מאמר שיטה

מחקר השוואתי של מצבי רכישה DDA ו-DIA בספקטרומטריית מסה UPLC-Q-Orbitrap באמצעות אבקת Huaihua

DOI:

10.3791/69227

⸱

3 באוקטובר 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Department of Pharmacy, Shizuishan Maternal and Child Health Hospital, 3Department of Assets and Laboratory Management, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה משווה בין מצבי DDA ו-DIA (UPLC-QE-Orbitrap MS) לניתוח אבקת Huaihua, TCM מורכב. פותחו שיטות DDA ו-DIA אופטימליות; תרכובות זוהו באמצעות Compound Discoverer. הביצועים (זיהוי תרכובות, שחזור, איכות ספקטרלית, רגישות) הוערכו, וסיפקו הנחיות אמפיריות לבחירת מצב סריקת TCM.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מעריך באופן שיטתי את הביצועים ההשוואתיים של שני מצבי רכישת ספקטרומטריית מסה, רכישה תלוית נתונים (DDA) ורכישה בלתי תלויה בנתונים (DIA), יחד עם ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה של כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC-Q-Orbitrap HRMS) לפרופיל כימי מקיף של פורמולציות מורכבות של רפואה סינית מסורתית (TCM). אבקת Huaihua, מרשם מנוסח קלאסי, שימשה כמערכת מודל להערכה אמפירית. שיטות רכישה אופטימליות של DDA ו-DIA נקבעו בנפרד: שיטת ה-DDA שילבה אסטרטגיית בחירת יונים מקודמת עם פרמטרי פיצול מותאמים אישית, בעוד ששיטת DIA השתמשה באסטרטגיית חלון משתנה מפולח כדי לכסות את טווח ה-m/z של היעד, תוך ביצוע פיצול בלתי מוטה על כל יוני המבשר. זיהוי התרכובות בוצע באמצעות תוכנת Compound Discoverer. ההערכה ההשוואתית התמקדה במיוחד במאפייני הביצועים של שני מצבי הרכישה, הכוללים את מספר התרכובות שזוהו, יכולת השחזור, האיכות הספקטרלית של MS/MS ורגישות הזיהוי עבור מרכיבים פעילים בשפע נמוך. התוצאות הראו כי מצב DDA הניב מספר כולל גבוה יותר של תרכובות שזוהו, בעוד שמצב DIA יצר שיעור גדול יותר של זיהויים ברמת ביטחון גבוהה (10.63% עם ציוני התאמה ספקטרלית >0.8). יש לציין כי גישת ה-DIA הציגה יכולת שחזור טובה משמעותית בזמן השמירה ושטח השיא עבור שש תרכובות מייצגות, כאשר רוטין מראה הבדל של פי >3 בזמן השמירה RSD בין שני מצבי הרכישה. עם זאת, DDA ייצר ספקטרום MS/MS נקי יותר עם יוני שבר מובחנים, בעוד שספקטרום DIA הפגין הפרעות מיונים מזהמים. במקביל, DIA זיהה ביעילות מרכיבים פעילים בשפע נמוך שלא ניתן היה לחלץ את כרומטוגרמות היונים שלהם ושברי MS/MS במצב DDA. מחקר זה תורם ראיות ניסיוניות קריטיות ומערכי נתונים אנליטיים כדי ליידע את הבחירה של מצבי רכישת ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה למחקר ניסוח מורכב של TCM. חוקרים עוקבים עשויים לשלב את היתרונות המשלימים של שתי הגישות כדי להשיג מטרות כפולות באפיון תרכובות מקיף.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

לפורמולות של הרפואה הסינית המסורתית (TCM) יש מערכות כימיות מורכבות עם שונות משמעותית בריכוזי הרכיבים, במיוחד נוכחות של חומרים פעילים רבים בשפע נמוך, המציבים אתגרים חמורים לטכנולוגיות אנליטיות. אבקת Huaihua, נוסחה קלאסית וידועה לרפואה סינית מסורתית, מורכבת מארבעה צמחי מרפא: סופורה יפנית, עלי Platycladus orientalis, קוצים של Schizonepeta tenuifolia וקליפת אורנטיום הדרים. נוסחה זו מכילה מגוון רחב של חומרים ביו-אקטיביים, כולל פלבנואידים, אלקלואידים ושמנים נדיפים, עם הבדלים משמעותיים בריכוזים שלהם. הוא משמש כמודל מייצג של מערכות מורכבות1 לחקר הבסיס החומרי של נוסחאות TCM. אפיון מדויק, מקיף ואמין של ההרכב הכימי שלו הוא תנאי מוקדם קריטי להבהרת בסיס החומר הפרמקודינמי ולשיפור תקני בקרת האיכות.

כרומטוגרפיה נוזלית בעלת ביצועים גבוהים במיוחד-שדה מרובע-אלקטרוסטטי אורביטראף ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה (UPLC-QE-Orbitrap MS) התגלתה כפלטפורמת ליבה לניתוח רכיבים כימיים במערכות TCM מורכבות, בשל הרזולוציה, הרגישות ודיוק המסה יוצאי הדופן שלה. במונחים של אסטרטגיות רכישת נתונים, רכישה תלויה-נתונים (DDA) ורכישה בלתי תלויה-בנתונים (DIA) הם שני אופני מיינסטרים 2,3,4 (איור 1). מצב DDA מפעיל באופן סלקטיבי פיצול של יונים בשפע גבוה על סמך כללים מוגדרים מראש (למשל, סף עוצמת יונים מבשר, הרחקה דינמית), ומניב ספקטרום MS/MS ממוקד באיכות גבוהה המאפשר הבהרה מבנית. עם זאת, יש לו מגבלות 5,6,7,8 בכיסוי יונים בשפע נמוך. לעומת זאת, מצב DIA מבצע פיצול לא מפלה של כל יוני המבשר בטווח יחס מסה למטען מוגדר באמצעות חלונות רציפים או משתנים. תיאורטית, הוא לוכד את כל היונים הניתנים לזיהוי, ומשפר משמעותית את הרוחב ואת יכולת השחזור של הזיהוי, מתאים במיוחד לניתוח גלובלי לא ממוקד, אם כי ספקטרום MS/MS המעורב המתקבל מורכב יותר לפירוש 5,9.

נכון לעכשיו, בעוד שטכניקות DDA ו-DIA יושמו בנפרד בניתוח TCM, מחקרים השוואתיים שיטתיים ואמפיריים על מדדי ביצועים מרכזיים, כגון רוחב זיהוי (במיוחד עבור רכיבים בעלי שפע נמוך), איכות ספקטרום MS/MS ורגישות לזיהוי, בתוך אותה מערכת נוסחאות TCM מורכבת (למשל, אבקת Huaihua) נותרו לא מספיקים. הבהרת התרחישים, היתרונות והמגבלות הישימים של שני המצבים הללו במטריצות TCM מורכבות היא חיונית לחוקרים כדי לייעל את בחירת האסטרטגיה על סמך יעדי ניסוי ספציפיים10.

פרמטרים ומגבלות עיקריים מסוכמים כאן כדי להדריך את הקוראים לגבי תחולת פרוטוקול זה. השיטה יעילה ביותר לאפיון מטריצות צמחים מורכבות, עם פרמטרים אופטימליים למערכת המכילה פלבנואידים ואלקלואידים. חלון משתנה ה-DIA הקריטי הוגדר ל-30 m/z לאחר בדיקה אמפירית; יש לכוון פרמטר זה לדגימות בעלות תכונות פיזיקוכימיות שונות. השיטה מזהה באופן אמין יונים בשפע נמוך (אזור שיא ~ 105) אך דורשת רכישה במצבי יינון חיוביים ושליליים נפרדים כדי להבטיח את איכות הנתונים. מגבלה עיקרית היא התלות של DIA בספריות ספקטרליות ובתוכנת דה-קונבולוציה מתקדמת לזיהויים בטוחים, מה שמשפיע על דרישות המשאבים החישוביים.

בהתאם לכך, מחקר זה נועד לערוך השוואה מעמיקה ושיטתית של הביצועים המקיפים של מצבי סריקה DDA ו-DIA בפלטפורמת UPLC-QE-Orbitrap MS, תוך שימוש בנוסחה הקלאסית Huaihua Powder כמקרה מבחן. יפותחו שיטות סריקה מותאמות DDA ו-DIA המותאמות לניתוח אבקת Huaihua. עיבוד הנתונים יבוצע באמצעות תוכנת Compound Discoverer כדי להעריך ולהשוות את שני המצבים בממדים הבאים: (1) המספר הכולל של תרכובות שזוהו; (2) איכות ספקטרום MS/MS שנרכש; (3) יכולת שחזור של אזורי שיא וזמני שימור של תרכובות מייצגות; ו-4) רגישות לזיהוי רכיבים פעילים בשפע נמוך. מחקר זה צפוי לספק ראיות ניסיוניות מוצקות ותמיכה בנתונים לבחירת מצבי סריקה של ספקטרומטריית מסה ברזולוציה גבוהה במחקרים של מערכות TCM מורכבות, תוך בחינת הפוטנציאל ליתרונות משלימים של DDA ו-DIA להשגת "איזון בין רוחב ועומק" ולקידום מודרניזציה של TCM.

במהלך הניסוי, לגבי הגדרת הפרמטר של חלון המשתנה המפולח במצב רכישת DIA, אנו מציעים להגדיר אותו ל-30 m/z. יחד עם זאת, אפקט האיסוף של יונים חיוביים ושליליים בנפרד טוב יותר.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הריאגנטים והציוד המשמשים במחקר זה מפורטים בטבלת החומרים.

1. הכנת תמיסת בדיקת אבקת Huaihua

  1. בהתאם לנורמות העיבוד של "פרח סופורה מוקפץ" במהדורת 2020 של הפרמקופיאה הסינית (חלק א'), קחו כמות מתאימה מחומר פרחי הסופורה המקורי, הסירו זיהומים וענפים, מסננים אפר ופסולת, מניחים במחבת חמה ומטגנים תוך ערבוב על אש נמוכה (100 מעלות צלזיוס) עד לצהוב כהה. מוציאים ומצננים.
  2. הכן את המוצרים המעובדים של עלי Platycladus orientalis על פי "כללים כלליים להכנה 0213" במהדורת 2020 של הפרמקופיאה הסינית (חלק IV). לוקחים כמות מתאימה מעלי Platycladus orientalis המקוריים, מסירים זיהומים, מניחים במחבת חמה ומטגנים תוך ערבוב על אש נמוכה (100 מעלות צלזיוס) עד לצהוב. מוציאים ומצננים.
  3. הכינו את המוצרים המעובדים של Zhike לפי השיטה ל"סובין מוקפץ Fructus Aurantii" במהדורת 2020 של הפרמקופיאה הסינית (חלק א'). קח כמות מתאימה של חומר גלם Zhike, הסר זיהומים, חמם ל-100 מעלות צלזיוס ופזר כמות מתאימה של סובין חיטה ביחס של 1:10 (חומרים לחומרי עזר).
    1. לאחר שהעשן עולה, מוסיפים פרוסות Zhike גולמיות ומטגנים במהירות. כאשר המשטח הופך לצהוב או צהוב כהה, מוציאים, מסננים את הסובין, מצננים ומניחים בצד.
  4. הכן אבקת Huaihua על פי מרשם יחס המשקל של 1:1:1:1 מפורמולולוגיה רפואית סינית (מהדורה שלישית של המאה החדשה). שקלו במדויק 1 גרם מכל אבקת צמחים (מסננת דרך מסננת מס '5).
    1. מערבבים את האבקות במכתש ומערבבים לפי "שיטת הטריטורציה והערבוב" לאבקות הרפואה הסינית המסורתית: טוחנים בעדינות ובעקביות בכיוון אחד במשך 10 דקות.
    2. שקול את האבקה מעורבבת באופן אחיד כאשר לא נצפים פסים, אגרומרטים או שינויים בצבע גלויים, וכתוצאה מכך מראה הומוגני על פני כל התערובת. הכן את דגימת אבקת Huaihua הסופית בשיטה זו.
  5. העריכו את אחידות הערבוב באמצעות פרוטוקול בדיקה חזותית סטנדרטי. בדוק את תערובת האבקה בתנאי תאורה עקביים על רקע לבן.
    הערה: שקול את התערובת הומוגנית רק אם היא עומדת בכל הקריטריונים הבאים: צבע אחיד לכל אורכו ללא פסים או טלאים גלויים של רכיבים בודדים; מרקם עקבי ללא סטייה גסה או עדינה; אין שונות ברורה בגוון הצבע בעת דגימה ממספר נקודות; ולא ניתן לזהות גושים גרגירים מצטברים בבדיקה מקרוב. בצע הערכה זו על ידי שני אנליסטים עצמאיים כדי להבטיח עקביות.
  6. שקלו במדויק 0.1 גרם מדגימת אבקת Huaihua המעורבת היטב. העבירו את הדגימה לבקבוק נפחי של 10 מ"ל. הוסף 8 מ"ל מתנול.
  7. בצע מיצוי קולי למשך 60 דקות בהספק של 500 וואט ובתדר של 40 קילו-הרץ. מצננים לטמפרטורת החדר. הרכיבו את עוצמת הקול עד הסוף בעזרת מתנול.
    1. יש לנער היטב לקבלת ריכוז סופי של 10 מ"ג/מ"ל תמצית אבקת Huaihua. סנן דרך ממברנה מיקרופורית (PVDF) של 0.22 מיקרומטר. העבירו את המסנן לבקבוקון דגימה לבדיקה.
      הערה: במהלך הניסוי, נוזל הפסולת האורגנית וריאגנטים רעילים ומזיקים אחרים הקשורים סווגו ותויגו. וכל שבועיים, צוות המשרד לניהול נכסים וניסויים של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית מעביר אותו למוסד מוסמך למיחזור ועיבוד מאוחדים.

2. תנאי זיהוי עבור UPLC-Q-Orbitrap HRMS

  1. הגדרות פרמטרים של מערכת כרומטוגרפית
    1. השתמש בעמודת C18 (3.0 מ"מ × 100 מ"מ, 2.6 מיקרומטר). שמור על טמפרטורת העמודה על 30 מעלות צלזיוס. השתמש בשלב נייד A (0.1% חומצה פורמית במים) ושלב B נייד (אצטוניטריל).
    2. תכנת את השיפוע באופן הבא: 0-10 דקות, 5%-20% B; 10-25 דקות, 20%-50% B; 25-40 דקות, 50%-95% B; 40-45 דקות, 95% ב. הגדר את קצב הזרימה ל-0.3 מ"ל/דקה. הזרקו 5 מיקרוליטר מהדגימה.
  2. בצע מחקר ספקטרומטריית מסה עם הגדרות הפרמטרים הבאות.
    הערה: מקור יונים: יינון אלקטרו-ספריי מחומם (H-ESI); מצב סריקה: במצב רכישת DDA, רכוש יונים חיוביים ושליליים בו זמנית; במצב רכישת DIA, רכשו יונים חיוביים ושליליים בנפרד; פרמטרים של מקור יונים: מתח ריסוס +3.5 קילו וולט (יונים חיוביים)/-2.8 קילו וולט (יונים שליליים); מהירות זרימת אוויר נדן 40 ARB; מהירות זרימת אוויר עזר 10 ARB; נושבת מהירות גז 1 arb; טמפרטורת צינור העברת יונים: 320 מעלות צלזיוס; טמפרטורת אידוי: 350 מעלות צלזיוס; רמת RF של עדשת S: 55%.
    1. בנייה ואופטימיזציה של שיטת Data Dependent Acquisition (DDA)
      1. לסריקת MS מלאה (MS מלאה), בחר את ההגדרות הבאות:
        הערה: רזולוציה: 35,000; טווח סריקה: 100-1000 מ'/ז; יעד בקרת רווח אוטומטי (AGC): 3e6; זמן הזרקה מרבי (מקסימום IT): 100 אלפיות השנייה.
      2. עבור סריקת MS/MS תלוית נתונים (dd-MS2), בחר את ההגדרות הבאות:
        1. לבחירת יונים מולקולרית, שמור על סף העוצמה של 5e4. אל תכלול יונים לא טעונים ופסגות איזוטופים (אפשר אי הכללת איזוטופים). החל אי-הכללה דינאמית עם זמן אי-הכללה של 15 שניות וסובלנות מסה של ±10 עמודים לדקה כדי למנוע בחירה חוזרת של יונים בעוצמה גבוהה.
        2. עבור הגדרות פיצול, שמור על הפרטים הבאים: חלון בידוד: 1.0 m/z; שיטת פיצול: דיסוציאציה של התנגשות באנרגיה גבוהה (HCD); אנרגיית התנגשות מנורמלת (NCE): 20, 40, 60 וולט; רזולוציה משנית: 17,500; יעד AGC: 1e5; מקסימום IT: 50 אלפיות השנייה; אסטרטגיית TopN: בחר את 3 היונים המולקולריים המובילים עם העוצמה הגבוהה ביותר לפיצול בכל מחזור סריקה.
    2. בנייה ואופטימיזציה של שיטת DIA
      1. עבור סריקת MS מלאה, השתמש באותם פרמטרים כמו בשיטת DDA.
      2. עבור סריקת MS/MS שאינה תלויה בנתונים (DIA-MS/MS), קבע אסטרטגיית חלון בידוד משתנים מפולח.
      3. הגדר את טווח היעד כ-100-1000 m/z. חלקו חלונות על סמך התפלגות שפע יונים על פני כל טווח ה-m/z באמצעות ספקטרום DDA איכותי בתנאים כרומטוגרפיים אופטימליים. הגדר חלונות משתנים כדי לאזן את שפע היונים הכולל בין מקטעים, תוך הימנעות מרוויה או אי ספיקה.
      4. בצע אופטימיזציה ל-30 חלונות כדי לאזן את הכיסוי וזמן המחזור.
        הערה: הגדרות פיצול - שיטת פיצול: HCD; NCE: 20, 40, 60 וולט; רזולוציה: 17,500; יעד AGC: 1e6; מקסימום IT: אוטומטי; חלון משתנה מפולח: 30 מ'/ז'; ספירת לולאות: 30.
      5. קבע את רשימת ההכללה על סמך המשקל המולקולרי המרכזי של כל קטע חלון בידוד, למשל, m/z 115, 145, 175, 205 ... 925, 955, 985.
    3. תהליך רכישת נתונים
      1. שיווי משקל מערכת: אזן את העמודה הכרומטוגרפית עם הפאזה הניידת למשך 5 דקות לפחות.
      2. הפעלת מדגם לפני הניסוי: הכן את תמיסת בדיקת אבקת Huaihua בהתאם להליך ההכנה. הזרקו 5 דגימות רצופות. הערך את יציבות המערכת (זמן שמירה RSD < 2%, עוצמת זרם יונים כוללת RSD < 5%).
      3. ריצה ריקה: הזרקו את תמיסת המתנול הריקה לחיסור רקע.
      4. דגימת אבקת Huaihua פועלת: נתח כל דגימה על ידי הזרקה בסדר אקראי. הפעל את כל הדוגמאות באופן עצמאי עבור כל מצב סריקה (DDA, DIA).
    4. עיבוד נתונים
      1. זיהוי תרכובות
        1. ייבא את הנתונים הגולמיים שנרכשו על ידי ספקטרומטריית מסה לתוכנת Compound Discoverer. צור זרימת עבודה לזיהוי עבור רכיבים לא ידועים. בצע עיבוד שיא ויישור שיא. התאם את ספקטרום MS/MS שנמדד עם מסד הנתונים המקוון של mzCloud MS/MS ומסד הנתונים המקומי של mzVault MS/MS.
        2. החל את פרמטרי הסינון הבאים: סף אזור שיא 105, סטיית מסה ± 5 עמודים לדקה עבור יונים ראשוניים ומשניים כאחד, וציון תואם ≥80. השווה יונים מסוננים עם מידע מורכב ממאגרי מידע, תקני ייחוס וספרות רלוונטית לזיהוי רכיבים כימיים.
        3. פעולה ספציפית בתוכנת Compound Discoverer: צור תהליך ניתוח חדש ובחר את מזהה המוצר הטבעי/מוצר טבעי לא ידוע עם זרימת העבודה של Stats Online ו-Local Database Searchers .
        4. הבטח הכללה של צומת זיהוי תרכובות לזיהוי וחילוץ שיא. הוסף את מסדי הנתונים Search mzCloud ו- Search mzVault לזרימת העבודה.
        5. הוסף את קובץ הנתונים הגולמי והגדר פרמטרי סינון (סף שטח שיא 105, סטיית מסה ± 5 עמודים לדקה עבור יונים ראשוניים ומשניים כאחד). לחץ על הפעל כדי לבצע את הניתוח.
      2. ניתוח השוואתי של אינדיקטורים קשורים
        1. כמות זיהוי: השווה את המספר הכולל של תרכובות שזוהו במצבי יונים חיוביים ושליליים עבור מצבי DDA ו-DIA כאחד. בנה מפות התפלגות יונים עבור כל מצב.
        2. מחקר שחזור: השווה הבדלים בזמן שימור (RT) ושטח שיא (AA) של תרכובות מייצגות עם שפע גבוה (רוטין, קוורציטרין), שפע בינוני (ניאוהספרידין, נרינגין) ושפע נמוך (פסורלנול, חומצה טרימתיל-קולצ'יצינית) בין מצבי DDA ו-DIA (n = 5).
        3. איכות ספקטרום MS/MS: הערך את האיכות של ספקטרום יונים של שבר MS/MS של פולגון, תרכובת מפתח ב-Q-Marker, במצבי DDA ו-DIA.
        4. זיהוי רכיבים בשפע נמוך: השווה את הזיהוי של שברי MS/MS של תרכובות מייצגות בשפע נמוך (קרבון, אדנוזין) במצבי DDA ו-DIA5.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

זיהוי כולל של תרכובות

כרומטוגרמות זרם היונים הכוללות של אבקת Huaihua תחת שני מצבי הרכישה מוצגות באיור 2, עם הבדלים כלליים מינימליים. במצב רכישת DDA, זוהו בסך הכל 14,958 תרכובות במצב יונים חיובי ושלילי כאחד, בעוד ש-9,489 תרכובות זוהו במצב רכישת DIA (איור 3A). ביניהם, שיעור התרכובות עם ציוני התאמה גבוהים (≥80) במצב DIA היה גבוה מזה במצב DDA (DDA: 6.50%; D...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה, ראוי במיוחד להזכיר שמצאנו שבמצב רכישת DIA, הגדרת הערך של חלון המשתנה המפולח לא צריכה להיות גדולה מדי. ניסינו להגדיר אותו ל-300 מגה-הרץ ו-100 מגה-הרץ, אבל האפקט הספקטרלי הסופי היה גרוע. לאחר חקירות וניסיונות חוזרים ונשנים, בחרנו לבסוף בחלון הרכישה של 30mz כמתאים ביותר. לכן, להגדרת חלון הרכישה יש השפעה מכרעת על הצלחת הניסוי או כישלונו.

במקביל, נערך גם ניסוי מקדים על השפעת רכישה נפרדת ובו זמנית של יונים חיוביים ושליליים במצב DIA על תוצאות הניסוי. איכות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר הנוכחי נתמך כספית על ידי קרן הנוער של קרן מדעי הטבע של מחוז סצ'ואן (מס' 2025ZNSFSC1823); פרויקט שתילי החדשנות המדעית והטכנולוגית של מחוז סצ'ואן (MZGC20230055); ואוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית "חוקרי שינגלין" תוכנית קידום כישרונות דיסציפלינה לפרויקט מיוחד של כישרונות פעוטון (MPRC2022017).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אצטוניטרילתרמו פישר/טוהר כרומטוגרפי
תוכנת Compound Discoverer 3.3תרמו פישר/עיבוד נתוני ספקטרומטריית מסה וזיהוי תרכובות
פרוקטוס אורנטיסצ'ואן נייג'יאנג220709צמחי המרפא במרשם של אבקת Huaihua
עלי Platycladus orientalisשאנדונג ליניי240619צמחי המרפא במרשם של אבקת Huaihua
ספייק Schizonepetaג'יאנגסו טאיג'ואו240601צמחי המרפא במרשם של אבקת Huaihua
פרח סופורהסצ'ואן גואנגאן241017צמחי המרפא במרשם של אבקת Huaihua
מכונת ניקוי אולטרסאונדJietuo אולטרסאונד ניקוי ציוד ושות', בע"מ240HTמיצוי רכיבים של אבקת Huaihua
UPLC-Q-Orbitrap HRMSתרמו פישר/ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה
מיםחברת ווטסון/מים טהורים במיוחד

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wang, D., et al. Establishment of fingerprint and chemical composition study of the classic formula Huaihua San based on two mass spectrometry techniques. Chin Herb Med. 56 (10), 3499-3512 (2025).
  2. Stincone, P., et al. Evaluation of data-dependent MS/MS acquisition parameters for non-targeted metabolomics and molecular networking of environmental samples: Focus on the Q Exactive platform. Anal Chem. 95 (34), 12673-12682 (2023).
  3. Guo, J., Huan, T. Comparison of fullscan, datadependent, and dataindependent acquisition modes in liquid chromatographymass spectrometry based untargeted metabolomics. Anal Chem. 92 (12), 8072-8080 (2020).
  4. FernándezCosta, C., et al. Impact of the identification strategy on the reproducibility of the DDA and DIA results. J Proteome Res. 19 (8), 3153-3161 (2020).
  5. Wang, H. D., et al. A novel hybrid scan approach enabling the ionmobility separation and the alternate datadependent and dataindependent acquisitions (HDDIDDA): Its combination with offline two-dimensional liquid chromatography for comprehensively characterizing the multicomponents from Compound Danshen Dripping Pill. Anal Chim Acta. 1193, 339320(2022).
  6. El Boudlali, H., et al. High-resolution accuratemass spectrometry-baseduntargeted metabolomics: Reproducibility and detection power across data-dependent acquisition, dataindependent acquisition, and AcquireX. Comput Struct Biotechnol J. 27, 2412-2423 (2025).
  7. Guo, J., Shen, S., Xing, S., Huan, T. DaDIA: Hybridizing data-dependent and data-independent acquisition modes for generating high-quality metabolomic data. Anal Chem. 93 (4), 2669-2677 (2021).
  8. Wu, Y., Wang, Y. A comparative study of dataindependent acquisition and datadependent acquisition in liquid chromatographymass spectrometrybased untargeted metabolomics analysis of Panax genus sample. Anal Bioanal Chem. 417 (14), 3215-3228 (2025).
  9. Barkovits, K., et al. Reproducibility, specificity, and accuracy of relative quantification using spectral library-based data-independent acquisition. Mol Cell Proteomics. 19 (1), 181-197 (2020).
  10. Barbier Saint Hilaire, P., et al. Comparative evaluation of data-dependent and data-independent acquisition workflows implemented on an Orbitrap Fusion for untargeted metabolomics. Metabolites. 10 (4), 158(2020).
  11. Zheng, R. L., et al. Screening and extraction process optimization for potential α-glucosidase inhibitors from quinoa seeds. Food Med Homol. 1, 9420004(2024).
  12. Cao, Z. X., et al. Analysis and comparison of staminate flowers components in five Chinese walnut varieties. Food Med Homol. 1, 9420005(2024).
  13. Zhou, J. W., et al. Anti-virulence potential of carvone against Serratia marcescens. Food Med Homol. 1, 9420001(2024).
  14. Tabb, D. L., et al. Interrogating dataindependent acquisition LCMS/MS for affinity proteomics. J Proteins Proteom. 15 (3), 281-298 (2024).
  15. Wartmann, Y., Boxler, M. I., Kraemer, T., Steuer, A. E. Impact of three different peak picking software tools on the quality of untargeted metabolomics data. J Pharm Biomed Anal. 248, 116302(2024).
  16. Bilbao, A., et al. Processing strategies and software solutions for data-independent acquisition in mass spectrometry. Proteomics. 15 (56), 964-980 (2015).
  17. Guan, S., Taylor, P. P., Han, Z., Moran, M. F., Ma, B. Data-dependentindependent acquisition (DDIA) proteomics. J Proteome Res. 19 (8), 3230-3237 (2020).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DDAMS MS

מאמרים קשורים