הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

תקנון מודל MCAO תוך-לומינלי של עכברוש: פרוטוקול מפורט עם אמצעי בקרת איכות

121 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/69573

⸱

7 באוגוסט 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Neurology, Xuanwu Hospital, Capital Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

פרוטוקול זה מדגים טכניקת חסימה מיטבית של 60 דקות של עורק מוחי אמצעי (MCAO) בעכברים. הפרוטוקול מאומת באמצעות גישות רב-מודליות, עם שיעור הצלחה של 87.5% עם תמותה מינימלית, ומניב תוצאות ניתנות לשחזור של אוטם והתנהגות למחקר שבץ.

תקציר

מודל חסימת העורק המוחי האמצעי (MCAO) של עכברוש נותר הסטנדרט הייחוס להבהרת פתופיזיולוגיה של שבץ איסכמי ולאימות טיפולים נוירופרוטקטיביים. עם זאת, סטיות כירורגיות עדינות יכולות לשנות באופן עמוק את נפח האוטם ואת תוצאות ההתנהגות. באמצעות מסגרת של "המחשה-אז-מערכת", בחנו מחדש כל שלב בהקמת המודל ובאימות שלו. בוצע תיעוד צילום מפורט של נקודות ציון כירורגיות מרכזיות ושלבים קריטיים כדי לתקן את הכיוון האנטומי ומיקום הסיבים. צביעת 2,3,5-טריפנילטטרזוליום כלוריד (TTC) שימשה למיפוי מדויק של נפח וטופולוגיה של אוטמים ב-24 שעות ו-72 שעות לאחר הרפוזיה. ליקויים נוירולוגיים דורגו באמצעות סולמות זיאה-לונגה, בדרסון, וסולמות גרסיה מותאמים. עשרים וארבעה זכרים של חולדות ספרג-דולי עברו MCAO חולף של 60 דקות; נפח האוטמת וציוני העצב הוערכו ב-24 שעות ו-72 שעות. כ-87.50% מהחיות השיגו חסימת זרימת דם מוחית מוצלחת (זיאה-לונגה ≥ 1 ואינקרט חד-משמעי שהוגדר על ידי TTC), עם תמותה כוללת של 12.50%, מה שמעיד על הדיוק הגבוה של המודל. פרוטוקול סטנדרטי זה מספק בסיס טכני משוכלל וניתן לשחזור למחקר פרה-קליני של שבץ, ומקל על עקביות בין-מעבדתית במחקרים החוקרים פתופיזיולוגיה של שבץ והתערבויות טיפוליות.

מבוא

שבץ הוא הגורם השני בשכיחותו למוות והשלישי בגודלו לנכות בעולם 1,2. שבץ משפיע באופן לא פרופורציונלי על מדינות בעלות הכנסה נמוכה ובינונית, כאשר הוא מתרחש, בממוצע, 15 שנים מוקדם יותר מאשר במדינות בעלות הכנסה גבוהה1. שני הסוגים העיקריים הם שבץ איסכמי (85%) ודימום תוך-מוחי (15%)3. שבץ איסכמי, האחראי לרוב המכריע של השבץ, נגרם מחסימת זרימת דם מוחית, המובילה למוות תאים ואוטם מוחי4. המפל האיסכמי כולל אירועים ביוכימיים מרובים, כולל תהליכים פרו-חמצניים משמעותיים 5,6.

למרות מאמצים פרה-קליניים וקליניים נרחבים, רק מספר קטן של טיפולים — ובעיקר תרומבליזה תוך-ורידית עם מפעיל פלזמינוגן רקמתי וכריתת תרומבקטומיה מכנית — הוכיחו את יעילותם, וטיפולים אלו מוגבלים על ידי חלונות טיפולים צרים וקריטריונים מחמירים לבחירת מטופלים. כתוצאה מכך, יש צורך דחוף להבהיר את המנגנונים התאיים והמולקולריים העומדים בבסיס פגיעה איסכמית, תיקון נוירו-וסקולרי והחלמה לאחר שבץ. מודל בעלי חיים שניתן לשכפול ורלוונטי קלינית הוא חיוני להשגת מטרה זו.

מודל חסימת העורק המוחי האמצעי (MCAO) משמש באופן נרחב לחקר שבץ איסכמי במכרסמים 7,8. שיטת החסימה התוך-לומינלית של חוט היא אחת הטכניקות הקלאסיות והנפוצות ביותר של MCAO9. טכניקה זו יכולה למודל סתירות קבועות וחולפות ללא צורך בכריתת גולגולת. טכניקה טרנספמורלית חדשה יותר המשתמשת בחוטים אנדווסקולריים הראתה פוטנציאל ליצירת MCAO חולף בעכברים, ומציעה תוצאות עקביות יותר10. מודל זה כולל חסימת העורק המוחי האמצעי, בדרך כלל באמצעות טכניקת חוט תוך-לומינלי11. MCAO גורם להיפופרפוזיה מוקדית במוח, המובילה לאיסכמיה ולפגיעה ברפרפוזיה12.

בעוד ש-MCAO בעל ערך לחקר פתופיזיולוגיה של שבץ וטיפולים אפשריים, הוא יכול לייצר נפחי נגעים משתנים. לכן, שיפורים במודל MCAO — כגון שיפור טכניקות רפורפוזיה, קביעת פרוטוקולי הפעלה סטנדרטיים ופיתוח קריטריונים מאוחדים להערכה — יכולים להפחית שונות במיקום ובנפח האוטמים, ובכך לשפר את השימושיות שלו במחקר שבץ איסכמי.

פרוטוקול זה דורש עקומת למידה של כ-10–15 ניתוחים כדילהשיג תוצאות עקביות. שיעורי ההצלחה עשויים להשתנות בהתאם לניסיון המפעיל ולזן העכברים14. המודל מתאים לחקר שבץ איסכמי חריף אך עשוי שלא לשחזר באופן מלא מחלות נלוות אנושיות כמו יתר לחץ דם או סוכרת. בהתאם לכך, ניסינו לפתח ולאמת בקפדנות פרוטוקול MCAO אופטימלי שמטרתו להפחית שונות ניסיונית באמצעות הליכים סטנדרטיים ואמצעי בקרת איכות מחמירים. ארבעה חידושים משלימים שולבו להשגת התקדמות כפולה בסטנדרטיזציה ובאמינות הנתונים: (1) הערכת אורך דו-נקודה בזמן — ציונים נוירולוגיים מסולמות Zea-Longa, Bederson ו-Modified Garcia הושגו במקביל לנפחי אוטם שמקורם ב-2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride (TTC) ב-24 שעות ו-72 שעות לאחר הפרפוזיה, ומגדירים את הקשר הזמני בין פתרון בצקת להחלמה פונקציונלית; (2) אימות צולב בקנה מידה משולש—ניקוד עיוור, חוקר כפול עם כיול משולש בקנה מידה משולב העלה משמעותית את הרגישות והדיוק של הערכת ההתנהגות; (3) חתך מהיר היפותרמי לאורך כל הקורס—נוהל תקני (SOP) של "חילוץ אמבט קרח בשנות ה-90 ואחריו חיתוך קורונלי חד-שלבי בקוטר 2 מ"מ בתבניות מקוררות מראש" הוקם כדי למזער אוטוליזה וטעויות אנוש, ולהבטיח מדידות נפחיות בדיוק גבוה; (4) מסגרת משולבת לבקרת איכות — SOP מקיף הכולל צום טרום-ניתוח, בקרת עומק הרדמה, ויסות חום לפני ניתוח ומניעת זיהום צולב, נבנתה כדי לספק הליך תקני MCAO שניתן לשחזור ולהעביר בקלות, ולהניח יסוד איתן לעקביות בין-מעבדתית ולהשוואה בין מחקרים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

הניסוי אושר ופיקח על ידי ועדת הניסויים המוסדיים בבעלי חיים ורווחת בעלי החיים הניסיוניים של אוניברסיטת קפיטל לרפואה. כל הפרוטוקולים עומדים במדריך NIH לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה (NIH Publ. 80-23, 1996 release), ונדרשים ציוד סטרילי וטכניקות אספטיות.

1. בחירת בעלי חיים

  1. השתמש בזכרים של חולדות ספרג-דולי (בגיל 6–8 שבועות, משקל 240–270 גרם) שהושגו מספק בעלי חיים במעבדה מוסמך (מספר רישיון. SCXK (בייג'ינג) 2021-0011) כדי להקים מודל של MCAO.
  2. לאחסן את בעלי החיים באופן קונבנציונלי עם אוכל ומים חופשיים; כל ההליכים פעלו לפי קוד האתיקה הבינלאומי.
  3. השתמשו בקריטריונים הבאים המבוססים על משקל גוף בעלי החיים לבחירת גודל החוטים כדי להבטיח סתימה עקבית:
    - 220–250 גרם: קוטר 0.33–0.35 מ"מ
    - 250–280 גרם: קוטר 0.35–0.38 מ"מ
    - 280–310 גרם: קוטר 0.38–0.40 מ"מ
    הערה: מפרטים אלו מתחשבים בעלייה בקוטר כלי הדם בהתאם לגיל ומפחיתים את שכיחות SAH או סתימה לא שלמה13.

2. גודל המדגם

  1. חשב גודל מדגם באמצעות תוכנת חישוב גודל מדגם. בהתבסס על נתונים ראשוניים המראים נפח אוטם צפוי של 35% ± 10% (ממוצע ± SD) בקבוצת MCAO לעומת 0% ±-2% בקבוצת SHAM, ההערכה של גודל ההשפעה (d) של כהן. למבחן Mann-Whitney U דו-זנבי (חלופה לא-פרמטרית למבחן t), עם α = 0.05 והספק (1-β) = 0.80, יש לחשב גודל מדגם מינימלי.
    הערה: גודל ההשפעה הוערך כ-3.5 וגודל המדגם המינימלי היה 6 בעלי חיים בכל קבוצה.
  2. כדי לקחת בחשבון תמותה צפויה (12.5%) ושיעור ההדרה (5–10%), כלול 24 חולדות בקבוצת MCAO ו-6 חולדות בקבוצת SHAM, מה שמספק הספק מספק (>0.90) לנקודת הקצה הראשית (נפח אוטם ב-24 שעות).

3. קריטריונים להכללה והחרגה

  1. כלול את בעלי החיים אם הם עומדים בקריטריונים הבאים: (1) זכרים של עכברי ספרג-דולי, 240–270 גרם, בני 6–8 שבועות; (2) היעדר ליקויים נוירולוגיים קיימים מראש (ציון נוירולוגי טרום-ניתוחי = 0); (3) השראה מוצלחת של הרדמה ללא סיבוכים.
  2. להוציא בעלי חיים מהניתוח אם הראהו: (1) דימום תת-עכבישי (SAH) הנראה בנתיחה; (2) מוות מוקדם (<24 שעות לאחר ריפרפוזיה) שאינו קשור להתערבות ניסויית; (3) כישלון בהסתרה (ציון נוירולוגי = 0 והיעדר פרק מוגדר על ידי ה-TICKET); (4) כשל כירורגי טכני (למשל, קרע ב-CCA).
    הערה: קריטריונים אלו נקבעו מראש לפני תחילת המחקר כדי למזער הטיית בחירה.
  3. מדיניות החלפת בעלי חיים: החלפת בעלי חיים בלבד שהוחרגו עקב כשל טכני בניתוח או מוות תוך כירורגי כדי לשמור על עוצמה סטטיסטית. אל תחליפו בעלי חיים במידול לא מוצלח (כישלון בהסתרה), אלא דווחו עליהם כחלק מחישוב שיעור ההצלחה כדי למנוע הפחתה מלאכותית של שונות.

4. הכנות טרום-ניתוחיות

  1. הכינו כלים עם אוטוקלב, חוט סטרילי ושדה מכוסה.
  2. אין צורך בצום שגרתי; בעת הצורך, הגביל את משך הצום ל-2–4 שעות. השרה הרדמה עם איזופלורן (3–4%) ושמרו על 1.5–2% ב-30–40% O₂ במהלך ההליך. אשר את עומק ההרדמה על ידי אובדן הרפלקס המתקין וצביטת האצבע.
  3. שמרו על טמפרטורת גוף של 37 ± 0.5 מעלות צלזיוס באמצעות כרית חימום מבוקרת משוב עם ניטור טמפרטורת רקטל.
  4. תגלח את הצוואר והקרקפת, ואז תנקה את האזור עם פובידון-יוד, ואחר כך 70% אתנול.
  5. מתן בופרנורפין (0.05 מ"ג/ק"ג, תת-עורי) 30 דקות לפני הניתוח וכל 12 שעות לאחר הניתוח למשך 48 שעות, או מלוקסיקאם (1 מ"ג/ק"ג, תת-עורי) פעם ביום במשך 3 ימיםו-16. הערכת כאב על ידי מעקב אחר התנהגות טיפוח, יציבה ופעילות ספונטנית; לספק הקלה נוספת אם סימני אי הנוחות נמשכים.

5. סתירת ה-MCA

  1. הניחו את העכברוש בשכיבה גבית עם הראש מושך בעדינות כדי לחשוף את הצוואר התחתון.
  2. בצע חתך צוואר הרחם במרכז (1.5–2.0 ס"מ) באמצעות מספריים של איריס.
  3. מפריד באופן ישיר את שרירי הסטרנומסטויד והאומוהיואיד באמצעות מלקחיים מעוקלים כדי לחשוף את הפיצול של עורק הקרוטיד השמאלי.
  4. לחבר את עורק הקרוטיד החיצוני (ECA) מרחוק עם תפר משי קבוע 4-0 ומקרוב עם קשורה זמנית. צור חתך קטן בין שתי הקשורות של ECA באמצעות מיקרוסיסרים.
  5. חסימו זמנית את ה-CCA ועורק התרדמה הפנימי (ICA) באמצעות מהדקים מיקרווסקולריים (לחץ 60 גרם).
  6. הכנס מונופילמנט מצופה סיליקון 4-0 (קוטר 0.35–0.40 מ"מ) דרך חתך ECA. קדם אותו רטרוגרדית ל-CCA, ואז הפנה אותו ל-ICA מעבר לפיצול ה-CCA.
    הערה: ודאו שהחוט נכנס ל-ICA לכיוון בסיס הגולגולת, ולא לעורק הפטריגופלטין (PPA) שמתפצל לרוחב. אם נתקלים בהתנגדות ב-<10 מ"מ, משוך את החוט, סובב את ראש החיה 30° לכיוון הצד הנגדי, והתקדם מחדש כדי להפנות אותו מעבר למקור ה-PPA.
  7. קדימו את החוט 18–20 מ"מ מהפיצול של ה-CCA עד שהתנגדות קלה מצביעה על חסימה של מקור ה-MCA. אמת את העומק באמצעות קו ההתייחסות המסומן מראש על החוט (ממוקם במרחק 2 מ"מ קרוב לפקק הסיליקון), הנמדד עם קליפר מנקודת החדרת הגדם של ECA. שחרר את מהדק ה-CCA ברגע שהפילמנט במקומו.

6. רפרפוזיה

  1. לאחר 60 דקות של חסימה, פותחים מחדש את החתך ומרפים את קשירת ECA הזמני.
  2. משכו בעדינות את החוט עד שהקצה שלו עובר את גזע ה-ECA, ובכך מחזירים את זרימת הדם. הניחו מיד רצועת קשורה קבועה פרוקסימלית לגדם כדי למנוע דימום גב. סגור את הפצע בשכבות.
  3. העבר את העכבר לכלוב התאוששות מחומם למעקב רציף.

7. ניתוח מזויף

  1. הכינו את בעל החיים בהתאם לאותו הליך שתואר לעיל עבור MCAO (צום, הרדמה, שליטה בטמפרטורה, כיסוי סטרילי).
  2. בצע חתך צוואר הרחם וחשיפה לביפרקציית CCA כפי שציינתי קודם.
  3. נתח וחשוף את הכלי. אל תכניס את הפילמנט.
  4. שהעורקים יישארו פטנטים; אין לגרום לאיסכמיה מוחית.
  5. סגור את החתך בשכבות אחרי 10 דקות חשיפה. העבר את החיה לכלוב התאוששות מחומם למעקב.

8. ציונים נוירולוגיים לאחר ניתוח

  1. הערכה ב-24 שעות ו-72 שעות לאחר הרפרפוזיה, מיד לפני הקרבה למדידת נפח האוטם.
  2. להרגיל את החיה בחדר שקט, 25 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות.
  3. שני חוקרים עצמאיים עיוורים להקצאת קבוצות. שכל חוקר ירשום ציונים בדפי נפרד ללא התייעצות; כל הבדל בין המערכים ≥נקודה אחת מעורר הערכה מחודשת.
  4. סולמות (לפי סדר ההעברה): ביצוע ציונים של Zea-Longa17 (טבלה 1), Bederson18 (טבלה 2), ו-Modified Garcia19 (טבלה 3), בהתאם לפרוטוקולים העדכניים ביותר שפורסמו לקריטריונים עקביים.
  5. השתמשו בממוצע של שני הצופים לניתוח סטטיסטי. החריגו נתונים מכל בעל חיים אם ממוצע הציונים שונים ב->10% והחליפו בנבדק חדש.

9. מדידת נפח אוטם המוח

  1. ב-24 שעות ו-72 שעות לאחר הרפרפוזיה, הרדימו עמוק חולדות עם 5% איזופלורן. ודאו הרדמה עמוקה על ידי אובדן רפלקס ישרוני ותגובת צביטת האצבעות, יחד עם נשימה יציבה, לפני הפעלה.
  2. הסר במהירות את המוח בתוך 90 שניות מאישור הרדמה עמוקה, שטוף עם PBS קר כקרח, וחתוך לפרוסות קורונליות של 2 מ"מ באמצעות מטריצת מוח עכברוש מקוררת. במהלך החיתוך, יש להקפיד על אמצעי הזהירות הבאים
    1. שמרו על כל ההליך על הקרח בטמפרטורה של 0–4 מעלות צלזיוס; קצור את המוח בתוך 90 שניות ומקם אותו שטוח במטריצה מקוררת מראש.
    2. השתמשו בלהב חד כדי לבצע חיתוכים חדים ומדויקים לחתכים קורונליים מדויקים בקוטר 2 מ"מ, ואסוף כל פרוסה בסדר רוסטרו-קאודלי ל-PBS קר כקרח.
    3. נקה מיד את המטריצה והלהב עם 75% אתנול בין בעלי החיים כדי למנוע זיהום צולב.
  3. לאחר חימום מוקדם של 2% ניסיון להריון ל-37 מעלות צלזיוס, טבלו את הפרוסות במלואן ודגרו בחושך למשך 20 דקות, תוך סיבוב עדין כל 5 דקות ב-20 דקות.
  4. עצרו מיד את התגובה על ידי שטיפה שלוש פעמים עם PBS של 4 מעלות צלזיוס. לאחר מכן מקבע 4% פרפורמלדהיד בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה.
  5. ב-300 dpi, תצלמו את שני הצדדים של כל פרוסה פעם אחת.
    1. השתמש בתאורה קבועה על רקע לבן כדי להסיר צללים והשתקפויות.
    2. הנח פרוסות שטוחות ללא חפיפה, וכללו פס סולם ותווית זיהוי בכל פריים. החזק את המצלמה בניצב לחלקים ושמור על אורך המוקד ואיזון הלבן קבועים לאורך כל הדרך.
  6. כמת נפח האימפרקט באמצעות ImageJ.
    1. ייבא את תמונת 300 dpi (פורמט RGB) והמיר לגווני אפור של 8 ביט (תמונה > Type > 8 ביט).
    2. הפעילו את הסף האוטומטי של Otsu (תמונה > כוונן > סף אוטומטי > בחר Otsu) כדי להפריד את האוטם (לבן) מהרקמה הקיימת (אדום).
    3. השתמש בכלי הבחירה החופשית כדי לתאר את גבול חצי הכדור האיפסילטרלי.
    4. מדוד את השטח (ניתוח > מדידה) והקלט את ספירת הפיקסלים.
    5. חשב נפח האימפרקט: Σ (שטח האימפרקט × עובי הפרוסה [2 מ"מ]) × (נפח חצי הכדור הנגדי/נפח חצי הכדור השני), המובע כאחוז מהחצי הכדור הנגדי.

10. ניתוח סטטיסטי

  1. הצג את הנתונים כסטיית תקן ממוצעת ± (SD) או כטווח חציוני [טווח בין-רבעוני] לפי הצורך.
  2. בצע השוואות בין קבוצות באמצעות מבחן הסטודנט הלא מזווג או מבחן Mann-Whitney U עבור נתונים שאינם מבוזרים נורמלית.
  3. קבע מובהקות סטטיסטית ל-P < 0.05. בצע את כל הניתוחים באמצעות תוכנת ניתוח סטטיסטית מתאימה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

בעלי החיים הוקצו באקראי לקבוצות הישרדות של 24 שעות (n = 10) או 72 שעות (n = 10) לאחר ריפרפוזיה עבור צביעת TTC סופית. עוד 4 חולדות עברו MCAO אך מתו לפני נקודת הסיום המתוכננת (שיעור תמותה 12.5%). קבוצת SHAM כללה n = 6. לכן, מספר בעלי החיים הכולל היה 30 (24 MCAO + 6 SHAM).

חולדות עברו MCAO של 60 דקות כדי לגרום לאיסכמיה מוחית (איור 1). הרפרפוזיה החלה על ידי הסרת הסיב התוך-לומינלי ושחרור הליגטורה הפרוקסימלית ב-ECA. מתוך 24 חולדות MCAO,...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

חשוב להבהיר שהמטרה העיקרית של מחקר זה הייתה תקינה מתודולוגית ולא גילוי ביולוגי. פיתוח פרוטוקול MCAO סטנדרטי חיוני להפחתת שונות בין-מעבדתית ולשיפור השחזוריות במחקר שבץ איסכמי. פרוטוקול זה משפר את השקיפות הפרוצדורלית באמצעות אמצעי בקרת איכות מחמירים ומתמודד עם ליקויים טכניים נפוצים במידול MCAO, כולל הכנסת פילמנט סטנדרטית, ויסות טמפרטורה ועיבוד היסטולוגי.

בעוד שהירידה הנצפית בנפח האונם מ-24 שעות ל-72 שעות וההתאוששות הנוירולוגית החלקית מייצגות תופעות פתופיזיולוגיו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי קרן המדע הטבעי של בייג'ינג (מס' 7232269) ופרויקט קרן הפיתוח למדע וטכנולוגיה לרפואה הסינית המסורתית של בייג'ינג (מס' JJ-2023-93).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
2% TTC staining solutionBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.T817025 g/bottle, ≥98 % purity
4% PFABeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.P1110500 mL ready-to-use
Absorbable sutureShandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd.VCP345H5-0 Vicryl
Adson forcepsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-110101×2 teeth, 12 cm
Dumont curved forcepsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-1105211 cm length, 0.05 mm fine tip
Feedback heating padShenzhen Reward Life Science & Technology Co., Ltd.6900137 ± 0.3 °C closed loop
ImageJNational Institutes of Healthversion 1.53k
Iris scissorsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-14060Curved tip, 10 cm
Micro-vascular clipsShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.JD-160101.5 cm curved clip
Non-absorbable silkShanghai Pudong Jin-Huan Medical Products Co., Ltd.S-23046-0 Black silk thread
PASS software NCSS, LLC, Kaysville, UT, USAversion 15.0 Sample size calculation software 
Rat brain matrixShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.686102 mm coronal slots
Silicone-coated nylon filamentShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.60-12500.35 mm OD, 30 mm silicone tip, EO-sterile
Small-animal anesthesia machineShenzhen Ruiwode Lift Technology Co.,Ltd.R500IEIsoflurane vaporizer, induction chamber & mask included
SPSSIBM Corp., Armonk, NY, USAversion 26.0 Statistical analysis software
Vannas micro-scissorsShanghai Jinzhong Surgical Instrument Co., Ltd.JD-14058Curved tip, 8 cm

מקורות

  1. Walter, J., Oyere, O., Mayowa, O., Sonal, S. Stroke: a global response is needed. Bull World Health Organ. 94 (9), 1816-1834 (2016).
  2. Mira, K., Andreas, L. Global burden of stroke. Semin Neurol. 38 (2), 1649-2211 (2018).
  3. Stephen, J. M., David, J. W. Stroke: causes and clinical features. Medicine (Abingdon). 48 (9), 1561-1566 (2020).
  4. Narayanaswamy, V. Ischemic stroke: new insights from risk factors, mechanisms and outcomes. J Cardiovasc Dev Dis. 10 (12), 472(2023).
  5. Chao, L., Tao, S., Chen, J. Recent advances in nanomedicines for the treatment of ischemic stroke. Acta Pharm Sin B. 11 (7), 1767-1788 (2021).
  6. Marcelo, F., Leonardo, E. V., Brigitta, B., Elisabetta, P., Luciano, S. The nrf2 pathway in ischemic stroke: a review. Molecules. 26 (16), 5001(2021).
  7. Melissa, T. -L., Claire, L. G. A review of experimental models of focal cerebral ischemia focusing on the middle cerebral artery occlusion model. F1000Res. 10, 51752(2021).
  8. Lang, Z., et al. Animal models of ischemic stroke with different forms of middle cerebral artery occlusion. Brain Sci. 13 (7), 1007(2023).
  9. Rosalia, C., Rosanna, D. P., Emanuela, E., Salvatore, C. Middle cerebral artery occlusion by an intraluminal suture method. Methods Mol Biol. 1727, 1393-1401 (2018).
  10. Afshin, A. D., et al. Transfemoral approach to induce transient middle cerebral artery occlusion in rats: the use of commercially available endovascular wires. Neurocrit Care. 32 (2), 575-585 (2020).
  11. Seunghoon, L., et al. Middle cerebral artery occlusion methods in rat versus mouse models of transient focal cerebral ischemic stroke. Neural Regen Res. 9 (7), 1315-1318 (2014).
  12. Kitti, T., Nipon, C., Siripron, C. C. The effects of hyperbaric oxygen therapy on the brain with middle cerebral artery occlusion. J Cell Physiol. 236 (3), 21677-21694 (2021).
  13. Gary, P. M., et al. A comparative study of variables influencing ischemic injury in the longa and koizumi methods of intraluminal filament middle cerebral artery occlusion in mice. PLoS One. 11 (2), e0148503(2016).
  14. J, S., et al. Strain differences in intraluminal thread model of middle cerebral artery occlusion in rats. Physiol Res. 68 (1), 933937-933948 (2019).
  15. Chang, L., Xiaoqing, W., Yueru, Z., Songli, Y., Xiangshi, T. Study on the efficacy and pharmacological mechanism of innate immune sting pathway regulators in the treatment of ischemic brain injury. Pharmaceuticals. 18 (12), 1775(2025).
  16. Pei-Kang, L., et al. Neuroprotective effects of low-dose G-CSF plus meloxicam in a rat model of anterior ischemic optic neuropathy. Sci Rep. 10 (1), 66977(2020).
  17. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 1184-1191 (1989).
  18. Bederson, J. B., et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination. Stroke. 17 (3), 1472-1476 (1986).
  19. David, W. H., et al. Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 30 (8), 1412-1431 (2010).
  20. Kudret, T., Raghu, V., Kurt, A. S., Robert, J. D. Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice. Neurosurgery. 56 (1 Suppl), 196-200 (2005).
  21. Ilya, L. G., et al. MRI guiding of the middle cerebral artery occlusion in rats aimed to improve stroke modeling. Transl Stroke Res. 9 (4), 12417-12425 (2018).
  22. Nathalie, P. D. S., et al. The IMPROVE guidelines (Ischaemia models: procedural refinements of in vivo experiments). J Cereb Blood Flow Metab. 37 (11), 17703488-17703517 (2017).
  23. Chintamani, N. J., Swatantra, K. J., Puvvada, S. R. M. An optimized triphenyltetrazolium chloride method for identification of cerebral infarcts. Brain Res Protoc. 13 (1), 1011-1017 (2004).
  24. Huaxin, S., Lihong, D., Xuan, L., Zhong, Y., Wei, Y. A modified transcranial middle cerebral artery occlusion model to study stroke outcomes in aged mice. J Vis Exp. (195), e65345(2023).
  25. Maria, S., et al. Modified middle cerebral artery occlusion model provides detailed intraoperative cerebral blood flow registration and improves neurobehavioral evaluation. J Neurosci Methods. 358, 109179(2021).
  26. Clemens, J. S. Ischemic stroke: experimental models and reality. Acta Neuropathol. 133 (2), 245-261 (2017).
  27. Bharti, M., Louise, D. M. Sexual dimorphism in ischemic stroke: lessons from the laboratory. Womens Health (Lond). 7 (3), 2222-2239 (2011).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

234234JoVE
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.