מאמר שיטה

הקמה והערכה של מודל עכברי המושרה על ידי תמצית מסיסה במים של קנדידה אלביקנס של דלקת עורקים כליליים הקשורה למחלת קוואסאקי

DOI:

10.3791/69041

⸱

7 בנובמבר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Medical Laboratory, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 2Department of Anesthesiology, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 3Department of Pathology, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University, 44Department of Pediatrics, Huai'an First People's Hospital, Huai'an Clinical College of Xuzhou Medical University, 5Department of Pediatrics, The Affiliated Huai'an NO.1 People's Hospital of Nanjing Medical University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מודל העכברים המושרה על ידי CAWS מדמה ביעילות את התקדמות מחלת קוואסאקי מדלקת חריפה לפיברוזיס כרונית, וחושף מאפיינים פתולוגיים ואימונופתולוגיים מרכזיים, ועשוי להקל על פיתוח אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות למחלת קוואסאקי.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת קוואסאקי (KD) היא דלקת כלי דם מערכתית הפוגעת בעיקר בילדים, כאשר נגעים בעורקים הכליליים הם הסיבוך החמור ביותר שלה. במחקר זה, מודל KD עכברי אופטימלי הוקם באמצעות תמצית מסיסה במים של קנדידה אלביקנס (CAWS). דלקת שריר הלב ושינויים פתולוגיים נלווים הוערכו באמצעות צביעת HE וצביעה של מאסון טריכרום. טכניקת האימונופלואורסצנציה זיהתה חדירה של תאי חיסון לרקמת הלב. הביטוי והלוקליזציה של חלבון VDAC1 ברקמת שריר הלב זוהו על ידי אימונוהיסטוכימיה. במבחנה, מודל פגוציטי הוקם על ידי תרבית משותפת של מקרופאגים RAW264.7 עם נבגי קנדידה אלביקנס , והיווצרותם ותפקודם של אוטופאגוליזוזומים הוערכו באמצעות צביעה אימונופלואורסצנטית LC3 ובדיקה אדומה של Lyso-Tracker. באמצעות בדיקת מינון, נקבע כי 8 מ"ג הוא מינון המודלים האופטימלי להשראת דלקת בעורקים הכליליים, עם שיעור תמותה מתון במינון זה. צביעת HE הראתה כי הזרקת CAWS גרמה ביציבות לנגעים בעורקים הכליליים התואמים את המאפיינים של מחלת קוואסאקי אנושית בעכברים. צביעת מאסון אישרה כי הייתה שקיעה משמעותית של סיבי קולגן סביב העורקים הכליליים ואבי העורקים בקבוצת העכברים CAWS, אשר חפפה באופן הדוק לאזור הדלקתי, והבדל מובהק סטטיסטית נצפה מקבוצת הביקורת לאחר 14 יום (עמ' < 0.001). אימונופלואורסצנציה גילתה כי ביום ה-14 למודל, החדירה של תאים חיסוניים מרובים ברקמת הלב של קבוצת CAWS גדלה באופן משמעותי (p < 0.001). התוצאות האימונוהיסטוכימיות הראו כי ביום ה-28 למודל, הביטוי של חלבון VDAC1 ברקמת שריר הלב של קבוצת CAWS היה מווסת באופן משמעותי (p < 0.001). ניסויים במבחנה הראו כי במקרופאגים הנגועים בנבגי קנדידה אלביקנס , היווצרות האוטופאגוליזוזומים עולה בשלב המוקדם, בעוד שהזרימה האוטופאגית נחסמת בשלב מאוחר יותר, מה שמרמז על הפרעה תפקודית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחלת קוואסאקי (KD), סוג של תסמונת בלוטות הלימפה הריריות, היא מחלה אוטואימונית המופיעה בילדים מתחת לגיל 5 ומלווה בדלקת כלי דם חום 1,2,3. מחקרים מצביעים על כך שקורסים לא מטופלים או טיפוליים העולים על 10 ימים של KD חמור נוטים לגרום לסיבוכים קרדיווסקולריים חמורים, בעיקר כולל מפרצת כלילית והיצרות עורקים כליליים 4,5. קרע של מפרצת כלילית עלול להוביל להלם קרדיוגני או אפילו למוות פתאומי, שהוא הגורם העיקרי למחלות לב נרכשות בילדים 6,7. למרות שהיישום של אימונוגלובולין תוך ורידי שיפר משמעותית את הפרוגנוזה, האטיולוגיה והפתוגנזה שלו נותרו לא ברורים, מה שמגביל את הפיתוח של אסטרטגיות טיפוליות ממוקדות 8,9. לכן, הקמת מודלים של בעלי חיים שיכולים לדמות במדויק את המאפיינים של מחלות אנושיות הפכה לצורך דחוף במחקר הנוכחי.

נכון לעכשיו, מכשול מרכזי בחקר מחלת קוואסאקי הוא היעדר מודלים של בעלי חיים מאופיינים היטב המסכמים באופן מלא את הפתולוגיה של מחלות אנושיות. בין המודלים השונים שפותחו כעת, מודל וסקוליטיס המושרה על ידי תמצית דופן התא של לקטובצילוס קזאי (LCWE) הוא מערכת בוגרת יחסית, ומודל זה יכול לגרום לדלקת עורקים כליליים. הוא נמצא בשימוש נרחב לחקר המנגנון של חוסר ויסות חיסוני וציטוקינים ספציפיים בכלי דם דמויי KD10,11. מודל דלקת כלי הדם המושרה על ידי תמצית מסיסה במים של קנדידה אלביקנס (CAWS) משך גם הוא תשומת לב רבה בשל הדמיון הגבוה שלו למאפיינים הפתולוגיים של מחלת קוואסאקי האנושית12,13. לאחר אופטימיזציה ושיפור שיטתי על ידי צוותי מחקר מרובים, המודל המושרה על ידי CAWS התפתח לכלי חשוב לחקר מחלת קוואסאקי14. למרות ש-CAWS יכול לגרום לדלקת בעורקים הכליליים באמצעות הזרקה תוך-צפקית, יש לו מגבלות בכך שהוא אינו יכול לשחזר באופן מלא את התהליך הפתולוגי המדויק של דלקת כלי דם ב-KD אנושי. לדוגמה, לא נמצאו נויטרופילים בפתולוגיה המאוחרת של KD15 אנושי, אך חדירת נויטרופילים עדיין התרחשה במודל זה עד 16 שבועות לאחר הזרקת CAWS16. יתר על כן, מנגנון דלקת כלי הדם הנגרמת על ידי CAWS לא הובהר במלואו כיום, מה שמגביל את ההבנה והיישום המעמיק של מודל9. מחקר זה נועד לבסס מודל סטנדרטי של KD בבעלי חיים על ידי אופטימיזציה של פרוטוקול האינדוקציה של CAWS, הבהרת מנגנון המחלה והקלה על פיתוח טיפולים ממוקדים.

מחקר זה השתמש ב-CAWS כדי לבסס מודל בעלי חיים סטנדרטי יותר של מחלת קוואסאקי. באמצעות ניסויי אופטימיזציה שיטתיים של מינון, נקבע כי הזרקה תוך-צפקית של 8 מ"ג ביום במשך חמישה ימים רצופים היא משטר המתן האופטימלי. משטר זה יכול לגרום ביציבות לנגעים בעורקים הכליליים תוך שמירה על שיעור הישרדות גבוה בבעלי חיים. בנוסף, חקרנו עוד את התפקיד של תפקוד לקוי של המיטוכונדריה בהיווצרות פיברוזיס במהלך השלב הכרוני של KD, תוך התמקדות במנגנון האפשרי של ערוץ אניון תלוי מתח 1 (VDAC1), חלבון מפתח המווסת אפופטוזיס מיטוכונדריאלי, במהלך המעבר מדלקת לפיברוזיס17. ראוי לציין כי באמצעות ניתוח לוקליזציה משותפת של אוטופאגוזום/ליזוזום במחקר זה, נצפתה תפקוד אוטופגיה לא תקין במודל זה. מודל אופטימלי זה מספק כלי חשוב למחקר שיטתי של הפתוגנזה של נגעי עורקים כליליים במחלת קוואסאקי ולהערכת אסטרטגיות טיפול חדשות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל ניסויי המחקר הכוללים נתונים מבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי מס' 1 של האוניברסיטה הרפואית נאנג'ינג (KY-2024-250-01). הריאגנטים והציוד המשמש מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנת CAWS

  1. חיסון קנדידה אלביקנס במרק דקסטרוז Sabouraud על פי הפרוטוקול שנקבע על ידי Duong et al.18. לאחר מכן, תרבית את המרק המחוסן באופן אנאירובי בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות בתא אנאירובי אטום עם תערובת גז.
    הערה: כדי להבטיח את הסטריליות של מדיום התרבית, יש לשלוט בקפדנות על מצב התרבות האנאירובית ב-37 מעלות צלזיוס כדי למנוע זיהום על ידי חיידקים שונים.
  2. יש לשטוף שוב ושוב עם מדיום מגביל C ולדגור בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות במהירות סיבוב של 4.5 x גרם.
  3. הוסף נפח שווה של אתנול נטול מים ותן לו לעמוד למשך הלילה ב -4 מעלות צלזיוס.
  4. צנטריפוגה ב-4.5 x גרם למשך 15 דקות ב-4 מעלות צלזיוס, הסר את הסופרנטנט, הוסף נפח שווה של אתנול נטול מים למשקעים, והשאיר אותו למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס.
  5. לאחר הצנטריפוגה, השליכו את הסופרנטנט, הוסיפו 50 מ"ל אצטון למשקעים, צנטריפוגה וייבשו את המשקעים. יש להמיס את המשקעים במי מלח סטריליים רגילים לשימוש מאוחר יותר.

2. בניית מודל עכברי של מחלת קוואסאקי

  1. בחר שמונים עכברים זכרים C57BL/6 בדרגת SPF בגילאי 4-6 שבועות, ושכן אותם בתנאים מבוקרים עם גישה חופשית למזון ומים.
    הערה: כדי למזער את ההפרעה הפוטנציאלית של תנודות ברמת האסטרוגן על תגובות חיסוניות ודלקתיות, נעשה שימוש רק בעכברים זכרים במחקר ראשוני זה של הקמת מודל ואפיון19.
  2. חלקו עכברים ל-4 קבוצות באופן שווה בשיטת טבלת מספרים אקראית, כולל 3 קבוצות הזרקת CAWS במינון שונה (4 מ"ג, 8 מ"ג, 12 מ"ג) וקבוצת ביקורת אחת עם מי מלח רגילים, עם 20 עכברים בכל קבוצה.
  3. הכינו אבקת CAWS לשלושה ריכוזים של 40 מ"ג/מ"ל, 80 מ"ג/מ"ל ו-120 מ"ג/מ"ל באמצעות תמיסת מלח סטרילית רגילה (0.9% NaCl). הזריק לקבוצת הניסוי 0.1 מ"ל של CAWS בבוקר מהיום הראשון עד החמישי של הניסוי, ומתן נפח שווה של מי מלח רגילים לקבוצת הביקורת באותו לוח זמנים.
    הערה: הזרקה תוך צפקית בוצעה באמצעות מזרק אינסולין של 1 מ"ל. בעת הניתוח, מקם את העכבר עם ראשו למטה וזנבו גבוה יותר כדי למנוע נזק לאיברים כמו המעי הגס והמעי הדק בעת החדרת המזרק.
  4. השתמש ביתרה אלקטרונית בשעה 9 בבוקר בכל יום כדי לשקול בו-זמנית את ההזנה שנותרה במזין ולחשב את צריכת המזון ל-24 שעות עבור כל כלוב עכברים.
  5. בימים ה-3, ה-7, ה-14 וה-28 לאחר הזריקה האחרונה, בחרו והקריבו באופן אקראי 3 עכברים מכל קבוצה בכל נקודת זמן.
  6. הניחו עכברים בתא סגור מלא מראש באוויר בחדר. הכנס CO2 דחוס בקצב זרימה של 30% מנפח החדר לדקה. לאחר 5 דקות, בוצעה פריקת צוואר הרחם כדי לאשר את המוות.
  7. אוספים ושוקלים דגימות לב. התבונן בנגעים דלקתיים של הלב וכלי הדם על ידי צביעת HE.

3. תקני צביעה ודירוג HE

  1. הלב וקשת אבי העורקים (כ-3 מ"מ ×-3 מ"מ) בודדו במהירות. בצע סטרנוטומיה חציונית לפי השיטה המתוארת20. הפרד במהירות את הלב מקשת אבי העורקים (כ -3 מ"מ × 3 מ"מ). הרקמות שנאספו קובעו בפורמלין ניטרלי של 10% למשך 24 שעות.
  2. לאחר הקיבוע, יש לייבש את הרקמות באמצעות סדרת אתנול מדורגת (70% אתנול למשך שעה, 80% אתנול למשך שעה, 95% אתנול למשך שעה אחת ו-100% אתנול למשך שעה), לנקות בקסילן ולהטמיע בפרפין. לבסוף, חתכו את הבלוקים לפרוסות רציפות של 5 מיקרומטר.
  3. לצביעה של H&E, יש להכתים את החלקים בהמטוקסילין למשך 5 דקות, לשטוף במים זורמים למשך 10 דקות, לצבוע עם אאוזין למשך 2 דקות, ולאחר מכן להמשיך בהתייבשות והרכבה21.
    הערה: על פי מידת הפגיעה האינטימית בכלי הדם, היא מסווגת לשלוש דרגות: דרגה I מאופיינת בעיקר בנפיחות אנדותל וצבירת נויטרופילים; דרגה II מתבטאת בניוון שרירים חלקים, חדירת תאים דלקתיים ונזק לאברונים; דרגה III מציגה נגעים חמורים כגון נמק אנדותל ונשירה, ותצהיר פיברין.

4. צביעת טריכרום מאסון

  1. לאחר הקיבוע, יש לייבש את דגימות הרקמה באמצעות סדרת אתנול מדורגת, לנקות בקסילן ולהטמיע בפרפין.
  2. לאחר הסרת שעווה, יש להרטיב את החלקים דרך סדרת אתנול מדורגת למים מזוקקים כהכנה לצביעה.
  3. צבעו את הגרעינים בהמטוקסילין הברזל של וייגרט למשך 5 דקות, שטפו היטב תחת מים זורמים, ולאחר מכן צבעו את הציטופלזמה בפוקסין חומצה אדומה של ליצ'ון למשך 5 דקות.
  4. יש להבדיל עם חומצה פוספומוליבדית 1% למשך דקה אחת, ולאחר מכן לצבוע ישירות את סיבי הקולגן בכחול אנילין למשך 3 דקות. יש לשטוף במהירות עם 1% חומצה אצטית קרחונית
    הערה: שלוט בקפדנות בתזמון שלב ההבחנה כדי להבטיח את ספציפיות הצביעה.
  5. לאחר התייבשות עם אתנול וקסילן, שהופכים לשקופים, אטמו את הסרט הנייטרלי.
  6. שוטפים את החלקים המוכתמים תחת מים זורמים כדי להסיר עודפי צבע.
  7. ייבשו את החלקים באמצעות סדרת אתנול מדורגת, שקופה בקסילן, והרכיבו עם מסטיק ניטרלי.
  8. התבונן בקטעים תחת מיקרוסקופ אור בהגדלה עקבית. סיבי קולגן צריכים להופיע כחולים, סיבי שריר וציטופלזמה אדומים וגרעינים כחולים עמוקים.

5. צביעה אימונופלואורסצנטית

  1. תקן קטעי תאים או רקמות, וחסום עם 5% BSA למשך שעה אחת כדי להפחית קשירה לא ספציפית.
  2. השתמש בסרום רגיל מאותו מוצא מין כמו הנוגדן המשני, דלל אותו ב-PBS ביחס של 1:10 והפיל אותו על הדגימה. אוטמים אותו בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. לאחר האיטום, יש לשטוף בעדינות פעמיים עם PBS.
  3. דגרו את החלקים עם הנוגדן הראשוני למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס. לאחר שטיפה עם PBS, הוסיפו את הנוגדן המשני הפלואורסצנטי ודגרו בחושך למשך שעה.
  4. צביעת הליבה ב-DAPI, איטום עם חומר הרכבה נגד מרווה והתבוננות במיקרוסקופיה קונפוקלית.

6. אימונוהיסטוכימיה

  1. לאחר הסרת שעווה ולחות של קטעי פרפין, בצע תיקון אנטיגן וחסום את הפרוקסידאז האנדוגני.
  2. דגירה של נוגדנים והתפתחות צבע: ראשית, יש לחסום עם סרום רגיל, לאחר מכן לדגור את הנוגדן הראשוני והנוגדן המשני המסומן ב-HRP ברצף, ולבסוף, פיתוח צבע DAB. שלוט במידת התגובה במיקרוסקופ.
  3. צבעו מחדש את גרעיני התא בהמטוקסילין. לאחר התייבשות ושקיפות, אטמו את הלוחות והתבוננו באות החיובי החום-צהוב תחת מיקרוסקופ.
    הערה: הניסוי צריך להגדיר בקרות ולשלוט בקפדנות בתנאים לשיקום ופיתוח צבע.

7. זיהוי אוטוליזוזום

  1. תרבית משותפת של מקרופאגים RAW264.7 עם נבגי קנדידה אלביקנס בפרופורציה מתאימה (10:1), ודוגרים ב-37 מעלות צלזיוס ו-5% CO2 למשך 4 שעות, 8 שעות, 12 שעות, 16 שעות, 20 שעות, 24 שעות, 28 שעות, 32 שעות, 36 שעות, 40 שעות, 44 שעות ו-48 שעות כדי לבסס מודל פגוציטי.
  2. שטפו שלוש פעמים עם PBS מקורר מראש כדי להסיר את הנבגים הלא פגוציטים.
  3. ראשית, חסום את הדגימות עם 5% BSA למשך 30 דקות. לאחר מכן, דגרו ברציפות עם הנוגדן הראשוני כנגד LC3 (דילול של 1:200) בטמפרטורת החדר למשך שעה, ואחריו הנוגדן המשני המסומן על ידי Alexa Fluor 488 בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
  4. הוסף בדיקת ליזוזום אדום Lyso-Tracker ישירות לתאים כדי לדמיין לוקליזציה ליזוזומלית. לבסוף, צבעו את הגרעינים עם DAPI (1 מיקרוגרם/מ"ל) למשך 5 דקות.
    הערה: כל תהליך הפעולה צריך להתבצע בחושך כדי להבטיח שזמן הדגירה וריכוז הנוגדן נשלטים במדויק.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתחילה, הערכנו באופן שיטתי את השינויים הפתולוגיים בשריר הלב הנגרמים על ידי מינונים שונים של CAWS בעכברים. לא נצפו מקרי מוות בקבוצת הביקורת PBS, בקבוצת ה-CAWS של 4 מ"ג ובקבוצת ה-CAWS של 8 מ"ג (n=20 בכל קבוצה). לעומת זאת, התגובה הדלקתית בקבוצת ה-4 מ"ג הייתה קלה ולא עמדה בדרישות המודל. שיעור התמותה היה גבוה יותר בקבוצת ה-CAWS של 12 מ"ג (9/20, 45%), ומקרי המוות התרחשו מהיום השלישי עד העשירי לאחר ההזרקה. ממצאים אלה מצביעים על כך שמינון של 12 מ"ג יכול לגרום לנז...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מפרצת בעורקים הכליליים (CAA) ופיברוזיס בשריר הלב ב-KD הם הגורמים העיקריים לאירועים קרדיווסקולריים ארוכי טווח. למרות ההתקדמות שנעשתה בטיפול בשלב החריף, כ-5% מהחולים עדיין מפתחים CAA מתמשך28,29. המנגנון של שינוי פתולוגי מושהה זה עדיין אינו ברור, ויש צורך דחוף במודלים של בעלי חיים לחשוף אתהתהליך הדינמי שלו. בשל דגימות רקמת הלב המוגבלות ביותר של חולי KD אנושיים והקושי במחקר קליני לעקוב באופן דינמי אחר השינויים...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תודה לחברי הצוות על תמיכתם ותרומתם לניסוי זה. המחקר נתמך על ידי הפרויקטים הבאים: פרויקט כללי של קרן הפיתוח של בית החולים המסונף לאוניברסיטה הרפואית של שוז'ו (XYFM202234) ופרויקט רך מיוחד למדעי הטבע על החיים והבריאות של העיר הואי-אן (2023KX0006).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נוגדן משני לעז ל-Rabbit IgG Alexa Fluor 488אבקאםAB15081נוגדן משני לעז ל-Rabbit IgG Alexa Fluor 488
תא אנאירוביתרמו-סיינטיפיקתרמו-סיינטיפיקתא אנאירובי
כחול אניליןסולרביולוגיהG3668כחול אנילין
אנטי-LC3אבקאםab192890הנוגדן העיקרי נגד LC3
ארון בטיחות ביולוגיתתרמו-סיינטיפיק1500ארון בטיחות ביולוגית
BSAסולרביולוגיהA8020BSA
זן קנדידה אלביקנסNBRC1385זן קנדידה אלביקנס
CD3eביוסיינס BD561827FITC ה-HSTER נגד עכבר CD3e(145-2C11)
CD86ביוסיינס BD105013CD86
CD8aביוסיינס BD100713CD8a
חממת תרבית תאיםתרמו-סיינטיפיק311חממת תרבית תאים
צנטריפוגהתרמו-סיינטיפיקST4R Plusצנטריפוגה
מיקרוסקופ קונפוקליאולימפוסIX73מיקרוסקופ קונפוקלי
DAPIBeyotime Biotechnology P0131-25mlDAPI
DMEMגיבקו11965126DMEM
מכונת הטמעהP.S.J MEDICALBM450Aמכונת הטמעה
אאוסיןסולרביולוגיה  G1100אאוסין
F4/80ביוסיינס BD123109F4/80
FBSגיבקו16000044FBS
פורמלדהידסולרביולוגיה  P1110פורמלדהיד
מייבש רקמות אוטומטי לחלוטיןLeica BiosystemsASP3005מייבש רקמות אוטומטי לחלוטין
שקופיות מיקרוסקופ זכוכיתציטוטסט250124A1שקופיות מיקרוסקופ זכוכית
H& צבע EBeyotime Biotechnology C0105MH& צבע E
ערכת IHCביוטכנולוגיה של אבסיןABS996-5MLערכת IHC
גלאי LC3Beyotime Biotechnology C3018Mגלאי LC3
להבי מיקרוטום בעלי פרופיל נמוךתרמו פישר3052835להבי מיקרוטום בעלי פרופיל נמוך
גשוש ליזוזוםBeyotime Biotechnology C1046גשוש ליזוזום
עט טושמעדןSK109עט טוש
צבע מסוןBeyotime Biotechnology C0189Mצבע מסון
מיקרוטוםLeica BiosystemsHistoCore BIOCUTמיקרוטום
מסטיק נייטרליסולרבי  G8590מסטיק נייטרלי
NK1.1ביוסיינס BD561117NK1.1
מיקרוסקופ אופטיניקוןניקוןמיקרוסקופ אופטי
פרפיןסולרביולוגיה  YA0012פרפין
שעוות פרפיןסולרביולוגיהYA0012שעוות פרפין
PBSסולרביולוגיהP1020PBS
חומצה פוספומוליבדיתסולרביולוגיהG3472חומצה פוספומוליבדית
VDAC1אבקאםab34726אנטי-VDAC1

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jone, P. -N., et al. Update on diagnosis and management of Kawasaki disease: A scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 150 (23), e481-e500 (2024).
  2. Goel, A. R., Yalcindag, A. An update on Kawasaki disease. Curr Rheumatol Rep. 27 (1), 4(2024).
  3. Sapountzi, E., et al. disease: An update on genetics and pathophysiology. Genet Test Mol Biomarkers. 28 (9), 373-383 (2024).
  4. Beltran, J. V. B., Lin, F. -P., Chang, C. -L., Ko, T. -M. Single-cell meta-analysis of neutrophil activation in Kawasaki disease and multisystem inflammatory syndrome in children reveals potential shared immunological drivers. Circulation. 148 (22), 1778-1796 (2023).
  5. Assempoor, R., et al. Different antithrombotic strategies to prevent cardiovascular complications in Kawasaki patients: A systematic review and meta-analysis. BMC Pediatr. 24 (1), 738(2024).
  6. Noval Rivas, M., Arditi, M. Kawasaki disease and multisystem inflammatory syndrome in children: Common inflammatory pathways of two distinct diseases. Rheum Dis Clin North Am. 49 (3), 647-659 (2023).
  7. Li, W., et al. Impact of platelet glycoprotein Ia/IIa C807T gene polymorphisms on coronary artery aneurysms of KD patients. Cardiol Res Pract. 2021, 4895793(2021).
  8. Gorelik, M., et al. American College of Rheumatology/Vasculitis Foundation guideline for the management of Kawasaki disease. Arthritis Care Res (Hoboken). 74 (4), 538-548 (2022).
  9. Noval Rivas, M., Arditi, M. Kawasaki disease: Pathophysiology and insights from mouse models. Nat Rev Rheumatol. 16 (7), 391-405 (2020).
  10. Li, R., et al. Lactobacillus casei cell wall extract and production of galactose-deficient IgA1 in a humanized IGHA1 mouse model. J Am Soc Nephrol. 36 (1), 60-72 (2025).
  11. Wei, K., et al. Mitochondrial DNA release via the mitochondrial permeability transition pore activates the cGAS-STING pathway, exacerbating inflammation in acute Kawasaki disease. Cell Commun Signal. 22 (1), 328(2024).
  12. Xu, H., et al. Characterization of inflammatory factors and T cell subpopulations in a murine model of Kawasaki disease induced by Candida albicans cell wall extracts (CAWS). Med Sci Monit. 28, e936355(2022).
  13. Miyabe, C., Miyabe, Y., Miyata, R., Ishiguro, N. Pathogens in vasculitis: Is it really idiopathic. JMA J. 4 (3), 216-224 (2021).
  14. Sato, W., Ishibashi, K. -I., Yamanaka, D., Adachi, Y., Ohno, N. Effects of natural and chemically defined nutrients on Candida albicans water-soluble fraction (CAWS) vasculitis in mice. Med Mycol J. 58 (2), E47-E62 (2017).
  15. Takahashi, K., Oharaseki, T., Yokouchi, Y. Histopathological aspects of cardiovascular lesions in Kawasaki disease. Int J Rheum Dis. 21 (1), 31-35 (2018).
  16. Lombardi Pereira, A. P., et al. Long-term cardiovascular inflammation and fibrosis in a murine model of vasculitis induced by Lactobacillus casei cell wall extract. Front Immunol. 15, 1411979(2024).
  17. Tian, G., et al. Voltage-dependent anion channel 1 (VDAC1) overexpression alleviates cardiac fibroblast activation in cardiac fibrosis via regulating fatty acid metabolism. Redox Biol. 67, 102907(2023).
  18. Duong, T. T., Silverman, E. D., Bissessar, M. V., Yeung, R. S. M. Superantigenic activity is responsible for induction of coronary arteritis in mice: An animal model of Kawasaki disease. Int Immunol. 15 (1), 79-89 (2003).
  19. Miller, L. R., et al. Considering sex as a biological variable in preclinical research. FASEB J. 31 (1), 29-34 (2017).
  20. Miyamoto, H. D., et al. Iron overload via heme degradation in the endoplasmic reticulum triggers ferroptosis in myocardial ischemia-reperfusion injury. JACC Basic Transl Sci. 7 (8), 800-819 (2022).
  21. Ding, J., et al. Myeloid-specific blockade of Notch signaling ameliorates nonalcoholic fatty liver disease in mice. Int J Biol Sci. 19 (6), 1941-1954 (2023).
  22. Xie, Z., et al. Atlas of circulating immune cells in Kawasaki disease. Int Immunopharmacol. 102, 108396(2022).
  23. Menikou, S., Langford, P. R., Levin, M. Kawasaki disease: The role of immune complexes revisited. Front Immunol. 10, 1156(2019).
  24. Xu, S., et al. Ketogenic diets inhibit mitochondrial biogenesis and induce cardiac fibrosis. Signal Transduct Target Ther. 6 (1), 54(2021).
  25. Peng, F., et al. 2-APQC, a small-molecule activator of Sirtuin-3 (SIRT3), alleviates myocardial hypertrophy and fibrosis by regulating mitochondrial homeostasis. Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 133(2024).
  26. Lin, L. -C., et al. Mitochondrial quality control in cardiac fibrosis: Epigenetic mechanisms and therapeutic strategies. Metabolism. 145, 155626(2023).
  27. Yuan, M., et al. IP3R1/GRP75/VDAC1 complex mediates endoplasmic reticulum stress-mitochondrial oxidative stress in diabetic atrial remodeling. Redox Biol. 52, 102289(2022).
  28. Kim, J. -J., et al. Sex-specific susceptibility loci associated with coronary artery aneurysms in patients with Kawasaki disease. Korean Circ J. 54 (9), 577-586 (2024).
  29. Anzai, F., et al. Crucial role of NLRP3 inflammasome in a murine model of Kawasaki disease. J Mol Cell Cardiol. 138, 185-196 (2020).
  30. Ohashi, R., et al. Characterization of a murine model with arteritis induced by Nod1 ligand, FK565: A comparative study with a CAWS-induced model. Mod Rheumatol. 27 (6), 1024-1030 (2017).
  31. Wang, Z., et al. Single-cell RNA sequencing of peripheral blood mononuclear cells from acute Kawasaki disease patients. Nat Commun. 12 (1), 5444(2021).
  32. Yang, J., et al. VSTM2L protects prostate cancer cells against ferroptosis via inhibiting VDAC1 oligomerization and maintaining mitochondria homeostasis. Nat Commun. 16 (1), 1160(2025).
  33. Niu, B., et al. Protecting mitochondria via inhibiting VDAC1 oligomerization alleviates ferroptosis in acetaminophen-induced acute liver injury. Cell Biol Toxicol. 38 (3), 505-530 (2022).
  34. Shoshan-Barmatz, V., Krelin, Y., Chen, Q. VDAC1 as a player in mitochondria-mediated apoptosis and target for modulating apoptosis. Curr Med Chem. 24 (40), 4435-4446 (2017).
  35. Ham, S. J., et al. Decision between mitophagy and apoptosis by Parkin via VDAC1 ubiquitination. Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (8), 4281-4291 (2020).
  36. Prabhu, S. D., Frangogiannis, N. G. The biological basis for cardiac repair after myocardial infarction: From inflammation to fibrosis. Circ Res. 119 (1), 91-112 (2016).
  37. Lin, M., et al. MCM8-mediated mitophagy protects vascular health in response to nitric oxide signaling in a mouse model of Kawasaki disease. Nat Cardiovasc Res. 2 (8), 778-792 (2023).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Candida AlbicansHEMasson TrichromeVDAC1

מאמרים קשורים