איתור חומצת גרעין Mycoplasma pneumoniae וגן עמידות לתרופות

סיכום

פרוטוקול זה מספק דרך מהירה ואמינה לזהות זיהומים במיקופלזמה פנאומוניה ולזהות עמידות לאנטיביוטיקה. זה עוזר למטפלים לבחור את הטיפולים הנכונים מהר יותר, משפר את הטיפול בחולים עם דלקת ריאות ותומך בשימוש טוב יותר באנטיביוטיקה

תקציר

מיקופלזמה פנאומוניה (Mp) מייצגת את אחד הפתוגנים השכיחים ביותר האחראים לדלקת ריאות נרכשת בקהילה (CAP) באוכלוסיות ילדים. איתור גנים עמידים ל-Mycoplasma pneumoniae מספק תמיכה טכנית חזקה ובסיס תיאורטי לאבחון קליני מדויק וטיפול בזיהומי MP. אבחון מדויק והערכה של עמידות לתרופות בזיהום Mp חיוניים לטיפול קליני. שיטות זיהוי נפוצות של מיקופלזמה פנאומוניה כוללות תרבית, זיהוי נוגדנים ובדיקות מבוססות ביולוגיה מולקולרית. תרבית MP היא תקן הזהב לאבחון אך דורשת מדיום ספציפי, גוזלת זמן ובעלת רגישות נמוכה. זיהוי מבוסס נוגדנים של Mp נמצא בשימוש נרחב; עם זאת, שליליות כוזבות עלולות להתרחש בשלב מוקדם של ההדבקה. זיהוי מבוסס ביולוגיה מולקולרית מספק תפנית מהירה, סיכון נמוך לזיהום, רגישות גבוהה, ספציפיות גבוהה, ואינו מוגבל על ידי עיתוי איסוף הדגימות או המצב החיסוני. לכן הוא הוכר כתקן זהב חדש לאבחון זיהום Mycoplasma pneumoniae . סוכני מקרוליד הם הטיפול הראשון לזיהום Mp בילדים. עם זאת, עם השימוש הנרחב במקרולידים בזיהומים בדרכי הנשימה בילדים, השכיחות של זיהום Mycoplasma pneumoniae עמיד לתרופות עולה. חולים שנדבקו בזנים עמידים חווים משך חום ארוך משמעותית, אשפוז ממושך וחום ממושך לאחר מתן בהשוואה לאלו שנדבקו בזנים רגישים. אתרי המוטציות שזוהו עד כה כוללים 2063, 2064, 2067 ו-2617. בסין, מוטציות נקודתיות תועדו רק במיקומים 2063 ו-2064, כאשר החלפת A-to-G בעמדה 2063 היא הנפוצה ביותר. עבור אתרים אלה, נעשה שימוש בתגובת שרשרת פולימראז (PCR) בשילוב עם טכנולוגיית בדיקה פלואורסצנטית כדי לזהות את חומצות הגרעין ומוטציות העמידות לתרופות של Mycoplasma pneumoniae בדגימות ליחה אנושיות. זיהוי גנים עמידים ל-Mycoplasma pneumoniae מציע תמיכה טכנית חיונית ובסיס תיאורטי לאבחון מדויק וטיפול יעיל בזיהום Mp.

מבוא

Mycoplasma pneumoniae (Mp) הוא המיקרואורגניזם הפתוגני הקטן ביותר המסוגל לשרוד באופן עצמאי, הממוקם בעמדת ביניים בין חיידקים לנגיפים. הוא מופץ בעיקר על ידי טיפות נשימה או אירוסולים ומהווה את הפתוגן השני בשכיחותו הקשור לדלקת ריאות נרכשת בקהילה (CAP) בילדים¹, האחראי ל-20% עד 40% ממקרי CAP². Mp מראה עמידות מובנית לאנטיביוטיקה β-לקטם, כגון פניצילין וצפלוספורינים, בשל היעדר דופן תא, שאנטיביוטיקות אלה מכוונות אליה על ידי חסימת סינתזת דופן התא. שיטות הטיפול העיקריות בזיהומי Mp כוללות חומרים החוסמים סינתזת חלבונים, כולל מקרולידים וטטרציקלינים, לצד תרופות המעכבות את שכפול ה-DNA, כגון טטרצי....

פרוטוקול

כל פרוטוקולי המחקר נבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים העממי Heyuan (אישור מס. YXYJLL-LW2025001). כל המטופלים סיפקו הסכמה מדעת בכתב לפני ההשתתפות.

1. איסוף דגימות

הערה: היזהר בשמירה על טכניקה אספטית במהלך איסוף הדגימה.

1. אסוף דגימות ליחה של המטופל או המטופל החשוד. השג דגימות תוך 3 ימים מתחילת המחלה של המטופל.
2. הנחו את המטופל לשטוף את פיו במים, לנשום עמוק, לשמור על נשימתו למשך 5 שניות ולנשוף בהדרגה.
3. בקשו מהמטופל לנשוף עמוק פעם נוספת, נסו להוציא את הליחה, להפקיד אותה בכוס פלסטיק ייעודית ולהדק את המכסה. יש להעביר את הליחה מיד למעבדה הקל....

תוצאות

לאחר נזילות, מיצוי חומצות גרעין והגברת PCR פלואורסצנטית של דגימות כיח, ערך ההתחלה, ערך הסיום וערך הסף של קו הבסיס שונו לאחר ניתוח עקומת ההגברה. ערך ההתחלה היה 3 וערך הסיום היה 20.

התוצאות המייצגות של ניסוי זה היו חיוביות לחומצת גרעין Mp, ומוטציה של עמידות A : G התרחשה ב-2063 או 2064 אתרים, מה שמרמז על זיהום Mp ועמידותו לאנטיביוטיקה מקרוליד.

עקומת ההגברה של בקרת האיכות .......

דיון

PCR וטכניקות הנגזרות שלו מפגינים רגישות וסגוליות מעולות בהשוואה לשיטות סרולוגיות בזיהוי, הקלדה וזיהוי עמידות לתרופות ב-Mycoplasma pneumoniae (MP). יתר על כן, טכניקות מבוססות PCR מספקות קלות תפעול והפחתת הוצאות, מה שהופך אותן לחלופה בת קיימא לאבחון קליני שגרתי³⁶. Mp הוא פתוגן בולט הקשור ל-CAP ומדגים שכיחות ניכרת³⁷. בחירת אנטיביוטיקה מתאימה יכולה לזרז את ההחלמה ולהפחית את הסבירות לתופעות לוואי. מקרולידים משמשים כטיפול העיקרי בדלק.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מכשיר אוטומטי למיצוי חומצות גרעין	גואנגג'ואו דה אן גן ושות', בע"מ	סמארט 32
טיפים לסינון	קורינג מדעי החיים ושות', בע"מ	29822001	0-10&מיקרו; L
טיפים לסינון	קורינג מדעי החיים ושות', בע"מ	03023001	1-50 ומיקרו; L
טיפים לסינון	קורינג מדעי החיים ושות', בע"מ	05623001	5-300 ומיקרו; L
מיקרו-צינורות	קורינג מדעי החיים ושות', בע"מ	14124934	1.5 מ"ל
Mycoplasma pneumoniae ערכת איתור מוטציות עמידות לתרופות של חומצות גרעין ותרופות (שיטת PCR פלואורסצנטית)	ג'יאנגסו שומה ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ	20241111
מגיב מיצוי חומצות גרעיניות (שיטת חרוזים מגנטיים)	Shengxiang ביוטכנולוגיה ושות', בע"מ	G24004
צינורות PCR	DN Biotech (הונג קונג)  ושות', בע"מ	6121003	0.2 מ"ל
מכשיר PCR פלואורסצנטי בזמן אמת	ביו-ראד	CFX96