מאמר שיטה

פלטפורמת נקודת טיפול לגילוי PCR טרימולטני של זיהומי צ'יקונגוניה, דנגי וזיקה

DOI:

10.3791/69580

⸱

30 בדצמבר 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1the Fourth People's Hospital of Nanning, 2The Fangchenggang Hospital of the People's Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region - The First People's Hospital of Fangchenggang City, 3Department of Clinical Laboratory, Guangdong Provincial People's Hospital (Guangdong Academy of Medical Sciences), Southern Medical University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאמר זה ממליץ על מערכת משולבת אוטומטית לחלוטין המשתמשת בטכנולוגיית PCR משולשת לאבחון בו-זמנית זיהומים משותפים של צ'יקונגוניה, דנגי ונגיף זיקה באמצעות דגימה אחת, ובכך למקסם את יעילות הבדיקות במעבדות קליניות ורפואה ראשונית.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קדחת צ'יקונגוניה (CHIKF), מחלה ויראלית חריפה המועברת על ידי יתושים והתגלתה לראשונה בטנזניה בשנת 1952, הראתה התפשטות לסירוגין בסין, עם התפרצויות מקומיות גוברות. עד יולי 2025, מחוז גואנגדונג, שהוא כיום מרכז ההתפרצות, דיווח על 4,824 מקרים מקומיים, כולל כמעט 3,000 נדבקים חדשים בשבוע אחד בלבד. העלייה המהירה הזו יוצרת צורך דחוף בטכנולוגיות אבחון מתקדמות. כלים כאלה קריטיים לתמיכה במאמצי הבלימה בקו החזית. אנו מציעים פתרון לגילוי מהיר וסימולטני של זיהומי דנגי (DENV), צ'יקונגוניה (CHIKV) ונגיף זיקה (ZIKV) כדי לשפר את יכולות המניעה והשליטה המוקדמת של מגפות. גישה זו כוללת פיתוח פרוטוקולי בדיקה מותאמים אישית לנקודות ביקורת בגבול ולמתקני בריאות ראשוניים.

שיטות אבחון מסורתיות ל-CHIKV ו-DENV לעיתים קרובות חסרות רגישות/ספציפיות במקרים של זיהום משותף. מכיוון ש-CHIKV, DENV ו-ZIKV חולקים דפוסי העברה ותסמינים דומים, ניטור סימולטני הוא קריטי. פרוטוקול זה מציג שיטת qPCR טריפלקס באמצעות גשושי TaqMan לזיהוי ארבו-וירוסים אלה בצינור יחיד בתוך 90 דקות. בהשוואה לתרבות ויראליות ובדיקות סרולוגיות, שיטה זו משפרת את היעילות על ידי זיהוי זיהומים פעילים וזיהומים משותפים בספציפיות גבוהה, תוך פישוט תהליך העבודה וביטול דרישות ציוד מיוחד.

אימות עם דגימות קליניות והערכת איכות חיצונית (EQA) אישר התאמה מלאה עם בדיקות סינגלפלקס סטנדרטיות זהב. שיטה זו משמשת ככלי יעיל למעקב אחר מחלות חום באזורים אנדמיים, במיוחד בסביבות עם משאבים מוגבלים שבהם שליטה מהירה בהתפרצויות היא קריטית.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

קדחת צ'יקונגוניה (CHIKF) היא מחלה ארבו-ויראלית נפוצה יותר ומועברת בעיקר על ידי וקטורי היתושים Aedes aegypti ו-Aedes albopictus. המחלה מאופיינת בהתפרצויות חוזרות באזורים טרופיים, והיא מתבטאת קלינית כמחלה חריפה עם חום חריפה, שלרוב מלווה בכאבי מפרקים חמורים ודלקת מפרקים מתמשכת1. נכון ל-26 ביולי, סך המקרים המאומתים במעבדה בעיר פושאן הגיע ל-4,824, כאשר 87.2% מהמקרים הללו התרחשו במחוז שונדה. ריכוז גאוגרפי בולט זה מטיל נטל משמעותי על תשתית הבריאות הציבורית האזורית ומוביל לעלויות בריאות משמעותיות, יחד עם אתגרים מקרו-כלכליים רחביםיותר.

בהקשר של ההתפשטות ההולכת וגדלה של וירוסי CHIKV, DENV ו-ZIKV, מתודולוגיות האבחון הנוכחיות מתמודדות עם שלוש מגבלות עיקריות. ראשית, בדיקות סרולוגיות אינן מסוגלות להבחין בזיהומים חריפים בשל ההתמדה הממושכת של נוגדנים לאחר ניקוי ויראלי1. שנית, טכניקות תרבית ויראליות מציגות שיעורי רגישות נמוכים ודורשות מספר ימים, מה שמקשה על קבלת החלטות קליניות בזמן. שלישית, אף שבדיקות PCR כמותיות מראות ספציפיות גבוהה (מעל 95%), הן אינן יכולות לזהות זיהומים משותפים בתוך תגובה אחת, מה שמהווה חיסרון משמעותי לאור שיעור ההדבקה המשותף המדווח של 12.8%בהודו. ניטור פילוגנטי מצביע על שינוי פרדיגמה. שושלת ECSA, שהייתה דומיננטית במהלך מגפת 2019-2022 בהודו, רכשה מוטציות מתכנסות בחלבוני המעטפת שלה: E1-A226V (מגביר זיהום יתושים) ו-E2-K252Q (קשור להתחמקות חיסונית). מוטציות אלו הובילו לגנוטיפ עם אלימות גבוהה יותר מתועדת, כפי שדווח במחקרי מעקב אחרונים מקרלה ומהאראשטרה3. במקביל, סין מתמודדת עם אתגרים מהייבוא של הגנוטיפ ECSA, כפי שתועד בהתפרצות יונאן, וגנוטיפים נוספים, כאשר דווח על העברה אוטוכטונית במספר מחוזות, כולל יונאן4.

מציאויות אלו יוצרות צרכים דחופים ומוגבלים במשאבים ל-(i) אבחון מבדל למרות חפיפות קליניות5, (ii) בדיקות אבחון שמבטלות את המורכבות של הכלים הנדרשת בדרך כלל ב-PCR כמותי בזמן אמת קונבנציונלי (qPCR)6, ו-(iii) אימות מקיף של טכנולוגיות חדשות בנקודת טיפול, כולל RT-LAMP ושיטות מבוססות CRISPR5. כדי להתמודד עם אתגרי האבחון הללו, אנו מציעים מבחן PCR משולש מהיר המשתמש במערכת משולבת אוטומטית לחלוטין, המאפשרת זיהוי סימולטני של CHIKV, DENV ו-ZIKV בתגובה אחת. אימתנו את ביצועי מבחן ה-qPCR הטריפלקס שלנו באמצעות השוואה ישירה עם מבחני סינגלפלקס5 הקיימים, ששימשו כסטנדרט ייחוס. הסעיפים הבאים מפרטים את ההליכים הן למבחן טריפלקס והן לבדיקות סינגלפלקס ייחוס. הניתוח ההשוואתי של התוצאות משתי השיטות מוצג בסעיף תוצאות מייצגות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה עומד בהנחיות האתיות שנקבעו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העממי המחוזי של גואנגדונג, האוניברסיטה הרפואית הדרומית, גואנגג'ואו, סין (מספר אישור: KY2025-510-01). מידע מפורט על החומרים בהם נעשה שימוש במחקר זה (מגבים, כימיקלים, ציוד ותוכנה) ניתן למצוא בטבלת החומרים.

1. בחירת משתתפים

  1. בחרו משתתפים בגילאי 18 עד 60.
  2. בחרו משתתפים שהגיעו עם מחלת חום חריפה (טסטוסטרון בית השחי ≥ 38 מעלות צלזיוס) בתוך 12 ימים מהופעת התסמינים, בנוסף לפריחה, דלקת מפרקים או לימפאדנופתיה צווארית, ונסיעות אחרונות לאזורים אנדמיים לצ'יקונגוניה; או אנשים ללא תסמינים עם היסטוריית מסע זהה.
  3. החריג: שימוש באנטימיקרוביאליים/אנטי-ויראליים בתוך 7 ימים או מחלה חום הנובעת מאומת מ-HIV או ממאירויות.

2. איסוף ועיבוד דגימות

  1. בדוק שהאריזה החיצונית של קופסת הדגימה אינה פגועה ואינה פגה תוקף, ואז הסר את החומרים הפנימיים.
  2. מקם את הנבדק עם היד מושטת. זהה את הווריד הקוביטלי הממוצע, הניחו חוסם דם וחיטוי את אתר הווריד עם מטוש של 70% אלכוהול.
  3. אסוף 1~3 מ"ל דם מהווריד האנטקוביטלי של הנבדק באמצעות צינור איסוף דם ללא נוגדי קרישה.
  4. הפוך בעדינות את הצינור 5-8 פעמים ותן לו להיקרש בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות.
  5. צנטריפוגה את דגימת הדם בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, 1000 x גרם בצנטריפוגה, למשך 10 דקות. דגימת הסרום שנאספה לאחר הצנטריפוגה ניתנת לבדיקה מיידית.
  6. בזהירות החלק את הסרום הסופרנטנטי לצינורות מיקרוצנטריפוגות סטריליות. השתמשו בסרום מיד לבדיקה, או שמרו אליקווטים בטמפרטורה של -80°C עד לניתוח נוסף של חומצות גרעין פתוגן באמצעות qPCR.

3. זיהוי אוטומטי של QPCR ב-Triplex של CHIKV, DENV ו-ZIKV

  1. ריאגנט והכנת צינורות
    1. לשלוף את כל החומרים הנדרשים מהאחסון ולהפשיר אותם בטמפרטורת החדר.
    2. בדקו ויזואלית כל צינור זיהוי TD אטום לאיתור נזק או כשל באיטום. זרוק כל שפופרת שנפגעה.
    3. לזמן קצר מערבולת את בופר חילוץ חומצות הגרעין של TD למשך 5 שניות כדי להבטיח הומוגניות.
    4. פזר אספטית 500 מיקרוליטר של בופר ההומוגני לצינור תגובת חילוץ TD (המכילה חרוזים מגנטיים סגולים מיובשים בהקפאה).
    5. סחרור את התערובת בעוצמה במשך 30 שניות עד שכל הרכיבים מומסים לחלוטין והחרוזים תלויים לחלוטין.
    6. העבר את כל התמיסה המחודשת לצינור זיהוי TD מסומן מראש.
  2. טעינת דגימות
    1. פיפטה 200 מיקרוליטר של סרום שקוף, ללא המוליזציה וללא ליפמי לתוך צינור גילוי ה-TD המוכן.
    2. אטום את הצינור היטב והפוך אותו עשר פעמים כדי לערבב בצורה אחידה.
      הערה: במהלך ההיפוך, אפשר לשכבת הפרפין לצוף לזמן קצר בתוך הצינור. זה חלק רגיל מהתהליך.
  3. הפעלת מכשירים ואיסוף נתונים
    1. הכנס את צינורות האיתור האטומים לחריצים המיועדים של האנלייזר.
    2. בממשק המסך המגע, הזן את פרטי הזיהוי של הדגימה.
    3. לחץ עלS tart Detection כדי להפעיל את תהליך העבודה האוטומטי והסגור לחלוטין.
      הערה: המערכת תבצע אוטומטית סריקת ברקוד, חילוץ חומצות גרעין באמצעות לכידת חרוזים מגנטיים, והגברה של PCR פלואורסצנטי ללא התערבות נוספת של המשתמש. התוכנית הסטנדרטית כוללת שלב דנאטורציה ב-95 מעלות צלזיוס למשך 3 דקות, ואחריו 40 מחזורי הגברה.
  4. פרשנות התוצאה
    1. בסיום הריצה, צפו בתוצאות ההגברה של כל שלושת המטרות (CHIKV, DENV, ZIKV) ובבקרה הפנימית על אותו מסך.
    2. רשם את הקריאה שנוצרת אוטומטית, "חיובי", "שלילי" או "לא תקין", עבור כל פתוגן יעד בערוץ הפלואורסצנציה המתאים לו.
      הערה: התוכנה הפנימית של המערכת משתמשת בסף מחזור (Ct) של 37.0 לפרשנות אוטומטית. אין צורך בניתוח נתונים ידני.

4. התייחסות לבדיקות qPCR של Singleplex להשוואת שיטות

  1. הכנת תגובות לחילוץ חומצות גרעין
    1. תוציא את לוח ה-96 בארות הארוזה מראש מהערכה. טפחו בעדינות את לוח 96 הבארות כדי לגרום לחומרים והחרוזים המגנטיים להתרכז בתחתית לוח 96 הבארות. קרעו בזהירות את סרט האטימה של נייר האלומיניום, תוך הימנעות מרעידות של לוח 96 בארות כדי למנוע התזת נוזלים.
    2. בעמודות 1 ו-7 של לוח עם 96 בארות, מוסיפים תחילה 20 מיקרו-ליטר של פרוטאנאז K, ואחריהם 200~300 מיקרוליטר של הדגימה להוצאה.
    3. חילוץ אוטומטי מחומצה גרעינית (שיטה מבוססת חרוזים מגנטיים)
      1. לוחות 96 בארות ארוזים מראש (עם דגימות) ממוקמים בחריצים המתאימים של מערכת חילוץ חומצות גרעין אוטומטית.
      2. תהליך חילוץ חומצות הגרעין הוא כדלקמן: ספיג את חרוזי המגנטיות הקשורים לחומצה גרעינית באמצעות מוט מגנטי בתוך תא המעבדה. העבר את קומפלקס החרוזים לחור התגובה הבא המיועד. הפעל את מכשיר הערבוב כדי לערבב היטב את הנוזל עם החרוזים המגנטיים באמצעות ערבוב מהיר וחוזר. אפשר למחלץ חומצות גרעין אוטומטית לבצע את השלבים הבאים באופן אוטומטי: i) פירוק תאים: 10 דקות ב-25 °C. ii) ספיחת חומצות גרעין: 15 דקות ב-70 °C, עם ביצוע ספיחה מגנטית 3 פעמים. iii) שטיפה: ערבוב במשך 2 דקות (חוזר על עצמו 3 פעמים), ואחריו ספיחה מגנטית פעמיים (15 שניות כל אחת). iv) שחרור: לבצע פעמיים (5 דקות כל אחת), כאשר הספיחה המגנטית מתבצעת 3 פעמים. בסופו של דבר, יש להשיג חומצות גרעין טוהרות.
    4. לצורך גילוי מיידי, יש לשאוב ישירות את האלואט המכיל חומצות גרעין מהעמודות 6 ו-12. לאחסון ארוך טווח, העבר את דגימות חומצות הגרעין שנותרו לטמפרטורה של -20°C.
  2. הכנת תגובות הגברה
    הערה: לתגובה של PCR סינגלפלקס, יש להכין שלושה צינורות PCR נפרדים באמצעות שלושה אנזימים שונים ושלוש תערובות תגובה מתאימות. השלים את הכנת המגיב בשלושה שלבים נפרדים. מכיוון ששלבי ההכנה דומים, נדגים רק את שלבי ההכנה למגיב גילוי CHIKV להלן.
    1. הסר את תמיסת תגובת הגברת חומצות גרעין ותמיסת תגובת CHIKV (פריימרים/גשושים ייעודיים ל-CHIKV) מהערכה. לאחר הפשרה, מניחים אותם בסביבה של 22~25 מעלות צלזיוס, ערבבו היטב בניעור חזק, ואז מבצעים צנטריפוגה קצרה (1000 x גרם, 15 שניות, 22~25 מעלות צלזיוס).
    2. חשב את מספר התגובות הכולל כ-N + 2 (כאשר N = מספר דגימות בדיקה, +2 = בקרת איכות שלילית אחת ואחת חיובית). הכינו את תערובת המאסטר בצינור מיקרוצנטריפוגה בגודל מתאים על ידי שילוב הרכיבים הבאים לכל תגובה: תמיסת תגובה להגברת חומצות גרעין בנפח 17 מיקרוליטר (המכילה בופר, dNTPs, DNA פולימראז, אנזים UDG), 3 מיקרוליטר תמיסת תגובת CHIKV (המכילה פריימרים, גלאים לגנים מטרה של CHIKV ו-IC). בצע Vortex ל-Master Mix היטב כדי להבטיח ערבוב מלא. צנטריפוגה קצרה של הצינור בעוצמה של 10,000 x גרם למשך 15 שניות בטמפרטורת החדר (22~25 מעלות צלזיוס) כדי לאסוף את התמיסה בתחתית. יש לחלק 20 מיקרו-ליטר מ-Master Mix לכל צינור תגובה PCR.
    3. הוסף דגימות חומצה גרעין ובקרת איכות: לצינורות התגובה PCR שהוכנו לעיל (20 מיקרוליטר), הוסף בהתאמה 5 מיקרוליטר של חומצה גרעין מדגימות שנבדקו, בקרה חיובית ובקרה שלילית, ולהשיג נפח סופי של 25 מיקרוליטר לכל צינור; סגרו היטב את הצינורות ובצעו צנטריפוגה מיידית (1000 x g, 15 שניות, 22 ~25 מעלות צלזיוס) ואז הכניסו את הצינורות למכשיר ה-PCR.
  3. הגברת PCR
    1. הגדר את תוכנית הרכיבה כך: קדם-דהנאטורציה: 50°C למשך 15 דקות, ואז 95°C למשך 15 דקות (שני השלבים יחד מהווים מחזור אחד); שני השלבים הבאים ל-40 מחזורים: דנטורציה של 94°C למשך 15 שניות ואנילינג בטמפרטורה של 55°C למשך 45 שניות.
    2. הגדר את פרמטרי זיהוי אות הפלואורסצנציה כדלקמן: תיוג פלואורסצנטי FAM של גני CHIKV; תיוג פלואורסצנטי של גן IC של VIC משמש כבקרה פנימית של הערכה. איסוף נתונים בטמפרטורה של 55 מעלות צלזיוס. עם סיום התגובה, יש לוודא שהנתונים נשמרים לניתוח עתידי.
    3. ניתוח נתונים באמצעות תוכנה ייעודית ל-qPCR
      1. מידע דגימה: בדיאגרמת פריסת לוחות הבאר של התוכנה, יש לסמן את סוגי הדגימות (למשל, בקרה חיובית, בקרה שלילית, דגימה לא ידועה, גן ייחוס פנימי וכו') בהתאם למיקומי העומס של הדגימה.
      2. הנחת צינורות התגובה: פתח את מכסה מודול החימום של המכשיר, הנח את פלטת ה-PCR/צינורות האטומים בפנים באופן קבוע, ודא שהם מתאימים במדויק למודול החימום, וסגר את מכסה המודול היטב (כדי למנוע חוסר אחידות בטמפרטורה)
      3. התחלת התגובה: לאחר אימות שההגדרות בתוכנה נכונות, לחץ על Start Run והקלט את מזהה הניסוי לעתיד.
      4. עצירת הריצה והסרת צינורות: לאחר סיום התוכנית, המתן עד שטמפרטורת מודול החימום תרד מתחת ל-50 מעלות צלזיוס. לאחר מכן, פתח את המכסה והסר בזהירות את פלטת ה-PCR או השפופרות. המשך בניתוח במורד הזרם או אחסון דגימות לפי הצורך.
      5. ניתוח נתונים לפני המשך הניתוח, אשר כי: i) עקומות הגברה לכל הדגימות והבקרה הפנימית הן אופייניות בצורת S; ii) סף הפלואורסצנציה נקבע בתוך הפאזה האקספוננציאלית, ומניב ערכי Ct ≤-38 מחזורים (CV < 5%); iii) תוצאות הבקרה תקפות, ומצביעות על כך שאין זיהום. אם תנאי כלשהו לא מתקיים או אם דגימה מראה הגברה חריגת (למשל, עקומה לא טיפוסית או Ct בטווח קריטי), יש לבדוק מחדש את כל האצווה או את הדגימה הספציפית בהתאם.
      6. עבד את הנתונים הגולמיים עם התוכנה כדי לקבוע ערכי Ct, באמצעות סף שנבחר אוטומטית; דגימה נחשבת חיובית אם Ct < 38 ועקומת ההגברה שלה מציגה צורה סיגמואידלית.

5. בטיחות ביולוגית והשלכת פסולת

  1. העבר את כל החומרים למיכל ביולוגי מסוכן, עמיד לניקובים, וניקוי על ידי אוטוקלב לפני ההשלכה הסופית דרך מערכת הפסולת הרפואית המוסדית. העבר מיד את החומרים הללו למיכל ביוסיכון עמיד לדליפות ועמיד לניקובים, המסומן כפסולת בסיכון גבוה. בהתאם להנחיות המוסדיות, יש לנקות את כל הפסולת המכילות מוצרים מוגברים על ידי אוטוקלבינג (למשל, 121 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות) כדי לנטרל פתוגנים ולפרק חומצות גרעין. לבסוף, להשליך את הפסולת המעוקרת דרך מערכת ניהול פסולת רפואית המיועדת.
    הערה: בצע את כל השלבים בהתאם לנהלי בטיחות ביולוגית רמה 2 (BSL-2), תוך שימוש בציוד מגן אישי מתאים כדי למזער סיכוני חשיפה.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כדי לאמת את היציבות והדיוק של מערכת הזיהוי המשולשת PCR, בחרנו חמש דגימות מייצגות קלינית מהמעבדה הפנימית שלנו ועשר דגימות עיוורות חיצוניות של EQA לאימות. חמשת הדגימות הקליניות המייצגות כוללות גם מקרים שליליים וגם חיוביים (S1-S5), כולל מדגמים חיוביים ל-CHIKV ו-DENV, שנבחרו כדי להוכיח את היישום הקליני של הבדיקה ולתמוך באימות פנימי של ביצועי הבדיקה (טבלה 1). פאנל הדגימה העיוור של EQA לשנת 2025 עבור פתוגנים מתפתחים המועברים על ידי יתושים כלל 10 דגימות פלזמה מושבתות (DZC2511-2520). אלה הכילו ריכוזים ושילובים ש...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

CHIKV הוא וירוס RNA חד-גדילי בעל חוש חיובי, המסווג בסוג אלפא-וירוס ממשפחת טוגאווירידיים7. ההתחממות הגלובלית המואצת, הסחר הבינלאומי המועצם ורשתות התיירות המתרחבות הגבירו יחד את הסיכון לחשיפה אנושית לאיומי ארבו-וירוס8. בעשור האחרון, ההתפתחות המהירה של האבחון המולקולרי שינתה באופן יסודי את נוף ניהול המחלות הזיהומיות. מבין הטכנולוגיות הללו, qPCR זכה לפרסום מיוחד במעבדות קליניות ברחבי סין בזכות השינוי המהיר, רגישותו האנליטית יוצאת הדופן, דיוק כמ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מומן על ידי קרן המחקר הרפואי של גואנגדונג (A2025034). למממנים לא היה תפקיד בעיצוב המחקר, באיסוף וניתוח הנתונים, בהחלטה לפרסם או בהכנת כתב היד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
מחלץ חומצות גרעין אוטומטידאןסמארט 32לצורך חילוץ DNA
בקמן X-12בקמןALA04H01עבור  צנטריפוגציה בדם 
BSC-1500IIA2-XביובייסSEDA 20143222263ארון בטיחות ביולוגית
צנטריפוגה אלקטרוניתWEALTECצנטריפוגה את הנוזל שנותר מדופן הצינור
אנלייזר PCR רפואי אוטומטי לחלוטיןBioustar‌  UP0102הגברה כמותית פלואורסצנטית של PCR
ערכת זיהוי חומצות גרעין לווירוס צ'יקונגוניה (שיטת PCR-פלואורסצנטי פלואורסצנטי)DAAN 20250804זיהוי של  גנים של וירוס צ'יקונגוניה
ערכת זיהוי חומצות גרעין לנגיף דנגי (שיטת PCR-פלואורסצנטית)DAAN 202504003זיהוי של  גנים של וירוס דנגי
ערכת זיהוי חומצות גרעין לנגיף דנגי, וירוס זיקה ווירוס צ'יקונגוניה (שיטת PCR-גלאי פלואורסצנטי)Bioustar‌  20250724זיהוי של  וירוס דנגי, וירוס הזיקה וגנים של וירוס צ'יקונגוניה
ערכת זיהוי חומצות גרעין לנגיף הזיקה (שיטת PCR-פלואורסצנט)DAAN 202508041גילוי נגיף הזיקה   גנים
ערכת חילוץ חומצות גרעיןדאןהפקת חומצה גרעינית
מערכת ניתוח PCR רפואית אוטומטית מלאה של SLANהונגשיניתוח נתונים
מכונת PCR בזמן אמת SLAN-96SהונגשיSLAN-96Sהגברה כמותית פלואורסצנטית של PCR
מקפיאים בטמפרטורות אולטרה-נמוכות (DW-YL450)מלינגSEDA 20172220091-20 & דרגה C לאחסון מגבים
וורטקס-5קיילין-בללערבוב מגיב

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chikungunya epidemiology update - June 2025. , World Health Organization. https://www.who.int/publications/m/item/chikungunya-epidemiology-update-june-2025 (2025).
  2. Li, Y., Chen, H., Wang, J., Zhang, X., Liu, B. Notes from the field: An outbreak of chikungunya fever in China - Foshan City, Guangdong Province, China, July 2025. Curr Med Sci. 7, 1064-1065 (2025).
  3. Naren Babu, N., et al. Clinical and molecular epidemiology of chikungunya outbreaks during 2019-2022 in India. Sci Rep. 15, 27280(2025).
  4. Liu, L. B., et al. Epidemiological and clinical characteristics of the chikungunya outbreak in Ruili City, Yunnan Province, China. J Med Virol. 94, 499-506 (2021).
  5. Cardona-Trujillo, J. D., Ocampo-Cárdenas, T., Tabares-Villa, F. A., Zuluaga-Vélez, A., Sepúlveda-Arias, J. C. Recent molecular techniques for the diagnosis of Zika and chikungunya infections: A systematic review. Heliyon. 8, e10225(2022).
  6. Hauner, A., et al. Technical validation of a multiplex real-time PCR for combined detection of Rift Valley fever, chikungunya, Zika and dengue viruses. J Virol Methods. 337, 115174(2025).
  7. Burt, F. J., et al. Chikungunya virus: An update on the biology and pathogenesis of this emerging pathogen. Lancet Infect Dis. 17, e107-e117 (2017).
  8. de Souza, W. M., et al. Chikungunya: A decade of burden in the Americas. Lancet Reg Health Am. 30, 100673(2024).
  9. Laurent, P., et al. Development of a sensitive real-time reverse transcriptase PCR assay with an internal control to detect and quantify chikungunya virus. Clin Chem. 53, 1408-1414 (2007).
  10. Pongsiri, P., Praianantathavorn, K., Theamboonlers, A., Payungporn, S., Poovorawan, Y. Multiplex real-time RT-PCR for detecting chikungunya virus and dengue virus. J Trop Med. 5, 342-346 (2012).
  11. Santiago, G. A., et al. Performance of the Trioplex real-time RT-PCR assay for detection of Zika, dengue, and chikungunya viruses. Nat Commun. 9, 1391(2018).
  12. Kanti, D., et al. Simultaneous detection of Zika, chikungunya and dengue viruses by a multiplex real-time RT-PCR assay. J Clin Virol. 83, 66-71 (2016).
  13. Waggoner, J. J., et al. Single-reaction multiplex reverse transcription PCR for detection of Zika, chikungunya, and dengue viruses. Emerg Infect Dis. 22 (7), 1295-1297 (2016).
  14. Souza, J. V. C., et al. Viral metagenomics for the identification of emerging infections in clinical samples with inconclusive dengue, Zika, and chikungunya viral amplification. Viruses. 14, 1933(2022).
  15. Berrueta, M., et al. Safety, immunogenicity, and effectiveness of chikungunya vaccines in pregnant persons, children, and adolescents: A protocol for a living systematic review and meta-analysis. Reprod Health. 22, 56(2025).
  16. Lura, T., et al. A validated triplex RT-qPCR protocol to simultaneously detect chikungunya, dengue and Zika viruses in mosquitoes. J Vector Borne Dis. 59, 198-205 (2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Triplex PCRPoint Of Care TestingChikungunya DetectionDengue DetectionZika Virus DetectionTaqMan ProbesArbovirus CoinfectionqPCR MethodFebrile Illness MonitoringRapid Virus Detection
הסרטון יגיע בקרוב

מאמרים קשורים