הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

איתור חומצת גרעין Mycoplasma pneumoniae וגן עמידות לתרופות

816 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68500

⸱

19 בספטמבר 2025

 ,  ,  ,  , 
1Department of Clinical Laboratory Medicine, Heyuan Key Laboratory of Molecular Diagnosis & Disease Prevention and Treatment, Heyuan People's Hospital, Guangdong Provincial People's Hospital Heyuan Hospital, 2Department of Clinical Laboratory Medicine, Heyuan People's Hospital, Guangdong Provincial People's Hospital Heyuan Hospital, 3Department of Clinical Laboratory Medicine, Guangdong Provincial People's Hospital, Guangdong Academy of Medical Sciences, Southern Medical University, 4Medical laboratory, Heyuan Key Laboratory of Molecular Diagnosis & Disease Prevention and Treatment, Doctors Station of Guangdong province, Heyuan People's Hospital, Guangdong Provincial People's Hospital Heyuan Hospital

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מספק דרך מהירה ואמינה לזהות זיהומים במיקופלזמה פנאומוניה ולזהות עמידות לאנטיביוטיקה. זה עוזר למטפלים לבחור את הטיפולים הנכונים מהר יותר, משפר את הטיפול בחולים עם דלקת ריאות ותומך בשימוש טוב יותר באנטיביוטיקה

תקציר

מיקופלזמה פנאומוניה (Mp) מייצגת את אחד הפתוגנים השכיחים ביותר האחראים לדלקת ריאות נרכשת בקהילה (CAP) באוכלוסיות ילדים. איתור גנים עמידים ל-Mycoplasma pneumoniae מספק תמיכה טכנית חזקה ובסיס תיאורטי לאבחון קליני מדויק וטיפול בזיהומי MP. אבחון מדויק והערכה של עמידות לתרופות בזיהום Mp חיוניים לטיפול קליני. שיטות זיהוי נפוצות של מיקופלזמה פנאומוניה כוללות תרבית, זיהוי נוגדנים ובדיקות מבוססות ביולוגיה מולקולרית. תרבית MP היא תקן הזהב לאבחון אך דורשת מדיום ספציפי, גוזלת זמן ובעלת רגישות נמוכה. זיהוי מבוסס נוגדנים של Mp נמצא בשימוש נרחב; עם זאת, שליליות כוזבות עלולות להתרחש בשלב מוקדם של ההדבקה. זיהוי מבוסס ביולוגיה מולקולרית מספק תפנית מהירה, סיכון נמוך לזיהום, רגישות גבוהה, ספציפיות גבוהה, ואינו מוגבל על ידי עיתוי איסוף הדגימות או המצב החיסוני. לכן הוא הוכר כתקן זהב חדש לאבחון זיהום Mycoplasma pneumoniae . סוכני מקרוליד הם הטיפול הראשון לזיהום Mp בילדים. עם זאת, עם השימוש הנרחב במקרולידים בזיהומים בדרכי הנשימה בילדים, השכיחות של זיהום Mycoplasma pneumoniae עמיד לתרופות עולה. חולים שנדבקו בזנים עמידים חווים משך חום ארוך משמעותית, אשפוז ממושך וחום ממושך לאחר מתן בהשוואה לאלו שנדבקו בזנים רגישים. אתרי המוטציות שזוהו עד כה כוללים 2063, 2064, 2067 ו-2617. בסין, מוטציות נקודתיות תועדו רק במיקומים 2063 ו-2064, כאשר החלפת A-to-G בעמדה 2063 היא הנפוצה ביותר. עבור אתרים אלה, נעשה שימוש בתגובת שרשרת פולימראז (PCR) בשילוב עם טכנולוגיית בדיקה פלואורסצנטית כדי לזהות את חומצות הגרעין ומוטציות העמידות לתרופות של Mycoplasma pneumoniae בדגימות ליחה אנושיות. זיהוי גנים עמידים ל-Mycoplasma pneumoniae מציע תמיכה טכנית חיונית ובסיס תיאורטי לאבחון מדויק וטיפול יעיל בזיהום Mp.

מבוא

Mycoplasma pneumoniae (Mp) הוא המיקרואורגניזם הפתוגני הקטן ביותר המסוגל לשרוד באופן עצמאי, הממוקם בעמדת ביניים בין חיידקים לנגיפים. הוא מופץ בעיקר על ידי טיפות נשימה או אירוסולים ומהווה את הפתוגן השני בשכיחותו הקשור לדלקת ריאות נרכשת בקהילה (CAP) בילדים1, האחראי ל-20% עד 40% ממקרי CAP2. Mp מראה עמידות מובנית לאנטיביוטיקה β-לקטם, כגון פניצילין וצפלוספורינים, בשל היעדר דופן תא, שאנטיביוטיקות אלה מכוונות אליה על ידי חסימת סינתזת דופן התא. שיטות הטיפול העיקריות בזיהומי Mp כוללות חומרים החוסמים סינתזת חלבונים, כולל מקרולידים וטטרציקלינים, לצד תרופות המעכבות את שכפול ה-DNA, כגון טטרציקלינים ופלואורוקווינולונים 3,4,5. לכן, זיהוי מעבדתי מהיר של Mp חיוני למידע על יישום נבון של אנטיביוטיקה. שיטות גילוי מעבדה עכשוויות ל-Mp כוללות בידוד ותרבות, זיהוי אנטיגן, זיהוי נוגדנים וטכניקות אבחון גנטיות.

כשיטת זיהוי מסורתית, בידוד ותרבית ממשיכים להיות הסטנדרט הסופי לאבחון זיהום Mycoplasma pneumoniae . Kashyap ואחרים הבחינו כי גידול Mp ממקלוני גרון או דגימות כיח היא טכניקת אבחון מהימנה6. גישה זו נתקלת במכשולים ניכרים, כגון הדרישות המוקדמות התרבותיות המחמירות של Mp, תקופות גידול ממושכות ושיעורי גילוי חיוביים נמוכים בדרך כלל, המגבילים את השימוש הקליני השגרתי בו. זיהוי אנטיגן Mp תלוי בנוגדנים ספציפיים ל-Mp. מיאשטה ועמיתיו השתמשו בנוגדנים חד-שבטיים מזני Mp שונים כחומרי ציפוי בסנדוויץ' בעל נוגדנים כפולים ELISA והעריכו את יעילותם באמצעות PCR7. הממצאים לא גילו הבדל מהותי בין שתי המתודולוגיות. עם זאת, הצורך בנוגדנים חד-שבטיים ספציפיים מאוד ובעלי טיטר גבוה מגביל את היישום הנרחב של שיטה זו.

בעקבות הדבקה ב-Mp, מערכת החיסון מייצרת נוגדנים ספציפיים ל-IgM ו-IgG. נוגדני IgM בדרך כלל ניתנים לזיהוי תוך שבוע לאחר ההדבקה ומגיעים לשיאם לאחר 3 עד 4 שבועות, מה שהופך אותם לאינדיקטורים אבחנתיים חשובים להדבקה מוקדמת. עם זאת, תוצאות שליליות כוזבות עשויות להתעורר בשלבים הראשונים עקב ירידה ברמות הנוגדנים8. לעומת זאת, נוגדני IgG מופיעים מאוחר יותר ובדרך כלל מסמנים זיהום קודם 9,10. זיהוי סרולוגי של Mp מסווג לבדיקות נוגדנים לא ספציפיות וספציפיות. בעוד שבדיקות נוגדנים לא ספציפיות הן פשוטות לביצוע, הספציפיות שלהן מוגבלת, מכיוון שזיהומים מפתוגנים אחרים, כולל ריקציה ואדנו-וירוס, יכולים גם להגביר את רמות האגלוטינין הקר, וכתוצאה מכך לתוצאות חיוביות כוזבות. בדיקות נוגדנים ספציפיות כוללות את בדיקת קיבוע המשלים, בדיקת אגלוטינציה של חלקיקים, בדיקת המגלוטינציה עקיפה, בדיקת אימונופלואורסצנציה עקיפה ובדיקת אימונוסורבנט מקושר לאנזים (ELISA). ELISA נמצאת בשימוש נרחב בסין בשל הטכנולוגיה המבוססת והנגישות המסחרית שלה, המספקת רגישות גבוהה ופשטות תפעולית, ובכך משמשת כשיטה מעשית ואמינה לאבחון זיהומי Mp בפרקטיקה הקלינית השגרתית11.

PCR כמותי פלואורסצנטי בזמן אמת נבדל על ידי זמן העיבוד המהיר שלו, הספציפיות המוגברת, הרגישות החזקה והיעדר תגובתיות צולבת. שיטה זו מזהה DNA Mp בדגימות של ליחה, ספוגית גרון או נוזל שטיפת סימפונות, ודורשת 1-100 ננוגרם DNA לכל תגובה. הזיהוי בוצע באמצעות מכשיר PCR בזמן אמת. תבנית ה-DNA חווה דנטורציה בטמפרטורות גבוהות יותר, ואחריה חישול פריימר והכלאה של בדיקה פלואורסצנטית. טכנולוגיית הגברת גנים מאפשרת שכפול של שברי חומצות גרעין בריכוזים נמוכים במיוחד למיליוני עותקים במסגרת זמן קצרה, ומשיגה רגישות זיהוי של ≥10 CFU/mL12. בהשוואה ל-PCR קונבנציונלי, PCR כמותי פלואורסצנטי בזמן אמת מפחית את סיכוני הזיהום תוך מתן אפשרות לתפוקה גבוהה וניתוח אוטומטי. לכן, היא התגלתה כטכניקה המועדפת לזיהוי ישיר של Mp בפרקטיקה הקלינית13. בשל רגישותו המוגברת, יש צורך באמצעים מחמירים כדי למנוע זיהום, שעלול לגרום לתוצאות חיוביות כוזבות או שליליות כוזבות.

בטיפול קליני, מקרולידים מהווים את ההתערבות הטיפולית העיקרית לדלקת ריאות Mycoplasma pneumoniae (MPP). השימוש המוגזם והיישום הלא נכון של אנטיביוטיקה הפעילו לחץ סלקטיבי, מה שהוביל להופעתו של Mp עמיד למקרוליד. התנגדות זו תורמת משמעותית ל-MPP עקשן. עמידות למקרולידים ב-Mycoplasma pneumoniae גבוהה במיוחד במזרח אסיה, במיוחד בסין וביפן, בעוד שאירופה וארצות הברית מציגות שיעורי עמידות נמוכים יחסית. חולים ילדים מפגינים בדרך כלל שיעורי עמידות גבוהים בהשוואה למבוגרים, מה שמחייב בדיקה מוגברת14. מאז שנת 2000, שכיחות זיהומי Mycoplasma pneumoniae (MRMPI) הסלימה באופן משמעותי בקנה מידה עולמי, במיוחד במזרח אסיה. בסין, זני MRMPI מהווים 69% עד 95% מהמקרים15, ותורמים באופן משמעותי למחלה קשה, כישלון טיפול, סיבוכים והשלכות ארוכות טווח. מחקרים מצביעים על כך שמוטציות בגן 23S rRNA מעכבות את קשירת המקרולידים לאתרי המטרה, וכתוצאה מכך מפחיתות את יעילות התרופה. מיקומי מוטציות תכופים מקיפים מיקומים 2063, 2064, 2067 ו-2617. בסין, מוטציות זוהו אך ורק במיקומים 2063 ו-206416,17. מחקר משנת 2016 הצביע על כך ששיעורי העמידות למקרולידים בבייג'ינג, חרבין, שנחאי ושינג'יאנג נעו בין 66.7% ל-86.7%, בעוד שנאנג'ינג הציגה שיעור נמוך יותר של 20%18. זנים עמידים למקרולידים הופיעו באזורים שונים, כאשר שיעורי העמידות מדווחים כדלקמן: 8.3%-9.8% בצרפת, 3.0%-3.6% בגרמניה, 8.2% בארצות הברית, 0.9%-2.9% בדנמרק, 12.1% בקנדה, 20% באיטליה, 22% בישראל, 8% בספרד ו-9.3% בבריטניה 19,20,21,22,23,24,25,26. 27. מגמה זו מדגישה את ההתפשטות העולמית של עמידות למקרולידים. בשנת 2008, הינדלי ועמיתיו דיווחו על 46 מקרים של Mycoplasma pneumoniae עמיד למקרוליד, כאשר 40 מקרים הדגימו את המוטציה A2063G, מקרה אחד הציג את המוטציה A2063C, וחמישה מקרים הציגו את מוטציית A2064G28. מוטציות עמידות דומות זוהו ביפן ובארצות הברית, כאשר המוטציות העיקריות התרחשו במיקומים 2063 ו-206429. מחקרים מצביעים על קשר בין אתרי מוטציות לפנוטיפים של עמידות לתרופות: מוטציית A2063G מעניקה עמידות למקרולידים של 14 איברים (ML), מוטציית A2064G מעניקה עמידות ל-ML של 14 ו-16 איברים, C2617G מקנה עמידות ל-ML של 14 ו-15 איברים, ומוטציה A2067G מעניקה עמידות ל-ML30 של 16 איברים. ניטור עמידות ל-Mp הוא חיוני לזיהוי מוקדם של זיהומים עמידים לתרופות ולמידע על בחירות טיפול קליניות. מחקרים הראו כי בדיקת רגישות אנטי-מיקרוביאלית במבחנה יכולה לחזות את יעילות התרופותהקליניות 31. בשנת 2011, המכון האמריקאי לתקנים קליניים ומעבדתיים פרסם הנחיות התומכות בשיטת המיקרו-דילול לבירור הריכוז המעכב המינימלי (MIC) כדי להעריך עמידות למקרולידים32. עם זאת, קביעת MIC עשויה לדרוש מספר שבועות, ובכך להגביל את התועלת הקלינית שלו בהכוונת טיפול אנטיביוטי בזמן אמת.

ריצוף סנגר הוא טכניקה ישירה לזיהוי מוטציות בגן 23S rRNA של Mp. שיטה זו משתמשת בנוקלאוטידים עם תווית פלואורסצנטית וניתוח אלקטרופורטי כדי לברר רצפי DNA, מה שמקל על זיהוי וריאציות גנטיות של Mp. ריצוף סנגר, בעוד שהוא מסוגל לזהות בו זמנית מוטציות מרובות ולכמת את היחסים בין זנים עמידים ורגישים, הוא עתיר עבודה וגוזל זמן, ובכך מגביל את התועלת הקלינית שלו33,34. לעומת זאת, pyrosequencing מספק הערכה מדויקת יותר של וריאציות רצף ה-DNA על ידי זיהוי שחרור פירופוספט במהלך שילוב נוקלאוטיד. שיטה זו יכולה לזהות זני MRMPI ולכמת את היחס בין זנים עמידים ורגישים בדגימות קליניות בדיוק רב יותר מאשר ריצוף סנגר. בנוסף, pyrosequencing מאפשר ניטור אורך של מטופלים בודדים, ומאפשר הערכה בזמן אמת של התפתחות עמידות ומידע על שינויים בטיפול33. עם זאת, היישום הקליני שלו מוגבל על ידי הצורך במכשירים מיוחדים, כוח אדם מיומן ומשכי עיבוד ממושכים.

בהתבסס על ניתוח פולימורפיזם באורך שבר הגבלה (RFLP) של הגן P1, Mp מסווג לשני סוגים: סוג I (מחולק עוד יותר לחמישה תת-סוגים: 1a-1e) וסוג II (מחולק עוד יותר לשלושה תת-סוגים: 2a-2c). בדיקה זו יכולה לזהות 8 תת-סוגים של גנים של Mycoplasma pneumoniae35. שיטה זו מקלה על זיהוי איכותי של מיקופלזמה פנאומוניה ומוטציות עמידות למקרולידים (23S rRNA 2063 (A:G) ו-2064 (A:G) בדגימות כיח ילדים, ומספקת מכשיר אבחון משלים מהיר ופשוט לזיהומי מיקופלזמה ומעקב אחר עמידות לאנטיביוטיקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל פרוטוקולי המחקר נבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים העממי Heyuan (אישור מס. YXYJLL-LW2025001). כל המטופלים סיפקו הסכמה מדעת בכתב לפני ההשתתפות.

1. איסוף דגימות

הערה: היזהר בשמירה על טכניקה אספטית במהלך איסוף הדגימה.

  1. אסוף דגימות ליחה של המטופל או המטופל החשוד. השג דגימות תוך 3 ימים מתחילת המחלה של המטופל.
  2. הנחו את המטופל לשטוף את פיו במים, לנשום עמוק, לשמור על נשימתו למשך 5 שניות ולנשוף בהדרגה.
  3. בקשו מהמטופל לנשוף עמוק פעם נוספת, נסו להוציא את הליחה, להפקיד אותה בכוס פלסטיק ייעודית ולהדק את המכסה. יש להעביר את הליחה מיד למעבדה הקלינית בטמפרטורת החדר (RT). אחסן את הדגימות בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס במקרר.

2. הכנת ריאגנטים להגברה

  1. באזור הכנת הריאגנטים של מעבדת ה-PCR, יש להפשיר את המאגר, בדיקת הפריימר והמים מהערכה ב-4 מעלות צלזיוס לאחר הוצאתם מהמקפיא של -20 מעלות צלזיוס. הסר את האנזים, ערבב אותו בעדינות על ידי ניעור, ולאחר מכן צנטריפוגה ב-1,006 x גרם למשך 10 שניות.
  2. אחזר צינור צנטריפוגה סטרילי נטול נוקלאז, סמן אותו והכן את מערכת התגובה עבור כל פרט כמתואר בטבלה 1. המספר הכולל של תגובות PCR חייב להיות שווה לסכום הדגימות, בקרת איכות חיובית חלשה אחת, מוצר בקרת איכות אחד W ובקרת מיצוי שלילית אחת.
  3. קבעו את הכמות של כל ריאגנט, שלבו אותו בצינור צנטריפוגה בגודל מתאים, ערבבו היטב וצנטריפוגה לזמן קצר במהירות נמוכה. הוצא 20 מיקרוליטר של מגיב לכל צינור תגובת PCR והעביר אותו לאזור עיבוד הדגימה.

3. טיפול לדוגמא

  1. טפל ב-1 מ"ל של דגימות ליחה עם 2 מ"ל של מאגר עיכול ליחה, מערבולת מעורבבת היטב ודגירה למשך 30 דקות עד להשגת נזילות מלאה.
  2. בהתבסס על כמות הדגימה, הוסף 5 מיקרוליטר של התקן הפנימי ברצף לעמודות 1 ו-7 של צלחת מיצוי חומצות הגרעין, ולאחר מכן תוספת של 200 מיקרוליטר של דגימות נוזליות, מי מלח רגילים ובקרת איכות חיובית חלשה MM ברצף.
  3. אחזר צלחת מיצוי חומצות גרעין באמצעות מכשיר אוטומטי למיצוי חומצות גרעין. הוסף את חומצות הגרעין המופקות לאחר ביצוע בדיקות במורד הזרם בעמודות 6 ו-12 של לוחית המיצוי.
  4. תוספת לדוגמא: באזור הכנת הדגימה של מעבדת ה-PCR, הוסף חומצת גרעין שחולצה לעמודות 6ו-12 של לוחית החילוץ. לאחר מכן, העבירו 5.0 מיקרוליטר של חומצת הגרעין הדגימית המוכנה לצינור תגובת ה-PCR, המכיל את תערובת תגובת ה-PCR (כולל דגימה, בקרת איכות חיובית חזקה וחלשה, בקרת איכות W ובקרת מיצוי שלילית).
  5. אבטח את נוזל צינור התגובה PCR ובצע צנטריפוגה מיידית כדי לאשר שהנוזל אטום כהלכה ונטול בועות.

4. הגברה

  1. הכנס את צינור התגובה לגלאי ה-PCR הקרינה והגדר את פרמטרי המחזור באופן הבא בטבלה 2.
  2. לרכוש אותות פלואורסצנטיים ב-FAM (מוטציה 2063 או 2064 A:G), VIC (Mycoplasma pneumoniae) ו-CY5 (תקן פנימי), עם איסוף נתונים מוגדר ב-64 מעלות צלזיוס.

5. ניתוח נתונים

הערה: מחקר זה השתמש ב-PCR כמותי בזמן אמת (qPCR), עם תוצאות מייצגות המצביעות על מוטציות הקשורות לעמידות ל-A:G במיקומים 2063 או 2064 של Mycoplasma pneumoniae. חולים שנמצאו חיוביים צריכים להימנע מאנטיביוטיקה מקרוליד בטיפול קליני.

  1. לאחר התגובה, המכשיר מנתח ושומר את התוצאות באופן אוטונומי. בדוק שגני המטרה לבקרה שלילית מציגים פלואורסצנטיות FAM Ct ≥ 35.33 ו-VIC fluorescence Ct ≥ 35.01, בעוד שגני המטרה לבקרת איכות W מדגימים פלואורסצנטיות FAM Ct ≥ 35.33 ו-VIC fluorescence Ct ≥ 35.01. ערכי ה-Ct עבור פלואורסצנטיות FAM ו-VIC במוצרי בקרת איכות חיוביים חלשים נעו בין 29.00 ל-34.00.
  2. בדרך כלל, ערך ה- Ct של התקן הפנימי הוא ≤ 35.00. אם נצפתה עקומת הגברה אופיינית של S אך התקן הפנימי אינו מוגבר עקב הריכוז המוגבר של גן המטרה, דווח עליו ישירות כדגימה חיובית, או הערך מחדש את הדגימה באמצעות דילול שיפוע פי 10.
  3. סווג את המדגם המציג UNDECT או היעדר עקומת הגברה טיפוסית מסוג S כשלילי.
  4. דגימות שליליות כאשר פלואורסצנטיות FAM (מוטציה 2063 או 2064 A:G) Ct ≥ 35.33, פלואורסצנציה VIC (Mycoplasma pneumoniae) Ct ≥ 35.01, או כאשר אין עקומת הגברה טיפוסית מסוג S. דגימות Deem חיוביות כאשר ערך ה-Ct שלהן עומד בטבלה 3 ומציגות עקומת הגברה אופיינית מסוג S.
    הערה: התוצאות של זיהוי הדגימות תלויות באיכות איסוף הדגימות, העיבוד, ההובלה והשימור; כל שגיאה עלולה לגרום לתוצאות שליליות כוזבות. אי שליטה בזיהום צולב במהלך עיבוד הדגימה עלול לגרום לתוצאות חיוביות כוזבות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

לאחר נזילות, מיצוי חומצות גרעין והגברת PCR פלואורסצנטית של דגימות כיח, ערך ההתחלה, ערך הסיום וערך הסף של קו הבסיס שונו לאחר ניתוח עקומת ההגברה. ערך ההתחלה היה 3 וערך הסיום היה 20.

התוצאות המייצגות של ניסוי זה היו חיוביות לחומצת גרעין Mp, ומוטציה של עמידות A : G התרחשה ב-2063 או 2064 אתרים, מה שמרמז על זיהום Mp ועמידותו לאנטיביוטיקה מקרוליד.

עקומת ההגברה של בקרת האיכות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

PCR וטכניקות הנגזרות שלו מפגינים רגישות וסגוליות מעולות בהשוואה לשיטות סרולוגיות בזיהוי, הקלדה וזיהוי עמידות לתרופות ב-Mycoplasma pneumoniae (MP). יתר על כן, טכניקות מבוססות PCR מספקות קלות תפעול והפחתת הוצאות, מה שהופך אותן לחלופה בת קיימא לאבחון קליני שגרתי36. Mp הוא פתוגן בולט הקשור ל-CAP ומדגים שכיחות ניכרת37. בחירת אנטיביוטיקה מתאימה יכולה לזרז את ההחלמה ולהפחית את הסבירות לתופעות לוואי. מקרולידים משמשים כטיפול העיקרי בדלק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

הריאגנטים הניסיוניים נתמכים על ידי מעבדת המפתח של Heyuan לאבחון מולקולרי ומניעת מחלות וטיפול, תחנת הרופאים של מחוז גואנגדונג.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מכשיר אוטומטי למיצוי חומצות גרעיןגואנגג'ואו דה אן גן ושות', בע"מסמארט 32
טיפים לסינוןקורינג מדעי החיים ושות', בע"מ298220010-10&מיקרו; L
טיפים לסינוןקורינג מדעי החיים ושות', בע"מ030230011-50 ומיקרו; L
טיפים לסינוןקורינג מדעי החיים ושות', בע"מ056230015-300 ומיקרו; L
מיקרו-צינורותקורינג מדעי החיים ושות', בע"מ141249341.5 מ"ל
Mycoplasma pneumoniae ערכת איתור מוטציות עמידות לתרופות של חומצות גרעין ותרופות (שיטת PCR פלואורסצנטית)ג'יאנגסו שומה ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ20241111
מגיב מיצוי חומצות גרעיניות (שיטת חרוזים מגנטיים)Shengxiang ביוטכנולוגיה ושות', בע"מG24004
צינורות PCRDN Biotech (הונג קונג)  ושות', בע"מ61210030.2 מ"ל
מכשיר PCR פלואורסצנטי בזמן אמתביו-ראדCFX96

מקורות

  1. Waites, K. B., Xiao, L., Liu, Y., Balish, M. F., Atkinson, T. P. Mycoplasma pneumoniae from the Respiratory Tract and Beyond. Clin Microbiol Rev. 30 (3), 747-809 (2017).
  2. Leal, S. M., et al. Evaluation of Commercial Molecular Diagnostic Methods for Detection and Determination of Macrolide Resistance in Mycoplasma pneumoniae. J Clin Microbiol. 58 (6), e00242-e00320 (2020).
  3. Lu, A., Wang, L., Zhang, X., Zhang, M. Combined treatment for child refractory Mycoplasma pneumoniae pneumonia with ciprofloxacin and glucocorticoid. Pediatr Pulmonol. 46 (11), 1093-1097 (2011).
  4. Li, Z. W., et al. Mycoplasma pneumoniae infection and drug resistance in children in Meizhou area from 2010 to 2014. Chinese J Zoonoses. 32 (3), 306-311 (2016).
  5. Ishiguro, N., et al. Therapeutic efficacy of azithromycin, clarithromycin, minocycline and tosufloxacin against macrolide-resistant and macrolide-sensitive Mycoplasma pneumoniae pneumonia in pediatric patients. PLoS One. 12 (3), e0173635(2017).
  6. Kashyap, S., Sarkar, M. Mycoplasma pneumonia: Clinical features and management. Lung India. 27 (2), 75-85 (2010).
  7. Miyashita, N., et al. Diagnostic sensitivity of a rapid antigen test for the detection of Mycoplasma pneumoniae: Comparison with real-time PCR. J Infect Chemother. 21 (6), 473-475 (2015).
  8. de Groot, R. C. A., et al. Mycoplasma pneumoniae carriage evades induction of protective mucosal antibodies. Eur Respir J. 59 (4), 2100129(2022).
  9. Rogozinski, L. E., Alverson, B. K., Biondi, E. A. Diagnosis and treatment of Mycoplasma pneumoniae in children. Minerva Pediatr. 69 (2), 156-160 (2017).
  10. Messous, S., et al. Prevalence of Chlamydophila pneumoniae and Mycoplasma pneumoniae IgM and IgG antibodies in Tunisian patients presenting with exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease. Med Mal Infect. 47 (2), 158-163 (2017).
  11. Li, Q. Z., Shi, W. Y., Chen, H. L. Research progress on laboratory detection technology of Mycoplasma pneumoniae. Chinese J Zoonoses. 33 (09), 841-844 (2017).
  12. Li, C., et al. Comparison of PCR and RT-PCR detection of Mycoplasma pneumoniae in throat swab specimens. Chinese J Zoonoses. 28 (2), 127-130 (2012).
  13. Taylor, S. C., et al. The Ultimate qPCR Experiment: Producing Publication Quality, Reproducible Data the First Time. Trends Biotechnol. 37 (7), 761-774 (2019).
  14. Waites, K. B., Talkington, D. F. Mycoplasma pneumoniae and its role as a human pathogen. Clin Microbiol Rev. 17 (4), 697-728 (2004).
  15. Cao, B., Qu, J. X., Yin, Y. D., Eldere, J. V. Overview of antimicrobial options for Mycoplasma pneumoniae: focus on macrolide resistance. Clin Respir J. 11 (4), 419-429 (2017).
  16. Liu, X., et al. Drug resistance mechanisms of Mycoplasma pneumoniae to macrolide antibiotics. Biomed Res Int. 2014, 320801(2014).
  17. Ye, Y., Li, S., Li, Y., Ren, T., Liu, K. Mycoplasma pneumoniae 23S rRNA Gene Mutations and Mechanisms of Macrolide Resistance. Lab Med. 44 (1), 63-68 (2013).
  18. Xue, G., et al. Comparison of the molecular characteristics of Mycoplasma pneumoniae from children across different regions of China. PLoS One. 13 (8), e0198557(2018).
  19. Pereyre, S., et al. The increased incidence of Mycoplasma pneumoniae in France in 2011 was polyclonal, mainly involving M. pneumoniae type 1 strains. Clin Microbiol Infect. 19 (4), E212-E217 (2013).
  20. Dumke, R., von Baum, H., Lück, P. C., Jacobs, E. Occurrence of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae strains in Germany. Clin Microbiol Infect. 16 (6), 613-616 (2010).
  21. Yamada, M., Buller, R., Bledsoe, S., Storch, G. A. Rising rates of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae in the central United States. Pediatr Infect Dis J. 31 (4), 409-500 (2012).
  22. Uldum, S. A., et al. Epidemic of Mycoplasma pneumoniae infection in in Denmark, 2010 and 2011. Euro Surveill. 17 (5), 20073(2010).
  23. Eshaghi, A., et al. Macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae in humans, Ontario, Canada, 2010-2011. Emerg Infect Dis. 19 (9), 1525-1527 (2013).
  24. Loconsole, D., et al. First Description of Macrolide-Resistant Mycoplasma pneumoniae in Adults with Community-Acquired Pneumonia in Italy. Biomed Res Int. 2019, 7168949(2019).
  25. Pereyre, S., et al. The spread of Mycoplasma pneumoniae is polyclonal in both an endemic setting in France and in an epidemic setting in Israel. PLoS One. 7 (6), e38585(2012).
  26. Rivaya, B., et al. Macrolide resistance and molecular typing of Mycoplasma pneumoniae infections during a 4 year period in Spain. J Antimicrob Chemother. 75 (10), 2752-2759 (2020).
  27. Brown, R. J., Macfarlane-Smith, L., Phillips, S., Chalker, V. J. Detection of macrolide resistant Mycoplasma pneumoniae in England, September 2014 to September 2015. Euro Surveill. 20 (48), 30078(2015).
  28. Suzuki, Y., et al. Gene Mutations Associated with Macrolide-resistance and p1 Gene Typing of Mycoplasma pneumoniae Isolated in Yamagata, Japan, between 2004 and 2013. Kansenshogaku Zasshi. 89 (1), 16-22 (2015).
  29. Kawai, Y., et al. Nationwide surveillance of macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae infection in pediatric patients. Antimicrob Agents Chemother. 57 (8), 4046-4049 (2013).
  30. Yun, Y. E., et al. Analysis on Mycoplasma pneumonia 23SrRNA gene mutation site and drug resistance phenotype. Lab Med. 28 (1), 11-16 (2013).
  31. Morozumi, M., Takahashi, T., Ubukata, K. Macrolide-resistant Mycoplasma pneumoniae: characteristics of isolates and clinical aspects of community-acquired pneumonia. J Infect Chemother. 16 (2), 78-86 (2010).
  32. Waites, K. B., et al. Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing for Human Mycoplasmas; Approved Guideline. , Wayne (PA): Clinical and Laboratory Standards Institute. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK544375/ (2011).
  33. Waites, K. B., Xiao, L., Liu, Y., Balish, M. F., Atkinson, T. P. Mycoplasma pneumoniae from the Respiratory Tract and Beyond. Clin Microbiol Rev. 30 (3), 747-809 (2017).
  34. Diaz, M. H., Winchell, J. M. The Evolution of Advanced Molecular Diagnostics for the Detection and Characterization of Mycoplasma pneumoniae. Front Microbiol. 7, 232(2016).
  35. Dorigo-Zetsma, J. W., Dankert, J., Zaat, S. A. Genotyping of Mycoplasma pneumoniae clinical isolates reveals eight P1 subtypes within two genomic groups. J Clin Microbiol. 38 (3), 965-970 (2000).
  36. Guo, Y., et al. Research progress on drug resistance mechanism of Mycoplasma pneumoniae. Chinese J Nosocomial Infect. 26 (20), 4782-4784 (2016).
  37. Zhang, W., Wang, Y., Cai, L. J. Mutation analysis and clinical significance of multidrug resistance gene loci in children with Mycoplasma pneumoniae. Chinese J Cont Pediat. 26 (11), 1176-1181 (2024).
  38. Pereyre, S., Goret, J., Bébéar, C. Mycoplasma pneumoniae: Current Knowledge on Macrolide Resistance and Treatment. Front Microbiol. 7, 974(2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

גנים לעמידות לתרופותגילוי חומצות גרעיניותבדיקות ביולוגיה מולקולריתעמידות למקרולידיםתגובת שרשרת פולימראזגשוש פלואורסצנטידלקת ריאות שנרכשה בקהילהגילוי נוגדניםאתרי מוטציה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.