מאמר מחקר

פרמקולוגיה של רשת ומחקר ניסיוני של תאים במבחנה לחקר הפוטנציאל הטיפולי של נגזרות תיאזולון ברבדומיוסרקומה

DOI:

10.3791/69464

⸱

14 בנובמבר 2025

 ,  ,  ,  , 
1Research Institute for Doping Control, Shanghai University of Sport, 2Drug and Food Anti-doping Laboratory, China Anti-Doping Agency

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מציגים מחקר החוקר באופן שיטתי את הפוטנציאל הטיפולי של נגזרות תיאזולון כנגד רבדומיוסרקומה בהתבסס על פרמקולוגיה של רשת וכימיה חישובית, עם תיקוף והערכה המבוצעים באמצעות ניסויים בתאי מבחנה .

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רבדומיוסרקומה (RD) הוא גידול ממאיר שמקורו ברבדומיובלסטים, המהווה איום רציני על בריאותם של ילדים ובני נוער. בהתבסס על הפוטנציאל של נגזרות תיאזולון במגוון פעילויות ביולוגיות, מחקר זה מתכוון לחקור באופן שיטתי את המנגנונים של נגזרות תיאזולון בטיפול ב-RD על ידי שילוב של פרמקולוגיה ברשת וניסויים בתאי מבחנה . באמצעות פרמקולוגיה של רשת, שולבו נתונים בעלי תפוקה גבוהה כדי לחזות את המטרות הפוטנציאליות של תיאזולון. בנוסף, תוכנת AutoDock Vina שימשה לחישוב אנרגיית הקישור של התרכובת ומולקולת חלבון המטרה, וחשפה את מסלול האיתות שלה הקשור ל-RD. לבסוף, ניסויים בתאי מבחנה אימתו עוד יותר את ההשפעה המדכאת של הגידול של התרכובות. פרמקולוגיה של רשת שימשה לניתוח המטרות של נגזרות תיאזולון בטיפול ב-RD, ו-172 גני מטרה הושגו לבסוף על ידי שילוב ומניעת כפילויות. חמש מטרות חלבון בעלות אנרגיית קישור נמוכה סוננו על ידי עגינה בין התרכובת למולקולת חלבון המטרה, PIK3CD, AKT1, GSK3B, HSP90AB1 ו-ITGB1. תוצאות ניסויי תרבית תאים במבחנה הראו כי לנגזרת ספציפית של תיאזולון הייתה השפעה מעכבת משמעותית על קווי תאי RD, מה שסיפק בסיס מדעי לגילוי מטרות חדשות ותרכובות יעילות לטיפול ב-RD. מחקר זה חשף את המנגנונים של נגזרות תיאזולון בטיפול ב-RD באמצעות שילוב של פרמקולוגיה ברשת וניסויים במבחנה וסיפק נקודת מבט חדשה לפיתוח תרופות עתידיות ואסטרטגיות טיפול.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

רבדומיוסרקומה (RD), סרקומה אגרסיבית ביותר של רקמות רכות בילדים המהווה איום משמעותי על בריאות הילדים, עם אפשרויות טיפוליות מוגבלות. מחקרים אפידמיולוגיים מצביעים על כך שבעוד ש-RD מציג שיעורי היארעות נמוכים יחסית, הממאירות הגבוהה והפרוגנוזה הגרועה שלו מהווים אתגרים קליניים משמעותיים. RD מסווג לארבעה תת-סוגים היסטולוגיים נפרדים: עוברי, מכתשית, תאי ציר/סקלרוזינג ופליאומורפי, כאשר רבדומיוסרקומה עוברית (ERMS) היא הצורה הנפוצה ביותר 1,2,3. האסטרטגיות הטיפוליות הנוכחיות לחולי ERMS שאובחנו לאחרונה בסיכון נמוך כוללות בעיקר כריתה כירורגית של גידולים מקומיים בשילוב עם תרופות כימותרפיות, כולל וינקריסטין, דקטינומיצין וציקלופוספאמיד. חולים בסיכון גבוה מקבלים בדרך כלל משטרי כימותרפיה מרובי גורמים מוגברים המשלבים איפוספמיד ואטופוזיד 4,5. בעוד שהגישה הרב-מודאלית המשלבת ניתוח, כימותרפיה והקרנות הוכיחה יעילות בהשגת שליטה מקומית בגידול ומיגור מיקרו-גרורות5, נותרו אתגרים משמעותיים. פרופילי הרעילות המשמעותיים של תרופות כימותרפיות קיימות, כולל רעילות עצבית ונזק בלתי הפיך לכליות ולשלפוחית השתן6, מהווים סיכונים מיוחדים למטופלים ילדים ומתבגרים. יתר על כן, ההטרוגניות המובנית של RD ונטייתו להישנות מדגישים את הצורך הקריטי בפיתוח תרופות יעילות וממוקדות יותר.

בהקשר זה, המחקר כאן מתמקד בסוג של נגזרות תיאזולון בעלות תכונות פרמקולוגיות מובהקות. נגזרות תיאזולון מציגות פעילויות אנטי דלקתיות, נוגדות חמצון ומווסתות אפופטוזיסמשמעותיות 8, מה שמדגים פעילות ביולוגית רחבה ופוטנציאל מבטיח לפיתוח תרופות 9,10. סימולציות עגינה מולקולרית על ידי Elgubbi et al. חשפו זיקות קשירה חזקות של נגזרות תיאזולון למטרות מפתח כגון אנהידראז קרבוניק אנושי IX (CA IX), אנזים המעורר היפוקסיה המתבטא יתר על המידה בגידולים אגרסיביים, מה שמרמז על מנגנון להשפעות האנטי-פרוליפרטיביות שלהם11. המחקר החישובי מבהיר את האינטראקציות המולקולריות בין נגזרות תיאזולון וחלבונים הקשורים לסרטן. בשנת 2024, El-Helw et al. דיווחו כי נגזרות תיאזולון מבוססות בנזוקינולין מציגות פעילות חזקה כנגד קווי תאים סרטניים, כאשר אנלוגים של תיאזולתיון ותיאזול מדגימים את היעילות הגבוהה ביותר12. מחקרים מכניסטיים 10,13 מצביעים על כך שתרכובות אלה משבשות את כדאיות תאי הגידול באמצעות מסלולים כפולים: (1) אינדוקציה של מתח חמצוני באמצעות אפנון מסלול נוגדי החמצון ו-(2) עיכוב ישיר של התפשטות. ממצאים אלה הדגישו את הפרופיל הפרמקולוגי הרחב של תיאזולונים, כולל תכונות אנטי דלקתיות ואנטי מיקרוביאליות. יש לציין כי תרכובות כגון פיוגליטזון14 וטרוגליטזון15 משמשות בעיקר לטיפול בסוכרת מסוג 216, בעוד שנגזרות 4-תיאזולון מציגות השפעות אנטי-פרוליפרטיביות כנגד תאי לוקמיה17 (איור 1). תרכובות אלו לא רק מדגימות הבטחה טיפולית משמעותית במחקרים קליניים, אלא גם מכוונות באופן ספציפי למסלולי איתות תאים מרובים, כולל עיכוב התפשטות תאי הגידול, השראת אפופטוזיס וויסות מחזור התא. המנגנונים האנטי-סרטניים של נגזרות תיאזולון כוללים מספר מסלולי איתות המעכבים ביעילות את צמיחת תאי הגידול והישרדותם על ידי אפנון מסלולים קריטיים, כגון מסלולי PI3K/Akt ו-NF-κB. יתר על כן, נגזרות תיאזולון הראו גם השפעות רגולטוריות על המיקרו-סביבה של הגידול, כולל עיכוב אנגיוגנזה ואפנון של תגובות חיסוניות18. הפעולות המכאניסטיות הרב-גוניות של נגזרות תיאזולון ממקמות אותם כמועמדים אידיאליים לפיתוח טיפולים חדשים בסרטן.

במחקר קודם, בנינו ביעילות נגזרות תיאזולון עם מרכזים כיראליים סמוכים באמצעות תגובת פרופרגילציה א-סימטרית דיסטלית מזורזת נחושת. באמצעות אסטרי פרופרגיל ותיאזולונים כסובסטרטים, התגובה הוזזה על ידי CuI בנוכחות ליגנד פירידין ביס(אוקסזולין) שהוחלף בפניל. על ידי אופטימיזציה של תנאי התגובה, השגנו יעילות גבוהה בסינתזה של נגזרות תיאזולון אלה19. פרמקולוגיה רשתית, כגישה לביולוגיה מערכתית, חושפת אינטראקציות מורכבות בין תרופות, מטרות ומסלולי מחלה, ומחוללת מהפכה בהבנה ובפיתוח של טיפולים למחלות מורכבות כמו סרטן20. מחקר זה נועד לחשוף את הערך הטיפולי הפוטנציאלי של נגזרות תיאזולון חדשות בטיפול ב-RD. באמצעות פרמקולוגיה משולבת של רשת וניסויים סלולריים, יזוהו תרכובות בעלות פעילות מעולה, שעשויות להפעיל השפעות טיפוליות מרובות מטרות על ידי ויסות מתואם של חמש מטרות ליבה, כולל PIK3CD ו-AKT1, ובכך להשפיע על מסלולי איתות מרכזיים כגון PI3K-Akt. סימולציות עגינה מולקולרית ודינמיקה מולקולרית ישמשו להדגמת מאפייני קשירה בין התרכובת לחלבוני המטרה. יתר על כן, יוקם מודל ראשוני של יחסי מבנה-פעילות, המספק התייחסות לאופטימיזציה מבנית לאחר מכן. עבודה זו לא רק מציעה מולקולות מועמדות חדשות לפיתוח תרופות של רבדומיוסרקומה, אלא גם מדגישה את התפקיד החיובי של אסטרטגיות רב-תחומיות בחקר מנגנונים טיפוליים מרובי מטרות של תרופות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כל הליכי פרמקולוגיה ברשת בוצעו בהתאם להנחיות לשיטות הערכת פרמקולוגיה ברשת21. זרימת העבודה המקיפה של פרמקולוגיה ברשת שאומצה במחקר זה מודגמת באופן סכמטי באיור 2.

סינתזה של נגזרות תיאזולון
נגזרות התיאזולון במחקר זה סונתזו בעבודה הקודמת שלנו19, באמצעות תגובת פרופרגילציה אסימטרית מרוחקת מזורזת נחושת. התגובה השתמשה ב-CuI כזרז ובליגנד Pybox כיראלי (L1) כליבת הסטריאו-קונטרול, בבסיס DIPEA ומערכת ממס מתנול ב-10 מעלות צלזיוס למשך 48 שעות, תוך השגת צימוד אננטיוסלקטיבי גבוה בין אסטרי פרופרגיל ותיאזולונים. מוצר היעד הושג עם יבול של עד 89%, יחס אננטיומרי (er) של 97.8:2.2 ויחס דיאסטריומרי (dr) של 17.8:1. למידע מפורט על שיטות הסינתזה של סדרת תרכובות זו, אנא עיין במחקרים קודמים19. שיטה זו הדגימה ישימות סובסטרט רחבה, המתאימה לאריל (תחליפי אורתו, מטא-, פרה-תחליפים), שרשראות אליפטיות ואסטרי פרופרגיל טבעתיים מאוחדים, כמו גם תיאזולונים תחליפיים שונים, עם תשואות שנעו בין 51% ל-98%. אסטרטגיה זו בונה ביעילות מסגרות תיאזולון רב-כיראליות בתהליך חד-שלבי בפעם הראשונה, ומספקת גישה סלקטיבית ופשוטה ביותר לסינתזה של מולקולות תרופות כיראליות עם יישומים פוטנציאליים משמעותיים בכימיה רפואית.

חיזוי פרמקולוגי ברשת
חיזוי יעד של נגזרת התיאזולון: הייצוגים המבניים של נגזרות תיאזולון נוצרו באמצעות תוכנת KingDraw, והקבצים המבניים המתאימים הומרו לאחר מכן למזהה SMILES באמצעות תוכנת Open Babel. כדי לחזות מטרות טיפוליות פוטנציאליות נגד RD, השתמשנו בגישה חישובית מקיפה תוך שימוש בשלושה מסדי נתונים נפרדים לחיזוי מטרות: SwissTargetPrediction (http://swisstargetprediction.ch/), TargetNet (http://targetnet.scbdd.com) ו-SuperPred (https://prediction.charite.de). עבור ניתוח TargetNet, יישמנו קריטריון סינון מחמיר על ידי בחירת גנים עם הסתברות > 0. במסד הנתונים של SuperPred, יישמנו פרמטרי בחירה קפדניים יותר, ושמרנו רק על אותם גנים המציגים דיוק מודל > 90% והסתברות > 60%, מה שמבטיח תחזיות יעד ברמת ביטחון גבוהה.

חיזוי מטרות RD: בהתבסס על מסד הנתונים GeneCards (https://www.genecards.org/) ומסד הנתונים OMIM (https://omim.org/), ערכנו חיפוש אחר Rhabdomyosarcoma. עבור הנתונים שמקורם במסד הנתונים של GeneCards, סיננו את התוצאות עם ציון גדול מ-20 כדי להשיג גנים הקשורים לרבדומיוסרקומה.

בנייה וניתוח של רשתות אינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI): המטרות הפוטנציאליות של נגזרות תיאזולון והגנים הקשורים ל-RD הצטלבו. היעדים הפוטנציאליים לטיפול ברבדומיוסרקומה עוברית אנושית על ידי נגזרות תיאזולון הועלו למסד הנתונים של STRING (https://www.string-db.org/) לניתוח יחסי PPI (אינטראקציה בין חלבון-חלבון) ברמת ביטחון גבוהה. רשת ה-PPI נבנתה בתוכנת Cytoscape (http://www.cytoscape.org/), ומטרות הליבה סוננו על סמך ערכי מעלות.

בניית רשת מסלולים של תרכובת-מחלה-מטרה: רשת מסלול-מטרה-תרופות יכולה לראות בבירור את המטרות של תרכובות ומחלות ואת המסלולים המעורבים במטרות אלה, כדי לזהות מטרות ומסלולי מפתח אפשריים לטיפול בתרכובות ל-RD. ראשית, בנה את טבלת הרשת וטבלת התכונות בגיליון האלקטרוני. התוכן של טבלת הרשת כולל בעיקר את ההתאמה בין התרכובת ליעד הליבה, את ההתאמה בין יעד הליבה למסלול המעורב ואת ההתאמה בין RD למסלול הראשי. התוכן של טבלת התכונות הוא בעיקר לסווג ולתת שם לכל המידע בטבלת הרשת. לאחר מכן, פתח את תוכנת Cytoscape, העלה את רשימת הרשת למיקום הטעינה, הגדר את נקודת ההתחלה, נקודת הסיום, העלה את טבלת התכונות ולבסוף שנה את צורת התמונה.

הערות פונקציונליות משולבות וניתוח פרמקולוגיה ברשת - העשרה של אונטולוגיה של גנים לבנייה (GO), אנציקלופדיה של גנים וגנומים של קיוטו (KEGG): ניתוח העשרה GO ו-KEGG של מטרות ליבה בוצע על ידי מסד הנתונים של DAVID (https://david.ncifcrf.gov/). על פי סדר ערך הזרחן מקטן לגדול, 10 הפריטים המובילים בתהליך ביולוגי (BP), רכיב תאי (CC) ותפקוד מולקולרי (MF) ב-GO נבחרו לניתוח, ו-20 הפריטים המובילים ב-KEGG נותחו, ומפות בועות GO ו-KEGG של מטרות ליבה נוצרו על סמך פלטפורמת המיקרו-ביו-מידע המקוונת.

עגינה מולקולרית: חלבוני מטרה מרכזיים נבחרו ממסד הנתונים PDB (https://www.rcsb.org/), והורדו הקבצים המבניים של מטרות הליבה. בתחילה, החלבונים יובשו באמצעות תוכנת PyMol, ולאחר מכן הפרדת הליגנדים והקולטנים. לאחר מכן, החלבונים עברו הידרוגנציה באמצעות תוכנת ADFRSuite, והתקבלו פרמטרי תיבת הרשת עבור תוכנת העגינה המולקולרית AutoDock. קבצי ה-pdbqt של נגזרות תיאזולידינון וחלבוני המטרה המרכזיים הוכנו באמצעות תוכנת AutoDock Vina. לאחר מכן נערכו סימולציות עגינה מולקולרית של נגזרות תיאזולון וחלבוני מטרה מרכזיים. לבסוף, מודלי העגינה המולקולרית הודגמו באמצעות תוכנת PyMol.

סימולציה של דינמיקה מולקולרית: קובץ ה-PDB הומר לפורמט GRO תואם GROMACS באמצעות שדה הכוח amber99sb-ildn ומודל המים TIP3P:
gmx pdb2gmx -f Pro.pdb -o Pro_temp_H.gro -ff amber99sb-ildn -water tip3p -ignh
נוספה תיבת גבול מחזורית מעוקבת עם מרחק של 1.2 ננומטר מהחלבון:
GMX EditConp -f Pro_temp_H.gro -o Pro_temp_H_box.gro -c -d 1.2 -bt cubic
הקופסה הייתה מלאה במולקולות מים TIP3P:
GMX Solvate -cp Pro_temp_H_box.gro -o Pro_temp_H_box_water.gro -p topol.top
המערכת נוטרלה על ידי הוספת יוני Na:
GMX Grompp -f ions.mdp -c Pro_temp_H_box_water.gro -p topol.top -ions.tpr
GMX genion -s ions.tpr -o Pro_temp_H_box_water_ion.gro -p topol.top -ניטרלי
בוצע מזעור אנרגטי:
GMX Grompp -f minim.mdp -c Pro_temp_H_box_water_ion.gro -p topol.top -o em.tpr
GMX MDRUN -V -deffnm em
שיווי משקל NVT בוצע:
GMX Grompp -f nvt.mdp -c em.gro -r em.gro -p topol.top -o nvt.tpr
GMX MDRUN -deffnm NVT -V
בוצע שיווי משקל ב-NPT:
GMX Grompp -f npt.mdp -c nvt.gro -r nvt.gro -t nvt.cpt -p topol.top -o npt.tpr
GMX MDRUN -deffnm NPT -V
סימולציית הדינמיקה המולקולרית של הייצור החלה:
GMX Grompp -f md.mdp -c npt.gro -t npt.cpt -p topol.top -o md_0_1.tpr
GMX MDRUN -deffnm md_0_1 -V

עם השלמת הסימולציות, נותחו המסלולים שהתקבלו באמצעות דינמיקה מולקולרית חזותית (VMD) ו-PyMOL, וניתוח האנרגיה החופשית המחייבת בין החלבונים לליגנדים של מולקולות קטנות בוצע באמצעות תוכנית g_mmpbsa.

הערכת השפעות תרופות על כדאיות תאי RD
תאי RD (תא רבדומיוסרקומה עוברי; STR Authenticated) בשלב הגידול הלוגריתמי עברו טריפסין ליצירת תרחיף תאים בריכוז של 1 x105 תאים/מ"ל. תרחיף זה נזרע לאחר מכן לתוך צלחת של 96 בארות בצפיפות של 1 x 104 תאים לבאר (100 מיקרוליטר לבאר) והודגרה ב-37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 כדי לאפשר הידבקות תאים. לאחר ההדבקה, המדיום הוחלף ב-100 מיקרוליטר של מדיום נטול סרום המכיל 1% FBS, והתאים הורעבו למשך 12 שעות. לאחר מכן, המדיום הוחלף ב-100 מיקרוליטר של המדיום המתאים המכיל ריכוזים משתנים של תרכובת הבדיקה. בארות בקרה טופלו במדיום המכיל ממס או במדיום רגיל, ונכללו בארות ריקות המכילות רק את המדיום המקביל ללא תאים. הלוחות הודגרו בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2 למשך 24 שעות (משך הזמן נקבע על ידי ניסויים ראשוניים כאופטימלי לצפייה בהשפעה המעכבת המקסימלית של סוג זה של תרכובות על תאי RD). כלומר, הזמן הנדרש לערך ה- OD של צפיפות התא להגיע לכ- 1.0.). לאחר מכן, 10 מיקרוליטר של תמיסת CCK-8 נוספו לכל באר, והצלחות הודגרו למשך 1-4 שעות נוספות. לבסוף, הספיגה ב-450 ננומטר נמדדה באמצעות קורא מיקרו-פלטות. התאים שטופלו בממס שימשו כקבוצת הביקורת, והבארות הריקות שימשו לתיקון בסיסי. כדאיות התא חושבה על סמך קריאות הספיגה.

שיעור הישרדות% = [(קבוצת ביקורת-ריקה)-(קבוצת ניסוי-ריק)]/(קבוצת ביקורת-ריקה) x 100%

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

במחקר זה, 13 נגזרות תיאזולון (תרכובות a-m; איור 3, איור 4) סונתזו בעבר19 נבחרו להערכת פעילותם המעכבת כנגד תאים סרטניים (איור 5). מבין תרכובות אלה, תרכובת m ב-100 מיקרומטר הראתה את שיעור העיכוב הגבוה ביותר כנגד תאי RD (תא רבדומיוסרקומה עוברי) (מאומת STR)22. ניסויים עוקבים שכללו ריכוזים משתנים (5 מיקרומטר, 10 מיקרומטר, 20 מיקרומטר, 50 מיקרומטר, 100 מיקרומטר) חשפו ערך IC50 של 53.14 מיקרומ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרמקולוגיה של רשת משמשת בדרך כלל לחיזוי וסינון מולקולות פעילות פוטנציאליות בתוך מרכיבי רפואה סינית מסורתית מורכבים, ולהבהרת המנגנונים הסינרגטיים של פעולות מרובות רכיבים, מרובות מטרות ומרובות מסלולים בפורמולות צמחים. במחקר זה, יישמנו גישה פרמקולוגיה של רשת כדי לחקור באופן שיטתי את המנגנון הפוטנציאלי של נגזרת התיאזולון המסונתזת החדשה שלנו כנגד RD על ידי בניית רשת תרכובת-מטרה-מסלול-מחלה. במחקר זה, הערכנו באופן שיטתי את ההשפעות המעכבות של 13 נגזרות תיאזולון על התפשטות תאי RD של רבדומיוסרקומה...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר המדווח בפרסום זה נתמך על ידי פרויקט מחקר של אוניברסיטת שנחאי לספורט (2025STD004).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ערכת בדיקה CCK-8Beyotime Biotechnology Co., Ltd.C0038ערכה המשמשת למדידת חיוניות והתרבות תאים בהתבסס על הפחתת מלח טטרזוליום מסיס במים ליצירת מוצר צבעוני.
ספסל נקיסוז'ואו אנטאי איירטק בע"מSW-CJ-1FDתחנת עבודה לזרימת אוויר למינרית המספקת סביבה סטרילית לטיפול בתרביות תאים וחומרים רגישים אחרים.
חממת CO2כוח ריפויHF90טמפרטורה, לחות וסביבה מבוקרת פחמן<פחמן>2 משמשת לתרבות תאים לשמירה על תנאי גדילה מיטביים.
רמת סוכר גבוהה DMEMציטיבהSH30022.01מדיום תרבית תאים עם ריכוז גלוקוז גבוה (4.5 גרם לליטר), המתאים למגוון סוגי תאים, כולל תאים יונקים שגדלים במהירות.
FBSיסן40130ES76תוסף נפוץ במדיות תרביות תאים, המספק גורמי גדילה, הורמונים וחומרים מזינים חיוניים להתרבות התאים.
מיקרוסקופ הפוךאולימפוסIX51מיקרוסקופ שתוכנן עם עדשת אובייקטיב מתחת לשלב, המאפשר תצפית על תרביות תאים בבקבוקים או לוחות מלמטה.
קורא מיקרופלטדיאטקDR-200Bמכשיר המשמש לזיהוי אירועים ביולוגיים, כימיים או פיזיקליים בדגימות מיקרופלטות על ידי מדידת ספיגה, פלואורסצנציה או זוהר.
PBSג'ינואו ביומדיקל טקנטג'י בע"מ.GNM20012תמיסת בופר משמשת לעיתים קרובות במחקר ביולוגי לשטיפת תאים, דילול תמיסות ושמירה על יציבות ה-pH.
RD (תא רבדומיוסרקומה עוברית) (STR מאומת)שנחאי פוהנג ביוטכנולוגיה בע"מ.FH0712קו התאים אומת באמצעות ניתוח חזרה טנדם קצר (STR), מחזיק ברקע גנטי מוגדר היטב וזהות תאית ברורה, ובכך מבטיח אמינות ושחזוריות של נתוני הניסוי.
RMPI בינוני מודיפייד (1640)ציטיבהSH30809.01מדיום תרבית תאים נפוץ שפותח במקור לתאי לויקוציטים אנושיים, משמש כיום לסוגי תאים יונקים שונים.
טריפסין-אדטהג'ינואו ביומדיקל טקנטג'י בע"מ.GNM25200תמיסה המשמשת לניתוק תאים דביקים ממשטחי התרבית על ידי עיכול חלבונים חוץ-תאיים וכילציה של יוני סידן.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, C., Dorado Garcia, H., Scheer, M., Henssen, A. G. Current and future treatment strategies for rhabdomyosarcoma. Front Oncol. 9, 1458(2019).
  2. Skapek, S. X., et al. Rhabdomyosarcoma. Nat Rev Dis Primers. 5 (1), 1(2019).
  3. Leiner, J., Le Loarer, F. The current landscape of rhabdomyosarcomas: An update. Virchows Archiv. 476 (1), 97-108 (2020).
  4. Hawkins, D. S., et al. Addition of vincristine and irinotecan to vincristine, dactinomycin, and cyclophosphamide does not improve outcome for intermediate-risk rhabdomyosarcoma: A report from the children's oncology group. J Clin Oncol. 36 (27), 2770-2777 (2018).
  5. Weigel, B. J., et al. Intensive multiagent therapy, including dose-compressed cycles of ifosfamide/etoposide and vincristine/doxorubicin/cyclophosphamide, irinotecan, and radiation, in patients with high-risk rhabdomyosarcoma: A report from the children's oncology group. J Clin Oncol. 34 (2), 117-122 (2016).
  6. Chisholm, J., et al. Frontline and relapsed rhabdomyosarcoma (far-rms) clinical trial: A report from the european paediatric soft tissue sarcoma study group (epssg). Cancers. 16 (5), 998(2024).
  7. Robinson, G. W., et al. Irreversible growth plate fusions in children with medulloblastoma treated with a targeted hedgehog pathway inhibitor. Oncotarget. 8 (41), 69295-69302 (2017).
  8. Finiuk, N., et al. 4-thiazolidinone derivative les-3833 effectively inhibits viability of human melanoma cells through activating apoptotic mechanisms. Croat Med J. 58 (2), 129-139 (2017).
  9. Petrou, A., Fesatidou, M., Geronikaki, A. Thiazole ring-a biologically active scaffold. Molecules. 26 (11), 3166(2021).
  10. Gupta, S., Jha, S., Rani, S., Arora, P., Kumar, S. Medicinal perspective of 2,4-thiazolidinediones derivatives: An insight into recent advancements. ChemistryOpen. 13 (11), e202400147(2024).
  11. Elgubbi, A. S., El-Helw, E. aE., Alzahrani, A. Y. A., Ramadan, S. K. Synthesis, computational chemical study, antiproliferative activity screening, and molecular docking of some thiophene-based oxadiazole, triazole, and thiazolidinone derivatives. RSC Adv. 14 (9), 5926-5940 (2024).
  12. El-Helw, E. aE., Asran, M., Azab, M. E., Helal, M. H., Ramadan, S. K. Synthesis, cytotoxic, and antioxidant activity of some benzoquinoline-based heterocycles. Polycyc Aromatic Comp. 44 (9), 5938-5950 (2024).
  13. Chawla, P. A., Wahan, S. K., Negi, M., Faruk, A., Chawla, V. Synthetic strategies and medicinal perspectives of 4-thiazolidinones: Recent developments and structure-activity relationship studies. J Heterocyc Chem. 60 (8), 1248-1286 (2023).
  14. Alam, F., et al. Efficacy and safety of pioglitazone monotherapy in type 2 diabetes mellitus: A systematic review and meta-analysis of randomised controlled trials. Sci Rep. 9 (1), 5389(2019).
  15. Moon, J. H., Hong, J. M., Park, S. Y. The antidiabetic drug troglitazone protects against prp (106-126)-induced neurotoxicity via the pparγ-autophagy pathway in neuronal cells. Mol Med Rep. 23 (6), 430(2021).
  16. Datar, P. A., Aher, S. B. Design and synthesis of novel thiazolidine-2, 4-diones as hypoglycemic agents. J Saudi Chem Soc. 20, S196-S201 (2016).
  17. Tiber, P. M., et al. Evaluation of hydrazide-hydrazone and 4-thiazolidinone derivatives of etodolac as potential anticancer agents in leukemia cells. Lett Drug Design Disc. 21 (12), 2396-2406 (2024).
  18. Tilekar, K., Shelke, O., Upadhyay, N., Lavecchia, A., Ramaa, C. S. Current status and future prospects of molecular hybrids with thiazolidinedione (tzd) scaffold in anticancer drug discovery. J Mol Str. 1250, 131767(2022).
  19. Wang, Z. -H., Wang, J. -R., Wei, Y. -Y., Liu, B., Lin, T. -Y. Copper-catalyzed remote asymmetric yne-allylic substitution: Construction of thiazolone derivatives with adjacent chiral centers. Org Chem Front. 11 (21), 6083-6088 (2024).
  20. Wang, X., Wang, Z. Y., Zheng, J. H., Li, S. Tcm network pharmacology: A new trend towards combining computational, experimental and clinical approaches. Chin J Nat Med. 19 (1), 1-11 (2021).
  21. Li, S. Network pharmacology evaluation method guidance - draft. World J Trad Chinese Med. 7 (1), 146-154 (2021).
  22. Hinson, A. R. P., et al. Human rhabdomyosarcoma cell lines for rhabdomyosarcoma research: Utility and pitfalls. Front Oncol. 3, 183(2013).
  23. Zhang, Q., et al. Clinical and genetic analysis of immunodeficiency-related diseases associated with pik3cd mutations. Pediat Investigat. 2 (4), 257(2019).
  24. Bae, S., et al. Akt is negatively regulated by the Mulan E3 ligase. Cell Res. 22 (5), 873-885 (2012).
  25. Padi, S. K., et al. Phosphorylation of depdc5, a component of the gator1 complex, releases inhibition of mtorc1 and promotes tumor growth. Proc Natl Acad Sci. 116 (41), 20505-20510 (2019).
  26. Duda, P., et al. Targeting gsk3 and associated signaling pathways involved in cancer. Cells. 9 (5), 1110(2020).
  27. Manduca, J. D., Thériault, R. K., Perreault, M. L. Glycogen synthase kinase-3: The missing link to aberrant circuit function in disorders of cognitive dysfunction. Pharmacol Res. , 157(2020).
  28. Lai, S., Wang, P., Gong, J., Zhang, S. New insights into the role of gsk-3β in the brain: From neurodegenerative disease to tumorigenesis. PeerJ. 11, e16635(2023).
  29. Haase, M., Fitze, G. Hsp90ab1: Helping the good and the bad. Gene. 575 (2), 171-186 (2016).
  30. Su, C., et al. Integrinβ-1 in disorders and cancers: Molecular mechanisms and therapeutic targets. Cell Comm Signal. 22 (1), 71(2024).
  31. Sun, L., Guo, S., Xie, Y., Yao, Y. The characteristics and the multiple functions of integrin β1 in human cancers. J Translat Med. 21 (1), 787(2023).
  32. Prota, A. E., et al. A new tubulin-binding site and pharmacophore for microtubule-destabilizing anticancer drugs. Proc Natl Acad Sci. 111 (38), 13817-13821 (2014).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Network PharmacologyThiazolone DerivativesRhabdomyosarcoma TreatmentIn Vitro ExperimentsTumor SuppressionProtein DockingTarget PredictionCell CultureSignaling PathwaysDrug Development

מאמרים קשורים