מינימלית) נוגדןBioLegend, סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב405301ציפינו צלחות חיסון לא סטריליות שקופות עם תחתית שטוחה 96 בארות עם 100 μ L/באר (10 ננוגרם/באר) מסך האימונוגלובולין G.
מספריים קטנים, Sansho כפול מחודדושות', בע"מ, טוקיו, יפן91-7005השתמשנו במספריים לחתך. דגם, S-4A; ולכל אורכו, 115 מ"מ.
חומצה גופרתיתWako תעשיות כימיות טהורות, בע"מ, טוקיו, יפן192-04755הוספנו 50 μ L של 2 N חומצה גופרתית לכל באר כדי לעצור את התגובה.
צנתר תוך ורידי של Surflo Terumo Corporation, טוקיו, יפן SR-FS2032השתמשנו בצנתר תוך ורידי של סרפלו והזרקנו PBS לקנה הנשימה לשטיפת סימפונות. קטטר, 20 גרם; אורך קטטר, 32 מ"מ; קוטר פנימי של קטטר, 0.80 מ"מ; קוטר חיצוני של קטטר, 1.1 מ"מ; והמחט הפנימית, 22G.
מספריים ישרים כירורגייםSansho Co., Ltd., טוקיו, יפן91-7004השתמשנו במספריים לדיסקציה. דגם, S-3B; ולכל אורכו, 120 מ"מ.
צלחת כירורגיתNatsume Seisakusho Co., Ltd., טוקיו, יפןKN-321-Bהשתמשנו בלוח שעם לדיסקציה. עומק, 20 ס"מ; רוחב, 15 ס"מ; וגובה 3 ס"מ.
קורא מיקרו-פלטות היברידי רב-מצבי Synergy H1 Agilent Technologies, Inc., סנטה קלרה, קליפורניה, ארה"ב NA מדדנו את הספיגה של דגימות ב-450 ננומטר, באמצעות קורא המיקרו-פלטות ההיברידי Synergy H1 Hybrid.
תאגיד מזרקTerumo, טוקיו, יפן SS-01Tהשתמשנו במזרק של 1 מ"ל לאיסוף דם מהלב.
חוט  Niccho Kogyo Co., Ltd. טוקיו יפןNAקשרנו קטטר עם חוט כדי להבטיח מיקום נכון במהלך ההליך.
.

מקורות

  1. Cortegano, I., et al. Age-dependent nasal immune responses in non-hospitalized bronchiolitis children. Front Immunol. 13, 1011607(2022).
  2. Yao, S., et al. Control of pathogenic effector T-cell activities in situ by PD-L1 expression on respiratory inflammatory dendritic cells during respiratory syncytial virus infection. Mucosal Immunol. 8 (4), 746-759 (2015).
  3. Gould, V. M. W., et al. Nasal IgA provides protection against human influenza challenge in volunteers with low serum influenza antibody titre. Front Microbiol. 8, 900(2017).
  4. Casado, B., Pannell, L. K., Viglio, S., Iadarola, P., Baraniuk, J. N. Analysis of the sinusitis nasal lavage fluid proteome using capillary liquid chromatography interfaced to electrospray ionization-quadrupole time of flight-tandem mass spectrometry. Electrophoresis. 25 (8), 1386-1393 (2004).
  5. Hull, J., Skinner, W., Robertson, C., Phelan, P. Elemental content of airway surface liquid from infants with cystic fibrosis. Am J Respir Crit Care Med. 157 (1), 10-14 (1998).
  6. Roponen, M., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage, induced sputum and serum of employees with rheumatic and respiratory disorders. Eur Respir J. 18 (3), 542-548 (2001).
  7. Santos Galvão, C. E., et al. Inflammatory mediators in nasal lavage among school-age children from urban and rural areas in São Paulo, Brazil. São Paulo Med J. 122 (5), 204(2004).
  8. Winkler, E. S., et al. SARS-CoV-2 causes lung infection without severe disease in human ACE2 knock-in mice. J Virol. 96 (1), e01511-e01521 (2022).
  9. Kieran, T. J., et al. Exploring associations between viral titer measurements and disease outcomes in ferrets inoculated with 125 contemporary influenza A viruses. J Virol. 98 (2), e01661-e01723 (2024).
  10. Peden, D. B. The use of nasal lavage for objective measurement of irritant-induced nasal inflammation. Regul Toxicol Pharmacol. 24 (1 II), 68-75 (1996).
  11. Rusznak, C., et al. Mechanisms of pollution-induced allergy and asthma. Rev Fr Allergol Immunol Clin. 38 (7 Suppl. 1), 397-402 (1998).
  12. Laumbach, R. J., et al. Nasal effects of a mixture of volatile organic compounds and their ozone oxidation products. J Occup Environ Med. 47 (11), 1182-1189 (2005).
  13. Kawai, A., et al. The potential of neuraminidase as an antigen for nasal vaccines to increase cross-protection against influenza viruses. J Virol. 95 (20), 1180-1201 (2021).
  14. Cho, S. H., et al. Spontaneous eosinophilic nasal inflammation in a genetically-mutant mouse: Comparative study with an allergic inflammation model. PLoS One. 7 (4), e35114(2012).
  15. Puchta, A., Verschoor, C. P., Thurn, T., Bowdish, D. M. E. Characterization of inflammatory responses during intranasal colonization with Streptococcus pneumoniae. J Vis Exp. (83), e50490(2014).
  16. Ghafouri, B., et al. Comparative proteomics of nasal fluid in seasonal allergic rhinitis. J Proteome Res. 5 (2), 330-338 (2006).
  17. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Svartz, J., Tagesson, C. Protein patterns of human nasal and bronchoalveolar lavage fluids analyzed with two-dimensional gel electrophoresis. Electrophoresis. 19 (18), 3222-3229 (1998).
  18. Lindahl, M., Ståhlbom, B., Tagesson, C. Identification of a new potential airway irritation marker, palate lung nasal epithelial clone protein, in human nasal lavage fluid with two-dimensional electrophoresis and matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight. Electrophoresis. 22 (9), 1795-1800 (2001).
  19. Schoenebeck, B., et al. Improved preparation of nasal lavage fluid (NLF) as a noninvasive sample for proteomic biomarker discovery. Biochim Biophys Acta Proteins Proteomics. 1854 (7), 741-745 (2015).
  20. National Research Council (US) Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Guide for the care and use of laboratory animals. , (2011).
  21. Roustan, A., et al. Evaluating methods of mouse euthanasia on the oocyte quality: Cervical dislocation versus isoflurane inhalation. Lab Anim. 46 (2), 167-169 (2012).
  22. Park, A. M., Tsunoda, I. Forensic luminol reaction for detecting fecal occult blood in experimental mice. Biotechniques. 65 (4), 227-230 (2018).
  23. Gao, K. M., et al. Human nasal wash RNA-Seq reveals distinct cell-specific innate immune responses in influenza versus SARS-CoV-2. JCI Insight. 6 (22), e152288(2021).
  24. Kirkeby, L., et al. Immunoglobulins in nasal secretions of healthy humans: Structural integrity of secretory immunoglobulin A1 (IgA1) and occurrence of neutralizing antibodies to IgA1 proteases of nasal bacteria. Clin Diagn Lab Immunol. 7 (1), 31-39 (2000).
  25. Webb, J. L., Creamer, J. I., Quickenden, T. I. A comparison of the presumptive luminol test for blood with four non-chemiluminescent forensic techniques. Luminescence. 21 (4), 214-220 (2006).
  26. Ahmad, I., et al. Exploring the role of platelets in virus-induced inflammatory demyelinating disease and myocarditis. Int J Mol Sci. 25 (6), 3460(2024).
  27. Olsson, T., Bergström, K., Thore, A. A sensitive method for determination of serum hemoglobin based on iso-luminol chemiluminescence. Clin Chim Acta. 122 (2), 125-133 (1982).
  28. Van der Meer, W., Dinnissen, J. M. B., de Keijzer, M. H. Evaluation of the Sysmex XT-2000i, a new automated haematology analyser. Sysmex. (2002), Available at: https://www.sysmex.co.jp/en/products_solutions/library/journal/vol12_no2/summary03.html (2002).
  29. Oshiro, I., Takenaka, T., Maeda, J. New method for hemoglobin determination by using sodium lauryl sulfate (SLS). Clin Biochem. 15 (2), 83-88 (1982).
  30. Hamaguchi, Y., Oshiro, I., Maeda, J. A study on reaction mechanism of sodium lauryl sulfate-hemoglobin (SLS-Hb), Part 1. Rinsho Byori. 40 (6), 649-654 (1992).
  31. McGee, D. W., McMurray, D. N. The effect of protein malnutrition on the IgA immune response in mice. Immunology. 63 (1), 25(1988).
  32. Castigli, E., et al. Impaired IgA class switching in APRIL-deficient mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (11), 3903-3908 (2004).
  33. Matsuo, K., et al. CCL28-deficient mice have reduced IgA antibody-secreting cells and an altered microbiota in the colon. J Immunol. 200 (2), 800-809 (2018).
  34. McDonald, K. G., et al. Aging impacts isolated lymphoid follicle development and function. Immun Ageing. 8 (1), 1-12 (2011).
  35. Abolins, S., et al. The comparative immunology of wild and laboratory mice, Mus musculus domesticus. Nat Commun. 8 (1), 1-13 (2017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

איסוף דגימות מעכבריםנתיב לועינתיב קנה הנשימהאימונוגלובולין Aאימונוגלובולין Gתגובת לומינולגילוי כמילומינצנציהאנליזת מיקרוביום
איסוף נוזלי שטיפת אף של עכברים ללא זיהום דם
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.