הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
עירוי רציף של אנגיוטנסין II (Ang II) באמצעות משאבות אוסמוטיות הוא אחת השיטות הקלאסיות לבניית מודלים של בעלי חיים של פיברוזיס שריר הלב יתר לחץ דם. פרוטוקול זה ייעל באופן שיטתי את תהליך בניית המודל הזה ופירט את נקודות המפתח של השתלת משאבה אוסמוטית, מיקום והגדרת ריכוז Ang II.
עירוי רציף של אנגיוטנסין II (Ang II) באמצעות משאבות אוסמוטיות הוא גישה בשימוש נרחב לביסוס מודלים בבעלי חיים של פיברוזיס שריר הלב יתר לחץ דם. עם זאת, טכניקה זו מציגה מגבלות מסוימות בדוחות הנוכחיים, כגון חוסר היציבות של Ang II, מיקום משאבה לא מדויק והיעדר נוהל סטנדרטי. הדיווחים הנוכחיים על המתודולוגיה להקמה נותרו מוגבלים יחסית. פרוטוקול זה ייעל באופן שיטתי את הקמתם של מודלים של פיברוזיס יתר לחץ דם המושרה על ידי משאבת Ang II בעכברים, כולל הכנה סטנדרטית של תמיסת Ang II, כיול מינון, השתלה תת עורית מדויקת של משאבות אוסמוטיות ותקנים כמותיים לאינדיקטורים להערכת מודל. תוצאות הניסוי הראו כי Ang II גרם ליתר לחץ דם בשריר הלב בעכברים עם שיעורי הישרדות גבוהים. רמות לחץ הדם הסיסטולי (SBP) התייצבו על 160 מ"מ כספית לאחר שבעה ימים של השתלה תת עורית. עכברי המודל הפחיתו משמעותית את שברי הפליטה של החדר השמאלי והגדילו את הממדים הדיאסטוליים הסופיים של החדר השמאלי. בהשוואה לקבוצת ניתוחי הדמה, שקיעת הקולגן ברקמת שריר הלב האינטרסטיציאלית ובאזורים הפרי-וסקולריים עלתה. מחקר זה, המבוסס על גודל מדגם קטן (n = 6), אימת באופן ראשוני את ההיתכנות של הקמת מודל עכבר של פיברוזיס שריר הלב יתר לחץ דם באמצעות Ang II בשילוב עם משאבה אוסמוטית, והקים מערכת אימות פנוטיפ כמותית.
פיברוזיס שריר הלב (MF), תוצאה פתולוגית עיקרית של יתר לחץ דם, מאופיינת בתצהיר יתר של סיבי קולגן בתוך שריר הלב הפגוע או הדחוס. הוא מייצג את אחת הצורות החשובות ביותר של נזק לאיברי מטרה בתיווך יתר לחץ דם ותורם לתפקוד לקוי מתקדם של הלב 1,2. הקמת מודלים מתאימים לבעלי חיים חיונית לקידום המחקר המכניסטי ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשות לפיברוזיס בשריר הלב יתר לחץ דם. אנגיוטנסין II (Ang II), אפקטור מרכזי של מערכת רנין-אנגיוטנסין, ממלא תפקיד מרכזי בפתוגנזה של יתר לחץ דם3. אינדוקציה מבוססת Ang II הפכה אפוא לגישה בשימוש נרחב לביסוס מודלים של יתר לחץ דם בעכברים.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הליכי הניסוי בוצעו על פי ההנחיות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המכונים הלאומיים לבריאות, ופרוטוקולי הניסוי אושרו על ידי ועדת המחקר בבעלי חיים של האוניברסיטה הרפואית של סאות'ווסט (מספר אישור SWMU2020317).
1. הכנת תמיסת Ang II ומילוי המשאבה האוסמוטית
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
שנים עשר עכברים הושתלו תת עורית עם משאבות אוסמוטיות ושרדו. כל קבוצות המודל פיתחו יתר לחץ דם (n = 6). שבעה ימים לאחר ההשתלה, ה-SBP הממוצע בקבוצת המודל עלה על 160 מ"מ כספית (איור 1A). בימים 14, 21 ו-28, ה-SBP בקבוצת המודל נשאר באופן עקבי מעל 160 מ"מ כספית. לעומת זאת, קבוצת ניתוחי הדמה שמרה על רמות SBP תקינות (כ-90-110 מ"מ כספית) לאורך כל הניסוי ללא עלייה משמעותית.
עשרים ושמונה ימים לאחר השתלת המשאבה האוסמוטית, אקו לב הצביע על כך שבהשוואה לקבוצת ניתוחי הדמה, קבוצת המ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול זה ייעל את שלבי המפתח הכרוכים בעירוי מתמשך של Ang II כדי לגרום לפיברוזיס יתר לחץ דם בשריר הלב באמצעות משאבה אוסמוטית ופירט את ההיבטים הקריטיים, כגון מיקום ההשתלה של המשאבה האוסמוטית וקביעת ריכוז Ang II. המשאבה מדגם 2004 נבחרה למשך 4 שבועות, ומינון Ang II חושב על סמך קצב העירוי הנומינלי, תוך התחשבות בשונות מינימלית בין אצווה. יעילותו של מודל זה אושרה באמצעות ניטור SBP, אולטרסאונד דופלר בצבע הלב וצביעה של מאסון. בפרוטוקול זה, נעשה שימוש בעכברי C57BL/6J זכרים בני 8 שבועות כדי להבטי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל המחברים מצהירים כי לכתב היד הזה אין ניגודי אינטרסים.
עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82074378), פרויקט מחלקת המדע והטכנולוגיה של מחוז סצ'ואן (2022YFS0618), פרויקט משרד המדע והטכנולוגיה ועבודת הכישרונות של לוז'ו (2023JYJ029), פרויקט המעבדה המחוזית לרפואה סינית מסורתית גואנגדונג (HQCML-C-2024005), תוכנית המדע והטכנולוגיה של שנזן (JCYJ20230807094603007, JCYJ20240813152440051), קרן המחקר הרפואי של שנזן (A2403028), פרויקט האגודה הרפואית של סצ'ואן (Q2025014) והפרויקט של האוניברסיטה הרפואית הדרום-מערבית (2024ZKZ007, 2024ZKY073, 2023ZYYQ04). למממן לא היה תפקיד בתכנון המחקר, בניתוח הנתונים או בהחלטה לפרסם.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| אנג השני | תאגיד סיגמא-אלדריץ' | סיגמא, A9525 | |
| מכונת הרדמה לבעלי חיים | שנזן פרס מדעי החיים בע"מ | R530 | |
| מכונת הנשמה לבעלי חיים | שנזן פרס מדעי החיים בע"מ | R415 | |
| GraphPad Prism | GraphPad Software Inc. | גרסה 9.0 | |
| מד לחץ דם חכם ולא פולשני | ניפון סופט דרגון בע"מ | סופטרון, BP-98A | |
| מיקרוסקופ אור | חברת ייג'ינגטונג אופטיקת (שנגחאי) בע"מ | אולימפוס, SZ61TR | |
| תמיסת צביעה וערכת צביעה של Masson Tricolor | בייג'ינג סוליבאו טכנולוגיה בע"מ | סולארביו, G1340 | |
| עכברים | צ'נגדו דוסי אקספריימנטל אנימנטל אניימנטל בע"מ | C57BL/6J | |
| משאבות אוסמוטיות | תאגיד אלזה | אלזט, דגם 2004 | |
| מערכות הדמיית אולטרסאונד | תאגיד FUJIFILM VisualSonics, קנדה | FUJIFILM, Vevo 3100 |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מאמר זה פורסם
הסרטון יגיע בקרוב