הטרוגניות של סרטן הערמונית ועמידות לטיפול נותרו אתגרים. אנו מתארים פרוטוקול ליצירת אורגנואידים שמקורם בחולה (PDOs) המשמרים את מאפייני הגידול ההורי המרכזיים. מודל סטנדרטי זה תומך בבדיקת תרופות ובהתקדמות ברפואה מדויקת.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הקמה ותחזוקה של אורגנואידים של סרטן הערמונית שמקורם בחולה: פרוטוקול ניסיוני מפורט
במאמר זה
סיכום
תקציר
סרטן הערמונית (PCa) הוא ממאירות הטרוגנית מאוד וגורם מוביל לתמותה הקשורה לסרטן בקרב גברים, עם אתגרים קליניים משמעותיים בהתמודדות עם עמידות לטיפול והתקדמות המחלה. למודלים פרה-קליניים קיימים, כגון קווי תאים דו-ממדיים (2D) ו-xenografts שמקורם בחולה (PDX), יש מגבלות בסיכום נאמן של המורכבות של PCa, כולל הטרוגניות של הגידול, איתות תלוי קולטן אנדרוגן (AR) ואינטראקציות מיקרו-סביבתיות. כדי להתמודד עם פער זה, מחקר זה מציג פרוטוקול חזק וניתן לשחזור להקמת אורגנואידים שמקורם בחולה (PDOs) המשמרים את המאפיינים הגנטיים, הפנוטיפיים וההיסטולוגיים של גידולי ההורים. שיטה זו מאפשרת תרבית של אורגנואידים מ-PCa מקומי ומתקדם כאחד, ומספקת מודל רלוונטי מבחינה ביולוגית לחקר מנגנוני מחלה, תגובה לתרופות וגילוי סמנים ביולוגיים. התוצאות מדגימות את יכולתו של הפרוטוקול לייצר אורגנואידים ממגוון דגימות קליניות, עם יישומים בבדיקת תרופות בתפוקה גבוהה ורפואה מדויקת. על ידי הצעת זרימת עבודה סטנדרטית הנותנת מענה לאתגרים טכניים מרכזיים, מחקר זה מדגיש את החשיבות של PDOs ככלים רב-תכליתיים לקידום מחקר סרטן הערמונית ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות יעילות יותר.
מבוא
סרטן הערמונית (PCa) נותר אחת הממאירות השכיחות ביותר בקרב גברים ברחבי העולם, שני רק לסרטן הריאות בתמותה הקשורה לסרטן. על פי מחקרים אפידמיולוגיים אחרונים, השכיחות העולמית של PCa עולה בהתמדה, וצפוי שמספר המקרים החדשים של סרטן הערמונית מדי שנה יעלה מ-1.4 מיליון בשנת 2020 ל-2.9 מיליון עד 20401. למרות ההתקדמות בגילוי מוקדם ופיתוח טיפולים חדשים, כולל טיפול במניעת אנדרוגנים (ADT) ותרופות ממוקדות, סרטן הערמונית נותר אתגר קליני משמעותי בשל אופיו ההטרוגני וההתפתחות הבלתי נמנעת של עמידות לטיפול, במיוחד בשלבים מתקדמים2. סרטן ערמונית עמיד לסירוס (CRPC), המופיע לאחר כישלון ADT, מייצג צורה קטלנית של המח....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול
מחקר זה נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים העממי וושי מס' 2 (מספר אישור: Y-38 (2023)). כל המשתתפים סיפקו טפסי הסכמה מדעת בכתב. נתוני המטופלים עברו ביטול זיהוי כדי להבטיח הגנה על הפרטיות בהתאם לסטנדרטים אתיים.
1. איסוף דוגמאות
- רכישת רקמות
- הכנה לפני הדגימה
- קריטריונים להכללה: ודא שלכל המשתתפים יש אבחנה מאושרת של סרטן הערמונית, כפי שנקבע על ידי בדיקה פתולוגית או הדמיה. להפיק דגימות גידול מכריתה כירורגית, ביופסיה או דגימות קליניות אחרות. ודא שכל המשתתפים הם בני 18 ומעלה ואין להם ממאירויות אחרות, כדי למנוע הפרעות פוטנציאליות מסוגי סרטן אחרים בחקר ....
- הכנה לפני הדגימה
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תוצאות
מאפייני גידול מורפולוגיים ודינמיים של אורגנואידים של סרטן הערמונית שמקורם בחולה
אורגנואידים של סרטן הערמונית שמקורם בחולה הוקמו בהצלחה מרקמות גידול טריות שנאספו במהלך הליכים קליניים. היווצרות אורגנואידים ראשונית נצפתה בדרך כלל תוך 5-7 ימים מהתרבית (איור 2). תחת מיקרוסקופ שדה בהיר, אורגנואידים הפגינו תכונות מורפולוגיות מובהקות, ויצרו ספרואידים קומפקטיים ומוגדרים היטב או מבנים דמויי בלוטה. אורגנואידים שמקורם בדגימות אדנוקרצינומה הראו ארגון .......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הקמת PDOs עבור PCa מייצגת התקדמות קריטית במודלים פרה-קליניים, המציעה יתרונות משמעותיים על פני תרביות תאים דו-ממדיות קונבנציונליות ו-PDXs16. השיטה המוצגת במחקר זה מאפשרת יצירת אורגנואידים המסכמים נאמנה את המאפיינים ההיסטולוגיים, הגנטיים והפנוטיפיים של הגידול המקורי. על ידי שימור הטרוגניות של הגידול, כולל איתות AR וארכיטקטורה תאית, האורגנואידים מספקים פלטפורמה רלוונטית יותר מבחינה ביולוגית לחקר התקדמות סרטן הערמונית, עמידות לטיפול ותגובות טיפוליות מותאמות אישית
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין מה לחשוף.
תודות
המחברים מודים בהכרת תודה על תמיכתם של הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (מענק מס' 82172831) ופרויקט המחקר המרכזי של ועדת הבריאות ותכנון המשפחה המחוזית של ג'יאנגסו (מענק מס' X20240121).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| A 83-01 | טוקריס | 2939 | |
| adMEM/F12 | גיבקו | 12634010 | |
| ארון בטיחות ביולוגית | ג'ינאן שינביישי ביוטכנולוגיה בע"מ | ||
| פתרון לשחזור תאים | קורנינג | 354253 | |
| צנטריפוגה | חברת טכנולוגיית החיים של שנזן רויוודה בע"מ | M1416R | |
| צינורות צנטריפוגה | נאנג'ינג iResearch Biotechnology Co., Ltd | ||
| Cultrex PathClear BM | R& D | 3533-010-02 | |
| BME עם גורם גדילה מופחת של Cultrex, סוג 2 | R& D | 3533-005-02 | |
| מיכלי גידול (לוחות עם 24 בארות עם הידבקות נמוכה) | תרמו | Nunc-174930-ZX | |
| DHT | ISOREAG | 521-18-6 | |
| איזון אלקטרוני | נאנג'ינג iResearch Biotechnology Co., Ltd | ||
| סרום בקר עוברי | גיבקו | 10099141 | |
| גלוטמין פלוס-200 מ״מ | R& D | B90210 | |
| HEPES | R& D | 1254/10 | |
| חממת תרבית תאים לחה (37°°; C, 5% CO2) | חברת הכלים המדעיים של שנחאי הטיאן בע"מ | HY-160SY | |
| מקרר | נאנג'ינג iResearch Biotechnology Co., Ltd | ||
| מנות תרבות בגודל בינוני | אבסין | ABS7005 | |
| תוספת מדיה N21-MAX (50X) | R& D | AR008 | |
| N-אצטילציסטאין | סיגמא | A9165-5G | |
| ניקוטינאמיד | R& D | 3533-010-02 | |
| נורמוסין | אינויווגן | אנט-אן-אן-2 | |
| מכשיר פיפטינג עם עזר פיפט | חברת Nanjing Hotspot Scientific Instrument בע"מ | ||
| פיפטות | חברת Nanjing Hotspot Scientific Instrument בע"מ | ||
| פרימוסין | אינויווגן | אנט-PM-2 | |
| rhEGF | R& D | 236-EG-01M | |
| rhFGF | R& D | 233-FB-025 | |
| rhFGF-10 | R& D | 345-FG-025 | |
| rhNoggin | R& D | 6057-NG-100 | |
| rhR-ספונדין 1 | R& D | 4656-RS-100 | |
| SB 202190 | טוקריס | 1264 | |
| מכשיר הכנת מתלים חד-תאיים | הנעה אחורית | DSC-400 | |
| מספריים/סכין רקמות | נאנג'ינג iResearch Biotechnology Co., Ltd | ||
| טריפל אקספרס | גיבקו | 126A04013 | |
| ערכת ניתוק גידולים, אנושי | מילטני ביוטק | 130-095-929 | |
| פינצטה | נאנג'ינג iResearch Biotechnology Co., Ltd | ||
| אמבט מים | צ'אנגג'ואו ג'ונגג'יה לייצור כלים ניסיוניים בע"מ | HH-600 | |
| Y-27632 דיהידרוכלוריד | R& D | 1254/10 |
מקורות
- James, N. D., et al. The lancet commission on prostate cancer: planning for the surge in cases. Lancet. 403 (10437), 1683-1722 (2024).
- Knutson, T. P., et al. AR alterations inform circulating tumor DNA detection in meta....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
