הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

השפעות אנטי-סרטניות של מרכיבי מפתח של Pileostegia tomentella באמצעות אפופטוזיס קלאסי בתיווך ROS בתאי סרטן ריאה של תאים לא קטנים

450 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/69008

⸱

19 בספטמבר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1International Zhuang Medicine Hospital affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Zhuang Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, 3Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute of Ethnic Medicine, 4Graduate School of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מציג שיטה להערכת אפופטוזיס בתיווך מיני חמצן תגובתיים (ROS) המושרה על ידי תרכובות טבעיות בתאי סרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC).

תקציר

מחקר זה בוחן את הפוטנציאל האנטי-סרטני של Pileostegia tomentella, תוך התמקדות מיוחדת ביכולתו לגרום לאפופטוזיס קלאסי בתאי סרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC) H1299 באמצעות מסלולים המתווכים על ידי מיני חמצן תגובתיים (ROS). באמצעות גישת בידוד מונחית ביו-אקטיביות, שתי תרכובות פעילות, umbelliferone (UMB) ו-epi-Vogeloside, זוהו כמרכיבים הציטוטוקסיים העיקריים. שתי התרכובות הראו השפעות מעכבות משמעותיות על כדאיות התאים וגרמו למעשה למוות של תאים אפופטוטיים בתאי H1299. חקירות מכניסטיות הראו כי טיפול ב-UMB ואפי-ווגלוזיד הוביל לעלייה ניכרת ברמות ה-ROS התוך-תאי, מה שמרמז על מתח חמצוני כמתווך מרכזי. ניתוח כתמים מערביים חשף רמות מוגברות של קספאז-3 שסוע וירידה בביטוי של החלבון האנטי-אפופטוטי Bcl-2, מה שמעיד על הפעלת המסלול האפופטוטי המיטוכונדריאלי הפנימי. בנוסף, פרופיל טרנסקריפטומי הראה שינויים נרחבים בביטוי הגנים, מה שתמך עוד יותר בשיבוש ההומאוסטזיס התאי. תוצאות אלה מצביעות על כך ש-Pileostegia tomentella ומרכיביו הפעילים מבטיחים כסוכנים טיפוליים פוטנציאליים לסרטן הריאות.

מבוא

מחלת הסרטן מהווה אתגר עולמי אדיר לבריאות הציבור, המאופיין בשיעור תמותה שנתי משמעותי. סרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC) הוא המניע העולמי העיקרי למקרי מוות הקשורים לסרטן, ומהווה כ-85% ממקרי סרטן הריאות1. סרטן, משחק גומלין מורכב מטבעו של תהליכים מולקולריים ותאיים, מושפע באופן קריטי משיבושים בהומאוסטזיס של מיני חמצן תגובתיים (ROS). ROS, הכוללים מחמצנים לא יציבים כגון אניונים סופראוקסיד, רדיקלים הידרוקסיל ומי חמצן, הם תוצרי לוואי של חילוף חומרים תאי תקין ומבצעים פונקציות חיוניות באיתות, התפשטות, בידול ואפופטוזיס2. חוסר איזון בריכוזי ROS יכול לזרז מתח חמצוני, מה שעלול להפעיל מסלולי מוות תאי מתוכנתים, במיוחד אוטופגיה ואפופטוזיס, ובכך לעכב את התפשטות תאי הסרטן והישרדותם3. כתוצאה מכך, ROS מפגינים תפקיד כפול באונקולוגיה, ופועלים הן כמקדמים והן כמדכאים של התקדמות הגידול. בעשור האחרון, האסטרטגיות הטיפוליות של NSCLC התקדמו משמעותית, עם פיתוח של חומרים אנטי-סרטניים חדשים שנועדו לנצל את האופי הדיכוטומי הזה של ROS המייצגיםתחום מחקר תוסס במיוחד.

ידוע כי חומרים אנטי-סרטניים רבים המסונתזים כימית, כגון אדריאמיצין (דוקסורוביצין), ציספלטין וציקלופוספאמיד, גורמים לאפופטוזיס בתאי סרטן על ידי קידום ייצור ROS5. למרות ההתקדמות בטיפולים ממוקדים ונוגדנים אימונותרפיים, כימותרפיה מבוססת פלטינום ממשיכה להיות אבן הפינה של הטיפול בחולי NSCLC. עם זאת, הופעת עמידות ותופעות לוואי שליליות מכימותרפיה מחייבת פיתוח תרופות חדשות נגד NSCLC. כתוצאה מכך, חקר מקורות טבעיים לתרכובות אנטי-סרטניות זוכה להכרה הולכת וגוברת בחשיבותה ובפוטנציאל שלה. מחקרים אחרונים הדגישו כי תמציות צמחים מסוימות ומרכיביהן הפעילים מציגים תכונות אנטי-סרטניות חזקות, המאופיינות ברעילות נמוכה, ספציפיות גבוהה ויכולת להתמקד במספר מסלולים6. יש לציין כי חלק מהתרכובות הטבעיות הללו יכולות לווסת את רמות ה-ROS והאיתות7, ובכך לגרום לאוטופגיה או אפופטוזיס בתאים סרטניים ולהפעיל השפעות טיפוליות 8,9.

Pileostegia tomentella יד. Zucc, צמח רב-שנתי מהסוג Clematis ממשפחת Buttercupaceae, נמצא בעיקר באזורים כמו יפן, צפון קוריאה וסין. מרכיביו השונים של הצמח, לרבות שורשים, גבעולים, עלים ופרחים, ידועים בסגולותיהם הרפואיות, ומציעים יתרונות כמו פינוי חום, ניקוי רעלים, הפחתת נפיחות, שיכוך כאבים והשפעות אנטיבקטריאליות ואנטי דלקתיות. מחקרים אחרונים שפכו אור על הפעילויות האנטי-סרטניות של תמציות או חומרים פעילים של Hoshi Hairy Vine, והדגימו השפעות מדכאות גידול על מגוון סוגי סרטן, כולל גליומה, סרטן השד, המעי הגס וצוואר הרחם10. עם זאת, המנגנונים האנטי-סרטניים הספציפיים של Pileostegia tomentella, במיוחד תפקידו הפוטנציאלי בוויסות ROS כדי לגרום לאוטופגיה או אפופטוזיס בתאים סרטניים, נותרו ברובם לא נחקרו.

למרות העניין המתעורר בתרכובות טבעיות לטיפול בסרטן, המנגנונים הפרו-אפופטוטיים של מרכיבי מפתח מ-Pileostegia tomentella בסרטן הריאות נותרו לא נחקרים. מחקר זה הוא חלוץ בזיהוי וניתוח מכניסטי של umbelliferone ו-epi-Vogeloside כמשפרי אפופטוזיס סלקטיביים תלויי ROS ב-NSCLC.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. הרכב כימי של Pileostegia tomentella וחיזוי מטרות NSCLC

המרכיבים הכימיים של Pileostegia tomentella נותחו באמצעות כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים בשילוב עם ספקטרומטריית מסה של מלכודת יונים ליניארית (HPLC-LTQ/MS). התמציות הומסו בממיסים מתאימים וסוננו לפני ההזרקה. הפרדה כרומטוגרפית הושגה באמצעות עמודת פאזה הפוכה תחת תוכנית פליטת שיפוע המותאמת למחלקות התרכובת. נתוני ספקטרומטריית מסה נאספו במצב יינון אלקטרוספריי חיובי על פני טווח מסה של 100-1500 m/z. מבנים מולקולריים של תרכובות שזוהו שורטטו באמצעות תוכנת שרטוט כימית גנרית ונשמרו בפורמט SDF. קבצים מבניים אלה הוגשו לכלי חיזוי מטרות מקוון כדי לזהות מטרות ביולוגיות פוטנציאליות, כאשר 20 המטרות המובילות נבחרו לאימות נוסף. מטרות הקשורות ל-NSCLC אוחזרו ממאגר גנים נגיש לציבור. המטרות החופפות משני מערכי הנתונים זוהו כמטרות טיפוליות פוטנציאליות של Pileostegia tomentella.

2. בניית רשת רכיב-יעד

נתוני אינטראקציה בין חלבון לחלבון עבור מטרות חזויות התקבלו ממסד נתונים של אינטראקציה חלבונית בגישה פתוחה. נתוני אינטראקציה יובאו לתוכנת הדמיית רשת כללית כדי לבנות את רשת האינטראקציה בין תרכובת למטרה. מאפיינים טופולוגיים של הרשת, כולל מרכזיות דרגה, בין וקרבה, נותחו באמצעות כלים אנליטיים מובנים לזיהוי צמתים רגולטוריים מרכזיים.

3. ניתוח העשרה במסלול KEGG

העשרה פונקציונלית של חלבוני מטרה חזויים בוצעה באמצעות ניתוח מסלול KEGG באמצעות כלי העשרה זמינים לציבור ותוכנות סטטיסטיות. מסלולים עם ערכי p מותאמים נמוכים מ-0.05 נחשבו משמעותיים. מסלולים משמעותיים שולבו עם נתוני יעד מורכב כדי לבנות רשת אינטראקציה "תרכובת-מטרה-מסלול" באמצעות תוכנת הדמיית רשת גנרית. ניתוח טופולוגיית הרשת הדגיש מרכזי רגולציה ביולוגיים מרכזיים, הממחישים את המנגנונים הרב-רכיביים ומרובי המטרות של Pileostegia tomentella.

4. מיצוי מרכיבי Pileostegia tomentella

גבעולי גפן מיובשים של Corydalis spinosa נטחנו לאבקה דקה. החומר האבקתי הופק עם 70% אתנול בטיפול קולי בטמפרטורת החדר לתקופה מוגדרת. התמצית הגולמית סוננה ורוכזה בלחץ מופחת. חלוקה נוזלית-נוזלית בוצעה באמצעות ממיסים בעלי קוטביות הולכת וגוברת, כולל אתר נפט, אתיל אצטט ו-n-בוטנול. מקטע אתיל אצטט, שהראה את הפעילות הביולוגית הגבוהה ביותר בבדיקות ראשוניות, נאסף, רוכז, יובש בהקפאה ונשמר בטמפרטורה של -20 מעלות צלזיוס עד לשימוש נוסף.

5. קו תאים ותנאי טיפול

קו תאי סרטן הריאות האנושי H1299 תורבת במדיום RPMI 1640 בתוספת 10% סרום בקר עוברי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באווירה לחה המכילה 5% CO2. התאים נזרעו בצפיפות מתאימה ואפשרו להם להיצמד למשך הלילה לפני הטיפול. התאים נחשפו לריכוזים משתנים (500 מיקרוגרם/מ"ל, 750 מיקרוגרם/מ"ל ו-1,000 מיקרוגרם/מ"ל) של שתי תרכובות בדיקה, UMB ו-epi-Vogeloside, כמפורט בטבלה 1. לאחר 24 שעות של דגירה בתנאי תרבית סטנדרטיים, התאים נאספו לניתוחים הבאים כדי להעריך את ההשפעות הביולוגיות של התרכובות.

6. בדיקת MTT לכדאיות התא

ההשפעות הציטוטוקסיות של התרכובות הוערכו באמצעות בדיקת MTT קולורימטרית. תאי H1299 נזרעו לתוך צלחות של 96 בארות בצפיפות מוגדרת ואפשרו להם להיצמד למשך הלילה. לאחר מכן התאים טופלו בתרכובות הבדיקה במשך 72 שעות בתנאי תרבית סטנדרטיים. לאחר הטיפול, תמיסה של MTT נוספה לכל באר והודגרה כדי לאפשר לתאים ברי קיימא להמיר MTT לגבישי פורמזן סגולים בלתי מסיסים. לאחר הדגירה, המדיום הוסר, וגבישי הפורמזן הומסו בדימתיל סולפוקסיד (DMSO). הספיגה נמדדה ב-570 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות. ערכי הספיגה תואמים את כדאיות התא, ומספקים הערכה כמותית של ציטוטוקסיות מורכבת.

7. הערכת שלמות הממברנה באמצעות שחרור LDH

שלמות קרום התא הוערכה על ידי מדידת שחרור לקטט דהידרוגנאז (LDH) כאינדיקטור לציטוטוקסיות. תאי H1299 טופלו בתרכובות הבדיקה במשך 24 שעות, 48 שעות או 72 שעות. בכל נקודת זמן, סופרנטנטים תרבית נאספו ועברו בדיקת פעילות LDH על פי פרוטוקול היצרן. מכיוון ש-LDH משתחרר רק מתאים עם ממברנות פגומות, ערכי הספיגה הנמדדים משקפים את היקף הנזק לממברנה שנגרם על ידי התרכובות לאורך זמן.

8. אנליזה ציטומטרית זרימה של אפופטוזיס

אינדוקציה של אפופטוזיס הוערכה על ידי זרימה ציטומטרית באמצעות צביעת Annexin V ו-7-Aminoactinomycin D (7-AAD). לאחר הטיפול בתרכובות הבדיקה, תאי H1299 נאספו על ידי צנטריפוגה, נשטפו במי מלח קרים עם חוצץ פוספט והושעו מחדש במאגר קשירה. לאחר מכן הודגרו התאים עם נספח V מצומד לצבע פלואורסצנטי ו-7-AAD על פי פרוטוקול הצביעה. הדגימות נותחו מיד על ידי ציטומטריית זרימה. שיטה זו אפשרה התמיינות בין תאים ברי קיימא (לא מוכתמים), תאים אפופטוטיים מוקדמים (Annexin V חיובי, 7-AAD שלילי) ותאים אפופטוטיים או נמקיים מאוחרים (חיוביים לשני הכתמים).

9. כימות ROS תוך-תאי

רמות מיני החמצן התגובתי התוך-תאיים (ROS) נמדדו באמצעות מבחן מבוסס פלואורסצנטי. תאי H1299 נזרעו בצלחות של 12 בארות בצפיפות של 1 × 105 תאים לבאר ותרבו עד שהגיעו לכ-80% מפגש. לאחר מכן התאים טופלו בתרכובות המיועדות במשך 72 שעות. לאחר הטיפול, התאים הודגרו עם 1 מיקרומטר של הגשושית הפלואורסצנטית הרגישה ל-ROS 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) ב-37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות בחושך. לאחר הדגירה נקצרו תאים, ועוצמת הקרינה נמדדה באורך גל פליטה של 525 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-פלטות פלואורסצנטיות. עוצמת הקרינה תואמת את רמות ה-ROS התוך-תאי.

10. PCR כמותי בזמן אמת (RT-qPCR)

תאי H1299 נזרעו בצלחות של 6 בארות בצפיפות של 2 × 105 תאים לבאר ותרבו עד שהגיעו לכ-80% מפגש. לאחר מכן התאים טופלו בתרכובות המיועדות במשך 72 שעות. סך ה-RNA הופק בשיטת פנול-כלורופורם בשימוש נרחב. סינתזת DNA משלימה (cDNA) בוצעה באמצעות ערכת שעתוק הפוך על פי הוראות היצרן. PCR כמותי בזמן אמת (qRT-PCR) נערך באמצעות מערכת PCR בזמן אמת עם פריימרים ספציפיים (מפורטים בטבלה 2). רמות ביטוי הגנים היחסיות חושבו בשיטת Ct השוואתית, כאשר גנים לניהול משק בית שימשו כבקרות פנימיות.

11. אימונובלוטינג לביטוי חלבונים

ניתוח כתמים מערביים נערך על תאי H1299 שגודלו וטופלו. סך החלבון הופק באמצעות מאגר ליזה מתאים, וליזטים הובהרו על ידי צנטריפוגה ב-10,000 × גרם למשך 15 דקות ב-4 מעלות צלזיוס. ריכוזי החלבון נקבעו באמצעות בדיקה ספקטרופוטומטרית. כמויות שוות של חלבון מכל דגימה הופרדו על ידי SDS-PAGE והועברו לקרום פוליווינילידן דיפלואוריד (PVDF). הממברנות נחסמו עם חלב יבש ללא שומן 5% למשך שעתיים בטמפרטורת החדר ולאחר מכן הודגרו למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס עם נוגדנים ראשוניים ספציפיים ל-Bcl-2, caspase-3, PARP1, BAX, GADHH וטובולין בדילולים אופטימליים. לאחר הכביסה, הממברנות הודגרו בנוגדנים משניים מתאימים למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. רצועות חלבון הודגמו וצולמו באמצעות מצע כימילומינסנטי. ניתוח צפיפות בוצע באמצעות תוכנת ניתוח תמונה, ועוצמות הפס נורמלו ל-GAPDH וטובולין כבקרות טעינה.

12. מיקרוסקופיה אימונופלואורסצנטית של Caspase-3

הביטוי והלוקליזציה התת-תאית של קספאז-3, חלבון אפופטוטי מרכזי, הוערכו על ידי צביעה אימונופלואורסצנטית. לאחר הטיפול, תאי H1299 קובעו עם פרפורמלדהיד, חדירו בתמיסת דטרגנט עדינה והודגרו עם נוגדן ראשוני נגד קספאז-3. לאחר מכן הוחל נוגדן משני עם תווית פלואורסצנטית כדי לזהות את אות הנוגדן הראשוני. גרעיני התאים הוכתמו באמצעות צבע פלואורסצנטי קושר DNA. התאים המוכתמים הודגמו תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. העוצמה וההתפלגות התאית של אות הקרינה סיפקו מידע איכותי ומרחבי על הפעלת קספאז-3, ותמכו במעורבותו בתגובה האפופטוטית הנגרמת על ידי התרכובת.

13. רצף טרנסקריפטומי

כדי לאפיין את תגובת השעתוק התאית לתרכובות הבדיקה, ה-RNA הכולל חולץ מתאי H1299 שטופלו והוערך לשלמות באמצעות שיטות בקרת איכות סטנדרטיות. ספריות ריצוף הוכנו בהתאם לפרוטוקולים שנקבעו והיו נתונים לריצוף תפוקה גבוהה באמצעות פלטפורמת ריצוף מהדור הבא. נתוני ריצוף גולמיים עובדו באמצעות צינור ביואינפורמטיקה קונבנציונלי, שכלל סינון בקרת איכות, התאמה לגנום הייחוס וכימות שפע התעתיק. ניתוח ביטוי גנים דיפרנציאלי נערך כדי לזהות גנים עם שינויים מובהקים סטטיסטית בביטוי לאחר הטיפול. ניתוחי העשרה ומסלול של הגנים המתבטאים באופן דיפרנציאלי בוצעו כדי להבהיר את התהליכים הביולוגיים העיקריים המושפעים מהתרכובות, ובכך לספק סקירה מקיפה של ההשפעות המולקולריות שלהם.

14. ניתוח סטטיסטי

כל הנתונים מבוטאים כממוצע ± סטיית תקן (SD) משלושה ניסויים בלתי תלויים לפחות. המובהקות הסטטיסטית בין הקבוצות נקבעה בשיטות סטנדרטיות, כולל מבחן t של סטודנט או ANOVA חד כיווני, במידת הצורך. ההבדלים נחשבו מובהקים סטטיסטית עבור ערכי P נמוכים מ-0.05.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הקרנה של מרכיבי מפתח של Pileostegia tomentella כנגד סרטן ריאות
סקירה כללית של תכנון הניסוי מוצגת באיור 1. HPLC-LTQ/Orbitrap MS שימש לאפיון שבעה מרכיבים ביו-אקטיביים עיקריים הקיימים ב-Pileostegia tomentella (טבלה 3). לאחר מכן, נערך חיזוי מטרה בסיליקו על תרכובות אלה באמצעות מסד הנתונים SwissTargetPrediction11, וסינן את התוצאות כך שיכללו רק את אלה עם הסתברויות אינטראקציה העולות על 0....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

סרטן ריאות של תאים לא קטנים (NSCLC) נותר דאגה בריאותית עולמית דחופה, המאופיין בביולוגיה אגרסיבית, התקדמות קלינית מהירה ופוטנציאל גרורתי גבוה, מה שמוביל לעתים קרובות לתוצאות גרועות של המטופלים12. למרות שהתערבויות סטנדרטיות, כגון כריתה כירורגית, הקרנות וכימותרפיה, מציעות תועלת טיפולית במחלה בשלב מוקדם, יעילותן פוחתת בשלבים מתקדמים עקב הופעת עמידות לתרופות ונטל הרעילות המערכתית. הפתוגנזה הבסיסית של סרטן ריאות היא מורכבת ועדיין לא מוגדרת במלואה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי אינטרסים להצהיר עליהם.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי פרויקט בניית משמעת מפתח ברמה גבוהה של רפואה סינית מסורתית - רוקחות מיעוטים אתניים (בית מרקחת ג'ואנג) מהמינהל הממלכתי לרפואה סינית מסורתית (No. zyyzdxk-2023165); תוכנית טיפוח הכישרונות "פרויקט הנוער" של בית החולים הרפואי הבינלאומי גואנגשי ג'ואנג (מס' 2022001); פרויקט צוות החדשנות הרב-תחומי ברפואה הסינית של גואנגשי (No. GZKJ2309); תוכנית צוות החדשנות לטיפוח כישרונות ברמה גבוהה של אוניברסיטת גואנגשי לרפואה סינית מסורתית (מס' 2022A008); פרויקט המחקר והפיתוח המרכזי של מחלקת המדע והטכנולוגיה של גואנגשי (No. Gui Ke AB21196057); תוכנית הפעולה התלת-שנתית לשנת 2023 לבניית צוות כישרונות ברמה גבוהה של בית החולים הרפואי הבינלאומי גואנגשי ג'ואנג (מס' GZCX20231203, GZCX20231202); האצווה השלישית של "פרויקט צ'יהואנג" תוכנית טיפוח צוות כישרונות ברמה גבוהה של אוניברסיטת גואנגשי לרפואה סינית מסורתית (מס' 202414).

תרומת המחבר:

וון ג'ונג, ליימין ג'יאנג ובינג צ'ינג תרמו באופן שווה לעבודה זו וחולקים את המחבר הראשון. הם היו אחראים בעיקר לתכנון ניסויים, רכישת נתונים ופרשנות של תוצאות. Xiumei Ma ערך ניתוח נתונים ותרם להכנת כתבי היד. שי שיאני, דנג צ'ינגמיי וג'ואו גואנג-יון השתתפו בעיצוב המחקר, איסוף הנתונים ומחקר הספרות. ג'יאנג-צ'ון ווי, המחבר המקביל, פיקח על ניתוח הנתונים ופרשנותו ומילא תפקיד מוביל בניסוח ובתיקון כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נספח V– ערכת זיהוי אפופטוזיס PE / 7-AADBD Biosciences556547זיהוי אפופטוזיס מבוסס ציטומטריית זרימה
נוגדן: BAXאבקםאב32503כתם מערבי לחלבון פרו-אפופטוטי
נוגדן: BCL-2אבקםאילן אלכסנדרכתם מערבי/אימונופלואורסצנציה
נוגדן: קספאז-3 שסועאבקםאילן אלכסנדרכתם מערבי / IF
נוגדן: GAPDHאבקםאילן אלכסנדרבקרה פנימית בכתם המערבי
נוגדן: PARP1אבקםאילן אלכסנדרכתם מערבי לסמן אפופטוזיס
נוגדן: טובוליןאבקםאילן אלכסנדרבקרה פנימית בכתם המערבי
ChemDrawפרקין אלמר אינפורמטיקהCCG821391שרטוט מבנה של מולקולות קטנות
מערכת הדמיה כימילומינסנציהטאנון מדע & טכנולוגיהטאנון 5200להמחשת רצועות חלבון
ציטוסקייפCytoscape.orghttps://cytoscape.orgבנייה וניתוח של רשתות
כתם גרעיני DAPIסיגמא D9542כתם נגד גרעיני כחול עבור IF
דודה-NIHhttps://david.ncifcrf.govהערות פונקציונליות והעשרת מסלול KEGG
DMSOסיגמא 
MFCD00002089		משמש להמסת גבישי פורמזאן
אתנול (למיצוי)סיגמאMFCD00003568ממס מיצוי בסיוע אולטרסאונד
אתיל אצטטסיגמאMFCD00009171משמש לפיצול ביו-אקטיבי
נוגדן משני מצומד FITCאבקםאילן אלכסנדרמשמש באימונופלואורסצנציה
ציטומטר זרימהתרמו סיינטיפיקא29001משמש לזיהוי אפופטוזיס ו-ROS
מיקרוסקופ פלואורסצנטיתאגיד אולימפוסBX53Fלהדמיית שקופיות אימונופלואורסצנטיות
מייבש הקפאהתאגיד Labconco7670520לליופיליזציה ושימור מדגם
כרטיסי GeneCardמכון ויצמןhttps://www.genecards.orgמאגר גנים לרלוונטיות למחלה
ספקטרומטריית מסה HPLC-LTQ-Orbitrapתרמו סיינטיפיקIQLAAEGAAVFACZMAIKזיהוי תרכובות על ידי MS
פלטפורמת ריצוף Illumina NovaSeqאילומינה בע"מ20012850משמש עבור RNA-seq
ערכת בדיקת ציטוטוקסיות LDHביוטייםג0016למדידת שחרור LDH כאינדיקטור ציטוטוקסיות
קורא מיקרופלייטתרמו סיינטיפיקVL0000D0למדידות ספיגה במבחני MTT ו-LDH
ערכת בדיקת כדאיות תאי MTTביוטיים C0009Sמשמש לבדיקת MTT להערכת כדאיות התאים
מכונת qPCRתרמו סיינטיפיק4485701לניתוח ביטוי גנים
תוכנת Rקרן Rhttps://www.r-project.orgמחשוב סטטיסטי והתוויית מסלולים
ערכת תמלול הפוך (ערכת RT)ואזיםמ.ר201לסינתזת cDNA
ערכת הכנה לספריית RNA-seqאילומינה בע"מ20020594הכנת ספרייה לריצוף
SwissTargetחיזויהמכון השוויצריhttp://www.swisstargetprediction.chכלי חיזוי מטרה מורכבת
SYBR תערובת qPCR ירוקהואזיםשאלה 311-02עבור PCR כמותי
מגיב טריזול (מיצוי RNA)סיגמא T3934למיצוי RNA כולל
מנקה אולטראסוניברנסוןM1800-CPXHלמיצוי בסיוע אולטרסאונד
מנגנון הכתם המערביתרמו סיינטיפיקא56727אלקטרופורזה של ג'ל והעברת חלבונים

מקורות

  1. Fan, D., Yu, S., Yang, Y., Qu, S. Pyoluteorin induces apoptosis and autophagy in NSCLC cells. Biol Pharm Bull. 44 (7), 976-983 (2021).
  2. Cui, Q., et al. Modulating ROS to overcome multidrug resistance in cancer. Drug Resist Updat. 41, 1-25 (2018).
  3. Wang, Y., et al. The double-edged roles of ROS in cancer prevention and therapy. Theranostics. 11 (10), 4839-4857 (2021).
  4. Sahoo, B. M., Banik, B. K., Borah, P., Jain, A. Reactive oxygen species (ROS): Key components in cancer therapies. Anticancer Agents Med Chem. 22 (2), 215-222 (2022).
  5. Perillo, B., et al. Ros in cancer therapy: The bright side of the moon. Exp Mol Med. 52 (2), 192-203 (2020).
  6. Luo, H., et al. Naturally occurring anticancer compounds: Shining from Chinese herbal medicine. Chin Med. 14, 48(2019).
  7. Han, X., et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 44, 102010(2021).
  8. Lv, C., et al. Ainsliadimer a induces ROS-mediated apoptosis in colorectal cancer cells via directly targeting peroxiredoxin 1 and 2. Cell Chem Biol. 30 (3), 295-307.e5 (2023).
  9. Jiaqi, L., et al. Andrographolide promoted ferroptosis to repress the development of non-small cell lung cancer through activation of the mitochondrial dysfunction. Phytomedicine. 109, 154601(2023).
  10. Liu, Y., et al. Total coumarins of Pileostegia tomentella induces cell death in SCLC by reprogramming metabolic patterns, possibly through attenuating β-catenin/AMPK/sirt1. Chin Med. 18 (1), 1(2023).
  11. Daina, A., Michielin, O., Zoete, V. Swisstargetprediction: Updated data and new features for efficient prediction of protein targets of small molecules. Nucleic Acids Res. 47 (W1), W357-W364 (2019).
  12. Catania, C., et al. New options and open issues in the management of unresectable stage III and in early-stage NSCLC: A report from an expert panel of Italian medical and radiation oncologists - interaction group. Crit Rev Oncol Hematol. 190, 104108(2023).
  13. Guo, H., et al. Biomarker-targeted therapies in non-small cell lung cancer: Current status and perspectives. Cells. 11 (20), 3200(2022).
  14. Mcnamee, N., Da Silva, I. P., Nagrial, A., Gao, B. Small-cell lung cancer update on targeted and immunotherapies. Int J Mol Sci. 24 (9), 8129(2023).
  15. Jiang, R., et al. The sodium new houttuyfonate suppresses NSCLC via activating pyroptosis through tcons-14036/mir-1228-5p/prkcdbp pathway. Cell Prolif. 56 (7), e13402(2023).
  16. Chen, P., Liu, Y., Wen, Y., Zhou, C. Non-small cell lung cancer in China. Cancer Commun (Lond). 42 (10), 937-970 (2022).
  17. Amorim, R., et al. Mitochondriotropic antioxidant based on caffeic acid antioxcin(4) activates Nrf2-dependent antioxidant defenses and quality control mechanisms to antagonize oxidative stress-induced cell damage. Free Radic Biol Med. 179, 119-132 (2022).
  18. Long, K., et al. Small-molecule inhibition of ape1 induces apoptosis, pyroptosis, and necroptosis in non-small cell lung cancer. Cell Death Dis. 12 (6), 503(2021).
  19. Lin, Z., Cheng, X., Zheng, H. Umbelliferon: A review of its pharmacology, toxicity and pharmacokinetics. Inflammopharmacology. 31 (4), 1731-1750 (2023).
  20. Cruz, L. F., et al. Umbelliferone (7-hydroxycoumarin): A non-toxic antidiarrheal and antiulcerogenic coumarin. Biomed Pharmacother. 129, 110432(2020).
  21. Zheng, S., et al. Systematic review of lonicerae japonicae flos: A significant food and traditional Chinese medicine. Front Pharmacol. 13, 1013992(2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

אפופטוזיס בתיווך ROSUmbelliferoneEpi-Vogelosideחיוניות תאיםעקה חמצוניתמסלול אפופטוזיס מיטוכונדריאליWestern Blot
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.