מאמר שיטה

מתודולוגיה לחקר למידה וזיכרון בחולדות צעירות באמצעות הרדמת סבופלורן להערכת ביטוי p-CREB ו-c-fos בהיפוקמפוס

DOI:

10.3791/68591

⸱

19 בספטמבר 2025

 ,  , 
1Department of Anesthesiology and SICU, Xinhua Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה חוקר כיצד סבופלורן פוגע בשימור הזיכרון ומפחית את ביטוי p-CREB ו-c-fos בנוירונים בהיפוקמפוס באמצעות מסלול NMDAR/p-CREB/c-fos בחולדות צעירות. התוצאות מראות כי סבופלורן גורם לליקויים בזיכרון לטווח קצר ומפחית את סמני הפלסטיות הסינפטית, עם השפעות הפיכות לאחר 3 ימים, ללא תלות בתדירות המינון.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חקר ליקויים קוגניטיביים במהלך התפתחות המוח מתמודד עם אתגרים בשל האופי הדינמי של התפתחות נוירולוגית, אילוצים מתודולוגיים ומחסומים הקשריים. מחקר זה חקר גישה מתודולוגית משולבת לחקר ליקויים קוגניטיביים במוח המתפתח הנגרמים על ידי סבופלורן, בהתבסס על זיכרון וביטוי p-CREB ו-c-fos בנוירונים בהיפוקמפוס דרך מסלול האיתות NMDAR/p-CREB/c-fos בחולדות צעירות. 64 חולדות זכרות בנות 21 יום (משקל גוף <80 גרם) חולקו לחמש קבוצות: נורמלי (n=8), 60% O2 (n=16), אימון דמה (n=8), סבופלורן במינון יחיד (n=16) וסבופלורן במינונים מרובים (n=16). שתי קבוצות הסבופלורנים חולקו לתת-קבוצה של יום אחד (קבוצות sev1a ו-sev1b) ו-30 יום (קבוצות sev30a ו-sev30b) לאחר האימון (n=8/תת-קבוצה); כל שאר החולדות הוקרבו שעה אחת לאחר האימון. מבחן מבוך ה-Y שימש להערכת למידה ושימור זיכרון. אימונוהיסטוכימיה שימשה לקביעת מספר הנוירונים החיוביים p-CREB ו-c-fos בדגימות ההיפוקמפוס. בהשוואה לקבוצת 60% O2 (שימור זיכרון של 86.33% ±-17.52%), הזיכרון של חולדות בקבוצות sev1a ו-sev1b הראה ירידה משמעותית (sev1a: 44.29% ±-11.26%; sev1b: 62.42% ±-7.27%; כל הקבוצות P<0.05), בעוד שקבוצות sev1b ו-sev30b לא הראו הבדלים משמעותיים (sev30a: 84.41% ±-14.15%; sev30b: 85.21% ±-11.61%; כל P>0.05). בהשוואה לקבוצת 60% O2 (c-fos: 92.83 ±-7.88; p-CREB: 72.22 ±-8.89), הביטוי של p-CREB ו-c-fos בתאי עצב בהיפוקמפוס ירד בקבוצת sev1a (c-fos: 23.13 ±-3.28; p-CREB: 22.88 ±-5.18) ובקבוצת sev30 (c-fos: 23.22 ±-3.13; p-CREB: 25.58 ±-2.26) (כולן P<0.05), בעוד שקבוצות sev30a ו-sev30b לא הראו הבדלים משמעותיים (כולן P>0.05). לסבופלורן יש השפעה מגרה שלילית לטווח קצר על יכולת תחזוקת הזיכרון של חולדות צעירות ללא השפעה על סמך תדירות המינון. סבופלורן מפחית את הביטוי של p-CREB ו-c-fos בתאי עצב בהיפוקמפוס של חולדות צעירות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חקר ליקויים קוגניטיביים במהלך התפתחות המוח מתמודד עם אתגרים משמעותיים בשל האופי הדינמי של התפתחות נוירולוגית, אילוצים מתודולוגיים ומחסומים הקשריים. התפתחות המוח כרוכה בשינויים מהירים ולא ליניאריים, המסבכים את זיהוי הליקויים במהלך חלונות קריטיים 1,2. במסגרות דלות משאבים, חסמים כמו אוריינות מטפלים, גיוון לשוני וגישה מוגבלת לכלים מיוחדים (למשל, MRI) מעכבים סינון מוקדם1. שונות אינדיבידואלית בהתבגרות המוח מקשה על הבחנה בין סטיות פתולוגיות להתפתחות טיפוסית 2,3. מצבים כמו תסמונת דאון מציגים שינוי בהתפתחות קליפת המוח, אך גודל מדגם קטן ונתונים היסטולוגיים נדירים מגבילים תובנות מכניסטיות4. הפרעות נוירו-התפתחותיות (למשל, ASD, ADHD) מתרחשות לעתים קרובות במקביל לחרדה או דיכאון, מה שמבלבל את ההערכות הקוגניטיביות5. ליקויי תקשורת חמורים באוכלוסיות מסוימות מגבילים את השימוש במבחנים סטנדרטיים6. תכונות אלה מובילות למספר בעיות עיצוב מחקר. ואכן, רוב המחקרים משתמשים בעיצובי חתך, ואינם מצליחים למדל שינויים בתוך הפרט לאורך זמן. יש הסתמכות יתר על אוכלוסיות מערביות ומשכילות (מדגמים "מוזרים")7. מחקר תסמונת דאון סובל מדגימות מוח קטנות לאחר המוות ובקרות לא מספקות בהתאמה לגיל4. כלי הערכה רגעיים אקולוגיים מתקשים להסביר משתנים הקשריים המשפיעים על הביצועים הקוגניטיביים היומיומיים5.

הפונקציות החשובות ביותר במוח החיה והאדם כוללות למידה וזיכרון, שהם מרכזיים להתפתחות האנושית ולחיים בכלל. מוחם של תינוקות נמצא בשלב ההתפתחותי ופגיע לגורמים חיצוניים כמו תרופות והרדמה 9,10. הנזק שנגרם על ידי חומרי הרדמה לתפקוד הזיכרון של תינוקות הוא נושא מחקר קליני מכריע ואף יכול לעכב טיפולים מיטביים לחולים ילדים בשל חוסר היכולת לבצע הרדמה11. להפרעות בתפקוד הקוגניטיבי הקשורות להרדמה (או הפרעה בתפקוד הקוגניטיבי לאחר הניתוח, POCD) עשויות להיות השלכות ארוכות טווח על תינוקותבני 12. שאיפת סבופלורן יכולה להשפיע על תפקודי הזיכרון אצל תינוקות13,14, אך הרדמה מסורתית מאמינה כי נזק מוחי בתינוקות נגרם בעיקר על ידי היפוקסיה מוחית במהלך ההרדמה, במיוחד בהרדמה כללית10. לכן, כל עוד אין היפוקסיה לטווח קצר או ארוך במוח, יש להפחית את הסיכון לפגיעה במערכת העצבים המרכזית אצל תינוקות11. ובכל זאת, ההבנה של POCD נותרה תת-אופטימלית. תינוקות הזקוקים לניתוח יזדקקו להרדמה, וידע טוב יותר על המסלולים המעורבים יכול לסייע בתכנון אסטרטגיות הרדמה שימזערו את הסיכון ל-POCD.

מחקר שכלל מטופלים מבוגרים שעברו ניתוחים שאינם לבביים גילה כי כמעט 25% מהמטופלים חוו POCD תוך שבוע לאחר הניתוח, והשיעור ירד מתחת ל-10% לאחר 3 חודשים, בעוד שקבוצת הביקורת הראתה שיעורי POCD של 3.4% ו-2.8%15. המחקר גם הצביע על כך שרוב מקרי ה-POCD היו הפיכים, כאשר רק מספר קטן של חולים חוו POCD15 ממושך או קבוע. במערכת העצבים המרכזית, גלוטמט היא חומצת האמינו המעוררת הנפוצה ביותר16. קולטן N-methyl-D-aspartate (NMDAR) חיוני לאינדוקציה ותחזוקה של חיזוק לטווח ארוך (LTP) ודיכאון ארוך טווח (LTD)17. מחקר על עכברים הראה כי פלסטיות סינפטית מעוררת משפיעה ישירות על התפתחות תפקוד המוח18, כאשר הפעלת NMDAR וזרם סידן חשובים במיוחד19,20. לפעילות NMDAR משופרת יש השלכות משמעותיות על השראת צמיחה סינפטית ופלסטיות19,20. לכן, רמה גבוהה יותר של חסימת NMDAR על ידי אנטגוניסטים של NMDAR (למשל, סבופלורן) אמורה לגרום ליכולות למידה וזיכרון נמוכות יותר21. בעוד שההשפעות של סבופלורן על למידה וזיכרון במוח של מבוגרים לא הגיעו למסקנה ברורה22,23, סבופלורן משמש בדרך כלל להרדמה בניתוחי ילדים14. כאנטגוניסט לא תחרותי של NMDAR, סבופלורן יכול להשפיע באופן משמעותי על תפקודי הלמידה והזיכרון של המוח 11,13,14,23,24. עם זאת, מלבד NMDAR, מסלולים וחלבונים אחרים מעורבים בלמידה ובזיכרון, ומנגנוני ויסות הזיכרון הכוללים חלבון קושר אלמנט של תגובת cAMP זרחנית (p-CREB) וגנים מוקדמים מיידיים c-fos הופכים ברורים יותר 25,26,27, אך עדיין דורשים הבנה טובה יותר למתן הרדמה אופטימלית בתינוקות וילדים.

בהתבסס על מסגרות תיאורטיות אלה, המחקר הנוכחי חקר גישה מתודולוגית משולבת שניתן להשתמש בה כדי לחקור ליקויים קוגניטיביים במוח המתפתח הנגרמים על ידי סבופלורן, בהתבסס על זיכרון וביטוי p-CREB ו-c-fos בנוירונים בהיפוקמפוס דרך מסלול האיתות NMDAR/p-CREB/c-fos בחולדות צעירות. התוצאות עשויות לעזור לשפר את ההבנה שלנו לגבי POCD ופגיעה בזיכרון לאחר הרדמה כללית. מחקר זה השתמש בחולדות בנות 21 יום מכיוון שהן רק נגמלו והיה להן משקל גוף ומצב פיזיולוגי אחיד מאוד, המתאים לגיל ההתבגרות המוקדם בבני אדם. בשל הנוירופלסטיות המוגברת והפגיעות שלהם במהלך תקופה התפתחותית קריטית זו, הם יכולים למדל ביעילות את הליקויים הקוגניטיביים הנגרמים על ידי ניתוח או הרדמה במוח הלא בוגר28,29. זה הופך אותם למתאימים במיוחד לחקר הסיכונים הנוירו-קוגניטיביים הקשורים לניתוחי ילדים ולבחינת אסטרטגיות התערבות פוטנציאליות. מבוך ה-Y הוא שיטה נפוצה להערכת למידה וזיכרון30. אימונוהיסטוכימיה משמשת בדרך כלל לחקר נוירונים וחלבונים עצביים שונים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הפרוטוקולים במחקר זה נבדקו ואושרו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים שינחואה, בית הספר לרפואה של אוניברסיטת שנחאי ג'יאו טונג (אישור מס. XHEC-C-2016-023-2).

1. סקירה ניסויית של בעלי חיים וקיבוץ

  1. השג חולדות SD זכרות בנות 64 בנות 21 יום (משקל גוף מתחת ל-80 גרם).
  2. חלקו את החולדות לחמש קבוצות: קבוצה נורמלית (n = 8), קבוצת O2 של 60% (n = 16), קבוצת אימון Sham (n = 8), קבוצת sevoflurane במינון יחיד (n = 16) וקבוצת sevoflurane עם מינונים מרובים (n = 16) (ראו טבלה 1).
  3. שכן את החולדות במתקן בעלי חיים בטמפרטורה של 20-24 מעלות צלזיוס עם 50%-60% לחות ואור טבעי.
  4. לספק מזון ומים נאותים.
  5. ודא שכל הפרוטוקולים נבדקים ומאושרים על ידי ועדת האתיקה.
  6. הכן את תא האינהלציה (ראה איור משלים S1, המפורט בסעיף 2.1).
  7. קבוצה רגילה
    1. חשוף את החולדות ל-60% אוויר למשך שעתיים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y יום אחד לאחר החשיפה (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).
  8. קבוצת 60% O2
    1. חשוף את החולדות ל-60% אוויר למשך שעתיים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y 30 יום לאחר החשיפה (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).
  9. קבוצת אימונים מזויפת
    1. חשוף את החולדות ל-60% אוויר למשך שעתיים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y יום אחד לאחר החשיפה ללא אימון מובנה (מיקומי אורות ואזורי הלם משתנים באופן אקראי), המשמש לבקרה על השפעות האור וגירויים חשמליים על למידה וזיכרון (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).
  10. קבוצת סבופלוראן במינון יחיד (קבוצת sev1a)
    1. חשוף את החולדות ל-60% אוויר + 3% סבופלורן למשך שעתיים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y יום אחד לאחר החשיפה (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).
  11. קבוצת סבופלוראן במינון יחיד (קבוצת sev30a)
    1. חשוף את החולדות ל-60% אוויר + 3% סבופלורן למשך שעתיים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y 30 יום לאחר החשיפה (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).
  12. קבוצת סבופלוראן במינון חוזר (קבוצת sev1b)
    1. חשפו את החולדות ל-60% אוויר + 3% סבופלורן למשך שעתיים ביום, במשך 7 ימים רצופים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y יום אחד לאחר החשיפה (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).
  13. קבוצת סבופלוראן במינון חוזר (קבוצת sev30b)
    1. חשפו את החולדות ל-60% אוויר + 3% סבופלורן למשך שעתיים ביום, במשך 7 ימים רצופים (מפורט בסעיף 2.2).
    2. בצע בדיקת מבוך Y 30 יום לאחר החשיפה (מפורט בסעיף 4).
    3. אסוף רקמות לאחר בדיקות התנהגותיות (מפורט בסעיף 5).

2. שאיפת סבופלוראן

  1. הכנת החדר (ראה איור משלים S1)
    1. חבר את החור בצד שמאל של הקופסה ל-60% O2/40% N2.
    2. חבר את אספקת החמצן למכשיר האידוי sevoflurane.
    3. חבר את החור מימין לקופסה למנתח הגז של מכונת הרדמה.
    4. חבר את החור בחלקו העליון של החדר לפסולת הגז.
    5. מניחים סיד מתחת לרשת בתחתית החדר ומוסיפים צמר גפן.
    6. הנח את ההתקנה במכסה אדים.
    7. הניחו כרית חימום מתחת לתא.
  2. אינהלציה
    1. הפעל את אספקת החמצן ואת מכשיר האידוי sevoflurane.
    2. כוונן את זרימת החמצן ל-2 ליטר לדקה.
    3. כאשר ריכוז הסבופלורן מגיע ל -3.0%, שמור על הזרימה למשך 30 דקות כדי לייצב את האווירה בתא.
    4. הניחו חולדה בצד הכותנה של החדר.
    5. שמור את החולדה שם לפי קיבוץ (ראה שלב 1.2).
    6. עקוב אחר צבע העור, קצב הנשימה, קצב הלב ואוקסימטריית הדופק.
    7. הסר את החולדה.
    8. תן לחולדה להתעורר באופן טבעי.
    9. החזירו את החולדה לכלוב שלה.

3. ריאגנטים ומכשירים ניסיוניים

  1. הכנת ריאגנטים
    1. הכן 250 מ"ל של סבופלורן זמין מסחרית למתן הרדמה.
    2. הכן את תמיסת העבודה של נוגדן p-CREB על ידי דילול נוגדן המלאי 1:350.
    3. הכן את תמיסת העבודה של נוגדן c-fos על ידי דילול נוגדן המלאי 1:200.
    4. הרכיבו את הערכה לצביעה אימונוהיסטוכימית.
    5. הכן 4% פרפורמלדהיד.
      1. ממיסים 40 גרם פרפורמלדהיד מסיס (PFA) במיכל זכוכית עם 500 מ"ל מים בטוהר גבוה, מחממים ברציפות ומערבבים מגנטית ל-60-65 מעלות צלזיוס עד ליצירת תרחיף חלבי.
      2. יש להוסיף טיפות של 1.0 מול/ליטר NaOH עד שהתמיסה מתבהרת (pH = 7.0).
      3. מוסיפים כ-500 מ"ל PBS ומערבבים היטב באמבט קרח או באמבט מים קרים.
      4. בדוק שוב את ה-pH, סנן וצור עד 1000 מ"ל נפח.
      5. יש לאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לשימוש עתידי.
  2. הגדרת ציוד
    1. מקם את מבוך ה-Y באזור הבדיקות ההתנהגותיות (ראה איור משלים S2).
    2. כיול המיקרוסקופ עם מערכת הדמיה משולבת לניתוח היסטולוגי.
  3. התקן את המיקרוטום עם להבים טריים לחיתוך רקמות.
  4. תכנת את מכונת ההתייבשות עם פרוטוקול עיבוד הרקמות הסטנדרטי.
  5. הכן את מכונת הצביעה עם אמבטיות הצביעה הרציפות על פי הוראות יצרן המכונה.
  6. הגדר את מנגנון הזילוף.
    1. השתמש בשני בקבוקי מלח ארוזים מפלסטיק, רוקן את מי המלח מהפתח התחתון ומלא אותם ב-PBS וקיבוע פרפורמלדהיד 4%.
    2. תלו את הבקבוקים, חברו אותם עם ערכות עירוי והצמידו תא עצירה תלת כיווני לקצה המחט העבה של ערכת העירוי.

4. מבוך Y ובדיקת למידה/זיכרון

  1. הרכיבו את מבוך ה-Y
    1. הגדר את מבוך ה-Y עם שלוש זרועות מלבניות המסומנות I, II ו-III, המחוברות בצומת משולש (ראה איור משלים S2).
    2. הניחו רשת חשמל במרווח של 1 ס"מ בתחתית המבוך.
    3. חבר רצועות נחושת דקות של 2 ס"מ על קירות המבוך כדי לדמות אזורים מסוכנים ולהתקין נורות איתות גירוי.
  2. הגדר אזורים מסוכנים ובטוחים
    1. חשמל אזורים I, II ו-III ב-16,000 V/m כדי לציין אזורים מסוכנים (נורית האות נדלקת כאשר הוא מחושמל).
    2. סמן אזורים לא מחושמלים באור אדום כדי לציין אזורים בטוחים.
    3. הגדר את הצומת בין הזרועות כאזור לא בטוח שבו החולדה עלולה לקבל התחשמלות.
  3. נוהל הכשרה
    1. בתחילת הניסוי, חשבו על האזור שבו החולדה ממוקמת כאזור הבטוח.
    2. לאחר 2-4 דקות, הפעל חשמל על האזור הבטוח, ועודד את החולדה לנוע לכיוון האזור הבטוח.
    3. אם החולדה עוברת מהאזור הבטוח לאזור מסוכן, היא תחזור לאזור הבטוח תחת התחשמלות, ותציג תגובת הימנעות פסיבית.
  4. פיתוח תגובת ההימנעות הפעילה
    1. לאחר מספר אימונים, הדליקו את האור באזור הבטוח מבלי להפעיל מכות חשמל.
    2. התבונן בתנועת החולדה לעבר האזור הבטוח המואר, ויוצר רפלקס מותנה של הבחנה בין אור לחושך (תגובת הימנעות פעילה).
  5. מקם את מבוך ה-Y באזור מואר ושקט כדי למזער הסחות דעת חיצוניות.
  6. ערכו אימונים מדי יום בין השעות 9:00-11:00 ו-14:00-16:00.
  7. אפשרו לחולדות לנוע בחופשיות בתוך המבוך במשך 5 דקות לפני הניסוי, כדי לסייע להן להסתגל לסביבת המבוך.
  8. התאם פרמטרים של גירוי
    1. כוונן את מתח הגירוי (16,000 וולט/מ"ר) במהלך הבדיקה כדי להבטיח שהחולדות יברחו תוך 10 שניות לאחר קבלת התחשמלות.
    2. השאר את נורית האות של האזור הבטוח דולקת למשך 15 שניות, ולאחר מכן כבה אותה.
    3. התחל את הסבב הבא של ניסויי הלם לאחר מרווח של 45 שניות.
  9. רצף נוריות אות ותגובה נכונה
    1. הגדר את רצף נורית האות שנדלקת כפי שאני → II → III → I, במחזור.
    2. הגדר תגובה נכונה כחולדה שבורחת מאזור ההתחלה ישירות לאזור הבטוח המואר תוך 10 שניות לאחר קבלת התחשמלות.
  10. קחו בחשבון שהחולדה הגיעה לסטנדרט הלמידה אם היא מבצעת את תגובת הבריחה הנכונה ב-8 מתוך 10 ניסויים רצופים.
  11. רשום כל בריחה לזרוע ללא אור כתגובה שגויה.
  12. מפגשי הדרכה ובדיקות מרובים
    1. בצע מפגשי אימון ובדיקות מרובים כדי להעריך למידה וזיכרון.
    2. רשום את מספר התגובות הנכונות והשגויות במהלך מספר קבוע של ניסיונות.
    3. שנה את אזור ההתחלה כדי להגדיל את מורכבות המשימות.
  13. העריכו את שימור הזיכרון במרווחי זמן (למשל, 24 או 48 שעות לאחר האימון) כדי להעריך את יכולת שימור הזיכרון של החולדות.

5. אימונוהיסטוכימיה

  1. להרדים את החולדות
    1. יש לתת זריקה תוך-צפקית של 10% כלורל הידרט (0.4 מ"ל/100 גרם) שעה אחת לאחר האימון כדי להרדים את החולדות. השלך תמיסת כלורל הידרט בהתאם לתקנות המקומיות.
    2. בצע כריתת בית החזה כדי לחשוף את הלב במלואו31.
  2. חולדות מורדמות עם תמיסה פיזיולוגית
    1. הכנס מחט המכילה PBS לחדר השמאלי לכיוון אבי העורקים, אבטח את המחט בעזרת מלקחיים המוסטטיים, וחתוך מיד את האפרכסת הימנית של העכבר כדי לשחרר דם ורידי.
    2. הזריק במהירות PBS עד שהשפכים צלולים והכבד והריאות נראים לבנים.
    3. לאחר מכן עירוי מהיר ולאחר מכן איטי של 500 מ"ל של תמיסת פורמלין 10% עד שגוף החיה מתקשה, ומשיג קיבוע פורמלין.
    4. השלך תמיסת פורמלין בהתאם לתקנות המקומיות.
  3. הסר את המוח
    1. פתח במהירות את הגולגולת32.
    2. הסירו את המוח כולו על ידי הרמתו בעדינות מהגולגולת וחיתוך כלי הדם וחוט השדרה בבסיסם, מבלי לפגוע בהמיספרות (כפי שמוצג באיור משלים S3).
  4. נתח את ההיפוקמפוס
    1. נתח את ההיפוקמפוס הדו-צדדי.
      1. בנקב העורפי של העכבר, חתכו את כל המוח במספריים.
      2. הכנס בזהירות מספריים באלכסון לתוך הנקב מגנום כדי לחתוך את העצם הקודקודית.
      3. לפרק את שני צידי העצם הקודקודית בעזרת מלקחיים המוסטטיים.
      4. השתמש במספריים כדי לחתוך את עצב הראייה בצד אחד ולחקור עד לבסיס הגולגולת.
    2. מניחים את ההיפוקמפוס בתמיסת פורמלין 10% למשך 12 שעות.
    3. טבלו את הדגימה בפורמלין המכיל שיפוע של סוכרוז (10%, 20%, 30%).
    4. שמור למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד שרקמת הדגימה שוקעת לתחתית.
  5. הטמע וחתך את הדגימה
    1. הטמע את הדגימה בפרפין. השלך תמיסת פורמלין בהתאם לתקנות המקומיות.
    2. חתך את הדגימה המשובצת ל -4 מיקרומטר.
  6. הפזר והתייבש מחדש את החלקים
    1. משרים את החלקים ב -50 מ"ל קסילן שלוש פעמים לדפרפיניזציה, בכל פעם למשך 15 דקות.
    2. טבלו ברצף ב-50 מ"ל של 100%, 90%, 70% ו-50% אתנול למשך 10 דקות כל אחד.
    3. יש לשטוף שלוש פעמים עם 50 מ"ל של 0.01 מ"מ PBS למשך 3 דקות כל אחת.
  7. אחזור אנטיגן
    1. הנח את החלקים ב-50 מ"ל של מאגר ציטראט (PBS, pH 6.0).
    2. מחממים את החלקים בסיר לחץ מנירוסטה ל-120 מעלות צלזיוס. הניחו את החלקים על מתלה, שקועים לחלוטין במאגר. אוטמים את הכיריים, מחממים ושומרים בלחץ גבוה למשך 3 דקות.
    3. מסירים את הכיריים מהאש ומניחים להתקרר באופן טבעי בטמפרטורת החדר לפני פתיחת המכסה.
    4. שטפו את החלקים ב-PBS (pH 7.2) למשך 2 דקות, וחזרו על הפעולה 3 פעמים.
    5. יש למרוח כ-100-200 מיקרוליטר של 3% H2O2 כדי לכסות את ה-sectgion על המגלשה ולדגור בטמפרטורת החדר למשך 5-10 דקות כדי למנוע פעילות פרוקסידאז אנדוגנית.
    6. יש לשטוף עם PBS למשך 2 דקות, 3 פעמים.
  8. דגירה ראשונית של נוגדנים
    1. הוסף 200 מיקרוליטר של נוגדנים ראשוניים (מדולל 1:150 ב-0.01 מול/ליטר PBS) למקטעים.
    2. יש לדגור למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
  9. דגירה משנית של נוגדנים
    1. שוטפים את החלקים ב- PBS למשך 3 דקות, 3 פעמים.
    2. דגרו את החלקים עם כ-100-200 מיקרוליטר של עוזר פולימר כדי לכסות את החלק בשקופית ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
    3. שטפו את החלקים ב-0.1 מול/ליטר PBS למשך 2 דקות, 3 פעמים.
    4. יש להוסיף כ-100-200 מיקרוליטר של IgG פוליפרוקסידאז-נגד עכברים/ארנב ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
    5. שוטפים את החלקים ב- PBS למשך 3 דקות, 3 פעמים.
  10. התפתחות צבע
    1. הוסף כ-100-200 מיקרוליטר מתמיסת הדיאמינובנזידין (DAB) (מספיק כדי לכסות את החלק בשקופית) להתפתחות צבע.
    2. תן לו להגיב במשך כ -3 דקות.
  11. מכתים והרכבה
    1. בצע צביעה נגדית על ידי הוספת כ-100-200 מיקרוליטר של המטוקסילין טיפתית כדי לכסות לחלוטין את החלק בכל שקופית.
  12. לייבש ולהרכיב את החלקים
    1. ייבשו את החלקים ב-50 מ"ל של 50%, 70%, 90% ו-100% אתנול למשך 10 דקות כל אחד, ואחריהם 50 מ"ל קסילן למשך 10 דקות.
    2. נקה והרכיב את החלקים באמצעות נהלים סטנדרטיים.
  13. בדיקה מיקרוסקופית
    1. ספרו את מספר הנוירונים החיוביים p-CREB ו-c-fos בהיפוקמפוס של כל קבוצה33,34.
    2. בדוק את החלקים במיקרוסקופ בהגדלה של פי 400.
    3. רשום את המספר הממוצע של נוירונים חיוביים בכל פרוסה, בהתבסס על ספירה משלושה חלקים לכל חיה ללא חפיפה.
      הערה: כל הנתונים נאספו בגיליון אלקטרוני ממוחשב. כל הניתוחים בוצעו באמצעות תוכנה סטטיסטית. התוצאות הוצגו כאמצעים ± שגיאת תקן של הממוצע (SEM) ונותחו באמצעות ANOVA חד כיווני עם מבחני פוסט הוק SNK-q ו-Dunnett T335. מבחן SNK-q משמש בדרך כלל למחקרי גישוש ומתאים להשוואה זוגית בין אמצעי מדגם מרובים. הוא אינו מסתמך על השערות מוגדרות מראש, מה שהופך אותו לאידיאלי להשוואה בין כל הקבוצות הממוצעות36. מבחן Dunnett T3 משמש בדרך כלל למחקרים מאשרים עם השערות מוגדרות מראש. הוא מתאים להשוואה בין קבוצות טיפול מרובות לקבוצת ביקורת או להשוואת אמצעים בעלי משמעות מקצועית מיוחדת35,37. כאשר ערך ה-P של מבחן ANOVA היה ≤-0.05, בוצעו מבחני הפוסט-הוק הזוגיים כדי לקבוע אילו קבוצות היו שונות באופן משמעותי מהאחרות. ערכי P דו-צדדיים < 0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תוך שימוש בנתונים ממחקר זה כדוגמאות להמחשה, הצגנו את סוגי התוצאות שניתן להפיק עם מסגרת מתודולוגית זו, כולל תמונות צביעה חיסונית מייצגות וכן נתונים התנהגותיים ומולקולריים מקבוצות שונות. הדגש הוא על הצגת תוצאות טיפוסיות או צפויות המופקות על ידי גישה זו, ולא מתן פרשנות למשמעותן הביולוגית.

תוצאות מבחני למידה וזיכרון של כל קבוצת חולדות
קבוצות הניסוי הושוו לקבוצת 60% O2 . הזיכרון של חולדות בקבוצת הסבופלורנים במינון יחיד (sev1a) ובקבוצת הסבופלוראן במינונים מרובים (sev1b...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה חקר כיצד סבופלורן משפיע על הזיכרון ומווסת את ביטוי p-CREB ו-c-fos בנוירונים בהיפוקמפוס באמצעות מסלול האיתות NMDAR/p-CREB/c-fos בחולדות צעירות. התוצאות מצביעות על כך שלסבופלורן הייתה השפעה שלילית לטווח קצר (שעה לאחר האימון, לא לאחר 3 ימים) על יכולת תחזוקת הזיכרון של חולדות צעירות, ללא השפעה על סמך תדירות המינון (מנה בודדת או שבע מנות במשך 7 ימים). סבופלורן הפחית משמעותית את הביטוי של p-CREB ו-c-fos בתאי עצב בהיפוקמפוס של חולדות צעירות שעה אחת לאחר האימון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מדווחים שאין אינטרסים מתחרים להצהיר עליהם.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יה ג'יאנג וגואוהוי לי תכננו את המחקר. יה ג'יאנג ולאי ג'יאנג אספו וניתחו את הנתונים וכתבו את כתב היד. יה ג'יאנג וגואוהוי לי תיקנו את כתב היד. כל המחברים בדקו ואישרו את הגרסה הסופית של כתב היד להגשה. עבודה זו נתמכת על ידי מענקים לגואוהוי לי מתוכנית שנחאי פוג'יאנג (מענק מס' 23PJD057).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>חיות ניסוי
עכברושי ספראג-דולי (SD).מעבדות צ'ארלס ריבר (בייג'ינג, סין)לא ישיםבן 21 יום, זכר
צ'או עכברוש סטנדרטKeao Xieli Feed (בייג'ינג, סין)לא ישיםתזונה סטנדרטית של חיות מעבדה
<חזק>כימיקלים וריאגנטים
כלורל הידרטמגיב כימי סינופארם (שנחאי, סין)80113818הרדמה לזלוף מסוף
חוצץ ציטראט (פי 10)ZSGB-BIO (בייג'ינג, סין)ZLI-9064תמיסת אחזור אנטיגן, pH 6.0
אתנול (100%)מגיב כימי סינופארם (שנחאי, סין)100092683חומר התייבשות להיסטולוגיה
תמיסת כתמי המטוקסיליןBaso Diagnostics Inc. (ג'וחאי, סין)BA-4041כתם נגד ל-IHC
מי חמצן (H<תת>2O2)מגיב כימי סינופארם (שנחאי, סין)10011218תמיסה של 3% לחסימת פרוקסידאז אנדוגני
בלזם ניטרליSolarbio (בייג'ינג, סין)G8590אמצעי הרכבה למגלשות
חנקן (N<תת>2)שנחאי גז רפואי ושות' (שנגחאי, סין)לא ישיםטוהר גבוה, לתערובת גז
חמצן (O2)שנחאי גז רפואי ושות' (שנגחאי, סין)לא ישיםדרגה רפואית, לתערובת גזים
פרפיןLeica Biosystems (נוסלוך, גרמניה)39601006מדיום הטמעת רקמות
פרפורמלדהיד (PFA)סיגמא-אולדריץ' (סנט לואיס, מיזורי, ארה"ב)158127קיבוע לזלוף וקיבוע רקמות
תמיסת מלח עם חומצת פוספט (PBS)גיבקו (וולת'אם, מסצ'וסטס, ארה"ב)70011044תמיסת מלאי פי 10, pH 7.4
סבופלוראןAbbVie Inc. (צפון שיקגו, אילינוי, ארה"ב)לא ישיםחומר הרדמה באינהלציה
סודה לייםו.ר. גרייס ושות' (קולומביה, מרילנד, ארה"ב)22-01-0010סופג CO2 לתא אינהלציה
נתרן הידרוקסיד (NaOH)מגיב כימי סינופארם (שנחאי, סין)10019818משמש להתאמת pH של תמיסת PFA
סוכרוזסנגון ביוטק (שנגחאי, סין)A502693משמש להגנה בהקפאה על רקמת המוח
קסילןמגיב כימי סינופארם (שנחאי, סין)10023418חומר סליקה להיסטולוגיה
<חזק>נוגדנים וערכות
נוגדן c-FosAbcam (קיימברידג', בריטניה)ab190289ארנב נגד עכברים, נוגדן ראשוני
ערכת כרומוג'ן DABZSGB-BIO (בייג'ינג, סין)ZLI-9018מצע לפיתוח צבע HRP
נוגדן p-CREB (Ser133)טכנולוגיית איתות תאים (דנברס, MA, ארה"ב)9198ארנב נגד עכברים, נוגדן ראשוני
ערכת גילוי HRP פולימרZSGB-BIO (בייג'ינג, סין)PV-9000מערכת נוגדנים וזיהוי משנית ל-IHC
<חזק>ציוד
מכונת הרדמהRWD מדעי החיים (שנזן, סין)₪100לאספקת תערובת גז מבוקרת
מעבד רקמות אוטומטיLeica Biosystems (נוסלוך, גרמניה)ASP6025להתייבשות וניקוי אוטומטי
קריוסטט/מיקרוטוםLeica Biosystems (נוסלוך, גרמניה)CM1950לחיתוך רקמת מוח קפואה/משובצת
מערכת מיקרוסקופאולימפוס (טוקיו, יפן)BX53להדמיה של שקופיות IHC
משאבת זלוףמשאבת דיוק ארוכה יותר (Baoding, סין)BT100-2Jמשאבה פריסטלטית לזלוף טרנס-קרדיאלי
וופורייזר סבופלוראןRWD מדעי החיים (שנזן, סין)R510PSלשליטה מדויקת בריכוז הסבופלוראן
מנגנון Y-MazeMed Associates Inc. (סנט אלבנס, ורמונט, ארה"ב)MED-VFC-S-Yעם רשת חשמל ואורות להימנעות אקטיבית
<חזק>תוכנה
פריזמה של GraphPadתוכנת GraphPad (סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב)גרסה 9ניתוח סטטיסטי וויזואליזציה של נתונים
תמונהJהמכונים הלאומיים לבריאות (בת'סדה, מרילנד, ארה"ב)גירסה 1.53תוכנה לניתוח תמונות לספירת תאים
מיקרוסופט אקסלMicrosoft Corporation (רדמונד, וושינגטון, ארה"ב)אופיס 365תוכנת גיליונות אלקטרוניים לאיסוף נתונים

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hadders-Algra, M. The developing brain: challenges and opportunities to promote school readiness in young children at risk of neurodevelopmental disorders in low- and middle-income countries. Front Pediatr. 10, 989518(2022).
  2. Pfeifer, J. H., Allen, N. B., Byrne, M. L., Mills, K. L. Modeling developmental change: contemporary approaches to key methodological challenges in developmental neuroimaging. Dev Cogn Neurosci. 33, 1-4 (2018).
  3. Pezzoli, P., et al. Challenges and solutions to the measurement of neurocognitive mechanisms in developmental settings. Biol Psychiatry Cogn Neurosci Neuroimaging. 8 (8), 815-821 (2023).
  4. Risgaard, K. A., Sorci, I. A., Mohan, S., Bhattacharyya, A. Meta-analysis of Down syndrome cortical development reveals underdeveloped state of the science. Front Cell Neurosci. 16, 915272(2022).
  5. Caporusso, E., et al. Current limitations in technology-based cognitive assessment for severe mental illnesses: a focus on feasibility, reliability, and ecological validity. Front Behav Neurosci. 19, 1543005(2025).
  6. Kasari, C., Brady, N., Lord, C., Tager-Flusberg, H. Assessing the minimally verbal school-aged child with autism spectrum disorder. Autism Res. 6 (6), 479-493 (2013).
  7. Hilton, M. T. Methodological challenges faced by researchers studying early neurodevelopmental outcomes in majority settings. Cambridge J Human Behav. 1 (2), 106-114 (2023).
  8. Lisman, J., et al. Viewpoints: how the hippocampus contributes to memory, navigation and cognition. Nat Neurosci. 20 (11), 1434-1447 (2017).
  9. Lee, J. H., Zhang, J., Wei, L., Yu, S. P. Neurodevelopmental implications of the general anesthesia in neonate and infants. Exp Neurol. 272, 50-60 (2015).
  10. Keunen, K., Sperna Weiland, N. H., de Bakker, B. S., de Vries, L. S., Stevens, M. F. Impact of surgery and anesthesia during early brain development: a perfect storm. Paediatr Anaesth. 32 (6), 697-705 (2022).
  11. McCann, M. E., et al. Neurodevelopmental outcome at 5 years of age after general anaesthesia or awake-regional anaesthesia in infancy (GAS): an international, multicentre, randomised, controlled equivalence trial. Lancet. 393 (10172), 664-677 (2019).
  12. Han, F. F., et al. Predictors and occurrence of postoperative cognitive dysfunction in children undergoing noncardiac surgery: a prospective cohort study. iBrain. 9 (2), 148-156 (2023).
  13. Chung, W., et al. Sevoflurane exposure during the neonatal period induces long-term memory impairment but not autism-like behaviors. Paediatr Anaesth. 25 (10), 1033-1045 (2015).
  14. Apai, C., Shah, R., Tran, K., Pandya Shah, S. Anesthesia and the developing brain: a review of sevoflurane-induced neurotoxicity in pediatric populations. Clin Ther. 43 (4), 762-778 (2021).
  15. Arefayne, N. R., Berhe, Y. W., van Zundert, A. A. Incidence and factors related to prolonged postoperative cognitive decline (POCD) in elderly patients following surgery and anaesthesia: a systematic review. J Multidiscip Healthc. 16, 3405-3413 (2023).
  16. Malik, A. R., Willnow, T. E. Excitatory amino acid transporters in physiology and disorders of the central nervous system. Int J Mol Sci. 20 (22), 5671(2019).
  17. Albarracin, S. L., Baldeon, M. E., Sangronis, E., Petruschina, A. C., Reyes, F. G. R. L-glutamate: a key amino acid for sensory and metabolic functions. Arch Latinoam Nutr. 66 (2), 101-112 (2016).
  18. Vyklicky, V., et al. function, and pharmacology of NMDA receptor channels. Physiol Res. 63 (Suppl 1), S191-S203 (2014).
  19. Zorumski, C. F., Izumi, Y. NMDA receptors and metaplasticity: mechanisms and possible roles in neuropsychiatric disorders. Neurosci Biobehav Rev. 36 (3), 989-1000 (2012).
  20. Lau, C. G., et al. Regulation of NMDA receptor Ca2+ signalling and synaptic plasticity. Biochem Soc Trans. 37 (Pt 6), 1369-1374 (2009).
  21. Bye, C. M., McDonald, R. J. A specific role of hippocampal NMDA receptors and Arc protein in rapid encoding of novel environmental representations and a more general long-term consolidation function. Front Behav Neurosci. 13 (8), (2019).
  22. Callaway, J. K., Jones, N. C., Royse, A. G., Royse, C. F. Sevoflurane anesthesia does not impair acquisition learning or memory in the Morris water maze in young adult and aged rats. Anesthesiology. 117 (5), 1091-1101 (2012).
  23. Li, R., et al. Sevoflurane exposure in the developing brain induces hyperactivity, anxiety-free, and enhancement of memory consolidation in mice. Front Aging Neurosci. 14, 934230(2022).
  24. Yuan, I., Xu, T., Kurth, C. D. Using electroencephalography (EEG) to guide propofol and sevoflurane dosing in pediatric anesthesia. Anesthesiol Clin. 38 (3), 709-725 (2020).
  25. Schinelli, S., et al. Stimulation of endothelin B receptors in astrocytes induces cAMP response element-binding protein phosphorylation and c-Fos expression via multiple mitogen-activated protein kinase signaling pathways. J Neurosci. 21 (22), 8842-8853 (2001).
  26. Florian, C., Mons, N., Roullet, P. CREB antisense oligodeoxynucleotide administration into the dorsal hippocampal CA3 region impairs long- but not short-term spatial memory in mice. Learn Mem. 13 (4), 465-472 (2006).
  27. Cabrera, O. H., Useinovic, N., Jevtovic-Todorovic, V. Neonatal anesthesia and dysregulation of the epigenome. Biol Reprod. 105 (3), 720-734 (2021).
  28. Arellano, J. I., Duque, A., Rakic, P. A coming-of-age story: adult neurogenesis or adolescent neurogenesis in rodents. Front Neurosci. 18, 1383728(2024).
  29. Borsini, A., Giacobbe, J., Mandal, G., Boldrini, M. Acute and long-term effects of adolescence stress exposure on rodent adult hippocampal neurogenesis, cognition, and behaviour. Mol Psychiatry. 28 (10), 4124-4137 (2023).
  30. Kraeuter, A. K., Guest, P. C., Sarnyai, Z. The Y-maze for assessment of spatial working and reference memory in mice. Methods Mol Biol. 1916, 105-111 (2019).
  31. Ordodi, V. L., Paunescu, V., Mic, F. A. Optimal access to the rat heart by transverse bilateral thoracotomy with double ligature of the internal thoracic arteries. J Am Assoc Lab Anim Sci. 47 (5), 44-46 (2008).
  32. Aboghazleh, R., et al. Rodent brain extraction and dissection: a comprehensive approach. MethodsX. 12, 102516(2024).
  33. Fedchenko, N., Reifenrath, J. Different approaches for interpretation and reporting of immunohistochemistry analysis results in the bone tissue: a review. Diagn Pathol. 9, 221(2014).
  34. Diem, K., et al. Image analysis for accurately counting CD4+ and CD8+ T cells in human tissue. J Virol Methods. 222, 117-121 (2015).
  35. Lee, S., Lee, D. K. What is the proper way to apply the multiple comparison test. Korean J Anesthesiol. 71 (5), 353-360 (2018).
  36. Shaffer, J. P. Controlling the false discovery rate with constraints: the Newman-Keuls test revisited. Biom J. 49 (1), 136-143 (2007).
  37. Liu, W. Some results on step-up tests for comparing treatments with a control in unbalanced one-way layouts. Biometrics. 53 (4), 1508-1512 (1997).
  38. Steven, A., et al. What turns CREB on? And off? And why does it matter. Cell Mol Life Sci. 77 (20), 4049-4067 (2020).
  39. Naqvi, S., Martin, K. J., Arthur, J. S. CREB phosphorylation at Ser133 regulates transcription via distinct mechanisms downstream of cAMP and MAPK signalling. Biochem J. 458 (3), 469-479 (2014).
  40. Brosnan, R. J., Thiesen, R. Increased NMDA receptor inhibition at an increased sevoflurane MAC. BMC Anesthesiol. 12, 9(2012).
  41. Wang, H., Peng, R. Y. Basic roles of key molecules connected with NMDAR signaling pathway on regulating learning and memory and synaptic plasticity. Mil Med Res. 3 (1), 26(2016).
  42. Chen, B. S., Roche, K. W. Regulation of NMDA receptors by phosphorylation. Neuropharmacology. 53 (3), 362-368 (2007).
  43. Brightwell, J. J., Smith, C. A., Neve, R. L., Colombo, P. J. Transfection of mutant CREB in the striatum, but not the hippocampus, impairs long-term memory for response learning. Neurobiol Learn Mem. 89 (1), 27-35 (2008).
  44. Colombo, P. J., Brightwell, J. J., Countryman, R. A. Cognitive strategy-specific increases in phosphorylated cAMP response element-binding protein and c-Fos in the hippocampus and dorsal striatum. J Neurosci. 23 (8), 3547-3554 (2003).
  45. Kida, S. A functional role for CREB as a positive regulator of memory formation and LTP. Exp Neurobiol. 21 (4), 136-140 (2012).
  46. Liu, Z., et al. Long-term sevoflurane exposure resulted in temporary rather than lasting cognitive impairment in Drosophila. Behav Brain Res. 442, 114327(2023).
  47. Wei, W., et al. Biomechanical effect of proximal multifidus injury on adjacent segments during posterior lumbar interbody fusion: a finite element study. BMC Musculoskelet Disord. 24 (1), 521(2023).
  48. Giza, C. C., Maria, N. S., Hovda, D. A. N-methyl-D-aspartate receptor subunit changes after traumatic injury to the developing brain. J Neurotrauma. 23 (6), 950-961 (2006).
  49. Jia, M., et al. Role of histone acetylation in long-term neurobehavioral effects of neonatal exposure to sevoflurane in rats. Neurobiol Dis. 91, 209-220 (2016).
  50. Tang, X., et al. Resveratrol mitigates sevoflurane-induced neurotoxicity by the SIRT1-dependent regulation of BDNF expression in developing mice. Oxid Med Cell Longev. 2020, 9018624(2020).
  51. Gao, H., et al. Effects of intravenous anesthetics on the phosphorylation of cAMP response element-binding protein in hippocampal slices of adult mice. Mol Med Rep. 18 (1), 627-633 (2018).
  52. Allen, T. A., Fortin, N. J. The evolution of episodic memory. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (Suppl 2), 10379-10386 (2013).
  53. Bucci, D. J., Robinson, S. Toward a conceptualization of retrohippocampal contributions to learning and memory. Neurobiol Learn Mem. 116, 197-207 (2014).
  54. Cherubini, E., Miles, R. The CA3 region of the hippocampus: how is it? what is it for? how does it do it. Front Cell Neurosci. 9, 19(2015).
  55. Lehr, A. B., et al. Ca2+ beyond social memory: evidence for a fundamental role in hippocampal information processing. Neurosci Biobehav Rev. 126, 398-412 (2021).
  56. Bliss, T. V., Lomo, T. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path. J Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).
  57. Benke, T. A., Luthi, A., Isaac, J. T., Collingridge, G. L. Modulation of AMPA receptor unitary conductance by synaptic activity. Nature. 393 (6687), 793-797 (1998).
  58. Shi, S., Hayashi, Y., Esteban, J. A., Malinow, R. Subunit-specific rules governing AMPA receptor trafficking to synapses in hippocampal pyramidal neurons. Cell. 105 (3), 331-343 (2001).
  59. Benke, T. A., et al. Mathematical modelling of non-stationary fluctuation analysis for studying channel properties of synaptic AMPA receptors. J Physiol. 537 (Pt 2), 407-420 (2001).
  60. Poncer, J. C., Esteban, J. A., Malinow, R. Multiple mechanisms for the potentiation of AMPA receptor-mediated transmission by alpha-Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II. J Neurosci. 22 (11), 4406-4411 (2002).
  61. Vorhees, C. V., Williams, M. T. Assessing spatial learning and memory in rodents. ILAR J. 55 (2), 310-332 (2014).
  62. Macheda, T., Snider, H. C., Watson, J. B., Roberts, K. N., Bachstetter, A. D. An active avoidance behavioral paradigm for use in a mild closed head model of traumatic brain injury in mice. J Neurosci Methods. 343, 108831(2020).
  63. Shang, M., et al. Moderate white light exposure enhanced spatial memory retrieval by activating a central amygdala-involved circuit in mice. Commun Biol. 6 (1), 414(2023).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Sevoflurane AnesthesiaJuvenile RatsLearning And MemoryHippocampal Neuronsp CREB Expressionc fos ExpressionY Maze TestImmunohistochemistryNMDAR SignalingCognitive Impairment

מאמרים קשורים