מאמר שיטה

יישום של אופטוגנטיקה בשילוב עם רישום פוטומטריית סיבים בוויסות מעגלים עצביים-תפקודים קרביים על ידי אלקטרואקופונקטורה

719 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/68667

⸱

19 בספטמבר 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מטרת ניסוי זה היא לבסס גישה חדשה לאינטגרציה בו-זמנית של אופטוגנטיקה, הקלטת אותות סידן תוך מוחי וניטור תנועתיות קיבה, המציעה פרדיגמה חדשה לניטור בזמן אמת של הקשר בין גירוי סומטי לאינטראקציות של מעגל עצבי-תפקוד קרביים, המיושמת במחקר דיקור סיני.

תקציר

פרוטוקול זה מתאר טכניקה למניפולציה אופטוגנטית של סוגים ספציפיים של נוירונים ורישום בזמן אמת של ההשפעות של דיקור אלקטרו-אקופונקטורה ב-Zusanli (ST36) על אותות סידן גרעיני ותנועתיות קיבה בעכברים תחת הרדמה in vivo. חקירת המנגנונים המרכזיים העומדים בבסיס יעילות הדיקור הוגבלה על ידי אילוצים טכנולוגיים. עם זאת, התקדמות טכנולוגיית ההדמיה האופטוגנטית והאופטית הניעה את התפתחות מדעי המוח. הקלטת פוטומטריית סיבים, הממנפת בתחילה מדדי סידן מקודדים גנטית כדי לדמיין שינויים בדינמיקת הסידן המעידים על פעילות עצבית, בולטת כטכנולוגיית מפתח לאפיון מתאמים מוח-התנהגות in vivo. יישום האופטוגנטיקה מאפשר קידוד גנטי של נוירונים, המאפשר הפעלה או עיכוב שלהם בתגובה לגירוי האור. יכולת זו מקלה על ביסוס קשרים סיבתיים בין תפקוד המעגלים העצביים לתוצאות התנהגותיות. פוטומטריית סיבים סימולטנית, רישום סידן וגירוי אופטוגנטי מספקים שיטה לרישום ומניפולציה בזמן אמת של פעילות עצבית, ומשמשים כגישה יעילה לחקירת המנגנונים המרכזיים של דיקור סיני. עם זאת, נותר מחסור במחקרים המתעדים את השימוש המקביל בפוטומטריית סיבים, רישום סידן, אופטוגנטיקה וניטור תפקודי קרביים במחקר דיקור. תוצאות ניסוי זה מראות כי EA-ST36 עשוי לווסת את תנועתיות הקיבה הקשורה למעגל PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT . גירוי אופטוגנטי של מעגל זה מייצר את אותו אפקט. לאחר הסופרפוזיציה של השניים, השינויים באות הסידן ובתנועתיות הקיבה מגיעים למקסימום שלהם. מחקר זה ביסס גישה חדשה לאינטגרציה בו-זמנית של הקלטת אותות סידן אופטוגנטית, תוך מוחית וניטור תנועתיות קיבה, המציע פרדיגמה חדשה לניטור בזמן אמת של הקשר בין גירוי סומטי לאינטראקציות של מעגל עצבי-תפקוד קרביים.

מבוא

בשנים האחרונות, התפשטותם של חיישנים פלואורסצנטיים ביומולקולריים הניעה את השימוש בפוטומטריית סיבים בביולוגיה מולקולרית, מה שמקל על רישום in vivo 1. התקדמות זו מאפשרת ניטור בזמן אמת של שינויים בפעילות העצבית במוח. השילוב של אופטוגנטיקה מאפשר מניפולציה עצבית, ומציע את היתרון של ביצוע מיידי של אופטוגנטיקה ורישום סיבים אופטיים על ידי החדרת הסיב האופטי. בשילוב עם רישום תפקוד קרביים, שיטה זו מציעה רזולוציה זמנית טובה ומיקוד ברמת הגרעין כדי לראות כיצד דיקור סיני מווסת את תפקודי הקרביים באמצעות שינויים בפעילות העצבית.

מחקרים רבים המחישו את ההשפעה הרגולטורית הברורה של דיקור סיני על תפקוד מערכת העיכול 2,3,4, אם כי המנגנונים המרכזיים המדויקים נותרו חמקמקים. ספרי רפואה סיניים עתיקים רבים, כגון HuangDiNeiJing, רשמו גם כי ST36 (בצד הצדדי האחורי למפרק הברך, כ-2 מ"מ נחות מפיבולה5) משמש לעתים קרובות לטיפול במחלות במערכת העיכול. מחקרים אחרונים הראו כי גרעינים המעורבים בתהליכים פיזיולוגיים של הקיבה (למשל, התנהגות האכלה6, הפסקת אכילה7, דיכוי תיאבון8) ותהליכים פתולוגיים (למשל, כאבי קיבה9, תפקוד לקוי של הקיבה10) מקיפים את הגרעין הפאראסובטלמי (PSTn), גרעין הראפ הגבי (DRN), הגרעין הפרברכיאלי הצדדי (LPB), גרעין הדרכי הבודד (NTS) והגרעין המוטורי הגבי של הנרתיק (DMV). מחקרים הראו כי דיקור חשמלי ב-ST36 יכול להגדיל את מספר תאי c-Fos+ ב-DMV, ובכך להגדיל את ביטוי c-Fos+ בתת-הגרעין הזנבי של NTS11. בנוסף, תועד כי הגרעין הפרה-צנטריקולרי (PBN) מעורב בהרכב הקומפלקס הגרעיני הפרה-צנטריקולרי, יכול להקרין עד ל-medulla oblongata NTS, הממלא תפקיד חשוב באינטגרציה של מידע חושי קרביים, כגון אותות במערכת העיכול12,13. המידע לעיל מצביע על כך שדיקור סיני יכול לווסת את תנועתיות הקיבה עשויה להיות קשורה למעגל העצבי PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT. נוירונים גלוטמטרגיים מעורבים בעיקר ב-LPB וב-NTS14, בעוד שתאי עצב כולינרגיים מעורבים בעיקר ב-DMV במהלך תהליכים פיזיולוגיים ופתולוגיים בקיבה15. חקירת ההשפעות הרגולטוריות של דיקור סיני על מעגלים עצביים ותפקודים קרביים יכולה לספק הבנה ברורה יותר של מנגנוני הדיקור ולספק גיבוי תיאורטי להתערבויות דיקור קליניות במחלות קרביים.

עם זאת, בשל מגבלות טכניות, מחקר מוגבל התעמק במנגנוני המעגלים העצביים של אלקטרו-אקופונקטורה בוויסות תפקודים קרביים. לכן, המחקר הנוכחי מציג הנחיות פשוטות להצגת התהליך המפורט של הזרקת הנגיף. יש לציין כי ניתן להשתמש במתודולוגיה המוסברת במאמר זה כדי להבהיר את מנגנוני המעגלים המעורבים בוויסות הדיקור של תפקודים קרביים מגוונים.

לכן, מחקר זה נועד לחקור את ההשפעות הרגולטוריות של דיקור סיני על תנועתיות הקיבה, שעשויות להיות קשורות למעגל העצבי PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT על ידי שילוב אופטוגנטיקה עם פוטומטריית סיבים להקלטת הדמיית סידן. המטרה היא להקים פרוטוקול להדמיית סידן וסנכרון אופטוגנטי, ולהציג מסגרת מחקר חדשה לחקירת תפקוד קרביים ומעגלים עצביים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל הנהלים פעלו בהתאם להנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה שנקבעו על ידי המכונים הלאומיים לבריאות וקיבלו אישור מוועדת האתיקה לטיפול ושימוש בבעלי חיים של המכון לדיקור סיני ומוקסה, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה. עכברי C57 זכרים בוגרים במשקל 25 גרם הועסקו להזרקה ויראלית והשתלת סיבים אופטיים. פרוטוקול הניסויים בבעלי חיים עמד בקפדנות בדרישות התקן הלאומי "קווים מנחים לבחינה אתית של רווחת חיות מעבדה" (GB/T 35892-2018) ואושר על ידי ועדת האתיקה של המוסד.

הערה: שמור על הסביבה נקייה במהלך תהליך הזרקת וירוסים והשתלת סיבים אופטיים. חבשו מסכות לאורך כל המבצע. לאחר תקופת הביטוי הגבוה של הנגיף (21-28 ימים), נערכו דיקור חשמלי ב-ST36 ומניפולציות אופטוגנטיות כדי לתעד את תנועתיות הקיבה. בעלי החיים שוכנו במתקן בעלי החיים של המכון לדיקור סיני ומוקסה, האקדמיה הסינית למדעי הרפואה, בתנאים מבוקרים (טמפרטורה: 22-24 מעלות צלזיוס, לחות: 50%-60%, 12 שעות בהיר-חושך), עם גישה חופשית למזון ומים. מידע ספציפי לגבי הריאגנטים והציוד המשמש ניתן למצוא בטבלת החומרים.

1. הכנה טרום ניתוחית

  1. לחטא את המכשיר הכירורגי שעבר עיקור בטמפרטורה גבוהה, ולנקות את אזור הניתוח עם 70% אתנול.
  2. הרדמה: לתת זריקה תוך צפקית של 1.25% טריברומו-אתנול (0.2 מ"ל/10 גרם משקל) לעכבר. העריכו את היעדר רפלקס צביטת הבוהן כדי למדוד את עומק ההרדמה.
  3. גלח את השיער מהראש ומקם את העכברים במסגרת סטריאוטקסית המצוידת בסרגלי אוזניים ושיניים. מרחו משחת אריתרומיצין על עיני העכברים כדי למנוע נזק מאור כירורגי.
  4. משרים את טבעת הסיבים האופטיים (גודל טבעת: 1.25 מ"מ טבעת לבנה, סוג סיבים: 200/0.37, אורך סיבים: 5.5 מ"מ, דגם מחט טבעת: V8475) באתנול 75% למשך 30 דקות ולאחר מכן שוטפים את האתנול 70% במי מלח.
  5. טען את המיקרו-מזרק (1 מיקרוליטר) בפרפין (800-900 נ"ל). ממיסים את צינור הזכוכית ומציירים אותו לשני חלקים. מחדדים קטע אחד בקצה באמצעות מכונת השחזה מחט כדי לשמש כמחט ההזרקה. על מנת להבטיח את אטימות הגז של המיקרו-מזרק, מלאו את הצינור בפרפין וחברו אותו למיקרו-מזרק בקצה באמצעות אקדח דבק.

2. ניתוח הזרקה ויראלית

  1. חתכו את הקרקפת לאורך קו האמצע מהעיניים ועד לחלק האחורי של הצוואר כדי לחשוף את הגולגולת. לאחר מכן, כרתו את שרירי הצוואר כדי לחשוף את עצם העורף. נגבו את פני העצם עם H2O2 למשך 30 שניות ולאחר מכן נקו בעזרת צמר גפן יבש כדי להסיר פאשיה תת-עורית ורקמות חיבור (איור 1A).
    הערה: שלב זה נועד להקל על כיסוי המלט הדנטלי על העצם העורפית, מה שהופך את הסיב האופטי למקובע בצורה יציבה יותר.
  2. יישר את הגולגולת.
    1. פילוס ציר X: סמנו שתי נקודות הנמצאות במרחק של 3.5 מ"מ מנקודת ברגמה בתפר העטרה, וחברו את שתי הנקודות ליצירת קו. נקודת האמצע של קו זה היא האפס. הערך המוחלט של הפרש ציר ה- Z על פני העצם במרחק של 3.5 מ"מ מהמקור צריך להיות ≤ 0.03 מ"מ.
    2. פילוס ציר Y: סמן שתי נקודות שנמצאות במרחק של 3.5 מ"מ מנקודת הלמבדה בתפר הלמבדואיד, הגדר את נקודת האמצע של שתי הנקודות וחבר את נקודת האמצע הזו לנקודת הלמבדה ליצירת קו. נקודת האמצע של קו זה היא אפס נוסף. הערך המוחלט של הפרש ציר ה- Z בין אפס זה לאפס בו הותאם משטח העצם במהלך ציר ה- X צריך להיות ≤ 0.03 מ"מ.
  3. סמן את הקואורדינטות הסטריאוטקטיות של הזרקת הנגיף בעזרת עט טוש. עבור PBN: -1.1 מ"מ קדמי-אחורי (ציר AP, Y), -5.45 מ"מ מדיאלי-לרוחב (ML, ציר X), -3.3 מ"מ גבי-גחון (DV, ציר Z) (עם ברגמה כנקודת האפס); עבור NTS: -0.35 מ"מ AP, 0.2 מ"מ ML, -3.3 מ"מ DV (עם הנקודה הגבוהה ביותר של עצם העורף כנקודת האפס); עבור DMV: -0.35 מ"מ AP, 0.0 מ"מ (הנקודה הגבוהה ביותר של העצם העורפית), -3.5 מ"מ DV (עם הנקודה הגבוהה ביותר של העצם העורפית כנקודת האפס) (איור 1B). השתמש במיקרו-מקדחה מהירה (קוטר מקדחה 0.8 מ"מ) כדי לחדור לגולגולת באתרים המיועדים כדי לחשוף את פני השטח של המוח. לאחר מכן, השתמש במלקחיים עדינים כדי לנקב בעדינות את הדורה מאטר ולהסיר אותו, למרוח מי מלח על הפתח הקדוח כדי לשמור על לחות על פני המוח.
  4. מרחו דבק אוניברסלי של Single Bond על משטח הגולגולת (למעט האזור הקדוח) וחשפו אותו לאור למשך 30 שניות לריפוי. חשוב לשמור על משטח גולגולת יבש לפני מריחת הדבק האוניברסלי היחיד כדי להבטיח הידבקות חזקה. בנוסף, יש להימנע מהדבק על השרירים במהלך היישום.
  5. הצמד את המיקרו-מזרק לזרוע המכנית של מנגנון סטריאוטקטי. ממלאים ב-250 נ"ל של וירוס (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA). במגע עם קצה המחט עם פני השטח של המוח, התאימו את העומק (Z) ל-0. הורד את המחט לאתר המטרה בתוך הגרעין הפרברכיאלי (PBN), והזריק את הנגיף לאזור ה-PBN בקצב של 35 nL/min. לאחר ההזרקה, שמור את המחט במקומה למשך 10 דקות, ולאחר מכן משוך אותה במהירות של 6 מ"מ לדקה. לאחר מכן, טבלו את המחט בצינור אפנדורף המכיל מי מלח לניקוי (איור 1C,D).
    הערה: מינוני ההזרקה של כל הנגיפים הבאים הם 250 nL; DMV הוא 100 nL16,17.
  6. השתמשו בפרוטוקול זהה כדי להזריק rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs לתוך גרעין ה-tractus solitarius (NTS) ו-rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA לתוך הגרעין המוטורי הגבי של הנרתיק (DMV) (איור 1D). כל טיטר הנגיף הוא ≥ 1 × 1012 VG/mL.

3. ניתוח השתלת סיבים אופטיים

  1. אבטח את טבעת הסיבים האופטיים על ידי מחזיק האופטרוד והצמד אותו לזרוע המכנית של המנגנון הסטריאוטקטי. הגדר את קואורדינטות ההשתלה המתאימות למיקום של כ-100 מיקרומטר מעל אתר ההזרקה הנגיפי של DMV (איור 1E, F).
  2. מערבבים 1-3 גרם צמנט דנטלי עם 1 מ"ל שרף מוקשה בטמפרטורת החדר עד לקבלת תערובת אחידה. נהל מיד את התערובת סביב טבעת הסיבים האופטיים ועל פני הגולגולת, והשאיר 5 מ"מ מהחלק העליון של טבעת הסיבים האופטיים חשופים. לאחר שהמלט התמצק, שחרר את בורג המחזיק, הרם והסר את המחזיק (איור 1G).
  3. השתמש בתפרים כירורגיים נספגים (6-0) כדי לתפור את הקרקפת העורפית האחורית של עכברים. הסר את העכברים מהמסגרת הסטריאוטקטית והנח אותם בסביבה חמה כדי להתאושש מההרדמה. לאחר שהחיות הפגינו תנועה בלתי מוגבלת, הן הועברו לכלוב נקי ומרווח ללינה, עם 4-5 עכברים ששוכנו יחד ואפשרו להם גישה חופשית למזון ומים.
    הערה: במהלך הניסוי נצפה כי כלוב גדול יותר מועיל לתנועה תקינה של עכברים והוא חיוני לשמירה על משקלם. החלל המוגדל גם מפחית את הסבירות למגע מקרי עם הסיב המושתל, ובכך ממזער נזק פוטנציאלי. עכברים במשקל 25 גרם ומעלה הראו שינויים משמעותיים בלחץ התוך-קיבה בעת הדיקור.

4. ניתוח החדרת בלון

  1. בשיא הביטוי הנגיפי (21-28 ימים), צמו את העכברים במשך 4-5 שעות. לאחר מכן, יש להרדים את העכברים באמצעות הזרקה תוך-צפקית של 1.25% טריברומו-אתנול (0.1 מ"ל/10 גרם משקל). 15 דקות לאחר מכן, יש לתת זריקה תוך-צפקית של תמיסת אתיל קרבמט 10% (0.15 מ"ל/10 גרם משקל). הערך את עומק ההרדמה על ידי אישור היעדר רפלקס צביטה בבוהן.
  2. לגלח את שיער הבטן ואזורי ST36. הפעל את כרית החימום והגדר אותה לשמירה על טמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, כאשר בעל החיים מוחזק על כרית החימום לאורך כל הניתוח כדי להבטיח טמפרטורת גוף קבועה.
  3. חבר את בלון הלטקס למזרק והזריק לתוכו אוויר כדי לבדוק שלבלון הלטקס (BS4 73-2787) אין דליפת אוויר.
  4. חשוף את הקיבה וחלק מהתריסריון מתחת לתהליך ה-xiphoid. בצע חתך קטן בתריסריון באורך של כ- 0.3 ס"מ, 0.5-1 ס"מ דיסטלי לפילורוס.
  5. הכניסו את הבלון לקיבה לאורך כיוון המעי דרך חתך התריסריון, כאשר הקשר ממוקם בסינוס הפילורי.
  6. הסר את מחט המזרק, מלא 5 מ"ל מים טהורים, שחרר את האוויר וחבר את הקצה השני של הבלון עם המזרק. משוך את מנעול האור של המזרק כלפי מעלה כדי לפנות גז מהבלון, ולאחר מכן הורד את מנעול הלואר כדי להזריק את המים הטהורים לתוך הבלון. חבר את המכלול לתא עצירה תלת כיווני ולמתמר לחץ.

5. הקלטה סינכרונית של לחץ תוך קיבה והדמיית סידן

  1. הפעל את מודל Neurolog Digitimer, CED Micro1401-4, Inper Studio, מערכת הקלטת סיבים אופטיים רב-ערוצית, תוכנת Inper Signal ותוכנת Spike 2. הגדר את תוכנת Inper, הקלטת אות סידן כך שתופעל על ידי תוכנת Spike2 וממריץ אופטוגנטי, מה שמבטיח שגירוי לייזר ורכישת אות סידן על ידי תוכנת Inper יתיישרו עם הקלטת לחץ תוך קיבה על ידי תוכנת Spike2.
  2. פתח את כל פקקי העצירה התלת-כיווניים המתחברים לבלון, סובב את כפתור ה-ZERO במודל הדיגיטיימר של נוירולוג, וצפה בתוכנת Spike 2 אם קו הבסיס מותאם לנקודה 0. לאחר השוואת הלחץ בתוך הבלון ללחץ האטמוספרי, יש להזריק מים טהורים לתוך הבלון עד להצגת הלחץ התוך-קיבה 15-35 ס"מ H2O. ברגע שגם אותות הלחץ התוך-קיבה וגם אותות הסידן מגיעים למצב יציב, רשמו קו בסיס של 60 שניות של אותות לחץ תוך-קיבה וסידן ב-DMV (איור 2A).

6. דיקור חשמלי ב-ST36 וגירוי לייזר

  1. הכנס מחט דיקור סיני (0.25 מ"מ × 25 מ"מ) לנקודת הדיקור השמאלית ST36 וחבר אותה למנגנון דיקור אלקטרו-אקופונקטורה (10 הרץ, 1 mA). נהל דיקור חשמלי במשך 60 שניות תוך רישום שינויים בלחץ התוך-קיבה ואותות הסידן.
  2. לאחר ייצוב הלחץ התוך-קיבה הבסיסי ואותות הסידן, העבירו גירוי אופטוגנטי (635 ננומטר, 5 אלפיות השנייה, 5 הרץ, 30 מגוואט) דרך הסיב למשך 60 שניות, תוך ניטור שינויים בלחץ התוך-קיבה ואותות הסידן.
  3. לאחר שקו הבסיס של אותות הלחץ התוך-קיבה והסידן מתייצב שוב, שלב דיקור אלקטרו-סיני ב-ST36 (10 הרץ, 1 mA) עם גירוי אופטוגנטי (635 ננומטר, 5 אלפיות השנייה, 5 הרץ) למשך 60 שניות, ורשום שינויים בלחץ התוך-קיבה ובאותות הסידן.

7. בדיקה היסטולוגית של הזרקה ויראלית ומיקום סיבים

  1. לאחר השלמת הפרוטוקולים הנ"ל, יש להחדיר לעכברים מי מלח ולתקן עם 4% פרפורמלדהיד דרך הלב באופן מיידי. קצרו את מוחם של העכברים. בצע התייבשות שיפוע באמצעות תמיסות סוכרוז של 20% ו-30%, ולאחר מכן חתך לאחר ההטמעה עם חומר הטבעה בהקפאה מהירה. השוו את פרוסות המוח עם מפות המוח של עכברים כדי לראות אם מיקומי הזרקת הנגיף והשתלת הסיבים האופטיים היו מדויקים. המיקום המדויק של זריקות ויראליות ושתלי סיבים אישר את תוקף הלחץ התוך-קיבה ונתוני אות הסידן (איור 1H,I).

8. ניתוח נתונים

  1. ניתוח נתוני אותות סידן באמצעות תוכנת ניתוח נתוני Inper ונתוני תנועתיות קיבה על ידי תוכנת Spike2. השווה את ההבדלים בין אותות סידן או אמפליטודות תנועתיות הקיבה בזמן הגירוי (60 שניות) לבין אלה שלפני הגירוי (60 שניות) כדי להתבונן בהשפעות הרגולטוריות של גירויים שונים על תנועתיות הקיבה ואותות הסידן. כל הנתונים המוצגים באיור 2 הם גרפים של הנתונים המקוריים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

וירוסים הוזרקו לגרעין הפרברכיאלי (PBN), לגרעין הסוליטריוס (NTS) ולגרעין המוטורי הגבי של הנרתיק (DMV) של עכברים, עם סיב שהושתל ב-DMV (איור 1A-G). במהלך תקופת שיא הביטוי הנגיפי, תועדו שינויים בלחץ התוך-קיבה ובאותות הסידן בתוך ה-DMV בעקבות דיקור אלקטרו-אקופונקטורה ב-ST36 וגירוי אופטוגנטי. מטרת מחקר זה היא לבחון את ההשפעות הרגולטוריות של אלקטרו-אקופונקטורה ב-ST36 וגירוי אופטוגנטי על תנועתיות הקיבה, שעשויה להיות קשורה למעגל העצבי PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

החקירה המדעית המרכזית של דיקור סיני נוגעת לוויסות איברי המטרה באמצעות גירוי נקודת דיקור של עצבים אוטונומיים. הממצאים שהוצעו על ידי Q. Ma הציעו כי השפעת הדיקור על אפנון תפקוד האיברים המרוחקים נובעת מרפלקסים אוטונומיים סומטיים המפעילים מסלולים סימפתטיים ו/או פאראסימפתטיים, במיוחד אלה הקשורים למחלות במערכת העיכול ודלקת מערכתית18. עם זאת, המחקר הקיים התמקד בעיקר בחקירות עצבים היקפיים או אזורי מוח מבודדים19,20....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

מחקר זה מומן על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מס' 82174518, 82474661), קרנות המחקר הבסיסיות למכוני המחקר המרכזיים לרווחת הציבור (ZZ-2023008) ופרויקט החדשנות המדעית והטכנולוגית של האקדמיה הסינית למדעי הרפואה הסינית (CI2021A03402).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
<חזק>וירוס
rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA (AAV2/9)מוח VTAחתול#PT-0020
rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2/9)מוח VTAחתול#PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)מוח VTAחתול#PT-10973
<חזק>אחר
1 μ מיקרו-מזרק Lהמילטון80135
דבק אוניברסלי 3M EPSP Single Bondפקיד עולמי לרפואת שיניים41269
מחט דיקור סיניג'ונג יאן-טאהה0.25/13 שניות
CED Micro1401-4CED(אנגליה)1401-4
צמנט דנטלי/שרף מוקשה בטמפרטורת החדרימאהאצ'י דנטללא ישים
מלקחיים עדיניםRWDF11028-13
צינור זכוכיתמכשירי דיוק עולמיים504949
האנס-200אמכון HANSהאנס-200
Inper Signal (תוכנה)אינפרלא ישים
סטודיו אינפר (ונוס)אינפרB1502
בלון לטקסמנגנון הארווארדBS4 73-2787
מערכת הקלטת סיבים אופטיים רב ערוצית (Vista Pro)אינפר₪1000
מודל דיגיטמיימר נוירולוג דיגיטמרNL900D
טבעת סיבים אופטיים אינפרV8475
ספייק 2 (תוכנה)CED(אנגליה)לא ישים
מכשירים סטריאוטקסיים (עם מחשבון קואורדינטות)דיוויד קופף אינסטרומנטסקופף 942
טריברומו-אתנולסיגמאT48402
טריברומו-אתנולסיגמא T48402

מקורות

  1. Li, S., et al. Perspective of calcium imaging technology applied to acupuncture research. Chin J Integr Med. 30 (1), 3-9 (2024).
  2. Xu, X., et al. Mechanism of electro-acupuncture in alleviating intestinal injury in septic mice via polyamine-related M2-macrophage polarization. Front Immunol. 15, e1373876(2024).
  3. Yaklai, K., Pattanakuhar, S., Chattipakorn, N., Chattipakorn, S. C. The role of acupuncture on the gut-brain-microbiota axis in irritable bowel syndrome. Am J Chin Med. 49 (2), 285-314 (2021).
  4. Wang, X. Y., Wang, H., Guan, Y. Y., Cai, R. L., Shen, G. M. Acupuncture for functional gastrointestinal disorders: a systematic review and meta-analysis. J Gastroenterol Hepatol. 36 (11), 3015-3026 (2021).
  5. China Association of Acupuncture and Moxibustion. Nomenclature and location of acupuncture points for laboratory animals Part 3: Mouse. World J Acupunct Moxibustion. 35 (2), 160-166 (2025).
  6. Chen, J., et al. A vagal-NTS neural pathway that stimulates feeding. Curr Biol. 30 (20), 3986-3998 (2020).
  7. Campos, C. A., Bowen, A. J., Schwartz, M. W., Palmiter, R. D. Parabrachial CGRP neurons control meal termination. Cell Metab. 23 (5), 811-820 (2016).
  8. Zhang, T., Perkins, M. H., Chang, H., Han, W., de Araujo, I. E. An inter-organ neural circuit for appetite suppression. Cell. 185 (14), 2478-2494 (2022).
  9. Zhang, F. C., et al. A vagus nerve dominant tetra-synaptic ascending pathway for gastric pain processing. Nat Commun. 15 (1), 9824(2024).
  10. Dong, W. Y., et al. Brain regulation of gastric dysfunction induced by stress. Nat Metab. 5 (9), 1494-1505 (2023).
  11. Iwa, M., Tateiwa, M., Sakita, M., Fujimiya, M., Takahashi, T. Anatomical evidence of regional specific effects of acupuncture on gastric motor function in rats. Auton Neurosci. 137 (1-2), 67-76 (2007).
  12. Browning, K. N., Travagli, R. A. Central nervous system control of gastrointestinal motility and secretion and modulation of gastrointestinal functions. Compr Physiol. 4 (4), 1339-1368 (2011).
  13. Sun, L., et al. Parabrachial nucleus circuit governs neuropathic pain-like behavior. Nat Commun. 11 (1), 21(2020).
  14. Simpson, E., et al. Lights, fiber, action! A primer on in vivo fiber photometry. Neuron. 112 (5), 718-739 (2024).
  15. Tao, J., et al. Highly selective brain-to-gut communication via genetically defined vagus neurons. Neuron. 109 (13), 2106-2115 (2021).
  16. Yao, L., Ye, Q., Liu, Y., et al. Electroacupuncture improves swallowing function in a post-stroke dysphagia mouse model by activating the motor cortex inputs to the nucleus tractus solitarii through the parabrachial nuclei. Nat Commun. 14 (1), 810(2023).
  17. Lyu, Q., Xue, W., Liu, R., et al. A brain-to-gut signal controls intestinal fat absorption. Nature. 634 (8035), 936-943 (2024).
  18. Ma, Q. Somatotopic organization of autonomic reflexes by acupuncture. Curr Opin Neurobiol. 76, e102602(2022).
  19. Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
  20. Liu, S., et al. Somatotopic organization and intensity dependence in driving distinct NPY-expressing sympathetic pathways by electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
  21. Luo, L. Architectures of neuronal circuits. Science. 373 (6559), eabg7285(2021).
  22. Yuan, Z., et al. A corticoamygdalar pathway controls reward devaluation and depression using dynamic inhibition code. Neuron. 111 (23), 3837-3853 (2023).
  23. Feng, J., et al. Monitoring norepinephrine release in vivo using next-generation GRABNE sensors. Neuron. 112 (12), 1930-1942 (2024).
  24. Smith, J., et al. Regulation of stress-induced sleep fragmentation by preoptic glutamatergic neurons. Curr Biol. 34 (1), 12-23 (2024).
  25. Li, Y., Liu, Z., Guo, Q., Luo, M. Long-term fiber photometry for neuroscience studies. Neurosci Bull. 35 (3), 425-433 (2019).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

מאמרים קשורים