שיטה זו מדמיינת את המבנה הטבעי של סיבי קולגן בגוף הזגוגית באמצעות מיקרוסקופ רפלקטיבי קונפוקלי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנת עיני חזיר למיקרוסקופיה רפלקטיבית קונפוקלית כדי להמחיש את רשת סיבי הקולגן הזגוגית
במאמר זה
סיכום
תקציר
הזגוגית היא ג'ל שקוף הממלא את החלל שבין העדשה לרשתית. המבנה שלו נתמך על ידי רשת של סיבי קולגן, מה שככל הנראה משפיע על תכונות ויסקו-אלסטיות ותורם למחלות רשתית. עם זאת, הארגון של רשת קולגן זו נותר לא מאופיין היטב מכיוון שהדמיית הזגוגית במצבה המקורי היא מאתגרת. טכניקות הדמיה רבות המיושמות על הזגוגית גורמות להתייבשות ועיוותים, ושיטות מבוססות צבע יכולות להכניס חפצים או תיוג לא ספציפי, מה שמקשה על חקר רשת הקולגן. בפרוטוקול זה, אנו מתארים: 1) שיטה לניתוח עיני חזיר לצורך הדמיה; 2) אסטרטגיה להרכבת העיניים על מיקרוסקופ הפוך; 3) הנחיות להדמיית רשת הקולגן הזגוגית במצבה המקורי באמצעות מיקרוסקופיה רפלקטיבית קונפוקלית; ו-4) הוראות לניתוח תמונה כמותי של מאפייני הרשת. אנו מדגישים מלכודות נפוצות ומדגישים נקודות טכניות מרכזיות. אנו מדווחים על יישום מיקרוסקופ רפלקטיבי קונפוקלי על הזגוגית. בהשוואה לאסטרטגיות הדמיה קודמות של הזגוגית, גישה זו משמרת את המבנה, הכיוון וההפצה המקוריים של סיבי קולגן בזגוגית ללא צבעים אקסוגניים או חפצי התייבשות. מיקרוסקופ רפלקטיבי קונפוקלי יכול לחקור את הבסיס המבני של קשיחות ג'ל הזגוגית בבריאות ובחולי.
מבוא
הזגוגית היא המטריצה החוץ-תאית בין העדשה לרשתית בעין. מתיחה מהזגוגית על הרשתית ממלאת תפקיד מרכזי באובדן ראייה במחלות כמו היפרדות רשתית, חור מקולרי ומתיחה של הזגוגית 1,2,3,4. יכולתו של הזגוגית להעביר כוחות משיכה לרשתית נקבעת על ידי קשיחות הג'ל שלה, אשר בתורה תלויה בתכונות המרכיבים העיקריים שלה, קולגן וחומצה היאלורונית5. קשיחות הג'ל של הזגוגית מושפעת ככל הנראה מתכונות של רשת סיבי הקולגן, מכיוון שהקשיחות של ג'ל קולגן מלאכותי מונעת על ידי מאפייני רשת כגון צפיפות, יישור ורוחב סיבים6.
רשת סיבי הקולגן הזגוגית קשה להדמיה בגלל תכולת מים גבוהה וריכוז קולגן נמוך7, מה שמוביל לעיוות מלאכותי במהלך העיבוד למיקרוסקופיה או מיקרוסקופ אלקטרונים שידור. היסטולוגיה מסורתית ומיקרוסקופ אלקטרונים הולכה דורשים עיבוד כדי להקשיח את הזגוגית לחתך דק. ההתייבשות הנדרשת להטמעה היסטולוגית גורמת לסיבי זגוגית להצטבר לתצורת חלת דבש8, והיווצרות גבישי קרח במהלך ההקפאה מגדילה את גודל הנקבוביות במטריצה החוץ-תאית9. הטמעת פלסטיק8 והקפאה מהירה10 הוחלו על הזגוגית כדי למזער את החפץ, אם כי ככל הנראה נשאר חפץ שיורי כלשהו. מיקרוסקופ ניגודיות פאזה היא שיטה שאינה דורשת חתך והוחלה על הזגוגית, אך היא דורשת הסרת חתיכה קטנה של זגוגית מהעין, ובכך לאבד את המיקום והכיוון המקוריים של הרשת11. לאחרונה, נעשה שימוש במיקרוסקופ אור מקוטב כמותי כדי למפות את הכיוון הממוצע של סיבים על פני עין חזירית חתוכה ברוטו, אך לא ניתן היה לפתור סיבים בודדים12. בנוסף, גישות תיוג מבוססות צבע (למשל, טריפאן כחול, אדום פיקרוסיריוס, 5-(4,6-דיכלורוטריאזיניל) אמינופלואורסצאין) יכולות להכניס חפצים או תיוג לא ספציפי ולכן נמנעו כדי לשמר את רשת הקולגן המקומית.
אימצנו את שיטת הכנת הדגימה המשמשת את Filas et al. למחקר מיקרוסקופ אור מקוטב, כלומר, דיסקציה גסה בבלוק אגרוז12, וצילמנו את הדגימה באמצעות מיקרוסקופ החזר קונפוקלי, שלא יושם בעבר על הזגוגית. באמצעות שיטה זו, רכשנו תמונות של רשת סיבי הקולגן הזגוגית במצב לחות, כמעט פיזיולוגי. זה מציע מספר יתרונות על פני שיטות קודמות, כולל חפצים מופחתים בהשוואה לגישות מבוססות שבר בהקפאה או התייבשות10,13. פרוטוקול זה דורש מיקרוסקופ קונפוקלי הפוך עם מטרת טבילה של הגדלה של פי 30 לפחות, צמצם מספרי גדול מ-0.9 ומרחק עבודה גדול מ-200 מיקרומטר. אנו כוללים הדרכה מרכזית להכנת דגימה ורכישת תמונה כדי להקל על רזולוציה ברורה של סיבים. על ידי שמירה על מצב כמעט טבעי של מטריצת הקולגן הזגוגית, גישה זו מאפשרת לחוקרים לנתח כמותית את כיוון הסיבים, צפיפות ופרמטרים של פיזור מרחבי שסביר להניח שהם חיוניים להבנת נוקשות הזגוגית והשינויים הפתולוגיים שלה. טכניקה זו מתאימה במיוחד לחוקרים המתעניינים ברשת הקולגן הזגוגית, במבנה שלה ובפתוגנזה של מחלות זגוגית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
1. הכנת רקמות ודיסקציה
הערה: מחקר זה בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות. במוסד שלנו, לא נדרש אישור מהוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים כדי לבצע ניסויים בעיני חזיר ex vivo .
- השג עיני חזיר ex vivo ממפעל לעיבוד בשר. יש להשתמש בעיניים תוך 48 שעות מהמוות.
הערה: למרות שמראה הזגוגית אינו משתנה עם זמן ארוך יותר לאחר המוות, הרשתית והכורואיד מתפרקים, מה שמוביל לפיזור של פסולת תאית ופיגמנטית במהלך הדיסקציה. פסולת זו עלולה להפריע להדמיה ולניתוח סיבים. - הסר עודפי שריר ורקמת חיבור מהגלובוס.
- הניחו את הכן בעל שלושת השיניים על בסיס תבנית קובייה, כגון תבנית קוביות קרח מסיליקון גדולה במיוחד (איור 1A ואיור 2).
- הנח את הגלובוס על הדום בעל שלוש השיניים, ומקם אותו כך שהלימבוס מונח על השיניים.
- הכינו ג'ל אגרוז 3% על ידי הוספת 3 גרם אגרוז לשימוש כללי ל-100 מ"ל מים מזוקקים ולאחר מכן חימום התמיסה עד להמסה. לאחר שהתמיסה התקררה לסביבות 37 מעלות צלזיוס, יוצקים אותה לתבנית עד שהעין שקועה באגרוז.
הערה: זה יטמיע את העין בג'ל אגרוז כדי לייצב את העין לדיסקציה. - מצננים את קוביית האגרוז למשך 4 שעות לפחות.
הערה: זה מגביר את הידבקות הג'ל לעין ויבטיח שהעין תישאר ללא תנועה במהלך דיסקציה - לאחר הקירור מוציאים את קוביית האגרוז מהתבנית. לאחר מכן, הסירו את הכן מהקובייה (איור 1B).
- בנו מסגרת תלת-צדדית באותם מידות כמו קוביית האגרוז באמצעות שילוב של 1 x 8 לבני לגו, צלחות ואריחים (איור 3).
הערה: זה יאבטח את הקובייה במקומה ויספק מדריך ללהב במהלך הדיסקציה. גובה מסגרת הלגו יקבע את המיקום בו תיחתך העין. ניתן לדמיין זאת באמצעות ג'ל האגרוז השקוף למחצה. - מניחים את קוביית האגרוז המקוררת במסגרת הלגו. החזק להב מיקרוטום בעל פרופיל גבוה בקצוות הקהים ויישר את הלהב עם החלק העליון של מסגרת הלגו. הפעילו לחץ עדין כלפי מטה על החלק העליון של הקובייה וגררו בעדינות את להב המיקרוטום קדימה ואחורה דרך הקובייה כולה והעין המוטמעת (איור 1C).
הערה: זה ייצור קטע של רקמת עין המוטבע באגרוז, אשר ייקרא "כובע העין".
2. מדגם הרכבה להדמיה
- בעזרת להב המיקרוטום, חתכו כ-1 מ"מ של אגרוז מכל המשטח החתוך של הקובייה (איור 4A).
הערה: זה ישאיר קטע קטן של מכסה העין המשתרע מעל המשטח החתוך של קוביית האגרוז - השתמש במגבון טישו או בספוג תאית משולש קטן כדי לייבש את המשטח החתוך של קוביית האגרוז, במיוחד ליד גבול מכסה העין.
- מוסיפים ככפית אחת של איטום סיליקון לכל מטרה לשקית סנדוויץ' קטנה מפלסטיק וחותכים חור של 3 מ"מ באחת הפינות התחתונות של השקית ליצירת שקית זילוף לאיטום.
- בעזרת שקית הצנרת, מרחו חרוז דק של איטום על פני השטח החתוכים של קוביית האגרוז, ממש לאורך קצה מכסה העין, וצרו גבול עמיד למים סביב הדגימה (איור 4B). זה ימנע מהג'ל הזגוגי לדלוף החוצה ממכסה העין.
- הניחו זכוכית כיסוי גדולה מעל מכסה העין ולחצו כלפי מטה כך שהמשטח החתוך של מכסה העין יהיה במגע עם מכסה הכיסוי ללא אוויר או נוזל כלוא (איור 4C). ודא שחרוז הסיליקון יוצר אטימה רציפה עם הכיסוי.
הערה: אם איטום הסיליקון אינו יוצר אטימה רציפה, נוזל הזגוגית עלול לדלוף החוצה ולאפשר אוויר לתוך הדגימה. חשיפה לאוויר תגרום להתכווצות הזגוגית, וכתוצאה מכך סיבים בהירים וצפופים יותר, כמו גם אזור נוזלי ללא סיבים. אם הזגוגית אינה במגע עם הכיסוי, יהיה קשה לדמיין. - תוך כדי החזקת קוביית האגרוז, הפוך את הדגימה והנח אותה על מתאם הכיסוי הגדול להדמיה במיקרוסקופ הפוך (איור 4D ואיור 5).
3. רכישת תמונות
- השתמש במיקרוסקופ קונפוקלי הפוך שאינו מסוג דיסק מסתובב. השתמש במטרת מים (עם מים או ג'ל סיכה לעיניים כמצמד), או אובייקט שמן עם צמצם מספרי של 0.90 לפחות, הגדלה בין 30x-60x ומרחק עבודה של לפחות 200 מיקרומטר.
- התאם את הגדרות נתיב האור עבור המיקרוסקופ הקונפוקלי כדי לקבל תמונות השתקפות. במקום המראה הדיכרואית המשמשת לניתוב מחדש של אור מרגש והעברת אור נפלט להדמיה פלואורסצנטית, ודא שיש מראה מפצלת קרן המפנה חלק מהלייזר המאיר ומעבירה חלק מהאור המוחזר.
הערה: אות ההחזר מסיבי קולגן זגוגית חלש במקצת, כך שרעשי רקע יכולים להשפיע על היכולת לצלם סיבים. יחס אות לרעש משופר נצפה באורך גל של 473 ננומטר, אך הצלחנו לדמות את סיבי הקולגן הזגוגיים באורכי גל שנעים בין 405 ננומטר ל-635 ננומטר. - הגדר את אורכי גל הזיהוי כך שיכללו את אורך הגל של הלייזר המאיר.
- כדי לכוון את מיקום Z בתוך הדגימה, הקטן את עוצמת הלייזר להגדרה הנמוכה ביותר האפשרית וזהה את הבזק האור המוחזר מהחלקה. זה יקרה בחלק התחתון והחלק העליון של הכיסוי (איור 6).
הערה: ליד הכיסוי, יש אות רפלקטיבי ניכר ברקע. הרחק מהכיסוי, האות מהאור המוחזר מסיבי הקולגן פוחת. - כוונן את מיקום z כך שהוא ממוקם מעל החלק העליון של הכיסוי ובתוך הדגימה.
- הגדל את עוצמת הלייזר לרמה גבוהה יותר מזו המשמשת בדרך כלל ליישום פלואורסצנטי.
הערה: ישנו חפץ טבעת רפלקטיבי שיהיה במרכז שדה ההדמיה. שילוב של התקרבות והפחתת שדה ההדמיה יכול לעזור להוציא חפץ זה (איור 7). - השתמש במיצוע קו והגדל את זמן השהייה של הפיקסלים בהגדרות רכישת התמונה, שהן שיטות סטנדרטיות להגדלת יחס האות לרעש במיקרוסקופים קונפוקליים.
4. ניתוח תמונה של רוחב הסיבים באמצעות CT-FIRE 14
- התקן את CT Fire בהתאם להוראות באתר זה: https://github.com/uw-loci/curvelets/wiki/Downloads-and-Installation-(CTF).
הערה: הגרסאות ששימשו כאן היו "CT-FIRE V3.0 BetaWindows64-2018b" וזמן הריצה של MATLAB, "MCR-2018b-win64". יש להוריד את שניהם כדי שהתוכנה תעבוד. - המירו את התמונות ל-tif של 8 סיביות ופתחו את תמונות ה-tif של 8 סיביות ב-CT-FIRE.
- ודא שהתוכנה מוגדרת ל - CT-Fire בפינה השמאלית העליונה ולאחר מכן בחר הפעל.
- CT-FIRE תעלה אוטומטית את תוצאות הניתוח לתיקיה בשם "ctfireout" הממוקמת באותה תיקייה כמו התמונה המקורית. בחן את איכות החילוץ על ידי השוואת הקובץ המתחיל בשם "OL_ctFIRE" לתמונה המקורית. כדי לעקוב אחר פרוטוקול זה, השתמש בהגדרות ברירת המחדל הבאות לפילוח תמונה (כלומר, זיהוי סיבים): thresh_im2: 5; s_xlinkbox: 8; thresh_ext: 70; thresh_dang_L: 15; thresh_short_L: 15; s_fiberdir: 4; thresh_linkd: 15; thresh_linka: -150; thresh_flen: 15
- אם הסיבים אינם מזוהים במדויק, התאם את הפרמטרים על ידי לחיצה על עדכן כפתור מתחת לקטע הפרמטרים בפינה השמאלית העליונה.
הערה: הנחיות כיצד להתאים את הפרמטרים ניתן למצוא בעמוד 20 בסעיף "3 הערות" במדריך CT-FIRE, שנמצא בתיקיית היישום CTFIRE. טיפים נוספים ניתן למצוא במאמר של ליו ואחרים בסעיף 3.5.215.
- אם הסיבים אינם מזוהים במדויק, התאם את הפרמטרים על ידי לחיצה על עדכן כפתור מתחת לקטע הפרמטרים בפינה השמאלית העליונה.
- התאימו את הגדרות הפלט במידת הצורך כדי להגביל את הסיבים המופיעים בתמונות הפלט. כדי לעקוב אחר פרוטוקול זה, השתמש בהגדרות ברירת המחדל הבאות: אורך סיבים מינימלי [פיקסלים]: 30; רזולוציה של תמונה [dpi]: 300; רוחב קו סיבים [0-2]: 0.5; רוחב סיבים מקסימלי [פיקסלים]: 15
- כדי להמיר את יחידות הרוחב מפיקסל למיקרומטר, פתח את התמונה המקורית בפיג'י. השתמש במידות התמונה המופיעה הן בפיקסלים והן במיקרומטר בפינה השמאלית העליונה של חלון התצוגה כדי לחשב יחס.
5. ניתוח תמונה של צפיפות סיבים, עקמומיות, יישור, לקוניות, יחידת גידול היפאלית וממד פרקטלי באמצעות TWOMBLI16
- הורד את TWOMBLI מ-https://github.com/wershofe/TWOMBLI.
- עקוב אחר ההוראות בקובץ: TwombliDocumentation תחת "התקנה ותלות".
- פתח את תיקיית TWOMBLI_v1/תוכניות והחלף קובץ AnamorfProperties.xml בקובץ AnamorfPropertiesEH.xml (קובץ משלים 1).
- בתיקיה TWOMBLI_v1/programs, החלף את הקובץ Twombli_v1.ijm בקובץ Twombli_v2.ijm (קובץ משלים 2).
- צור תיקיה עם תיקיות ריקות בתוכה בשם "בדיקת HDM", "מסכות בדיקה", "HDM" ו"מסכות".
- המר את התמונות ל-tif של 8 סיביות.
- שים 3-5 תמונות בתיקיית "קלט ערכת בדיקה".
- שים את כל התמונות לניתוח בתיקיה אחת ללא תיקיות משנה הנקראות "זכאי".
- בפיג'י, לחץ על תוספים | פקודות מאקרו | לרוץ | בחר Twombli_v2.ijm ב-twombli/תוכניות.
- עקוב אחר ההנחיות כדי להפעיל את TWOMBLI. כדי לעקוב אחר פרוטוקול זה, השתמש בפרמטרים הבאים: רוויית ניגודיות, 0.35; רוחב קו מינימלי, 3; רוחב קו מקסימלי, 3; חלון עקמומיות מינימלי, 40; חלון עקמומיות מקסימלית, 40; אורך ענף מינימלי, 10; תצוגה מקסימלית HDM, 100; קוטר פער מינימלי, 0
הערה: ייתכן שיהיה צורך להתאים את הפרמטרים של התמונות. התוכנה תנחה את המשתמש בבחירת הפרמטרים, והוראות נוספות ניתן למצוא בקובץ TwombliDocumentation.docx, שהגיע עם התוכנית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
עין אחת מכל אחד משלושה חזירים בוגרים צעירים (נקבה בת 4 חודשים, זכר בן 5 חודשים ונקבה בת 6 חודשים) צולמה לאחר חתך העין במישור צירי דרך הלימבוס התחתון. שישה מיקומי הדמיה נרכשו במישור החתך X-Y, במרווחים של 4 מ"מ זה מזה. בכל מיקום הדמיה, התקבלה רשת רציפה של 4 x 4 של תמונות של 70 מיקרומטר x 70 מיקרומטר (איור 8). עבור כל חזיר, כל תמונה נותחה בנפרד עבור כמה פרמטרים (טבלה 1).
צפיפות הסיבים נמדדה בשתי שיטות: 1) אורך כולל של סיבים לאחר פילוח של מבנים ליניאר...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שיטות הדמיה קודמות של זגוגית הראו צבירת סיבים מלאכותיים13, אובדן ארגון סיבים, כיוון ומיקום17, או הסתמכו על רזולוציה גבוהה בהרבה עם שדה ראייה קטן יותר, מה שהגביל את התובנות לגבי התפלגות הסיבים10. מיקרוסקופ החזר קונפוקלי של רקמה טרייה ex vivo, חתך גס מספק תמונות בקנה מידה מיקרוני של סיבי קולגן זגוגית תוך שמירה על ארגון, אוריינטציה ומיקום סיבים טבעיים. בידינו, גישות צביעה מבוססות צבע (למשל, כחול טריפאן, אדום פיקרוזיריוס...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
כל המחברים אינם מדווחים על ניגודי עניינים רלוונטיים.
תודות
מענק הליבה של המכונים הלאומיים לבריאות EY014800; מענק בלתי מוגבל ממחקר למניעת עיוורון, ניו יורק, ניו יורק, למחלקה לרפואת עיניים ומדעי הראייה, אוניברסיטת יוטה; NIH NEI K08 EY034549; קרן בית החולים הראשוני לילדים; קרן מטילדה זיגלר; אנו מודים לד"ר גיום ל. הוראו ואוסטין ג'ונסון על עיני החזיר.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אגארוזה הראשון | VWR | 0710-500G | |
| סיליקון רב-תכליתי 1 סיליקון, שקוף | GE | 2795576 | |
| ספוג תאית (Weck-Cel Eye Spear) | ביבר -ויזיטק | 000865 | |
| פדסטל מותאם אישית עם 3 פינים | נה | נה | |
| מתאם מותאם להתקנת זכוכית כיסוי גדולה | נה | נה | |
| זכוכית כיסוי גדולה, 1.42" x 2.36" מס' 1 | טד פלה | 260460-100 | |
| לגו (פלטת בסיס קלאסית, 1 על 8 אריחים, 1 x 8 לבנים, 1 על 6 פלטות) | לגו | 11023, 3008, 3666, 4162 | |
| להבי מיקרוטום (פרופיל גבוה) | ליקה ביוסיסטמס | 14035838926 | |
| אובייקטיבית סיליקון 30x Olympus UPlanSApo | אולימפוס | UPLSAPO30XS | |
| מגש קוביות קרח גדול מסיליקון (Samuelworld) | אמזון | 713243280060 | |
| מגבוני רקמה (Kimwipes) | קימברלי קלארק | 34120 |
מקורות
- Sebag, J. Vitreous and vision degrading myodesopsia. Prog Retin Eye Res. 79, 100847(2020).
- Phillips, J. D., Hwang, E. S., Morgan, D. J., Creveling, C. J., Coats, B. Structure and mechanics of the vitreoretinal interface. J Mech Behav Biomed Mater. 134, 105399(2022).
- Seider, M. I., Conell, C., Melles, R. B. Complications of acute posterior vitreous detachment. Ophthalmology. 129 (1), 67-72 (2022).
- Ketkar, M., et al. Vitreomacular traction - a review. Eye. 39 (4), 710-717 (2025).
- Filas, B. A., Zhang, Q., Okamoto, R. J., Shui, Y. -B., Beebe, D. C. Enzymatic degradation identifies components responsible for the structural properties of the vitreous body. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (1), 55(2014).
- Taufalele, P. V., VanderBurgh, J. A., Muñoz, A., Zanotelli, M. R., Reinhart-King, C. A. Fiber alignment drives changes in architectural and mechanical features in collagen matrices. PLoS One. 14 (5), e0216537(2019).
- Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19 (3), 323-344 (2000).
- Los, L. I., van Luyn, M. J. A., Nieuwenhuis, P. Organization of the rabbit vitreous body: Lamellae, Cloquet's channel and a novel structure, the 'Alae canalis Cloqueti'. Exp Eye Res. 69 (3), 343-350 (1999).
- Voytik-Harbin, S. L., Brightman, A. O., Waisner, B. Z., Robinson, J. P., Lamar, C. H. Small intestinal submucosa: A tissue-derived extracellular matrix that promotes tissue-specific growth and differentiation of cells in vitro. Tissue Eng. 4 (2), 157-174 (1998).
- Bos, K. J., et al. Collagen fibril organisation in mammalian vitreous by freeze etch/rotary shadowing electron microscopy. Micron. 32 (3), 301-306 (2001).
- Bembridge, B. A., Crawford, G. N. C., Pirie, A. Phase-contrast microscopy of the animal vitreous body. Br J Ophthalmol. 36 (3), 131-142 (1952).
- Filas, B. A., et al. Quantitative imaging of enzymatic vitreolysis-induced fiber remodeling. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (12), 8626-8637 (2014).
- Los, L. I. The rabbit as an animal model for post-natal vitreous matrix differentiation and degeneration. Eye. 22 (10), 1223-1232 (2008).
- Bredfeldt, J. S., et al. Computational segmentation of collagen fibers from second-harmonic generation images of breast cancer. J Biomed Opt. 19 (1), 016007(2014).
- Liu, Y., Keikhosravi, A., Mehta, G. S., Drifka, C. R., Eliceiri, K. W. Methods for quantifying fibrillar collagen alignment. Methods Mol Biol. 1627, 429-451 (2017).
- Wershof, E., et al. A FIJI macro for quantifying pattern in extracellular matrix. Life Sci Alliance. 4 (3), e202000880(2021).
- François, J., Victoria-Troncoso, V., Albarran, E. The histochemical structure of the vitreous fibers studied by phase-contrast microscopy. Am J Ophthalmol. 69 (5), 763-773 (1970).
- Hwang, E. S., Morgan, D. J., Sun, J., Hartnett, M. E., Toussaint, K. C., Coats, B. Confocal reflectance microscopy for mapping collagen fiber organization in the vitreous gel of the eye. Biomed Opt Express. 14 (2), 932(2023).
- Harris, J. R. Visualizing in vitro type I collagen fibrillogenesis by transmission electron microscopy. Methods Mol Biol. 1627, 367-383 (2017).
- Arevalo, R. C., Urbach, J. S., Blair, D. L. Size-dependent rheology of type I collagen networks. Biophys J. 99 (8), L65-L67 (2010).
- Raub, C. B., et al. Noninvasive assessment of collagen gel microstructure and mechanics using multiphoton microscopy. Biophys J. 92 (6), 2212-2222 (2007).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
