מאמר זה מדגים את הפעולה וההשפעה של מיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo באבחון וטיפול בעין יבשה וחוקר את היישום והתוצאות של מיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo כדי לספק בסיס למחקר עתידי.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
מאמר זה מדגים את הפעולה וההשפעה של מיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo באבחון וטיפול בעין יבשה וחוקר את היישום והתוצאות של מיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo כדי לספק בסיס למחקר עתידי.
מיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo (IVCM) זכתה לתשומת לב משמעותית בשל אופייה הלא פולשני והרזולוציה הגבוהה שלה. הוא מאפשר תצפית in vivo וכימות אובייקטיבי של מבני פני העין הרבים הקשורים למחלת עין יבשה (DED), כולל הקרנית, הלחמית, שולי העפעפיים, בלוטות המייבומיאן וטפילים כגון דמודקס, ברמה התאית. יכולת זו מסייעת לרופאי עיניים בזיהוי אטיולוגיות ותתי סוגים ספציפיים של DED, ובכך מאפשרת אבחון מדויק, טיפול ממוקד והערכה פרוגנוסטית. עם זאת, עדיין חסרים פרוטוקולים סטנדרטיים לתפעול ודיווח IVCM. בקיאות הן בידע עיניים והן בתפעול טכני חיונית לניצול יעיל של מכשיר זה ולהפקת דוחות באיכות גבוהה. מאמר זה מפרט את השלבים הפרוצדורליים והניואנסים של בדיקת IVCM עבור חולי DED. זהו פרוטוקול ה-IVCM הראשון של JoVE צעד אחר צעד עבור DED. הוא נועד לשמש כהתייחסות לרופאים, לעזור להם להימנע מחוסר יעילות תפעולית ולהשיג באופן עקבי תמונות איכותיות של פני הקרנית והעיניים כדי להנחות את הניהול הקליני.
בשל אילוצים במשאבים הרפואיים המקומיים או הנטל הכספי של המטופל, האבחנה הקלינית של DED מתמקדת לרוב רק בהיבט בסיסי (למשל, תצפית מתחת למיקרוסקופ מנורת החריץ, תלונה על יובש וגירוד בעיניים) או אפילו אינדיקטור יחיד (למשל, זמן פירוק סרט דמעות פולשני, בדיקת הפרשת דמעות או התפשטות דמודקס). יישום IVCM אינו זמין באופן נרחב, שלא לדבר על סטנדרטיזציה של פרוטוקולים עבורו. עם זאת, עבור מוסדות עיניים המצוידים ב-IVCM, המחבר ממליץ לחולים בפעם הראשונה לעבור בדיקה מיקרוסקופית מקיפה כדי למנוע השמטות, כולל הקרנית, הלחמית ושוליים פלפברליים. למקרי DED דו-משמעיים או לזיהוי דמודקס, IVCM מתאים במיוחד לתשובה מפורשת.
מחלת עין יבשה (DED) מוגדרת כמצב כרוני של פני העין הנגרם על ידי חריגות באיכות או בכמות נוזל הדמעות וירידה ביציבות של שכבת הדמעות. בסדנת העין היבשה II (DEWS II), DED מסווג לחמישה סוגים: עין יבשה חסרת מים (ADE), עין יבשה באידוי (EDE), עין יבשה מעורבת (MDE), נטייה לעין יבשה ועין יבשה פרה-קלינית מצב1. ראלין ועמיתיו סיכמו את הפרקטיקה הקלינית החשובה של IVCM בסוגים שונים של עין יבשה, כולל הספרות שפורסמה בין השנים 2017 ל-20222. מחקרים אחרונים הראו כי דלקת ממלאת תפקיד מפתח בפתוגנזה של DED 3,4. במיוחד, צפיפות התאים הדנדריטים (DCs) עשויה להיות אינדיקטור טוב ל-DED הקשור לתהליך מערכתי בתיווך חיסוני5.
ה-IVCM משתמש בטכנולוגיית טומוגרפיה לייזר קונפוקלית. הוא מציע רזולוציות אופקיות ואנכיות של 1 מיקרומטר. מפרט טכני מפורט של המכשיר מתועד בדוח של ג'רמי ואחרים6. במהלך בדיקת פני העין, IVCM מוחל תחילה על הקרנית7, ולאחר מכן על הלחמית ובלוטות המייבומיאן8. דלקת העפעפיים של דמודקס זכתה לתשומת לב קלינית הולכת וגוברת בשנים האחרונות 9,10. IVCM מספק תמונות ברורות של הקרנית, הלחמית ושולי הפלפברל. תמונות אלו מאפשרות לרופאים להעריך את מצב המחלה ולהקל על הדמיה וכימות של תאים דלקתיים וחיסוניים.
בהערכת DED, המיקוד שלנו כולל: תאי אפיתל בקרנית (CEC); סיבי עצב תת-אפיתל (SNF); תאים דלקתיים/חיסוניים בין-אפיתליים ותת-אפיתליים; תאי גביע הלחמית (CGCs); תאים דלקתיים/חיסוניים של הלחמית; בלוטת מייבומיאן acini ופתחים; Demodex folliculorum ו-Demodex brevis; ותאים דלקתיים בתוך הרקמות הסובבות. דגש זה נובע מהפתופיזיולוגיה: תפקוד לקוי של בלוטת מייבומיאן מוביל להפרשה מופחתת או לשינוי בהרכב שכבת השומנים של שכבת הדמעות, וכתוצאה מכך אידוי מואץ של הדמעות ונזק למשטח העין. התפשטות דמודקס תורמת לגירוד ואי נוחות בעיניים. CGCs מפרישים מוצין, מרכיב קריטי של סרט הדמעות; דלדול שלהם יכול לגרום למחסור במוצין. לעומת זאת, DED עצמו פוגע במבני פני העין, כולל CEC ו-SNF, וכתוצאה מכך מעלה את צפיפות התאים הדלקתיים/חיסוניים ברקמות הקרנית והלחמית. לאחר השגת התמונות האידיאליות, אנו יכולים להשתמש ביעילות בכלים הכמותיים המובנים של התוכנה כדי לספור את התאים הרבים שהוזכרו (איור 1). אבל עבור המגוון המורפולוגי של SNF, עלינו להסתמך על תוכנה אנליטית שתעזור בכימות11,12.
IVCM הכרחי להערכה בזמן אמת של שכבות הקרנית, סיבי העצב ותאים דלקתיים/חיסוניים ברקמות פני העין. להערכת CGCs, ציטולוגיה של רושם משמשת כשיטה חלופית. טכניקה זו מכוונת ללחמית הפורניקס, שם צפיפות תאי הגביע מגיעה לשיא, ומניבה ערכים גבוהים בדרך כלל ממדידות IVCM13,14. עם זאת, התוצאות כפופות לשונות הצביעה ולמומחיות המפעיל, בעוד שהפרוטוקול עתיר הזמן מגביל את היישום הקליני השגרתי. חסימת פתח בלוטת מייבומיאן ניתנת לצפייה ישירה באמצעות מיקרוסקופ מנורת חריץ, אך שיטה זו אינה יכולה לזהות חסימות הנגרמות על ידי Demodex brevis, ש-IVCM מזהה במדויק. לאבחון נגיעות דמודקס, אפילציה של ריסים בבדיקת מיקרוסקופ אור מספקת שיטה בעלות נמוכה. למרות שהיא פשוטה מבחינה טכנית, גישה זו טומנת בחובה מגבלות משמעותיות: אי נוחות של המטופל מגבילה דגימה מרובה, קרדית השוכנת עמוק בתוך זקיקי הריסים או פתחי בלוטת המייבומיאן נותרת בלתי ניתנת לגילוי15. לעומת זאת, IVCM מאפשר בדיקה מקיפה של אתרי שולי עפעפיים מרובים, כולל זקיקי ריסים ופתחי בלוטת מייבומיאן, עם אי נוחות מינימלית של המטופל. גישה זו משיגה שיעורי אבחון חיוביים גבוהים משמעותית באמצעות הדמיה בזמן אמת של טפילים בתוך בתי הגידול שלהם16,17.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הליך הבדיקה אושר על ידי ועדת האתיקה של בית החולים לעיניים Hankou Aier, והתקבלה הסכמה מדעת מכל המטופלים.
הערה: קריטריוני ההכללה לבחירת מטופלים כוללים מטופלים המציגים תלונות על עיניים יבשות ומגרדות, ואנשים המבקשים בדיקות עיניים שגרתיות. קריטריוני ההחרגה לבחירת מטופלים כוללים חולים עם ניקוב בקרנית או ניקוב קרנית מתקרב, אלה האלרגיים להרדמה מקומית של העין, אנשים צעירים מדי (למשל, מתחת לגיל 3) או מבוגרים מכדי לשתף פעולה, חולים עם סדקים צרים בפלפברל שאינם מסוגלים להכיל ספקולום עפעפיים, נשים בהריון ואנשים שאינם מסוגלים לשתף פעולה מסיבות אחרות. ניתן למצוא דיאגרמת זרימת עבודה קצרה באיור 2. ושלבי הפעולה המפורטים הם כדלקמן.
1. בחינה מוקדמת
2. במהלך הבדיקה
3. בדיקה לאחר
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל התמונות המיקרוסקופיות של IVCM נרכשו ברזולוציה של 384 פיקסלים ×-384 פיקסלים, שדה תצפית של 400 מיקרומטר ×-400 מיקרומטר. כאשר היא "מאופסת" כראוי, בדיקה זו תציג רק שלוש תוצאות אפשריות במסגרת התמונה: 1) אין תמונה כלל (ניסוי לא מוצלח): האזור האופטי המרכזי לא יצר מגע עם רקמת המטרה. ii) תמונה חלקית בלבד (איור 7) או מצבים חריגים אחרים (איור 8) (ניסוי לא מוצלח): האזור האופטי המרכזי יצר מגע לא שלם או רופף עם רקמת המטרה. 3) תמונה ברורה ו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חיפוש ספרות PubMed באמצעות מילות המפתח "מיקרוסקופיה קונפוקלית in vivo " ו"מחלת עין יבשה" (אוחזר ביוני 2025) הניב >-300 פרסומים. יש לציין כי שיעורי הפרסום השנתיים התייצבו על כ-40 מאמרים בשנה מאז 2021. יישומים רחבים יותר של IVCM בהפרעות פני העין הניבו >-2,000 מחקרים במהלך שני העשורים האחרונים (2004-2024). מבחינה קלינית, IVCM חולל מהפכה בהערכה ברמת התא של פתולוגיות פני העין. טכנולוגיה זו מאפשרת זיהוי ביטויי מחלה תת-קליניים, מה שמקל על אבחון מוקדם והתערבויות מדויקות, התואמים במדויק ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים.
המחברים מודים ללינה ג'ין מבית החולים לעיניים Hankou Aier ולמין צ'ן ממחלקת העיניים של בית החולים ללב ווהאן אסיה על הסיוע בכמה תמונות, ולכל המשתתפים ואנשי הצוות שעבדו על הליך הניתוח. מחקר זה נתמך על ידי מענק מפרויקטי מחקר מדעיים מוועדת הבריאות העירונית של ווהאן (WX23A20).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| כדורי כותנה סופגים | ג'יאן צ'י, סין | http://www.hnjianqi.com | להכנת כדורי אלכוהול, קטנים |
| ג'ל מבוסס אלכוהול | לי קאנג, שנגחאי, סין | 31107904 | ג'ל חיטוי לידיים ללא שטיפה, 500 מ"ל |
| טיפות קרבומר לעיניים | וידיסיץ', גרמניה | 8187195 | ג'ל עיניים סטרילי לסוכן קישור, 10 גרם |
| כובע מגע בקרנית (TomoCap) | היידלברג, גרמניה | 18829 | מדיום אופטי ומגע בקרנית באופן אספטי |
| ספקולום עפעף | אסיקון, סין | 6102A | על פתיחת העיניים |
| תוכנת חוקר העיניים של היידלברג | היידלברג, גרמניה | גרסה 1.5.2.0 | התוכנה שמגיעה עם מכשיר IVCM |
| מכשיר IVCM | היידלברג, גרמניה | HRT-?,08398 | הציוד המרכזי של הבחינה |
| מטשיות כותנה רפואיות | אסאונד מד, סין | www.e-soundmed.com | לניקוי עיני המטופלים וסיוע בפתיחת העיניים, 10 ס"מ |
| 75% אלכוהול רפואי | הויצ'אנג, סין | www.huichang888.cn | להכנת כדורי אלכוהול, 75% ומעלה; 5% 500 מ"ל |
| טיפות עיניים 0.4% אוקסיבופרוקאין הידרוכלוריד | סנטן, יפן | http://www.santen.co.jp | הרדמה מקומית עינית, 0.4% (0.5 מ"ל: 2 מ"ג) |
| טיפות עיניים עם טוברמיצין | טוברקס, בלגיה | 8453824 | טיפות עיניים נוגדות דלקת, 0.3% (5 מ"ל: 15 מ"ג) |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.