מאמר שיטה

זרימת עבודה אופטימלית לבידוד ותרבית ארוכת טווח של תאי גליומה שמקורם בחולה תוך שמירה על מאפייני הגידול המקוריים

DOI:

10.3791/68566

⸱

8 ביולי 2025

 , 
1Beijing Institute for Brain Research, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, 2Chinese Institute for Brain Research

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מציג פרוטוקול סטנדרטי לביסוס קווי תאי גליומה שמקורם בחולה (PDGCs), המבטיח את נאמנותם הגנטית והפנוטיפית. מערכת התרבית הדביקה בסיוע תמצית ממברנת הבסיס משפרת את צמיחת התאים וההומוגניות, מה שהופך את המודלים הללו לבעלי ערך עבור סינון תרופות ומחקר GBM.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גליובלסטומה (GBM) הוא גידול המוח הראשוני האגרסיבי ביותר, המאופיין בהטרוגניות גבוהה ועמידות לטיפולים סטנדרטיים. קווי תאי גליומה מסורתיים לרוב אינם מצליחים לשמור על מאפיינים גנטיים ופנוטיפיים ספציפיים למטופל, מה שמגביל את הרלוונטיות התרגומית שלהם. כדי לטפל בכך, הקמנו 50 קווי תאי גליומה שמקורם בחולה (PDGCs) באמצעות מערכת תרבית תאי גזע עצביים ללא סרום. פרוטוקול זה מתאר את האיסוף, העיבוד והתרבות ארוכת הטווח של דגימות גידול המתקבלות מחולי GBM, ומבטיח שימור של תכונות מולקולריות מרכזיות. המתודולוגיה שלנו כוללת דיסוציאציה אנזימטית של רקמות, ליזה של תאי דם אדומים ותרבית דבקה בסיוע תמצית מטריצת קרום בסיס, המשפרת את כדאיות התאים ומאפשרת סינון תרופות בתפוקה גבוהה. אפיון PDGCs באמצעות ריצוף גנום שלם וטרנסקריפטומי וצביעה אימונופלואורסצנטית מאשר את שימורם של שינויים גנטיים נפוצים ב-GBM וסמני תאי גזע עצביים ואבות. בנוסף, תאים אלה מציגים פוטנציאל גידולי במודלים של קסנוגרפטים. על ידי אופטימיזציה של תנאי התרבית, פרוטוקול זה מספק מסגרת סטנדרטית ליצירת מודלים רלוונטיים ביולוגית של GBM לתמיכה בגילוי טיפולי ומחקרים מכניסטיים.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גליומה, הגידול התוך גולגולתי הראשוני הנפוץ ביותר, מקורו בתאי גזע עצביים או אב שעברו מוטציות גנטיות1. ארגון הבריאות העולמי מסווג גליומות לדרגות 1-4 על סמך מאפיינים פתולוגיים ומולקולריים, החל מדרגה נמוכה ועד דרגהגבוהה 2. גליובלסטומה (GBM), גליומה בדרגה 4, מייצגת כ-57% מכלל הגליומות ו-48% מכלל הגידולים הממאירים הראשוניים במערכת העצבים המרכזית3. חולי GBM מתמודדים עם פרוגנוזה גרועה, עם זמן הישרדות חציוני של פחות משנתיים ושיעור הישרדות של 5 שנים של 5.4% בלבד4. הטיפול הסטנדרטי כולל כריתה בטוחה מקסימלית ואחריה הקרנות וכימותרפיה טמוזולומיד5. למרות התערבויות אלה, GBM נותר חשוך מרפא בשל אופיו החודרני ועמידותו המובנית לטיפולים, מה שיוצר צורך דחוף בגישות טיפול חדשות.

חוקרים משתמשים בדרך כלל בשורות תאי גידול שמקורם בבני אדם כמודלים לחקר התפתחות סרטן ומנגנונים טיפוליים. עם זאת, קווי תאי גליומה קלאסיים הנשמרים במדיום המכיל סרום ועוברים בהרחבה במבחנה מציגים שינויים משמעותיים במאפיינים הפנוטיפיים ובפרופילים הגנטיים בהשוואה לגידולים של חולים 6,7,8. כתוצאה מכך, מודלים של סינון פרה-קליני המבוססים על קווי תאים אלה לרוב אינם מצליחים לזהות מטרות טיפוליות ומולקולות המתורגמות ביעילות למסגרות קליניות. הצלחת הטיפול ב-GBM מסובכת עוד יותר על ידי הטרוגניות ופלסטיות של הגידול9. הטרוגניות זו מתבטאת לא רק בתת-סוגים טרנסקריפטומיים (למשל, פרונורליים, מזנכימליים) אלא גם במצבי ההתפתחות המגוונים של תאים מרכיבים10. GBM משתמש במנגנונים נוירו-התפתחותיים ומכיל תת-אוכלוסיות של תאי גזע גליובלסטומה (GSC) המניעים את התפשטות הגידול ומציגים עמידות משופרת לרדיותרפיהוכימותרפיה 11,12. תרבית תאי גליומה שמקורם בחולה במדיום תאי גזע עצביים נטולי סרום משמרת ביעילות את ספקטרום המוטציות ודפוסי ביטוי הגנים של הגידול המקורי תוך שמירה על מאפייני GSC חלקיים8.

בהשוואה למודלים של תרביות נוירוספרה, תרבית דבקה בסיוע תמצית מטריצת קרום מרתף מקדמת צמיחת תאים יציבה ומהירה יותר, מה שהופך אותה למתאימה יותר להקרנה כימית וגנטית13. באמצעות גישה זו, הקמנו 50 קווי תאי GBM שמקורם בחולים ואפיינו אותם באמצעות ריצוף גנום שלם, ריצוף טרנסקריפטומי וסינון ספריית תרופות של ה-FDA כדי לחקור אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות. משאב זה מקדם את מחקר הגליומה, עם תוצאות מפורטות שפורסמו במחקרים הקודמים שלנו14. כאן, אנו מתארים את המתודולוגיה המשמשת לפיתוח קווי תאי גליומה שמקורם בחולה (PDGCs).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרוטוקול זה משתמש ברקמת גליומה שמקורה בחולה ודגימות דם שהושגו באמצעות שיתופי פעולה עם בתי חולים. כל הליכי הדגימה והפרוטוקולים הניסויים קיבלו אישור מוועדת האתיקה של בית החולים בייג'ינג טיאנטאן, האוניברסיטה הרפואית של הבירה (KY 2020-093-02 ו-KY 2014-021-02). המטופלים מספקים הסכמה מדעת חתומה לפני הניתוח, וכל פרטי הזהות עוברים אנונימיזציה לפני העברת הדגימות למעבדה. על החוקרים לקבל אישור מוועדת האתיקה המוסדית שלהם ולקבל את הסכמת המטופל לפני יישום פרוטוקול זה.

1. הכנה לפני עיבוד הדגימה

  1. עקר מספריים, פינצטה ומכשירים אחרים על ידי חיטוי.
  2. הכן מדיום תרבית PDGC על ידי שילוב של 47.5 מ"ל של DMEM/F12, 500 מיקרוליטר של N2, 1 מ"ל של B27, 500 מיקרוליטר של 100x פניצילין/סטרפטומיצין, 250 מיקרוליטר של תחליף גלוטמין 100x, 100 מיקרוליטר של 2.5 M HEPES, 100 מיקרוליטר של 30% גלוקוז, 50 מיקרוליטר של 50 מ"מ β-מרקפטואתנול, 1.5 מ"ל של 1 מיקרוגרם/מ"ל גורם גדילה אפידרמלי (EGF), ו-1.5 מ"ל של גורם גדילה פיברובלסטים בסיסי (bFGF) של 1 מיקרוגרם/מ"ל.
  3. הכן 1x מאגר ליזה של תאי דם אדומים (ACK) על ידי המסת 8.29 גרם אמוניום כלוריד, 1 גרם אשלגן ביקרבונט ו-37 מ"ג EDTA במים, ולאחר מכן דילול ל-1 ליטר.
  4. הנח מכשירים מעוקרים, מאגר PBS, מיכלי פסולת, צינורות צנטריפוגה ואספקה אחרת בארון בטיחות ביולוגית ובצע חיטוי UV למשך 30 דקות.
  5. מניחים חנקן נוזלי בכלי מבודד.

2. איסוף דגימות מטופלים

הערה: בצע את כל הליכי איסוף הרקמות בתנאים סטריליים מחמירים כדי למנוע זיהום חיידקי של תרביות תאים עוקבות. שמור על טכניקה אספטית לאורך כל זרימת העבודה.

  1. לאסוף דגימות דם לפני הניתוח ולהוציא רקמת גידול ממוחו של המטופל. עבור גידולים גדולים וחודרים מאוד שבהם קשה להבחין בין הגידול לרקמה הנורמלית הסובבת, מקסם את כריתת הרקמה הפריטומלית תוך שמירה על אזורי מוח תפקודיים קריטיים. הפרד כ-500-2,000 מ"מ3 מרקמת ליבת הגידול והנח בצינורות צנטריפוגה של 15 מ"ל המכילים 10 מ"ל של מדיום שימור היפותרמי.
  2. אטמו את צינורות הדגימה, הניחו אותם בקופסת קרח והעבירו אותם במהירות למעבדה לעיבוד.
    הערה: ודא שהמרווח בין איסוף הדגימה לעיבוד אינו עולה על 6 שעות ב-4 מעלות צלזיוס. במהלך איסוף הדגימה, אל תכלול בזהירות רקמות שרופות ואזורים של נמק גידול. פני השטח של חתכי רקמות נחרכים לעתים קרובות על ידי הסכין החשמלית המשמשת במהלך הניתוח, מה שעלול לפגוע בכדאיות התאים בתרבית.

3. עיבוד דגימות דם

  1. צינורות דגימת דם צנטריפוגה ב-1,000 × גרם למשך 10 דקות והשליכו את שכבת הפלזמה העליונה.
  2. העבירו את שארית תאי הדם הלבנים ושכבת תאי הדם האדומים לצינור צנטריפוגה של 50 מ"ל. יש להוסיף 10 מ"ל של 1x ACK ולדגור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי ליז כדוריות דם אדומות.
  3. הוסף 40 מ"ל PBS כדי לסיים את הליזיס, לערבב בעדינות וצנטריפוגה ב-1,000 × גרם למשך 10 דקות.
  4. השליכו את הסופרנטנט, הוסיפו 3 מ"ל של 1x ACK, ודגרו בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות לשלב ליזה שני של כדוריות דם אדומות.
  5. הוסף 12 מ"ל PBS כדי לסיים את הליזיס, לערבב בעדינות וצנטריפוגה ב-1,000 × גרם למשך 10 דקות.
  6. השליכו את הסופרנטנט, השעו מחדש את כדור התא החד-גרעיני של הדם ההיקפי (PBMC) ב-1 מ"ל של PBS, העבירו לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל וצנטריפוגה ב-510 × גרם למשך 10 דקות.
  7. השליכו את הסופרנטנט, הקפיאו את כדור ה-PBMC בחנקן נוזלי ואחסנו בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס.

4. עיבוד רקמת גידול

  1. הסר את תמיסת שימור הרקמות מצינור הדגימה ושטוף את הרקמה ב-PBS כדי להסיר קרישי דם גלויים ורקמה נמקית. בצע שטיפת PBS שנייה על הרקמה שנותרה.
  2. גזרו את חלק הרקמה השלם ביותר וקבעו למשך הלילה ב-4% פרפורמלדהיד (PFA) ב-4 מעלות צלזיוס.
    הערה: גודל הרקמה הקבועה הוא כ-10 מ"מ. דלג על שלב זה אם המדגם קטן.
  3. חותכים 2-4 חתיכות רקמה קטנות, מעבירים לצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל, מקפיאים בחנקן נוזלי ומאחסנים בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס.
    הערה: גודלם של חלקי רקמה קטנים נע בדרך כלל בין 5 ל-10 מ"מ, תלוי בכמות ה-DNA וה-RNA הנדרשת לריצוף.
  4. מניחים את רקמת הגידול הנותרת בצינור צנטריפוגה של 1.5 מ"ל וטוחנים לעיסה דקה בעזרת מספריים תוך שמירה על קרח.
  5. הוסף 1-3 מ"ל של תמיסת ניתוק תאים והעביר את הרקמה הטחונה לצינור העיכול. עכל את הרקמה באמצעות דיסוציאטור רקמות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 16 דקות.
  6. הוסף פי 3 נפח PBS כדי לעצור את העיכול ולהעביר את תרחיף התאים לצינור צנטריפוגה עם מסננת תאים של 70 מיקרומטר. טוחנים בעדינות את הרקמה דרך המסננת בעזרת מוט קטן כדי למקסם את איסוף התאים. צנטריפוגה בחום של 510 × גרם למשך 10 דקות והסר את הסופרנטנט.
  7. הוסף 1-3 מ"ל של 1x ACK ודגירה בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי ליז כדוריות דם אדומות. הוסף פי 4 נפח PBS כדי לעצור את הליזה, ערבב בעדינות וצנטריפוגה ב-510 × גרם למשך 10 דקות כדי להסיר את הסופרנטנט.
  8. השעיה מחדש של תאים במדיום PDGC וחלק זרעים של תרחיף התאים בצלחות תרבית. מניחים את הצלחות בחממה היפוקסית של 37 מעלות צלזיוס. הקפיאו את התאים הנותרים במדיום תרבית המכיל 10% DMSO.
    הערה: בדרך כלל, עבור דגימות רקמה בגודל של כ-10-20 מ"מ, אנו זורעים כ-1/3 עד 1/10 מתרחיף התא לתוך צלחת של 6 ס"מ עם 3 מ"ל של מדיום תרבית, והתאים הנותרים נשמרים בהקפאה ב-2-4 בקבוקונים, תלוי בתפוקת התאים.
  9. מצפים צלחות על ידי הוספת תמצית מטריצת קרום מרתף ל-PBS קר כקרח ביחס של 1:100 ודגירה של צלחות בטמפרטורת החדר על חממה רועדת למשך שעתיים. השלך את ה-PBS לפני הוספת מדיום תרבית PDGC.
    הערה: בצע את כל מעבר התאים והתרבית הבאים באמצעות לוחות מצופים תמצית מטריצת קרום מרתף.
  10. לאחר יומיים, העבירו את התאים המתורבתים לצלחות מצופות תמצית מטריצת קרום הבסיס כדי לאפשר הידבקות וצמיחה של תאים.

5. תרבית תאים ומעבר

  1. לאחר שהתאים נצמדים לצלחות התרבית, הסר תאים שאינם נדבקים והחלף או השלם מדיום תרבית כל 2-3 ימים.
    הערה: יכולת ההדבקה משתנה בין תאים שונים. גם בנוכחות תמצית מטריצת קרום המרתף, חלק קטן מהתאים עשוי להישאר לא דבק, כגון BNI7-11, הדורש תרבית מתלה רציפה. בנוסף, חלק מהתאים מציגים דפוס גדילה דביק למחצה, כגון BNI20. לכן, התבוננות מדוקדקת במצב התא היא חיונית. עבור תאים שאינם דבקים, ניתן לציין עלייה בתאים תלויים. אם אגרגטי התאים מופיעים כמבנים כהים דמויי כותנה ואינם מראים שינויים משמעותיים לאורך זמן, הם בדרך כלל אינם מסוגלים להתרחב לטווח ארוך.
  2. כאשר תאים מגיעים למפגש, הוסף תמיסת דיסוציאציה של תאים כדי לנתק את התאים. סיים את הדיסוציאציה עם 3x PBS וצנטריפוגה ב-250 × גרם למשך 3 דקות. העברת התאים ביחס של 1:2 עד 1:4. הקפיאו את התאים הנותרים במדיום תרבית המכיל 10% DMSO.
  3. המשך לעבור לפחות 10-20 דורות כדי ליצור קו תאים יציב.
    1. תעד מורפולוגיה של תאים עם תמונות במהלך כל קטע ורשום מספרי מעברים. סמן בבירור את הקפאת התא הראשונית עם מידע מפורט (למשל, מספרי מעבר).
    2. לאחר שקו התאים מתייצב, אסוף 2-3 צינורות של כדורי תאים (300,000-1,000,000 תאים / צינור) ואחסן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס.

6. פעולות ניסוי עוקבות

  1. עבור דגימות קבועות PFA, לאחר קיבוע לילה, ייבשו דגימות באמצעות סדרה מדורגת של תמיסות אתנול על ידי טבילה רציפה ב-60% אתנול, 70% אתנול, 80% אתנול, 90% אתנול, 95% אתנול ושני שינויים של 100% אתנול, כל אחד למשך 40 דקות. לאחר מכן, נקה את הדגימות בשני שינויים של קסילן, כל אחד למשך 40 דקות, ולאחר מכן הסתנן עם שני שינויים של תמיסת פרפין, כל אחד למשך 40 דקות. לבסוף, הטמיעו את הדגימות המיובשות והמוחדרות בגושי פרפין לצורך חתך וצביעה לאחר מכן15.
  2. עבור כדורי PBMC, רקמת גידול או דגימות תאי גידול המאוחסנות ב-80 מעלות צלזיוס, חלץ DNA ו-RNA למחקרי אומיקס שונים, כולל ריצוף גנום שלם, ריצוף אקסום, ריצוף RNA בתפזורת וריצוף RNA של תא בודד לפי הצורך.
  3. השתמש בקווי תאי PDGC יציבים להקמת מודל קסנוגרפט של עכברים, סינון תרופות בתפוקה גבוהה, מחקר מנגנונים וניסויים קשורים אחרים.
    1. כדי לבסס את מודל הקסנוגרפט האורתוטופי התוך-גולגולתי של PDGCs, יש לפרק ולספור את התאים, ואז להשעות אותם מחדש בתערובת של 1:1 של תמצית מטריצת ממברנת הבסיס ו-PBS קר כקרח לריכוז סופי של 100,000 תאים/מיקרוליטר. הגדר את קואורדינטות ההזרקה ביחס לברגמה באופן הבא: +0.5 מ"מ קדמי-אחורי (AP), -1.9 מ"מ מדיאלי-צדדי (ML) ו-3.6 מ"מ גבי-גחון (DV).
    2. ליצור PDGCs המבטאים לוציפראז ולהקים קסנוגרפטים תוך גולגולתיים להדמיה ביולומינסנציה של צמיחת הגידול.
      1. ארוז את הגן המדווח luciferase-tdTomato לחלקיקים לנטי-ויראליים, ולאחר מכן הדביק PDGCs ב-lentivirus הארוז כדי ליצור ביטוי יציב16.
      2. לאחר ההדבקה, מיין תאים חיוביים לעגבניות לפי ציטומטריית זרימה כדי לקבל אוכלוסיית תאים יציבה המבטאת לוציפראז.
      3. לפני ההדמיה, יש להזריק D-לוציפרין תוך צפקי במינון של 10 מיקרוליטר/גרם משקל גוף באמצעות תמיסת D-לוציפרין של 15 מ"ג/מ"ל. להרדים את העכברים באיזופלורן ולהמתין 10 דקות לאחר הזרקת D-לוציפרין. הנח את העכברים במערכת ההדמיה הביו-לומינסנציה. הגדר את זמן החשיפה למצב אוטומטי במהלך הדמיה17.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

איור 1 מספק סקירה מקיפה של זרימת העבודה של הפרוטוקול. דגימות המטופלים כוללות דם היקפי ורקמת ליבת הגידול. דגימות דם עוברות צנטריפוגה להסרת פלזמה ואחריה שני סבבי ליזה של ACK כדי להשיג PBMCs המשמשים כבקרות לניתוחי ריצוף. דגימות הגידול נשטפות ב-PBS כדי להסיר קרישי דם ואזורים נמקיים לפני שהן מעובדות לשברים קטנים. שברי רקמות מרובים נשמרים בהקפאה למיצוי וריצוף עתידי של DNA/RNA, בעוד שחתיכה שלמה מקובעת ב-PFA ומשובצת בפרפין לניתוח היסטולוגי. רקמת הגידול הנותרת נטחנת היטב על קרח עד שהיא הומוגנית, ואז ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ההטרוגניות של GBM מציבה אתגרים טיפוליים משמעותיים. קווי תאי GBM קונבנציונליים מפתחים לעתים קרובות רקע גנטי הומוגני ומאבדים את מאפייני הגידול של המטופל לאחר תרבית ממושכת במדיום המכיל סרום, מה שמגביל את ערך התרגום שלהם. אופטימיזציה של תנאי תרבית GBM וסטנדרטיזציה של זרימות עבודה של עיבוד דגימות מטופלים חיוניים למקסום המשאבים הקליניים המוגבלים במחקר. מערכת מקיפה של מודל תאי GBM תשפר את ההבנה שלנו לגבי הטרוגניות GBM ותשפר את האסטרטגיות הטיפוליות.

פרוטוקול זה מפרט א...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין ניגודי אינטרסים לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מומנה על ידי התוכנית הלאומית למחקר ופיתוח מפתח של סין (#2022YFA1103900 ל-J.C.), מעבדת צ'אנגפינג וקרן החדשנות CAMS למדעי הרפואה (CIFMS) (#2024-I2M-3-022 עד J.C.). מימון נוסף לג'יי.סי מגיע מהמכון הסיני לחקר המוח. איור 1 נוצר בשנת https://BioRender.com.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
70 μ מסננת תאיםm Falcon352350
תמיסת ניתוק תאים AccutaseBioLegend423201
אמוניום כלורידאלאדין60-92-4
נוגדן Anti- Sox2MerckmilliporeAB5603
מדיום הרכבה נגד דהייה עם DAPIBeyotimeP0131
נוגדן נגד נסטיןNOVUSNB100-1604
B27 ללא תוסף ויטמיןGibco12587010
BD FACSAria Fusion Flow CytometerBD Biosciences/
צלחת תרבית תאיםNEST705001
D-לוציפרין, אשלגן מלחInvitrogenL2916
DMEM/F12GibcoC11330500BT
DMSOסינופארם30072418
EDTABBI מדעי החייםA600107-0500
גלוקוזסנגון ביוטקA50991-0500
GlutaMAXGibco35050-061תחליף גלוטמין
ערכת צביעה המטוקסילין-אאוזיןSolarbioG1120
HEPESBeyotimeST090
Human bFGFאוריג'יןTP750002
EGF אנושינובופרוטאיןC029-500μ g
HypoThermosol FRSBiolife Solutions101104מדיום שימור היפותרמי
IsofluraneRWD Life ScienceR510-22-10
IVIS Lumina XR III מערכת הדמיהPerkinElmer/
MatrigelCorning356231תמצית מטריצת קרום הבסיס
Microsyringeהמילטון80300
N2 תוסףGibco17502048
Nunclon Sphera 6-Well PlateThermo Scientific174932לוחות חיבור נמוכים במיוחד
Paraformaldehydeסנגון ביוטקA500684-0500
PBS מאגרSolarbioP1010-100*2L
פניצילין/סטרפטומיציןSolarbioP8420/S8290
אשלגן ביקרבונטSangon BiotechA501195-0500
RWD מפרק רקמותRWD מדעי החייםDSC-410
מכשיר סטריאוטקסי סטנדרטיRWD מדעי החיים68801
שפופרת לעיבוד דגימות רקמותRWD Life ScienceSCT-100
β-מרקפטואתנולסיגמאM3148-100 מ"ל
bioluminescence

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Weller, M., et al. Glioma. Nat Rev Dis Primers. 10 (1), 33(2024).
  2. Louis, D. N., et al. The 2021 WHO classification of tumors of the central nervous system: A summary. Neuro Oncol. 23 (8), 1231-1251 (2021).
  3. Miller, K. D., et al. Brain and other central nervous system tumor statistics, 2021. CA Cancer J Clin. 71 (5), 381-406 (2021).
  4. Ostrom, Q. T., Cote, D. J., Ascha, M., Kruchko, C., Barnholtz-Sloan, J. S. Adult glioma incidence and survival by race or ethnicity in the United States from 2000 to 2014. JAMA Oncol. 4 (9), 1254-1262 (2018).
  5. Horbinski, C., Berger, T., Packer, R. J., Wen, P. Y. Clinical implications of the 2021 edition of the WHO classification of central nervous system tumours. Nat Rev Neurol. 18 (9), 515-529 (2022).
  6. Pardal, R., Clarke, M. F., Morrison, S. J. Applying the principles of stem-cell biology to cancer. Nat Rev Cancer. 3 (12), 895-902 (2003).
  7. Pandita, A., Aldape, K. D., Zadeh, G., Guha, A., James, C. D. Contrasting in vivo and in vitro fates of glioblastoma cell subpopulations with amplified EGFR. Genes Chromosom Cancer. 39 (1), 29-36 (2004).
  8. Lee, J., et al. Tumor stem cells derived from glioblastomas cultured in bFGF and EGF more closely mirror the phenotype and genotype of primary tumors than do serum-cultured cell lines. Cancer Cell. 9 (5), 391-403 (2006).
  9. Yabo, Y. A., Niclou, S. P., Golebiewska, A. Cancer cell heterogeneity and plasticity: A paradigm shift in glioblastoma. Neuro-Oncol. 24 (5), 669-682 (2021).
  10. Neftel, C., et al. An integrative model of cellular states, plasticity, and genetics for glioblastoma. Cell. 178 (4), 835-849.e21 (2019).
  11. Bao, S., et al. Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response. Nature. 444 (7120), 756-760 (2006).
  12. Chen, J., et al. A restricted cell population propagates glioblastoma growth after chemotherapy. Nature. 488 (7412), 522-526 (2012).
  13. Pollard, S. M., et al. Glioma stem cell lines expanded in adherent culture have tumor-specific phenotypes and are suitable for chemical and genetic screens. Cell Stem Cell. 4 (6), 568-580 (2009).
  14. Wu, M., et al. Multi-omics and pharmacological characterization of patient-derived glioma cell lines. Nat Commun. 15 (1), 6740(2024).
  15. Zhanmu, O., Yang, X., Gong, H., Li, X. Paraffin-embedding for large volume bio-tissue. Sci Rep. 10 (1), 12639(2020).
  16. Wang, X., McManus, M. Lentivirus production. J Vis Exp. (32), e1499(2009).
  17. Sun, A., et al. Firefly luciferase-based dynamic bioluminescence imaging: A noninvasive technique to assess tumor angiogenesis. Neurosurgery. 66 (4), 751-757 (2010).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים