מאמר שיטה

מחקר ניסיוני על מוסקון מפחית את פעילות מסלול NF-κB על ידי התמקדות ב-IL-1R1 כדי להחליש פגיעה בעקה חמצונית בתאי שוואן

DOI:

10.3791/69009

⸱

10 באוקטובר 2025

 ,  ,  , 
1Department of Rehabilitation, Baoshan Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Institute of Innovative Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה חוקר את ההשפעה של מוסקון, המרכיב העיקרי במושק, על התפשטות ואפופטוזיס של תאי שוואן. התוצאות ממחישות באופן ראשוני את המנגנון הפוטנציאלי של מאסק המפחית את פעילות מסלול NF-κB על ידי עיכוב IL-1R1 כדי להחליש פגיעה בעקה חמצונית בשיתוק בל.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המנגנון הבסיסי של האופן שבו מאסק טבעי מטפל בשיתוק בל אינו ברור. מחקר זה נועד לחשוף את המנגנון הפוטנציאלי של מאסק בטיפול בפגיעה עצבית היקפית במבחנה. כדי להשיג זאת, הוקם מודל פגיעת מתח חמצוני בתאי שוואן (SCs) באמצעות קובלט כלוריד (CoCl2). כדי להעריך את ההשפעות המגנות של מוסקון (Mus) על פגיעה זו ולחקור את המנגנון שלה, נעשה שימוש במבחני כדאיות תאים, טרנספקציה של siRNA, מבחני אימונוסורבנט מקושרים לאנזים (ELISA), תגובת שרשרת פולימראז שעתוק הפוך כמותי (qRT-PCR), כתמים מערביים, צביעה אימונופלואורסצנטית וניתוח אולטרה-מבני של תאים. כתוצאה מכך, מצוין כי התערבות Mus שיפרה את התפשטות SC ואת ה-mRNA S-100b תחת היפוקסיה, תוך הפחתת מיני חמצן תגובתיים (ROS) והעלאת רמות סופראוקסיד דיסמוטאז (SOD). Mus שיפר מתח חמצוני ודלקת ב-SCs היפוקסיים על ידי הפחתת IL-1β ו-TNF-α. יתר על כן, Mus אפנן אינדיקטורים מרכזיים המעורבים במטבוליזם של חמצן, תיקון תאים וחילוף חומרים עצבי, כולל C-JUN ו-GDNF. IL-1R1, הממוקם בקרום SC, היה מווסת על ידי היפוקסיה אך הפחית משמעותית בעקבות התערבות Mus. Mus גם עיכב את הביטוי של רכיבי מסלול NF-κB (IRAK1, IKK, p65, p50) והגדיל את IκB-α. באופן קריטי, ביטול ביטוי IL-1R1 באמצעות נוקדאון siRNA הראה השפעה עקבית עם Mus. המסקנה היא כי על ידי דיכוי IL-1R1, Mus החליש את הדלקת ב-SCs היפוקסיים באמצעות עיכוב מסלול NF-κB. מחקר זה הצביע על תפקידו של IL-1R1 בתפקוד לקוי של SC הנגרמת על ידי היפוקסיה. יתר על כן, מוס עשויה להיות תרופה יעילה פוטנציאלית לטיפול בשיתוק בל.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מוסקון (Mus), 3-methylcyclopentadecanone, בודד מהתמצית הטבעית של מושק צבי כבר בשנת 19061. למאסק, רפואה סינית מסורתית (TCM) חשובה ויעילה, יש השפעות מרפאות נרחבות כגון כריתה, אנטי דלקת, החייאה וקידום זרימת הדם2. TCM המכיל מאסק שימש למגוון מחלות נפוצות, כולל מחלת מערכת העצבים המרכזית3, ניקוי רעלים4, גידולים במערכת העיכול5, דלקת כבד נגיפית6 ומחלת לב כלילית7 וכו'. כמרכיב התרופתי הפעיל של מאסק, Mus הראה השפעות ביולוגיות מצוינות הכוללות אנטי דלקת8, נוגד חמצון 8,9, תיקון נזק עצבי והקלה על אוטם שריר הלב10 וכו'. מבחינה מכנית, מחקרים הראו כי Mus יכול להפחית את שחרורם של ציטוקינים דלקתיים כגון אינטרלוקין (IL)-1β, IL-6, גורם נמק גידול (TNF)-α, מיני חמצן תגובתיים (ROS)1,8, ולווסת את החלבון קינאז המופעל על ידי מיטוגן (MAPK), גורם גרעיני קאפה-משפר-שרשרת קלה של תאי B פעילים (NF-κB), AKT/יעד מכניסטי של רפמיצין (mTOR), ומסלול CaN/Erk1/21, 8,11 וכו'.

בסין דווח כי כמה רופאים טיפלו בהצלחה בשיתוק בל עם מושק טבעי על פי רישומי ספרות קודמים וניסיון קליני 12,13,14,15. Mus אינה תרופה מומלצת בהנחיות האבחון והטיפול, אך בתחומים רפואיים לא מפותחים או עבור אנשים מסוימים שאינם יכולים להשתמש בסטרואידים או בתרופות אנטי-ויראליות, Mus יכולה להיות אפשרות מועדפת נוספת. ניתוח הספרות בשנים האחרונות מראה גם כי מושק הוא הרפואה הסינית הנפוצה ביותר במרשמים לרפואה סינית ומחקרי נקודת דיקור לטיפול בשיתוק פנים היקפי16. למרות שישנם מחקרים פרמקולוגיים ורפואיים רבים על מוס, כיצד מאסק ריפא בדיוק את שיתוק בל, ומהם המנגנונים הנוירוכימיים והביולוגיים התאיים הבסיסיים, עדיין לא ידוע.

שיתוק בל, שיתוק פנים אידיופטי חריף, נובע מתפקוד לקוי של עצב הפנים ההיקפי, המעצבב את כל שרירי הפנים. הסימן הבולט ביותר לתסמיני השיתוק של בל הוא חולשה וצניחה של שרירי הפנים בצד אחד. למרות ששיתוק הפנים של בל אינו מסכן חיים, הוא יכול להשפיע על איכות חייו של המטופל ואף לגרום לחרדה ודיכאון. מה שמדאיג במיוחד הוא שעד 30% מהמטופלים סובלים מהשלכות ארוכות טווח, כולל סינקינזיס, התכווצות, שיתוק פנים קבוע ואסימטריה בפנים, אפילו עם טיפול מתאים. לכן, מציאת פתרון לשיתוק בל והפחתת הסיכון לשיתוק הן המטרות העיקריות שלנו. הידע הנוכחי על המנגנון הפתוגני של שיתוק בל נותר לא ברור. מחקר שנערך לאחרונה הוכיח כי הפעלה מחדש של וירוסים עשויה להיות הגורם העיקרי לשיתוק בל, ונגיפים אלה יכולים לגרום לבצקת עצבית ולדלקת כדי לעורר את התקף שיתוק בל.

בהתבסס על ראיות עדכניות, שיערנו ש-Mus מקל על הסימפטומים של שיתוק בל על ידי שיפור נזקי עקה חמצונית לעצב הפנים. מחקר זה הצביע באופן ניסיוני על ההשפעות הטיפוליות של Mus, וחשף כי IL-1R1 מווסת ב-SCs מפעיל את מסלול NF-κB וגורם לנזק תאי. באופן מכריע, הראינו ש-Mus מעכב איתות NF-κB על ידי ויסות נמוך של IL-1R1. הממצאים שלנו זיהו את התפקיד של ויסות מוגבר של IL-1R1 ב-SCs שנחשפו לעקה חמצונית במבחנה ומיצבו את מתן ה-Mus כאסטרטגיה טיפולית חדשנית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר ניסיוני זה נערך באישור הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (מספר אישור: LL-240077).

תרבית תאים והתערבות תרופתית
תאי שוואן של חולדה (SCs) תורבבו במדיום תאי שוואן, המורכב ממדיום בסיסי, 5% סרום בקר עוברי, 1% תוסף צמיחת תאי שוואן, 1% פניצילין ו-1% סטרפטומיצין. כל התאים נשמרו באטמוספירה של 5% CO2 בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. כאשר אפשרו לגדול עד לצפיפות של 70-80%, SCs חולקו לארבע קבוצות (n = 5 לקבוצה): (1) קבוצת NC; (2) קבוצת NC+CoCl2 ; (3) קבוצת NC+CoCl2+Mus; (4) NC+CoCl2+siIL-1R1+קבוצת Mus.

קובלט כלוריד (CoCl2), חומר המשמש לעתים קרובות לחיקוי היפוקסיה, ידוע כמעורר תגובות דומות לאלו של היפוקסיה, כגון עיכוב פירוק וייצוב של גורמים המעוררים היפוקסיה והצטברות של חלבון HIF-1α15. על פי השיטה המתוקנת המבוססת על Osuru et al.17, בקבוצת NC+CoCl2 וקבוצת NC+CoCl2+Mus, SCs תורבבו ב-Schwann Cell Medium בתוספת 240 מיקרומטר CoCl2 למשך 8 שעות, בתנאים אטמוספריים של 95% אוויר ו-5% COCl2 ב-37 מעלות צלזיוס באינקובטור לח (21% O2). לאחר מכן, בקבוצות Mus, יושמה התערבות של 1.25 מיקרוגרם/מ"ל Mus למשך 24 שעות נוספות. בינתיים, בקבוצת NC+CoCl2+siIL-1R1+Mus, ה-SCs טופלו תחילה ב-24 שעות של זיהום siRNA, ולאחר מכן תרבית רציפה עם 240 מיקרומטר CoCl2 למשך 8 שעות, ולאחר מכן התערבות של 1.25 מיקרוגרם/מ"ל Mus למשך 24 שעות נוספות, כמו בקבוצות הקודמות. תרשים הזרימה של תהליך הניסוי מוצג באיור 1.

בדיקת כדאיות תאים
הכדאיות של SCs נקבעה באמצעות ריאגנט בדיקת ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8) בהתאם להוראות היצרן. SCs מתורבתים בצפיפות של 5 × 105 תאים לבאר נזרעו בצלחת תרבית תאים של 96 בארות עם 100 מיקרוליטר של מצע גידול שלם ב-37 מעלות צלזיוס באטמוספירה לחה של 5% CO2 . כאשר המפגש הגיע ל-70-80%, 10 מיקרוליטר של תמיסת CCK-8 נוספו לכל באר, והצלחות הודגרו למשך שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס. הצפיפות האופטית (OD) של לוחות 96 הבארות נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרו-לוחות, וחושבה כדאיות התא. התאים חולקו לארבע קבוצות: קבוצת NC, קבוצת NC+CoCl2 , קבוצת NC+CoCl2+Mus וקבוצת NC+CoCl2+siIL-1R1+Mus. תוצאות הניסוי תוקנו באמצעות באר ריקה (תמיסת בינוני + CCK8). שיעור הישרדות התאים = [(קבוצת ניסוי - באר ריקה)/(קבוצת NC - באר ריקה)] × 100%.

טרנספקציה של siRNA
טרנספקציה בוצעה על פי הוראות היצרן של ריאגנט טרנספקציה מסחרי במבחנה siRNA/miRNA באמצעות דופלקסים סינתטיים של siIL-1R1 (AUAGUCUUGGAUUUUCCAA, GGAGAAAAUCCAAGACUAUGA) בריכוז של 100 ננוגרם/מיקרוליטר למשך 24 שעות. לאחר טרנספקציה של siIL-1R1, ביטויי siIL-1R1 הוערכו על ידי ביצוע ניתוח RT-qPCR לאחר 24 שעות של טרנספקציה18, ויש להבטיח שהיעילות תהיה גבוהה מ-80%

בדיקת אימונוסורבנט מקושרת לאנזים (ELISA)
סופרנטנטים לאחר תרבית נאספו וצנטריפוגות בתנאים ספציפיים לקבוצה (2950 גרם, 20 דקות, 25 מעלות צלזיוס). רמות חוץ-תאיות של IL-1β, TNF-α, ROS ו-SOD נבדקו באמצעות ELISA בהתאם להוראות הערכה. קריאות ספיגה סופיות ב-450 ננומטר התקבלו באמצעות קורא מיקרו-פלטות.

בידוד RNA ו-PCR כמותי בזמן אמת (RT-qPCR)
בהתאם להוראות היצרן, סך ה-RNA הופק מתאים מתורבתים באמצעות מגיב TRizol. גני יעד (IL-1β, TNF-α, S-100b, IL-1R1) הוגברו ב-20 מיקרוליטר של תגובות תערובת SYBR qPCR במשך 40 מחזורים במכשיר PCR. נורמליזציה של נתונים בשימוש β-אקטין, עם ספציפיות PCR מאומתת על ידי ניתוח עקומת התכה. שיטת 2−ΔΔCt כימתה ביטוי יחסי מחמש דגימות בלתי תלויות שנבדקו במשולש. פריימרים מפורטים בטבלה 1.

כתם מערבי
לאחר הטיפול, SCs מכל קבוצות הניסוי הודגרו במשך 24 שעות ונקטפו. סך החלבון הופק באמצעות ערכת מיצוי חלבון כוללת. ליזטים של חלבון שולבו עם אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד (SDS-PAGE) של נתרן דודציל-סולפט שעבר דנטורציה ב-98 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות, והופרד (20 מיקרוגרם לנתיב) על 10-12% ג'ל SDS-פוליאקרילאמיד. חלבונים שנפתרו הועברו אלקטרופורטית לממברנות פוליווינילידן פלואוריד (PVDF). הממברנות נחסמו עם חלב יבש ללא שומן 5% למשך 60 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן הודגרו למשך הלילה בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס בנפח של 6 מ"ל עם הנוגדנים העיקריים הבאים: נוגדן נגד HIF-1α (1:1000), נוגדן נגד GAPDH (1:1000), נוגדן נגד IL-1R1 (1:1000), נוגדן נגד C-JUN (1:1000), נוגדן נגד GDNF (1:1000), נוגדן נגד IRAK1 (1:1000), נוגדן נגד IKK (1:1000), נוגדן נגד P65 (1:800), נוגדן נגד P50 (1:900), נוגדן נגד IκB-α (1:900) ונוגדנים נגד β-אקטין (1:1000). לאחר הכביסה, הממברנות נבדקו עם נוגדנים משניים מצומדים של חזרת פרוקסידאז (HRP) למשך 60 דקות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס. אותות חלבון זוהו באמצעות Image Studio Digits Ver 4.0. עוצמות הלהקה כומתו באמצעות תוכנת ImageJ ונורמלו לביטוי β-אקטין ו-GAPDH. בוצעו שלושה ניסויים עצמאיים.

אימונופלואורסצנציה
לוקליזציה של IL-1R1 ב-SCs הוערכה בעקבות Zhao et al.19. קצור תאים בשלב הצמיחה הלוגריתמית על ידי טריפסיניזציה, השהה אותם מחדש במדיום שלם טרי וטריטור ביסודיות לקבלת תרחיף אחיד של תא בודד. זרע את התאים על צלחות תרבית המכילות החלקות כיסוי סטריליות. לאחר שהתאים הגיעו למפגש מלא, שטפו אותם 1-2 פעמים עם מי מלח עם פוספט (PBS), הסירו בזהירות את החלקות הכיסוי וקבעו את התאים הדבקים ב-4% פרפורמלדהיד ב-PBS למשך 10 דקות, חלחלו עם 0.05% טריטון X-100 (10 דקות), וחסמו עם 5% סרום עיזים (1 שעה). הדגירה הראשונית השתמשה בארנב נגד חולדות IL-1R1 mAb. לאחר שטיפות PBS, הדגימות הודגרו עם IgG נגד ארנב עז מצומד FITC למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. הוסף חומרי הרכבה מסיסים במים להחלקת הכיסוי להרכבה. תאים בעלי תווית חיסונית הודגמו וכומתו באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי עם אורך גל עירור 492 ננומטר ואורך גל פליטה 520 ננומטר.

ניתוח אולטרה-מבנה
בעקבות פרוטוקול19 של Zhao et al., SCs קובעו ב-2.5% גלוטרלדהיד וקובעו לאחר לילה ב-4 מעלות צלזיוס ב-1% אוסמיום טטרוקסיד. הדגימות עברו סדרת התייבשות אתנול/אצטון. חתכים אולטרה-דקים (80 ננומטר) נצבעו באורניל אצטט וציטראט עופרת לפני בדיקה אולטרה-מבנית באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים הולכה.

סילוק ריאגנטים כימיים מסוכנים
המדיום והתמיסות המכילות CoCl2 נאספים למיכל פסולת מתכת כבדה ייעודי. כל החומרים החד פעמיים שבאו במגע עם הנוזלים הנ"ל, לרבות קצות פיפטות, צינורות צנטריפוגות וכפפות, מסווגים כפסולת מסוכנת ממתכות כבדות ומועברים לחברה מורשית לניהול פסולת מסוכנת המאושרת על ידי הרשויות הרלוונטיות לסילוק נאות. השלך את תמיסת הפסולת פרפורמלדהיד למיכל פסולת אלדהיד ייעודי. יש לאסוף חומרים מתכלים משומשים כפסולת אלדהיד ולעבד אותם על ידי אותה חברה מורשית לניהול פסולת מסוכנת.

ניתוח סטטיסטי
השוואות מרובות קבוצות נותחו על ידי ANOVA חד כיווני עם מבחן הפוסט-הוק של Tukey ב-GraphPad Prism 8.0. מובהקות סטטיסטית הוגדרה כ-P < 0.05. הנתונים מוצגים כממוצע ±± סטיית תקן (SD).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

השפעות מגנות של Mus על פגיעה בעקה חמצונית של תאי שוואן במבחנה
הביטוי של HIF-1α הראה שינויים בתגובה לשינויים בנסיבות היפוקסיות20. כדי למדל היפוקסיה, SCs נחשפו ל-CoCl2, אשר גרם בהצלחה להיפוקסיה, כפי שאושר על ידי רמות גבוהות של חלבון HIF-1α, סמן היפוקסיה קנוני, באמצעות כתמים מערביים (איור 2A). התערבות Mus לאחר מכן של SCs היפוקסיים העריכה את השפעותיו על התפשטות ותגובות לחץ. מבחני CCK-8 גילו כי Mus הגדיל באופן משמעות...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

שיתוק בל הוא שיתוק עצב פנים היקפי אידיופטי המאופיין בחולשת פנים חד צדדית. מעטפת המיאלין מבצעת פונקציות חיוניות שונות בתפקוד יעיל של נוירונים23. זה מבטיח הולכה חלקה של דחפים עצביים, תומך בנוירונים על ידי אספקת גורמי הזנה ומסייע בתהליך ההתחדשות24 . לפיכך, אובדן מיאלין במערכת העצבים ההיקפית עלול לגרום לנוירופתיות דמיאלינטיות, שעלולות לגרום לניוון שרירים, פרסטזיה, חוסר תחושה ושיתוק25. לתאי שוואן (SCs), שהם תאי הגליה העיק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין להם אינטרסים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל המחברים רוצים למסור את תודתם לגופי המימון שהם תוכנית הכישרונות של ועדת הבריאות המחוזית של באושאן (מנהיגים אקדמיים מצוינים) (BSWSYX-2024-02), תוכנית תקציב ההוצאות של אוניברסיטת שנחאי לרפואה סינית מסורתית (2021LK003), תוכנית הנוער המצטיין של ועדת הבריאות המחוזית של באושאן (יוקאי) (BSWSYC-2024-02) ופרויקט טיפוח Class B בדיסציפלינות רפואיות מרכזיות ומותגים אופייניים, ועדת הבריאות של מחוז באושאן, שנגחאי (BSZK-2023-BP07). לגופי מימון אלה לא היה כל תפקיד בתכנון המחקר או בהחלטה להגיש את כתב היד לפרסום.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
תמיסת עיכול טריפסין 0.25% (ללא EDTA)סרוויסביוG4002
10 טרה-בתיםיוביוטקBF0153
10-180 KDסמן חלבון צבע מוכתם.יוביוטקעמ' 0069
חלב יבש 5% ללא שומןBeyotime Biotechnology, סיןP0216-300גרם
נוגדן נגד C-JUNאיתות סלולרי, ארה"ב#9165T
נוגדן נגד GAPDHabcam, בריטניהab245355
נוגדן נגד GDNFאיתות סלולרי, ארה"ב#47808
אנטי-HIF-1 ואלפא; נוגדןאיתות סלולרי, ארה"ב#14179
נוגדן נגד IKKאיתות סלולרי, ארה"ב#2682
נוגדן נגד IL-1R1איתות סלולרי, ארה"ב#6775עבור WB
נוגדן נגד IL-1R1חלבון טקברקוד 84094-6-RRלאימונופלואורסצנציה
נוגדן נגד IRAK1איתות סלולרי, ארה"ב#4395
אנטי-אני&קאפה; B-&; נוגדןאיתות סלולרי, ארה"ב#8943
נוגדן נגד P50abcam, בריטניהab305263
נוגדן נגד P65 abcam, בריטניהאילן אלכסנדר
IL-1R1 נגד חולדות mAb Beyotime Biotechnology, סיןAF7212
נוגדן אנטי-&בטא;-אקטיןאילן אילןab179467
ערכת כימות חלבון BCAיוביוטקWB2123
ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8) מגיב בדיקהBeyotime Biotechnology, סיןC0048M
קובלט כלוריד (CoCl<תת>2)Macklin, סיןC804815
כוכב EuECLיוביוטקWB2131
סרום בקר עוברי (FBS)Bergolin, סיןPWL001
IgG נגד ארנב עז עם תווית PitcסרוויסביוGB22303
מיקרוסקופ פלואורסצנטי ניקון 
Hieff Trans במבחנה siRNA/miRNA מגיב טרנספקציהYEASEN, סיןברקוד 40806ES01
חזרת פרוקסידאז (HRP) - נוגדנים משניים מצומדים
IgG נגד עכברים עם תווית Hrp		Servicebio, סיןGB23301
ערכת IL-1β, TNF-α, ROS ו-SOD ELISABOSTER, סיןBES1762K, BES0481K, BES5018K BES2920K
מוסקון (Mus)Aladdin, סיןM141496
מאגר PBSסרוויסביוG4202
תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין, 100xפרוסלPB180120
ממברנות פוליווינילידן פלואוריד (PVDF).Millipore, ארצות הבריתIPFL00010
תאי שוואן עכברוש (SCs)פרוסל מדעי החיים & טכנולוגיה סיןCM-M111
מאגר ליזה RIPAיוביוטקWB2116
מדיום תא שוואןScienCell, ארצות הברית1701
מאגר טעינת SDS-PAGEBeyotime Biotechnology, סיןעמ' 0015
SDS-PAGE חוצץ טעינת חלבון, 5xיוביוטקWB2122
סי-IL-1R1גן אוניברסליRX0114371
נתרן דודציל סולפט פוליאקרילאמיד ג'לאלקטרופורזה (SDS-PAGE) ערכת הכנהיוביוטקWB2118
SYBR qPCR מיקסBeyotime Biotechnology, סיןD7260
ערכת מיצוי חלבון כוללתBeyotime Biotechnology, סיןעמ' 123-01
מיקרוסקופ אלקטרונים שידורהיטאצ'י HT7800 
טריזולBeyotime Biotechnology, סיןR0011
Tween-20 (טווין-20)יוביוטקWB2114
חומרי הרכבה מסיסים במיםAbsin, סיןאילן אלכסנדר
מאגר ההעברה המערבייוביוטקWB2129

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhai, X., et al. Muscone ameliorates ovariectomy-induced bone loss and receptor activator of nuclear factor-κb ligand-induced osteoclastogenesis by suppressing TNF receptor-associated factor 6-mediated signaling pathways. Front. Pharmacol. 11, 348(2020).
  2. Lv, S., et al. Chemical compositions and pharmacological activities of natural musk (Moschus) and artificial musk: A review. J Ethnopharmacol. 284, 114799(2022).
  3. Dong, X., et al. Xingnaojing injection alleviates cerebral ischemia/reperfusion injury through regulating endoplasmic reticulum stress in vivo and in vitro. Heliyon. 10 (3), e25267(2024).
  4. Lu, L., et al. The atheroprotective roles of heart-protecting musk pills against atherosclerosis development in apolipoprotein E-deficient mice. Ann Transl Med. 7 (23), 714(2019).
  5. Zhuang, Q., et al. Pien Tze Huang inhibits tumor cell proliferation and promotes apoptosis via suppressing the STAT3 pathway in a colorectal cancer mouse model. Int J Oncol. 40 (5), 1569-1574 (2012).
  6. Yang, H. X., et al. Babaodan capsules for viral hepatitis: Systematic review of clinical efficacy and safety and Meta-analysis of randomized clinical trials. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 44 (22), 4953-4961 (2019).
  7. Li, J., et al. Chinese medicine She-Xiang-Xin-Tong-Ning, Containing Moschus, Corydalis and Ginseng, protects from myocardial ischemia injury via angiogenesis. Am J Chin Med. 48 (1), 107-126 (2020).
  8. Li, Y. C., et al. Muscone and (+)-borneol cooperatively strengthen CREB induction of claudin 5 in IL-1β-induced endothelium injury. Antioxidants (Basel). 11 (8), 1455(2022).
  9. Yu, S., et al. Muscone relieves inflammatory pain by inhibiting microglial activation-mediated inflammatory response via abrogation of the NOX4/JAK2-STAT3 pathway and NLRP3 inflammasome. Int Immunopharmacol. 82, 106355(2020).
  10. Du, Y., et al. Hypoxia-inducible factor 1 alpha (HIF-1alpha)/vascular endothelial growth factor (VEGF) pathway participates in angiogenesis of myocardial infarction in muscone-treated mice: Preliminary study. Med Sci Monit. 24, 8870-8877 (2018).
  11. Dong, J., Li, H., Bai, Y., Wu, C. Muscone ameliorates diabetic peripheral neuropathy through activating AKT/mTOR signalling pathway. J Pharm Pharmacol. 71 (11), 1706-1713 (2019).
  12. Zhao, M. Acupoint application for facial neuritis: 32 cases. Sichuan Tradit Chinese Med. 2, 54(1996).
  13. Wang, L., Chen, X. Clinical observation and analysis of 96 cases of facial neuritis treated by integrated Chinese and Western medicine. J Mod Integr Chinese West Med. 4, 617-618 (1997).
  14. Meng, S., Hu, C., Zhang, H., Shang, C. Observation of curative effect of acupuncture with musk combined with physical factors on facial neuritis. New Chinese Med. 45, 134-136 (2013).
  15. Chen, N., Qin, Y. Effect of artificial musk acupoint application combined with acupuncture on peripheral facial paralysis. People's Mil Med. 60, 1197-1198 (2017).
  16. Qi, Q., Ni, S., Li, C., Wang, X. Literature analysis of acupoint application of Chinese medicine in treatment of peripheral facial palsy. J Extern Treat Chinese Med. 23, 59-60 (2014).
  17. Osuru, H. P., Lavallee, M., Thiele, R. H. Molecular and cellular response of the myocardium (H9C2 cells) towards hypoxia and HIF-1alpha inhibition. Front Cardiovasc Med. 9, 711421(2022).
  18. Lai, W., Yu, L. Insulin-like growth factor 1 ameliorates pre-eclampsia by inhibiting zinc finger E-box binding homeobox 1 by up-regulation of microRNA-183. J Cell Mol Med. 27 (9), 1179-1191 (2023).
  19. Zhao, L., Qu, W., Wu, Y., Ma, H., Jiang, H. Dorsal root ganglion-derived Schwann cells combined with poly(lactic-co-glycolic acid)/chitosan conduits for the repair of sciatic nerve defects in rats. Neural Regen Res. 9 (22), 1961-1967 (2014).
  20. Tong, Y., et al. Effect of a hypoxic microenvironment after radiofrequency ablation on residual hepatocellular cell migration and invasion. Cancer Sci. 108 (4), 753-762 (2017).
  21. Zeng, H. T., et al. Modulating oxidative stress in B cells promotes immunotherapy in food allergy. Oxid Med Cell Longev. 2022, 3605977(2022).
  22. Wang, D., et al. Circulating brain-derived neurotrophic factor, antioxidant enzymes activities, and mitochondrial DNA in bipolar disorder: An exploratory report. Front Psychiatry. 11, 514658(2020).
  23. Stadelmann, C., Timmler, S., Barrantes-Freer, A., Simons, M. Myelin in the central nervous system: Structure, function, and pathology. Physiol Rev. 99 (3), 1381-1431 (2019).
  24. Intisar, A., et al. An electroceutical approach enhances myelination via upregulation of lipid biosynthesis in the dorsal root ganglion. Biofabrication. 14 (1), ac457c(2022).
  25. Kamil, K., Yazid, M. D., Idrus, R. B. H., Das, S., Kumar, J. Peripheral demyelinating diseases: From biology to translational medicine. Front Neurol. 10, 87(2019).
  26. Ma, Y., et al. Human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles promote the proliferation of Schwann cells by regulating the PI3K/AKT signaling pathway via transferring miR-21. Stem Cells Int. 2021, 1496101(2021).
  27. Su, Y., et al. Aptamer engineering exosomes loaded on biomimetic periosteum to promote angiogenesis and bone regeneration by targeting injured nerves via JNK3 MAPK pathway. Mater Today Bio. 16, 100434(2022).
  28. Tian, T., et al. IL1alpha antagonizes IL1beta and promotes adaptive immune rejection of malignant tumors. Cancer Immunol Res. 8 (5), 660-671 (2020).
  29. Mosley, B., et al. The interleukin-1 receptor binds the human interleukin-1 alpha precursor but not the interleukin-1 beta precursor. J Biol Chem. 262 (7), 2941-2944 (1987).
  30. Krumm, B., Xiang, Y., Deng, J. Structural biology of the IL-1 superfamily: Key cytokines in the regulation of immune and inflammatory responses. Protein Sci. 23 (5), 526-538 (2014).
  31. De Benedetti, F., et al. Canakinumab for the treatment of autoinflammatory recurrent fever syndromes. N Engl J Med. 378 (20), 1908-1919 (2018).
  32. Liskiewicz, A., et al. Methamphetamine-associated cognitive decline is attenuated by neutralizing IL-1 signaling. Brain Behav Immun. 80, 247-254 (2019).
  33. Zhang, H., et al. Activated Schwann cells and increased inflammatory cytokines IL-1beta, IL-6, and TNF-alpha in patients' sural nerve are lack of tight relationship with specific sensory disturbances in Parkinson's disease. CNS Neurosci Ther. 26 (5), 518-526 (2020).
  34. Su, D., et al. Tumor-neuroglia interaction promotes pancreatic cancer metastasis. Theranostics. 10 (11), 5029-5047 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

NF KappaBsiRNAWestern Blotting

מאמרים קשורים