מטרת ניסוי זה היא לבסס גישה חדשה לאינטגרציה בו-זמנית של אופטוגנטיקה, הקלטת אותות סידן תוך מוחי וניטור תנועתיות קיבה, המציעה פרדיגמה חדשה לניטור בזמן אמת של הקשר בין גירוי סומטי לאינטראקציות של מעגל עצבי-תפקוד קרביים, המיושמת במחקר דיקור סיני.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
מטרת ניסוי זה היא לבסס גישה חדשה לאינטגרציה בו-זמנית של אופטוגנטיקה, הקלטת אותות סידן תוך מוחי וניטור תנועתיות קיבה, המציעה פרדיגמה חדשה לניטור בזמן אמת של הקשר בין גירוי סומטי לאינטראקציות של מעגל עצבי-תפקוד קרביים, המיושמת במחקר דיקור סיני.
פרוטוקול זה מתאר טכניקה למניפולציה אופטוגנטית של סוגים ספציפיים של נוירונים ורישום בזמן אמת של ההשפעות של דיקור אלקטרו-אקופונקטורה ב-Zusanli (ST36) על אותות סידן גרעיני ותנועתיות קיבה בעכברים תחת הרדמה in vivo. חקירת המנגנונים המרכזיים העומדים בבסיס יעילות הדיקור הוגבלה על ידי אילוצים טכנולוגיים. עם זאת, התקדמות טכנולוגיית ההדמיה האופטוגנטית והאופטית הניעה את התפתחות מדעי המוח. הקלטת פוטומטריית סיבים, הממנפת בתחילה מדדי סידן מקודדים גנטית כדי לדמיין שינויים בדינמיקת הסידן המעידים על פעילות עצבית, בולטת כטכנולוגיית מפתח לאפיון מתאמים מוח-התנהגות in vivo. יישום האופטוגנטיקה מאפשר קידוד גנטי של נוירונים, המאפשר הפעלה או עיכוב שלהם בתגובה לגירוי האור. יכולת זו מקלה על ביסוס קשרים סיבתיים בין תפקוד המעגלים העצביים לתוצאות התנהגותיות. פוטומטריית סיבים סימולטנית, רישום סידן וגירוי אופטוגנטי מספקים שיטה לרישום ומניפולציה בזמן אמת של פעילות עצבית, ומשמשים כגישה יעילה לחקירת המנגנונים המרכזיים של דיקור סיני. עם זאת, נותר מחסור במחקרים המתעדים את השימוש המקביל בפוטומטריית סיבים, רישום סידן, אופטוגנטיקה וניטור תפקודי קרביים במחקר דיקור. תוצאות ניסוי זה מראות כי EA-ST36 עשוי לווסת את תנועתיות הקיבה הקשורה למעגל PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT . גירוי אופטוגנטי של מעגל זה מייצר את אותו אפקט. לאחר הסופרפוזיציה של השניים, השינויים באות הסידן ובתנועתיות הקיבה מגיעים למקסימום שלהם. מחקר זה ביסס גישה חדשה לאינטגרציה בו-זמנית של הקלטת אותות סידן אופטוגנטית, תוך מוחית וניטור תנועתיות קיבה, המציע פרדיגמה חדשה לניטור בזמן אמת של הקשר בין גירוי סומטי לאינטראקציות של מעגל עצבי-תפקוד קרביים.
בשנים האחרונות, התפשטותם של חיישנים פלואורסצנטיים ביומולקולריים הניעה את השימוש בפוטומטריית סיבים בביולוגיה מולקולרית, מה שמקל על רישום in vivo 1. התקדמות זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של שינויים בפעילות העצבית במוח. השילוב של אופטוגנטיקה מאפשר מניפולציה עצבית, ומציע את היתרון של ביצוע מיידי של אופטוגנטיקה ורישום סיבים אופטיים על ידי החדרת הסיב האופטי. בשילוב עם רישום תפקוד קרביים, שיטה זו מציעה רזולוציה זמנית טובה ומיקוד ברמת הגרעין כדי לראות כיצד דיקור סיני מווסת את תפקודי הקרביים באמצעות שינויים בפעילות העצבית.
מחקרים רבים המחישו את ההשפעה הרגולטורית הברורה של דיקור סיני על תפ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הנהלים פעלו בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שנקבעו על ידי המכונים הלאומיים לבריאות וקיבלו אישור מוועדת האתיקה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המכון לדיקור סיני ומוקסה, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה. עכברי C57 זכרים בוגרים במשקל 25 גרם הועסקו להזרקה ויראלית והשתלת סיבים אופטיים. פרוטוקול הניסויים בבעלי חיים עמד בקפדנות בדרישות התקן הלאומי "קווים מנחים לבחינה אתית של רווחת חיות מעבדה" (GB/T 35892-2018) ואושר על ידי ועדת האתיקה של המוסד.
הערה: שמור על הסביבה נקייה במהלך תהליך הזרקת וירוסים והשתלת סיבים אופטיים. חבשו מסכות לאורך כל המבצע. לאחר תקופת הביטוי הגבוה של הנגיף (21-28 ימים), נערכו דיקור חשמלי ב-S....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
וירוסים הוזרקו לגרעין הפרברכיאלי (PBN), לגרעין הסוליטריוס (NTS) ולגרעין המוטורי הגבי של הנרתיק (DMV) של עכברים, עם סיב שהושתל ב-DMV (איור 1A-G). במהלך תקופת שיא הביטוי הנגיפי, תועדו שינויים בלחץ התוך-קיבה ובאותות הסידן בתוך ה-DMV בעקבות דיקור אלקטרו-אקופונקטורה ב-ST36 וגירוי אופטוגנטי. מטרת מחקר זה היא לבחון את ההשפעות הרגולטוריות של אלקטרו-אקופונקטורה ב-ST36 וגירוי אופטוגנטי על תנועתיות הקיבה, שעשויה להיות קשורה למעגל העצבי PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
החקירה המדעית המרכזית של דיקור סיני נוגעת לוויסות איברי המטרה באמצעות גירוי נקודת דיקור של עצבים אוטונומיים. הממצאים שהוצעו על ידי Q. Ma הציעו כי השפעת הדיקור על אפנון תפקוד האיברים המרוחקים נובעת מרפלקסים אוטונומיים סומטיים המפעילים מסלולים סימפתטיים ו/או פאראסימפתטיים, במיוחד אלה הקשורים למחלות במערכת העיכול ודלקת מערכתית18. עם זאת, המחקר הקיים התמקד בעיקר בחקירות עצבים היקפיים או אזורי מוח מבודדים19,20........
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.
מחקר זה מומן על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82174518, 82474661), קרנות המחקר הבסיסיות למכוני המחקר המרכזיים לרווחת הציבור (ZZ-2023008) ופרויקט החדשנות המדעית והטכנולוגית של האקדמיה הסינית למדעי הרפואה הסינית (CI2021A03402).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| <חזק>וירוס | |||
| rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA (AAV2/9) | מוח VTA | חתול#PT-0020 | |
| rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2/9) | מוח VTA | חתול#PT-12637 | |
| rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9) | מוח VTA | חתול#PT-10973 | |
| <חזק>אחר | |||
| 1 μ מיקרו-מזרק L | המילטון | 80135 | |
| דבק אוניברסלי 3M EPSP Single Bond | פקיד עולמי לרפואת שיניים | 41269 | |
| מחט דיקור סיני | ג'ונג יאן-טאהה | 0.25/13 שניות | |
| CED Micro1401-4 | CED(אנגליה) | 1401-4 | |
| צמנט דנטלי/שרף מוקשה בטמפרטורת החדר | ימאהאצ'י דנטל | לא ישים | |
| מלקחיים עדינים | RWD | F11028-13 | |
| צינור זכוכית | מכשירי דיוק עולמיים | 504949 | |
| האנס-200א | מכון HANS | האנס-200 | |
| Inper Signal (תוכנה) | אינפר | לא ישים | |
| סטודיו אינפר (ונוס) | אינפר | B1502 | |
| בלון לטקס | מנגנון הארווארד | BS4 73-2787 | |
| מערכת הקלטת סיבים אופטיים רב ערוצית (Vista Pro) | אינפר | ₪1000 | |
| מודל דיגיטמיימר נוירולוג | דיגיטמר | NL900D | |
| טבעת סיבים אופטיים | אינפר | V8475 | |
| ספייק 2 (תוכנה) | CED(אנגליה) | לא ישים | |
| מכשירים סטריאוטקסיים (עם מחשבון קואורדינטות) | דיוויד קופף אינסטרומנטס | קופף 942 | |
| טריברומו-אתנול | סיגמא | T48402 | |
| טריברומו-אתנול | סיגמא | T48402 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה