מאמר שיטה

ניתוח פרוגנוסטי של טיפול בבוטילפתליד בהנחיית גנוטיפ CYP2C19 בחולים עם אוטם מוחי חריפה

DOI:

10.3791/69165

⸱

5 במאי 2026

 ,  ,  , 
1Department of Neurology, Shangyu People's Hospital of Shaoxing, Shaoxing University, 2Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University School of Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה מתאר מחקר שהעריך את הפרוגנוזה של טיפול CYP2C19 מונחה גנוטיפ בבוטילפתליד באוטם מוחי חריפה, ומראה כי מטבוליזרים חלשים מביאים תוצאות גרועות יותר, וש-Hcy, NIHSS ו-CYP2C19 הם מנבאים עצמאיים.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לחקור את הפרוגנוזה של חולים עם אוטם מוחי בשלב חריף שטופלו בבוטילפתליד, בהתבסס על גנוטיפ ציטוכרום P450 2C19 (CYP2C19). בסך הכל 175 מטופלים עם אוטם מוחי חריפה שטופלו בבוטילפתליד בבית החולים שלנו בין ינואר 2022 לינואר 2025 נרשמו בדיעבד. בהתבסס על ציוני סולם רנקין (mRS) מותאמים לאחר 3 חודשים לאחר הטיפול, המטופלים סווגו לקבוצת פרוגנוזה טובה (mRS ≤2) וקבוצת פרוגנוזה ירודה (mRS ≥3). CYP2C19 גנוטיפים ופנוטיפים מטבוליים נותחו. הנתונים הקליניים וההתפלגויות הגנוטיפיות הושוו בין הקבוצות, ובוצעה ניתוח רגרסיה לוגיסטית לזיהוי גורמים פרוגנוסטיים. מטבוליזטורים בינוניים שלטו (46.29%), בעוד שמטבוליזטורים חלשים היו הפחות נפוצים (12.00%). בהשוואה לקבוצת הפרוגנוזה הטובה, קבוצת הפרוגנוזה הלקויה הראתה שכיחות גבוהה משמעותית של יתר לחץ דם (P <0.05), רמות גבוהות של הומוציסטאין בסרום (Hcy) (P <0.05), וציוני בסיס גבוהים יותר בסולם השבץ של המכון הלאומי לבריאות (NIHSS) (P <0.05). מטבוליזטורים חלשים (CYP2C19*2/*2, *2/*3, *3/*3) היו מיוצגים יתר בקבוצת הפרוגנוזה הלקויה, בעוד שמטבוליזטורים מהירים (CYP2C19*1/*1) היו שכיחים יותר בקבוצת הפרוגנוזה הטובה (P <0.05). ניתוח רגרסיה לוגיסטית זיהה שלושה מנבאים בלתי תלויים של פרוגנוזה לקויה לאחר שליטה במשתנים משתנים: רמות גבוהות של הומוציסטאין (יחס סיכויים (OR) = 2.255; רווח בר-סמך 95%: 1.404–3.622; P < 0.001), ציון NIHSS בסיסי גבוה יותר (OR = 3.127; CI 95%: 1.508–6.482; P = 0.002), ומצב מטבוליזם CYP2C19 לקוי (OR = 4.559; רווח בר-סמך 95%: 2.392–8.688; P < 0.001). רמות גבוהות של Hcy, עלייה בציוני NIHSS, ופנוטיפים גרועים של מטבוליזטור CYP2C19 הם גורמים פרוגנוסטיים משמעותיים באוטם מוחי חריף שטופלו בבוטילפתליד. מטופלים עם גנוטיפים לקויים של מטבוליזם מציגים תוצאות גרועות יותר, מה שמדגיש את הצורך באסטרטגיות טיפול מותאמות אישית לאופטימיזציה.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אוטם מוחי חריפה, המהווה למעלה מ-80% מכלל מקרי השבץ, מהווה נטל בריאותי עולמי קריטי המאופיין בתמותה, נכות ושיעורי הישנות גבוהים. כסיבת המוות השנייה בשכיחתה בעולם, היא מטילה השפעות סוציו-אקונומיות חמורות באמצעות פגיעה נוירולוגית ארוכת טווח ותלות תפקודית1. הדחיפות של התערבות טיפולית מודגשת על ידי המושג "זמן-הוא-מוח" – שבו כ-1.9 מיליון נוירונים מתים בדקה במהלך איסכמיה2 שלא טופלה.

בנוף קליני זה, בוטילפתליד (dl-3-n-butylphthalide) הפך לסוכן נוירו-מגן קו ראשון בסין, והדגים יעילות רב-מודלית בשיפור המיקרוקולציה המוחית, הפחתת לחץ חמצוני והפחתת אפופטוזיס נוירוני3. עם זאת, שונות בין-אישית משמעותית בתגובה הטיפולית קיימת, כאשר 12%–18% מהמטופלים חווים תועלות קליניות מוגבלות או תופעות לוואי, כולל רעילות כבד והידרדרות נוירולוגית4. הטרוגניות זו מדגישה את הצורך הקריטי בגישות טיפול מותאמות אישית. התקדמות פרמקוגנומית הבהירה את אנזימי הציטוכרום P450, במיוחד CYP2C19, כגורמים מרכזיים למטבוליזם התרופות וליעילותה5. פולימורפיזמים CYP2C19 משפיעים באופן משמעותי על הפרמקוקינטיקה של סוכנים נוירואקטיביים, עם השפעות מבוססות היטב על תגובתיות הקלופידוגרל במניעת שבץ. יותר מ-40% מהאוכלוסיות האסייתיות נושאות אללים של אובדן תפקוד (*2, *3) שמעניקים פנוטיפים לקויים של מטבוליזטור, מה שמוביל לחשיפה לתרופות משתנות ולתוצאות קליניות. ראוי לציין שלמרות שגנוטיפינג CYP2C19 חולל מהפכה בטיפול אנטי-טסיות6, תפקידו בהכוונת משטרי נוירופרוטקטנטים נותר לא נחקר. בוטילפתליד עובר מטבוליזם כבדי מורכב הכולל איזופורמים של CYP450, אך ההשלכות הפרוגנוסטיות של CYP2C19 וריאנטים על יעילותו הטיפולית אינן ידועות. בניגוד לקלפידוגלרל, פרו-תרופה הדורשת הפעלה בתיווך CYP2C19, מסלולי המטבוליזם של בוטילפתליד והתפקיד המדויק של CYP2C19 בהתנהגותו וביעילותו טרם הוכחו במלואם. הבחנה זו מדגישה את ההיבט החדשני במחקר שלנו: מעבר לפרדיגמה המוכרת של פרמקוגנומיקה אנטי-טסיתית אל תחום המתפתח של טיפול מותאם אישית בסוכן נוירו-פרוטקטיבי. פער ידע זה מונע את יישום הרפואה המדויקת בטיפול בשבץ אקוט. לכן, מחקר זה בוחן את הקשר בין פולימורפיזמים גנטיים CYP2C19 לבין תוצאות תפקודיות של 3 חודשים בחולים עם אוטם מוחי חריפה המקבלים בוטילפתליד. על ידי שילוב נתוני גנוטיפ עם סמנים פרוגנוסטיים מבוססים, אנו שואפים לפתח מסגרת פרמקוגנומית לאופטימיזציה של טיפול נוירופרוטקטיבי באוכלוסייה זו, ובכך להרחיב את היישומים של פרמקוגנומיקת שבץ מעבר לסוכנים אנטי-טסיות.

מחקר זה הוא בין הראשונים שחוקרים את השפעת הפרמקוגנומיקה CYP2C19 על תוצאות הטיפול המונותרפי בבוטילפתליד. הממצאים מגלים קשר משמעותי בין פנוטיפים לקויים של מטבוליזטור לבין החלמה פונקציונלית גרועה יותר, ומספקים הצדקה לאסטרטגיות נוירופרוטקנטיות מותאמות אישית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר נערך בהתאם להצהרת הלסינקי ואושר על ידי ועדת האתיקה המוסדית של בית החולים המרכזי של חויז'ואו (אישור מס' 2022-015). מחקר זה לא נרשם כניסוי קליני בשל עיצובו הרטרוספקטיבי. הסכמה מדעת בוטלה בשל אופיו הרטרוספקטיבי של הניתוח, וכל נתוני המטופלים בוטלו. הרגנטים והציוד בו השתמשו מופיעים בטבלת החומרים.

1. עיצוב המחקר ובחירת מטופלים

כמחקר רב-מרכזי רטרוספקטיבי, אנו מכירים בפוטנציאל להטיית בחירה. כדי לצמצם זאת, זיהוי המטופלים התבצע לפי פרוטוקול הרשמה רציף מרשימות שבץ פוטנציאליות בכל מרכז משתתף. כל המטופלים שהגיעו עם אוטם מוחי חריף במהלך תקופת המחקר (ינואר 2022 עד ינואר 2025) נבדקו לזכאות, ואלו שעמדו בקריטריונים להכללה נרשמו ברצף. הנתונים נאספו משלושה מוסדות: בית החולים העממי שאוקסין שאנגיו, בית החולים ראן רן שו, ובית החולים המרכזי של העם בהויז'ואו. הסכמי שיתוף נתונים הוקמו בין כל המרכזים המשתתפים כדי להבטיח פיקוח נכון וגישה לנתונים.

כדי להתמודד עם נתונים חסרים, יושמה גישת אימפוטציה מרובה באמצעות משוואות שרשרת למשתנים עם חסריות <5%. עבור משתנים עם נתונים חסרים של >5%, נעשה שימוש בניתוח מקרה מלא, עם דיווח שקוף על דפוסי היעדרות. משתנים קריטיים, כולל גנוטיפ CYP2C19, NIHSS בסיסי ו-mRS לשלושה חודשים, החזיקו נתונים מלאים לכל המשתתפים. הבלבול הפוטנציאלי טופל באמצעות התאמות רב-משתניות במודלים הסטטיסטיים שלנו, כולל גורמים פרוגנוסטיים ידועים כגון גיל, חומרת שבץ בסיסית, גורמי סיכון וסקולריים ותרופות נלוות. באופן ספציפי, נאספו והתאימו נתונים על תרופות נלוות (אנטי-טסיות, סטטינים, תרופות נוגדות יתר לחץ דם) בניתוחים.

  1. קריטריוני הכללה
    קריטריוני ההכללה היו כדלקמן: (1) אבחון של אוטם מוחי חריף שאושר באמצעות הדמיה וקריטריונים קליניים בהתאם להנחיות הסיניות לאבחון וטיפול בשבץ איסכמי חריף; (2) שבץ ראשון אי פעם עם זמן התחלה ועד קבלה <72 שעות; (3) טיפול בבוטילפתליד (0.1 גרם לקפסולה) במינון של 0.2 גרם שלוש פעמים ביום על קיבה ריקה, החל בתוך 24 שעות מהקבלה; (4) ללא טיפול טרומבוליטי או נוגד קרישה קודם.
  2. קריטריוני החרגה
    הקריטריונים להוצאה היו כדלקמן: (1) הפרעות פסיכיאטריות נלוות או פגיעה קוגניטיבית; (2) תפקוד כבד, כליה או לב חמור; (3) רגישות יתר לתרופת המחקר; (4) מחלות דלקתיות או אוטואימוניות מערכתיות. המטופלים חולקו לקבוצות פרוגנוזה טובה (mRS ≤2) ותחזית ירודה (mRS ≥3) בהתבסס על ציונים 7 בסולם רנקין מותאם לשלושהחודשים. תהליך הכללת המטופלים מוצג באיור 1.
    הקפדה על טיפול בבוטילפתליד נבדקה באמצעות תצפית ישירה על מתן התרופות במהלך האשפוז, ספירת כדורים וסקירות יומן תרופות במהלך ביקורי מעקב, ראיונות טלפוניים מובנים במרווחי שבועיים להערכת עמידה ותופעות לוואי, וסקירת רשומות מילוי בתי מרקחת למרפאות חוץ. מטופלים עם היצמדות ל-<80% הוצאו מהניתוח (n=7). נקודת המעקב של 3 חודשים נבחרה בהתבסס על תקני מחקר מבוססים לתוצאות שבץ, שכן mRS ב-90 יום לאחר השבץ נחשב לנקודת סיום ראשית המתעדת את תקופת ההחלמה הקריטית.

2. איסוף נתונים קליניים

הנתונים נאספו באופן שיטתי באמצעות טפסי דוח מקרה אלקטרוניים המכסים חמישה תחומים: מאפיינים דמוגרפיים (גיל, מין, מדד מסת גוף, טבלה 1), גורמי סיכון וסקולריים (יתר לחץ דם, סוכרת, היסטוריית עישון, היסטוריית שתייה), הצגה קלינית (אתר אוטם, ציון בסיס NIHSS), פרמטרים במעבדה ופרטי טיפול. סמנים ביולוגיים בדם נמדדו כך:

  1. פרופיל שומנים (TC, TG, LDL-C, HDL-C)
    נותח באמצעות אנליזר ביוכימי אוטומטי, עם טווח בדיקה 0–20 mmol/L עבור TC, 0–10 mmol/L עבור TG, 0–15 mmol/L עבור LDL-C, ו-0.5–2.0 mmol/L עבור HDL-C.
  2. הסרום הומוציסטאין (Hcy)
    נמדד באמצעות ELISA (טווח גילוי 5–50 מיקרומול/ליטר, מקדם שונות <5%). הדגימות אוחסנו בטמפרטורה של -80°C בתוך שעתיים מהאיסוף כדי למנוע התדרדרות.

3. CYP2C19 גנוטיפינג

  1. איסוף דגימות וחילוץ DNA
    דם ורידי בצום (5 מ"ל) נאסף מהווריד הקוביטלי החציוני בבוקר. לאחר 30 דקות של קרישה בטמפרטורת החדר, דגימות צנטריפוגה ב-1,600 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס באמצעות צנטריפוגה מהירה לבידוד הסרום. DNA גנומי הופק מ-300 מיקרוליטר סרום בהתאם לפרוטוקול היצרן. בקצרה, דגימות הודגרו עם בופר ליזיס של 300 מיקרוליטר בטמפרטורה של 56°C למשך 10 דקות, ולאחר מכן נוספו 100 מיקרוליטר אתנול אבסולוטי. התערובת הועברה לעמודי טיהור וצנטריפוגה ב-12,000 × גרם למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר. ה-DNA הוזרם באמצעות בופר שחרור חימום מראש של 50 מיקרוליטר (70 מעלות צלזיוס) לאחר שני שלבי שטיפה עם בופר שטיפה של 500 מיקרוליטר כל אחד, עם צנטריפוגה ב-12,000 × גרם למשך דקה לאחר כל שטיפה. ריכוז ה-DNA הסופי הותאם ל-50–100 ng/μL באמצעות ספקטרופוטומטר ונשמר בטמפרטורה של -20°C.
  2. גנוטיפינג PCR בזמן אמת
    הגנוטיפינג CYP2C19 בוצע באמצעות PCR בזמן אמת. תערובת התגובה בנפח 20 מיקרוליטר כללה 10 מיקרוליטר 2× TaqMan Master Mix, 1 מיקרוליטר תערובת פריימר-פרוב, 2 מיקרוליטר תבנית DNA, ו-7 מיקרוליטר מים ללא נוקליאז. תנאי המחזור התרמי נקבעו כך: דנאטורציה ראשונית ב-95 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, ואחריה 40 מחזורי דנאטורציה ב-95 מעלות צלזיוס למשך 5 שניות, ושילוב של אנילינג/הארכה ב-60 מעלות צלזיוס למשך 34 שניות. נתוני פלואורסצנציה נאספו במהלך שלב האנילינג/הארכה.
  3. אישור גנוטיפ ובקרת איכות
    קריאות גנוטיפ אושרו באמצעות רצף Hi-SNP דור שני עם כיסוי של 100×. לתוצאות לא מתאימות (n=3), נעשה שימוש בניתוח פולימורפיזם אורך מקטעי הגבלה כשיטת גיבוי: מוצר PCR של 20 מיקרוליטר דוגר עם אנזים הגבלה של 1 μL HpyCH4V ו-4 מיקרוליטר בופר מתאים ב-37 מעלות צלזיוס למשך שעה, ולאחר מכן הפרדה באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז 2% ב-100 וולט למשך 45 דקות.
    יושמו אמצעי בקרת איכות מחמירים. כל הדגימות עובדו בשכפול עם בדיקות שכפול עיוורות; בקרות פנימיות (גנוטיפים ידועים) נכללו בכל הרצת PCR; ההתאמה בין תוצאות ריצוף PCR בזמן אמת ל-Hi-SNP הייתה 100%; דגימות שנבחרו באקראי (10%) נשלחו למעבדה עצמאית לאימות, והושגו התאמה של 100%; שיעורי השיחות עלו על 99.5% עם ציון איכות גנוטיפ מינימלי של Q30.
  4. סיווג פנוטיפ מטבולי
    הפנוטיפים המטבוליים סווגו על פי הגנוטיפ CYP2C19 כך: מטבוליזטורים חלשים (*2/*2, *2/*3, *3/*3); מטבוליזטורים ביניים (*3/*17, *2/*17, *1/*2, *1/*3); מטבוליזרים מהירים (*1/*1). סכמת סיווג תלת-שכבתית זו שימשה לצורך התאמה לפרקטיקות מעבדה קליניות אזוריות. תדירות האלל *17 והתפלגות הגנוטיפים בקבוצת ה-IM מפורטים בסעיף התוצאות.

4. ניתוח סטטיסטי

ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות גרסה 25.0 של SPSS. הנתונים הקטגוריים הוצגו כ-[n (%)] והושוו באמצעות מבחני χ2 (עם תיקון ייטס למדגמים קטנים). משתנים רציפים נבדקו לנורמליות באמצעות מבחן שפירו-וילק; נתונים מבוזרים נורמלית הוצגו כסטיית תקן ממוצעת ± ונותחו באמצעות מבחני t עצמאיים, בעוד שנתונים לא נורמליים נותחו באמצעות מבחני Mann-Whitney U.
רב-קוליניאריות הוערכה באמצעות סבילות (≥0.1) ומקדם אינפלציית שונות (VIF <10). ניתוח רגרסיה לוגיסטית (באמצעות ניתוח → רגרסיה → נתיב תפריט לוגיסטי בינארי ב-SPSS) שימש לזיהוי גורמי פרוגנוזה בלתי תלויים, כאשר קריטריוני כניסה ויציאה נקבעו ב-P <0.05 ו-P >0.10, בהתאמה. המשתנים שהוכנסו למודל כללו רמות Hcy (רציפות), ציון NIHSS בסיסי (רציף), יתר לחץ דם (קטגורית), ופנוטיפ מטבולי CYP2C19 (קטגורית, עם מטבוליזר מהיר כהפניה). מבחן ההתאמה של Hosmer-Lemeshow בוצע להערכת כיול המודלים. P דו-זנבי <0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.
גודל האפקט חושב כך: עבור משתנים רציפים, d של כהן חושב באמצעות פונקציית מבחן ניתוח < השוואת ממוצעיםדגימות בלתי תלויה T עם חישוב גודל אפקט נוסף; עבור משתנים קטגוריים, מקדם ה-phi התקבל מפלט הבדיקהχ 2 תחת ניתוח סטטיסטיקה תיאוריתCrosstabs, כאשר Phi ו-Cramer's V נבחרו באפשרויות הסטטיסטיקה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

התפלגות הגנוטיפים CYP2C19 ופנוטיפים מטבוליים

הניתוח של CYP2C19 גנוטיפים ופנוטיפים מטבוליים ב-175 מטופלים עם אוטם מוחי חריפה גילה כי מטבוליזטורים ביניים היו השכיחים ביותר (81 מתוך 175, 46.29%), בעוד שמטבוליזטורים חלשים היו הנפוצים ביותר (21 מתוך 175, 12.00%). התפלגות הגנוטיפ הראתה כי CYP2C19 * 1/*1 (מטבוליזר מהיר) היה הגנוטיפ השכיח ביותר (73/175, 41.71%), ואחריו *1/*2 (מטבוליזר ביניים, 72/175, 41.14%). הגנוטיפ של *2/*2 היווה 8.57% (15 מתוך 175)...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אוטם מוחי חריפה, תסמונת הנגרמת מאי ספיקת כלי דם מוחית, מייצגת מצב חירום נוירולוגי קריטי 8,9,10. בוטילפתליד הפך לסוכן טיפולי עיקרי למצב זה. מחקרים הראו כי המנגנונים הטיפוליים שלו כוללים דיכוי יצירת רדיקלים חופשיים תוך-תאיים, הגברת פעילות אנזימי נוגדי חמצון ושימור שלמות המיטוכונדריה, ובשילוב משפרים את חילוף החומרים האנרגטי ברקמות עצביות בתנאים איסכמיים-היפוקסיים11. למרות יע...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין אינטרסים מתחרים, כולל יחסים פיננסיים, מסחריים או לא-פיננסיים, שעשויים להשפיע על האובייקטיביות של מחקר זה.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מבקשים להודות למטופלים ולמשפחותיהם על השתתפותם במחקר זה. אנו גם מודים לצוות הקליני במחלקת הנוירולוגיה, בית החולים המרכזי של חויז'ואו, על סיועו באיסוף נתונים. תודה מיוחדת ל[שם/מוסד, אם רלוונטי] על התמיכה הטכנית בניתוח גנטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2× TaqMan Master Mixתרמו פישר סיינטיפיק4371355משמש לגנוטיפינג CYP2C19 תגובת PCR בזמן אמת
אגרוזלא זמיןלא זמיןמשמש להכנת ג'ל 2% לאלקטרופורזה בג'ל אגרוז
קפסולות בוטילפתלידNBP פארמה בע"מ.H200502990.1 גרם לקפסולה; ניתן 0.2 גרם שלוש פעמים ביום על קיבה ריקה
ערכת חילוץ DNAטיאנגן ביוטכנולוגיהDP304משמש להפקת DNA גנומי מדגימות סרום; כולל בופר ליזיס, בופר שטיפה ובופ שחרור
טפסי דיווח מקרה אלקטרוניים (e-CRF)לא זמיןלא זמיןכלי לאיסוף נתונים קליניים שיטתי המכסה חמישה תחומי נתונים קליניים
ערכת ELISA להומוציסטאין (Hcy)ביוטכנולוגיה שנחאי המקושרת לאנזימיםלא זמיןטווח זיהוי 5– 50 & mu; mol/L; מקדם שונות < 5%; למדידת Hcy בסרום
בופר השטפהטיאנגן ביוטכנולוגיהלא זמיןחימום מראש ל-70&G; C; רכיב בערכת חילוץ DNA של DP304, לשחרור DNA
צנטריפוגה מהירה מקוררת Eppendorf 5425Rאפנדורף5425Rמשמש לבידוד סרום ולשלבי צנטריפוגציה של טיהור DNA גנומי
פלטפורמה/מערכת ניתוח של פלטפורמת ריצוף Hi-SNPBGI גנומיקסלא זמיןרצף דור שני; שימש לאישור גנוטיפ CYP2C19 עם 100 פעמים; כיסוי
אנזים הגבלה HpyCH4Vניו אינגלנד ביולאבסלא זמיןמשמש לניתוח פולימורפיזם באורך קטעי הגבלה של תוצאות גנוטיפינג דיסוננטיות
בופר Lysisטיאנגן ביוטכנולוגיהלא זמיןרכיב בערכת חילוץ DNA של DP304; דוגר עם דגימות בטמפרטורה של 56 מעלות; C ל-10 דקות
ספקטרופוטומטר ננו-טיפהתרמו פישר סיינטיפיקלא זמיןמשמש להתאמת ריכוז ה-DNA הגנומי הסופי ל-50-100 ng/μ L
מים ללא נוקלאזלא זמיןלא זמיןמשמש להכנת תערובת תגובת PCR בזמן אמת CYP2C19 גנוטיפינג
תערובת פרימר-פרוב (CYP2C19*2)תרמו פישר סיינטיפיקC__25986767_30ייעודי לגנוטיפינג CYP2C19*2 ב-PCR בזמן אמת
תערובת פריימר-פראב (CYP2C19*3)תרמו פישר סיינטיפיקC__27861809_10ספציפי לגנוטיפינג CYP2C19*3 ב-PCR בזמן אמת
מערכת Roche LightCycler 480 IIרוש דיאגנוסטיקהLightCycler 480 IIמערכת PCR בזמן אמת לגנוטיפינג CYP2C19
אנלייזר Roche/Hitachi 7600Roche Diagnostics/Hitachi7600למדידת פרופיל שומנים (TC, TG, LDL-C, HDL-C); טווחי הבדיקה לליפידים שצוינו במחקר
SPSSחברת IBM25תוכנת ניתוח סטטיסטי; משמש לכל ניתוח נתוני המחקר (χ ² מבחנים, מבחני T, רגרסיה לוגיסטית וכו')
בופר שטיפהטיאנגן ביוטכנולוגיהלא זמיןרכיב בערכת חילוץ DNA של DP304; שתי מדרגות שטיפה עם 500 & mu; L כל אחד בטיהור DNA

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, X., Luan, X., Yang, Z. The effect of butylphthalide on improving the neurological function of patients with acute anterior circulation cerebral infarction after mechanical thrombectomy. Medicine (Baltimore). 102 (34), e34616-e34616 (2023).
  2. Sun, K., Guo, L. Influences of butylphthalide injection in combination with edaravone on clinical efficacy and cytokines in elderly acute cerebral infarction patients. Altern Ther Health Med. 24 (1), AT10523-AT10523 (2024).
  3. Li, Y., Liu, J., Zhu, Y., Xue, M., He, J. Effects of butylphthalide sodium chloride injection combined with edaravone dexborneol on neurological function and serum inflammatory factor levels in sufferers having acute progressive cerebral infarction. Front Neurol. 15, 1415977(2024).
  4. Wang, K., et al. Drug interaction evaluation of the novel phosphodiesterase type 5 inhibitor tunodafil (youkenafil): Effects of tunodafil on omeprazole pharmacokinetics based on CYP2C19 gene polymorphism, and effects of ritonavir on tunodafil pharmacokinetics. Eur J Pharm Sci. 206, 107010(2025).
  5. Mo, Y., Lu, Y., Guo, F., Wu, A., Weng, Y. Analysis of CYP2C19 gene polymorphism and influencing factors of pharmacological response of clopidogrel in patients with cerebral infarction in Zhejiang, China. Front Cardiovasc Med. 10, 1020593(2023).
  6. Meschia, J. F., et al. Efficacy of clopidogrel for prevention of stroke based on CYP2C19 allele status in the POINT trial. Stroke. 51 (7), 2058-2065 (2020).
  7. Coleman, C. I., et al. Agreement between 30-day and 90-day modified Rankin Scale score and utility-weighted modified Rankin Scale score in acute intracerebral hemorrhage: An analysis of ATACH-2 trial data. J Clin Neurosci. 121, 61-66 (2024).
  8. Hurford, R., Sekhar, A., Hughes, T. .A. .T., Muir, K. .W. Diagnosis and management of acute ischaemic stroke. Pract Neurol. 20 (4), 304-316 (2020).
  9. Kreutz, R., et al. 2024 European Society of Hypertension clinical practice guidelines for the management of arterial hypertension. Eur J Intern Med. 126, 1-15 (2024).
  10. Olivato, S., et al. e-NIHSS: An Expanded National Institutes of Health Stroke Scale weighted for anterior and posterior circulation strokes. J Stroke Cerebrovasc Dis. 25 (12), 2953-2957 (2016).
  11. Sun, M., et al. Butylphthalide inhibits ferroptosis and ameliorates cerebral ischaemia-reperfusion injury in rats by activating the Nrf2/HO-1 signalling pathway. Neurotherapeutics. 21 (5), e00444(2024).
  12. Wu, Z., Wang, M., Mao, Q., Li, Y., Li, Z. Assessment of the impact of combining butylphthalide and atorvastatin on neurological function, quality of life and vascular endothelial function in individuals diagnosed with acute cerebral infarction. Pak J Pharm Sci. 37 (5), 1003-1010 (2024).
  13. Shang, X., Li, J., Wang, X., Zhang, P. Diagnostic efficacy of ACA, a?2-GP1, hs-CRP, and Hcy for cerebral infarction and their relationship with the disease severity. Am J Transl Res. 16 (6), 2369-2378 (2024).
  14. Li, K., Xu, M., Zhang, Y., Zhao, L. Prognostic values of homocysteine and potassium levels in patients with acute cerebral infarction after intravenous thrombolysis with recombinant tissue plasminogen activator. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 35 (2), 65-73 (2025).
  15. Fu, B., Meng, S., Gao, G. A combination of tetramethylpyrazine hydrochloride and butylphthalide on serum S100B, CRP, Hcy levels and NIHSS score in patients with acute cerebral infarction: A retrospective study. Pak J Pharm Sci. 35 (3), 945-951 (2022).
  16. Chen, Q., Ling, W. T., Han, D. K. Study on the association of homocysteine and C-reactive protein with neurofunctional changes in patients with acute ischemic stroke after endovascular stent treatment. Neuropsychiatr Dis Treat. 18, 881-889 (2022).
  17. Zheng, Z. D-dimer levels and NIHSS as prognostic predictors in elderly patients with cerebral infarction. Clin Interv Aging. 20, 505-511 (2025).
  18. Ananthathandavan, P., Narayanasamy, D. Computational drug-drug interaction prediction mediated by CYP450 isoforms of ilaprazole coadministered with clopidogrel. Future Sci OA. 10 (1), FSO966(2024).
  19. Kim, J. H., et al. Prognostic impact of CYP2C19 genotypes on long-term clinical outcomes in older patients after percutaneous coronary intervention. J Am Heart Assoc. 13 (10), e032248(2024).
  20. Li, W., et al. The association between CYP2C19 genetic polymorphism and prognosis in patients receiving endovascular therapy. Ann Indian Acad Neurol. 27 (1), 27-33 (2024).
  21. Tunehag, K. R., et al. CYP2C19 genotype-guided antiplatelet therapy and clinical outcomes in patients undergoing a neurointerventional procedure. Clin Transl Sci. 18 (1), e70131(2025).
  22. Li, P., et al. Analysis of the effect of CYP2C19 gene properties on the antiplatelet aggregation of clopidogrel after carotid artery stenting under network pharmacology. BMC Pharmacol Toxicol. 25 (1), 34(2024).
  23. Bu, X., et al. Butylphthalide inhibits nerve cell apoptosis in cerebral infarction rats via the JNK/p38 MAPK signaling pathway. Exp Ther Med. 21 (6), 565(2021).
  24. Sun, M., et al. Butylphthalide inhibits ferroptosis and ameliorates cerebral ischaemia-reperfusion injury in rats by activating the Nrf2/HO-1 signalling pathway. Neurotherapeutics. 21 (5), e00444(2024).
  25. Martelotto, L. G. 'Frankenstein' protocol for nuclei isolation from fresh and frozen tissue for snRNAseq. , Protocols.io. (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Modified Rankin ScaleNIHSS

מאמרים קשורים