הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

בדיקת מיקרוסקופית 2,3,5-טריפנילטרזוליום כלוריד לניתוח מדויק ואמין של פגיעות שריר הלב

853 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68596

⸱

28 בנובמבר 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Molecular Cardiology, Medical Faculty and University Hospital Düsseldorf, Heinrich Heine University of Düsseldorf, 2Department of Anesthesiology and Perioperative Medicine, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 3Shanghai Key Laboratory of Anesthesiology and Brain Functional Modulation, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 4Clinical Research Center for Anesthesiology and Perioperative Medicine, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University, 5Translational Research Institute of Brain and Brain-Like Intelligence, Shanghai Fourth People's Hospital, School of Medicine, Tongji University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

הבדיקה הנוכחית של 2,3,5-טריפנילטראזוליום כלוריד (TTC) מציגה פרוטוקול צביעה משופר של TTC המאפשר ניתוח פגיעות שריר הלב ברזולוציה מיקרוסקופית, ומפיקה תמונות איכותיות המאפשרות הערכה מדויקת ואמינה של גודל האוטם וחיוניות הקרדיומיוציטים ברמת התא.

תקציר

בפרוטוקול זה, אנו מציגים שיטה משופרת מבוססת 2,3,5-טריפנילטרזוליום כלוריד (TTC) לניתוח מדויק ואמין של אוטם שריר הלב (MI) ברזולוציה תאית. פרוטוקול זה כולל הליך צביעת TTC דו-שלבי המתבצע על לבבות מאותמים 24 שעות לאחר MI: פרפוזיה, שבה תמיסת TTC של 1% מופרקת רטרוגרדית דרך כלי הדם הכליליים דרך קנולה אאורטה, וטבילה, שבה הלב מודגר בתמיסת TTC בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה. לאחר הצביעה, הלב מוטמע בתרכובת OCT ומוקפיא באופן רוחבי לפרוסות בעובי 50 מיקרון במרווחים של 100 מיקרון. לאחר תהליך קיבוע של 24 שעות עם הקיבע של זמבוני, גבול חד ומובחן בין שריר הלב (אדום עמוק) לרקמה נקרוטית (צהובה) הופך לברור תחת בדיקה מיקרוסקופית. ראוי לציין כי מבחן TTC מיקרוסקופי זה מאפשר זיהוי MI לא רק בשלב החריף (24 שעות לאחר MI) אלא גם לאורך חלון זמן ממושך מעבר ל-7 ימים. מכיוון שמבחן ה-TTC המיקרוסקופי מייצר תמונות רב-שכבתיות (80 פרוסות ללב), פיתחנו אלגוריתם חצי-אוטומטי מבוסס צבע חזק שמאפשר ניתוח מהיר ויעיל של מאגרי נתונים גדולים של תמונות גדולות ומכמת את גודל האנקט הגלובלי תוך דקות. עם שיפורים אלו, הגישה הנוכחית משפרת משמעותית את תהליך הצביעה של TTC ומספקת כלי שימושי ורחב ערך למעבדות החוקרות פגיעות איסכמיות לבביות.

מבוא

במהלך שני העשורים האחרונים, קרדיופרוטקציה ממשיכה להיחשב כאסטרטגיה מרכזית לשימור קרדיומיוציטים לאחר פגיעות איסכמיות חמורות בלב1. הן בסביבות ניסיוניות והן קליניות, היקף הפגיעה הסופית בשריר הלב הוא מדד קריטי להערכת יעילות ההתערבויות הקרדיופרוטקטיביות2. לכן, הערכה אמינה ומדויקת של גודל האינקט היא רצויה מאוד וחשובה במהותה.

במודלים של מכרסמים, הפרוטוקול הסטנדרטי להערכת גודל האוטפקט לאחר המוות התבסס בעיקר על פעילות הדהידרוגנאז המיטוכונדריאלי, אשר ממיר אנזימטית את התרכובת חסרת הצבע 2,3,5-טריפנילטרזוליום כלוריד (TTC) למשקע אדום בתאים בריאים, בעוד שהוא נשאר אפור בהיר ברקמה נקרוטית3. למרות שצביעה מבוססת TTC פשוטה וחסכונית כלכלית, היא מציבה מספר אתגרים מתודולוגיים ומגבלות פנימיות. אלה כוללים פרוסות לב שעוברות התכווצות בתמיסת BIRTHC, שמעוותות קשות את הרקמה ומונע מהן לשכב שטוח לצורך פלנימטריה; עובי פרוסה לא אחיד במהלך עיבוד דגימה; ואיכות תמונה ירודה שמגבילה את ההגדרה המדויקת של גבול האימפרקט. בשנים האחרונות הוכנסו מספר שינויים טכניים בתהליך הכנת הדגימה, כגון שימוש במטריצות לב אקריליות4 או הקפאה חלקית של הלב כדי להקל על חיתוך3. למרות ששינויים אלו שיפרו משמעותית את הפרקטיות של חיתוך רקמות, הגישה המקובלת ממשיכה להסתמך על הדמיה גסה של קטעי לב עבים, לעיתים יוצרים איכות תמונה משתנה ומתחת לאופטימלית5, עם ניגודיות צבע לא מספקת שיכולה להכניס סובייקטיביות משמעותית למדידת אוטם6. יתרה מזאת, השיטה הקונבנציונלית דורשת שימוש ברקמת לב שלמה, מה שמונע ניתוחים רב-תכליתיים על אותן דגימות רקמה, כגון צביעת חלבונים רגולטוריים עם מערכת חיסון לזיהוי מפלי איתות מרכזיים המעורבים בהישרדות הלב. כתוצאה מכך, נדרשים לעיתים קרובות מספר רב של בעלי חיים כדי להתמודד כראוי עם שאלות מחקר שונות.

כדי להתגבר על מגבלות אלו5, פיתחנו פרוטוקול מתאים להדמיה מיקרוסקופית של צביעת TTC. שיטה זו משלבת שלבי צביעה של "פרפוזיה + הטמעה" עם כריתת רקמת הלב לפרוסות דקות המותאמות להדמיה במיקרוסקופ אור. למרות ששיטה זו דווחהלאחרונה ב-7, אנו מאמינים שמתן נהלים ניסיוניים מפורטים משפר את הפרקטיות והנגישות שלה. יתרה מזאת, מכיוון ששיטת ה-TTC המיקרוסקופית מייצרת תמונות ברזולוציה גבוהה המורכבות ממספר שכבות של חתכי לב, פיתחנו אלגוריתם חצי-אוטומטי מבוסס צבע חזק להתמודדות עם האופי הארוך של ניתוח מערכי נתונים גדולים של תמונות. השיטה הנוכחית מאפשרת זיהוי מהיר של אזורי האוטם וכימות גודל האוטפקט הגלובלי בתוך דקות.

בסך הכול, הפרוטוקול המוצג כאן משמש ככלי בעל ערך, המאפשר לחוקרים ליישם שיטה זו ביעילות ובקלות ובדיוק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הניסויים אושרו על ידי LANUV של נורדריין-וסטפאלן, גרמניה, ובוצעו בהתאם להנחיות ARRIVE ולמדריך NIH לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה. כל הציוד והכימיקלים הנדרשים מופיעים בטבלת החומרים.

1. הקמת מערכת פרפוזיה רטרו-לנדורף

הערה: המערכת מורכבת מתא עצירה דו-כנופי תלת-כיווני המחובר לקנולה אאורטלית העשויה ממחט קהה בקוטר 20 ושני פתחי עירוי, אחד לתמיסת השטיפה (יציאת מלח עם זרחן (PBS)) והשני לעירוי TTC (פורט TTC). על ידי החלפת כיוון הסטופוקוק התלת-כיווני, הפרפוזאט יכול להיות מועבר ללב לסירוגין.

  1. מקבע את המכשיר אופקית על צלחת פטרי בקוטר 150 מ"מ באמצעות רצועת דבק כדי למנוע תנועה לא רצויה בשלבים הבאים.
  2. כוונו את קצה הקנולה כך שיהיה 1 מ"מ מעל התחתית, וליישר אותו עם גובה שורש האאורטה כאשר הלב מונח שטוח.
  3. מלא מראש את המערכת ב-PBS קר מאוד באמצעות מזרק של 10 מ"ל דרך יציאת PBS.
  4. הכינו תמיסת צביעה טרייה (1% TTC מומס ב-PBS); נדרש נפח מינימלי של 6 מ"ל לכל לב.
    אזהרה: ניסיון להריון נחשב בדרך כלל למסוכן ודורש טיפול זהיר, שכן הוא עלול לגרום לגירוי קל בעור, גירוי חמור בעיניים, ולהיות מזיק אם נשאפ. להשליך פסולת ושאריות בהתאם לדרישות הרשות המקומית.
  5. השתמש במזרק של 3 מ"ל כדי למלא מראש את פתח ה-TTC בתמיסת הצביעה.
  6. ודא שאין בועות אוויר לא מכוונות במערכת, שכן הן עלולות לגרום לתסחיף אוויר פוטנציאלי שיפריע לכתמים הבאים. ברוב המקרים, בועות אוויר נראות במערכת; כאשר הם קיימים, הסר אותם על ידי משיכת ומילוי PBS תוך הקשה עדינה על תאי העצירה התלת-כיווניים במצב הקנולה הזקופה.
  7. צור קשר חצי מרובע רופף באמצעות תפר משי 6-0 ומניח אותו בקצה המרוחק של הקנולה לקיבוע מאוחר יותר של שורש האאורטה.

2. הכנת דגימת לב

הערה: עכברים C57BL/6J (20-25 גרם) שימשו במחקר זה. אוטם שריר הלב הניסיוני (MI) בוצע על ידי קשירת העורק הקדמי היורד (LAD) בניתוח למשך 30-60 דקות, כפי שמתואר להלן. שיטת האינדוקציה של MI דווחה בעבר8 ואינה מפורטת במאמר זה. אלא אם צוין אחרת, דגימות לב נאספו 24 שעות לאחר ההפרעה.

  1. הוציאו את עכבר ה-MI מהכלוב והפכו אותו להפרעה צווארית תחת הרדמה איזופלורנית עמוקה (3%, v/v).
    הערה: כל הליכי המתת חסד חייבים להיות מתועדים ומדווחים כראוי, כולל הסיבה להמתת החסד והשיטה שבה נעשה שימוש, בהתאם לתקנות המקומיות.
  2. העבר את החיה שהושמדה לשולחן הניתוחים ואבטח את כל ארבעת הגפיים עם דבק דבק.
  3. הסר את הפרווה מאזור אמצע הבטן ועד אמצע כף הרגל הקדמית באמצעות מלקחיים ומספריים מיקרו-ניתוחים.
  4. בצע חתך רוחבי באורך 2 ס"מ בדופן שריר הבטן, ממש מתחת לסרעפת, כדי לאפשר כריתת חזה נוספת.
  5. פרוש את הסרעפת במספריים עדינות כדי לחשוף את הלב, ואז בצע חתכים דו-צדדיים דרך העור, השריר והצלעות כדי לפתוח את חלל החזה.
  6. חתוך את הסרעפת דו-צדדית וחשוף את הלב במלואו על ידי הרמת עצם החזה.
  7. שופכים מיד 20 מ"ל PBS קר על פני הלב כדי לעצור את הדופק.
  8. הוצאו את הלב יחד עם הרקמות הסובבות (הריאות והוושט) והעבירו את מסת הרקמה לבקבוק בגודל 50 מ"ל המכיל PBS קר למשך כדקה כדי לאפשר לדופק להירגע.
  9. העבר את הלב לצלחת פטרי בקוטר 150 מ"מ וגזום את שורש האאורטה ללא רקמת חיבור תחת מיקרוסקופ בינוקולרי באמצעות מלקחיים ומספריים דקים.
  10. הסר בעדינות את התימוס וחשף את האאורטה העולה.
  11. גזום שורש האאורטה על ידי ניתוח רקמת החיבור.
  12. הרימו את גזע האאורטה עם פינצטה עדינה והתקינו אותו מעל הקנולה שכבר מחוברת למכשיר פרפוזיה שממולא מראש בתמיסת צביעת PBS ו-TTC. השתמש בפינצטה עדינה לייצוב דופן שורש האאורטה בזמן ההכנסה.
  13. אבטח את האאורטה באמצעות קשר רופף מראש על הקנולה. בדקו בקפידה את הקנולה והלב בזמן שהם עוברים פרפיוז רטרו עם PBS. מילוי הלב ניתן לאשר חזותית על ידי בליטת החדר ככל שנפח ה-PBS הנכנס ללב עולה.
  14. השאירו את הרקמות החוץ-לביות (הריאות והוושט) במקומן כדי לתמוך בלב במצב טבעי ומתאימ.

3. צביעת ניסיון להרות

  1. כסו את הלב בנייר טישו לח לאחר שהקניולציה מאובטחת.
  2. התחילו לשטוף את הלב עם מזרק 10 מ"ל מחובר מראש מלא ב-PBS קר בקצב של 2-3 מ"ל לדקה למשך 3 דקות, עד שנוזל הלב מתנקז. זה מבטיח שרק כמות מינימלית של דם תישאר בלב ובכלים. בשלב זה, יש להימנע מלחץ יתר במהלך הפרפוזיה, שכן הוא עלול לגרום לקרע בחדר הסגור.
  3. בדקו את הלב תחת מיקרוסקופ בינוקולרי כדי לוודא שאין דליפה בשורש האאורטה ושהוא מתנפח כראוי תחת לחץ פרפוזיה.
  4. סובב את העצירה התלת-כיוונית לכיוון תמיסת ה-TTC והזריק בהדרגה 1 מ"ל של תמיסת צביעה דרך פתח ה-TTC במשך 30 שניות.
  5. השרתו מחדש 1 מ"ל של תמיסת TTC חמש דקות לאחר מכן וחזרו על השלב הזה שוב אחרי עוד 5 דקות (10 דקות אחרי ההזרקה הראשונה). נדרש סך הכל 3 מ"ל של תמיסת TTC להזרקה של 3x במשך 15 דקות.
  6. בדוק את פני הלב תחת מיקרוסקופ בינוקולרי. בשלב זה, כבר אמורה להיות הבחנה ברורה בין שריר הלב הקיים (אדום עמוק) לרקמה נקרוטית (אפורה בהירה).
  7. הסר את כל הרקמות הלא-לביות באמצעות מספריים עדינים והעבר את הלב המוצבע לצינור קוני בגודל 15 מ"ל המכיל 3 מ"ל תמיסת TRIPC.
  8. הניחו את הצינור הקוני בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה לסבב צביעה נוסף בטבילה.

4. הכנת חסימת רקמה

  1. הוציאו את הלב מהצינור הקוני וייבשו אותו בזהירות עם נייר טישו. בשלב זה, הצביעה בשריר הלב הקיים הופכת לבולטת יותר, ושריר הלב הלא-פרפיוזי (אזורים אפיקרדיאליים ואולי אנדוקרדיאליים) גם הם מראים כתמים אדומים בהירים.
  2. מלאו קנולה קהה ומעוקלת בקוטר 20 עם תרכובת טמפרטורת חיתוך אופטימלית (OCT) באמצעות מזרק בנפח 1 מ"ל.
  3. חתוך את המסתום הטריקוספידי עם מספריים עדינים והכנס את הקנולה לחדר הימני.
  4. מלאו את החלל בתרכובת OCT (כ-50-80 מיקרוליטר) ועצרו את ההזלפה כאשר נצפים זרימה חוזרת.
  5. חשפו את המסתם המיטרלי והכניסו את הקנולה דרך העלייה השמאלית ומסתם המיטרלי אל החדר השמאלי.
  6. החריקו בעדינות את החלל בתרכובת OCT (כ-80 מיקרוליטר) ועצרו את ההזלפה כאשר נצפים זרימה מהאאורטה.
  7. הכינו קפסולה גלילית קטנה (בקוטר 1 ס"מ) עשויה נייר אלומיניום וממלאים אותה ב-300 מיקרוליטר של תרכובת OCT.
  8. הניחו בזהירות את הלב בתוך הקפסולה במצב קצה כלפי מטה וכוונו אותו לכיוון אנכי. מנקודת מבט מלמעלה למטה, הקצה לא צריך לבלוט יתר על המידה לכיוון אף צד.
  9. טבלו את הקפסולה בתמיסת 2-מתילבוטאן מקוררת מראש ל-30 מעלות צלזיוס עד 40 מעלות צלזיוס.
  10. אפשר לדגימה להישאר בתמיסה 5-10 דקות כדי להתגבש לפני יצירת בלוק רקמה.
  11. יש לסמן את בלוק הרקמה ולאחסן אותו בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס לניתוח היסטולוגי נוסף.

5. קריוסקציה וקיבוע

  1. התקן את בלוק הרקמה על צ'אק קריוסטט באמצעות תרכובת OCT.
  2. הנח את הצ'אק בקריוסטט וקבע את הטמפרטורה לכ-24 מעלות צלזיוס.
  3. חתוך את בלוק הרקמה עד שהקצה יהיה גלוי.
  4. הגדר את עובי החתך ל-50 מיקרון ואספו כל פרוסה שנייה, מה שמוביל למרווחים של 100 מיקרון בין הפרסות.
    הערה: הימנעו מקיפול רקמות במהלך הקרוגה. זה מצטמצם במידה רבה על ידי מילוי חללי החדר הריקים בתרכובת OCT (ראו שלבים 4.4-4.6).
  5. יישר את הפרוסות ברצף על שקופיות זכוכית מיקרוסקופיות, ומניח שמונה חלקים בכל שקופית. בסך הכל, צפויים 80 חלקים, כלומר 10 שקופיות, לכל לב.
  6. ייבשו את המחסניות עם מייבש שיער על ההגדרה הנמוכה ביותר באמצעות זרימת אוויר בטמפרטורת החדר (אין צורך בחימום) למשך כ-10 דקות.
  7. טבלו את השקופיות בתא צביעה מלא בתמיסת זמבוני (קיבוע המכיל 2% פאראפורמלדהיד ו-0.4% חומצה פיקריקית, ללא וי).
    אזהרה: הקיבעון של זמבוני עלול לגרום לתגובה עורית אלרגית וחשוד כגורם למומים גנטיים ולקרצינוגנזה. סילוק פסולת ושאריות בהתאם לתקנות הרשות המקומית.
  8. תקבע את רקמת הלב בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה. קיבוע ארוך טווח זה מבטיח שמשטח רקמת הלב נשאר נקי מבועות אוויר שנוצרו במהלך תהליך הקיבוץ.
  9. אחרי הקיבע, מוציאים את הסליידפים מהפקסטיב ושוטפים אותן שלוש פעמים עם PBS.
  10. התקן את המגלשות עם מדיום ההתקנה וכסה את החלקים עם משטחי כיסוי. לאחר שלב זה, שקופיות הלב מוכנות לרכישת תמונה.
  11. אחסן את הדגימות בקופסת שקופיות בטמפרטורת החדר.
    הערה: מכיוון שמשקעי פורמזן אינם מסיסים במים, ניתן לשמר את הכתמים במשך שנים ללא אובדן עוצמה.

6. דימות ועיבוד

  1. התקן מיקרוסקופ אור עם מטרת 1.25x והרץ תוכנת CellSens להדמיה.
  2. מקם את אזור הלב במרכז שדה הראייה.
  3. כוון את זמן החשיפה, המיקוד ואיזון הלבן של המצלמה לפי הצורך.
  4. ללכוד תמונות של כל חלק ולשמור את כל התמונות מאותו לב בתיקייה ייעודית.
  5. העתק את סקריפט R (קובץ משלים 1) לפלטפורמת RStudio והפעיל אלגוריתם אוטומטי מבוסס R להערכת מישור מידע. האלגוריתם מחשב את גדלי האוטם הפלנימטרי עבור כל פרוסה ומחשב את נפח האוטם הכולל לכל הלב.
  6. ייצא את מערך הנתונים לקובץ אקסל ונתח את הנתונים לפי הצורך.
  7. ייבא את כל התמונות של כל לב לפלטפורמת ImageJ לשחזור תלת-ממדי נוסף.
  8. ערמו את כל התמונות בסדר קוהרנטי וסדרתי באמצעות תפריט הקופץ של פלטפורמת ImageJ.
  9. צור בנייה תלת-ממדית באמצעות פונקציית הגרף של פני השטח.
  10. פתח את חלון Volume Viewer והתאם את כל הפרמטרים להקרנה תלת-ממדית.
    הערה: המתודולוגיה לאימונוהיסטוכימיה9 וסרטונים לצביעת TTC קונבנציונלית 4,5 דווחו בעבר ואינן כלולות במאמר זה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השלבים המרכזיים בביצוע צביעת TTC מיקרוסקופית מוצגים באיור 1. לאחר שני סבבים של כתמי TC, הופיע דפוס מנוקב ברור על פני הלב. חיתוך סדרתי של כל הלב במרווחים של 100 מיקרון הניב כ-80 חתכי רקמה, כאשר אתר הקשיכה ממוקםסביב הפרוסה ה-60. בכל חלק, הצביעה האדומה העמוקה של קרדיומיוציטים חיים (viaCM) הייתה מובחנת בבירור מהרקמה הנמקית הצהובה (necCM), המסומנת בחומצה פיקריקית, ויצרה גבול מוגדר היטב (איור 2A

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

אוטם שריר הלב (MI), הנגרם מאיסכמיה ממושכת של שריר הלב, נותר דאגה בריאותית עולמית משמעותית, שכן פציעה איסכמית לעיתים פוגעת בתפקוד הכיווץ של הלב הנדרש למחזור דם יעיל. בעשורים האחרונים, הושקעו מאמצים משמעותיים לזיהוי התערבויות או תרכובות שמגבירות את עמידות הלב ללחץ איסכמי1. למרות שנבדקו נקודות קצה חלופיות, כגון שחרור אנזימים11, התאוששות פונקציונלית פוסט-איסכמית, או מדדי קיום תאי בתאים מתורבתים12, רק

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

מחקר זה מומן על ידי FoKo 23/2013 ועל ידי מכון המחקר הקרדיווסקולרי בדיסלדורף (CARID).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מטרה 1.25xאולימפוסPlanApo 1.25X/0.04הדמיה
מזרקים של 10 מ"לב. בראום4617100Vרטרו-פרפוזיה
2,3,5-טריפנילטטרזוליום כלורידמיליפורה1.08380.0100כימיקלים
קנולה של 20 גרםBD305895רטרו-פרפוזיה
3  מזרקים mLב. בראום4617022Vרטרו-פרפוזיה
עצור תלת-כיווניב. בראום16494Cרטרו-פרפוזיה
Aquamount BDH362262Hצירוסקציה
איזוןאוהאוסלא זמיןשקילת כימיקלים
מיקרוסקופ בינוקולרילייקהMZ6קנולציה
C57BL/6Jג'אנבייהלא זמיןבעלי חיים
מצלמהאולימפוסUC30הדמיה
החלקות כיסויאפרדיהBB02400500A113MN20צירוסקציה
קריוסטטלייקהM850צירוסקציה
מים מזוקקים כפוליםמיליפורלא זמיןהכימיקלים הממוססים
מספריים לניתוח דקAESCULAPBC702Rכלים כירורגיים
מלקחיים דקים עם מיקרו-דיסקטיקה AESCULAPFM001Rכלים כירורגיים
שקופיות מיקרוסקופ זכוכיתאנגלברכט11102צירוסקציה
ImageJNIH1.54 גרםעיבוד דימות
איזופלוראןפירמל14150097146754כימיקלים
איזופרופנולרות'  0733.1כימיקלים
מיקרוסקופ אוראולימפוסBX61הדמיה
מלקחיים מיקרו-דיסקטיביים F.S.T11152-10כלים כירורגיים
תרכובת OCTסאקורה4583כימיקלים
צלחת פטריתרנו סיינטיפיק172931רטרו-פרפוזיה
תמלח מפוספט עם בופררות'9143.1כימיקלים
Rstudioתוכנת פוזיט2024.09.0עיבוד דימות
תפר משיF.S.T18020-60רטרו-פרפוזיה
תוכנהאולימפוסCellSens V3.2הדמיה
מספריים לניתוח אל-חלדAESCULAPBC257Rכלים כירורגיים
פתרון זמבונימורפיסטו12773.0050כימיקלים

מקורות

  1. Bolli, R., Becker, L., Gross, G., Mentzer, R., Balshaw, D., et al. Myocardial protection at a crossroads: the need for translation into clinical therapy. Circ Res. 95 (2), 125-134 (2004).
  2. Murphy, E., Steenbergen, C. Mechanisms underlying acute protection from cardiac ischemia-reperfusion injury. Physiol Rev. 88 (2), 581-609 (2008).
  3. Bohl, S., Medway, D. J., Schulz-Menger, J., Schneider, J. E., Neubauer, S., et al. Refined approach for quantification of in vivo ischemia-reperfusion injury in the mouse heart. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (6), H2054-H2058 (2009).
  4. Liepinsh, E., Kuka, J., Zvejniece, L., Vilskersts, R., Dambrova, M. Rodent heart and brain tissue preparation for digital macro photography after ischemia-reperfusion. J Vis Exp. (180), e62942(2022).
  5. Kim, S. -C., Boehm, O., Meyer, R., Hoeft, A., Knüfermann, P., et al. A murine closed-chest model of myocardial ischemia and reperfusion. J Vis Exp. (65), e3896(2012).
  6. Lindsey, M. L., et al. Guidelines for experimental models of myocardial ischemia and infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 314 (4), H812-H838 (2018).
  7. Ding, Z., et al. A refined TTC assay precisely detects cardiac injury and cellular viability in the infarcted mouse heart. Sci Rep. 14 (1), 25214(2024).
  8. Zhu, H., et al. IL-6 coaxes cellular dedifferentiation as a pro-regenerative intermediate that contributes to pericardial ADSC-induced cardiac repair. Stem Cell Res Ther. 13 (1), 44(2022).
  9. Zhu, H., et al. Sfrp1 as a pivotal paracrine factor in the trained pericardial stem cells that foster reparative activity. Stem Cells Transl Med. 13 (2), 137-150 (2023).
  10. Yellon, D. M., Hausenloy, D. J. Myocardial reperfusion injury. N Engl J Med. 357, 1121-1135 (2007).
  11. Li, C., Chen, M., Zhang, D., Xu, T., Wang, Z. Cardiac injury induced by obstructive jaundice: a comprehensive review. Perioper Precis Med. 28 (1), 28-38 (2025).
  12. Chang, X., et al. ß-tubulin contributes to Tongyang Huoxue decoction-induced protection against hypoxia/reoxygenation-induced injury of sinoatrial node cells through SIRT1-mediated regulation of mitochondrial quality surveillance. Phytomedicine. 108, 154502(2023).
  13. Li, Z., Hu, B., Zou, X. Research advances in understanding the role and mechanism of pyroptosis in myocardial ischemia-reperfusion injury. Perioper Precis Med. 2 (2), 52-63 (2024).
  14. Ouyang, W., et al. An immunostaining-based approach for assessing myocardial viability in the infarcted mouse hearts. Front Cardiovasc Med. 12, 1598314(2025).
  15. Benedek, A., et al. Use of TTC staining for the evaluation of tissue injury in the early phases of reperfusion after focal cerebral ischemia in rats. Brain Res. 1116 (1), 159-165 (2006).
  16. Lindsey, M. L., et al. Guidelines for in vivo mouse models of myocardial infarction. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 321 (6), H1056-H1073 (2021).
  17. Lujan, H. L., Janbaih, H., Feng, H. -Z., Jin, J. -P., DiCarlo, S. E. Myocardial ischemia, reperfusion, and infarction in chronically instrumented, intact, conscious, and unrestrained mice. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 302 (12), R1384-R1400 (2012).
  18. Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17 (4), 268-272 (2012).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

TTC
בדיקת מיקרוסקופית 2,3,5-טריפנילטרזוליום כלוריד לניתוח מדויק ואמין של פגיעות שריר הלב
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.