$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
מחקר זה כלל 30 מטופלים עם טיפול חלקית בשיניים שפנו לטיפול פרוסטודונטי במרפאת הפרוטזות הדנטליות, המרכז הקליני לרפואת שיניים של קוסובו, בין ספטמבר 2021 למרץ 2022. אישור אתי התקבל מוועדת הביקורת המוסדית (אישור מס' 378/19), וכל ההליכים עמדו בעקרונות הצהרת הלסינקי. הסכמה מדעת בכתב התקבלה מכל המשתתפים.
גודל המדגם נקבע בהתבסס על מחקרים קודמים, המצביעים על כך ש-11 עד 30 משתתפים מספיקים להשגת תוצאות משמעותיות בפרמטרים מיקרוביאליים וחניכיים בקרב לובשי RPD21,23. בהנחה שמדובר במבחן t זוגי דו-זנבי עם רמת אלפא של 0.05, ניתוח ההספק הצביע על כך שגודל מדגם של 28 משתתפים יספק 80% כוח לזיהוי הבדל מובהק סטטיסטית בעוצמה זו. כדי להתמודד עם פוטנציאל לנשיר, גייסנו 30 משתתפים. יתרה מזאת, תקופת מעקב של שלושה חודשים הספיקה לצפייה בעלייה בעומס החיידקים בקרב מטופליםאלו 24.
מטופלים זכאים היו משתמשים ראשונים במכשירים תותבים, והופיעו עם שיניים טבעיות סמוכות ואנטגוניסטיות. קריטריוני ההדרה כללו: עומק חקירה >4 מ"מ, מצב מערכת חיסון מוחלשת (למשל, כימותרפיה), שימוש באנטיביוטיקה ב-90 הימים האחרונים, עישון כבד (>25 סיגריות ביום), וליקוי קוגניטיבי שמקשה על הבנת הליכי RPD.
כל המשתתפים קיבלו RPDs שנשמרו על ידי האבזם שיוצרו במסגרת מתכת קובלט-כרום, ושרף אקרילי (פולימתיל מתקרילט). העיצוב של כל RPD הותאם על פי סיווג הדנטוליזם, איכות הרכס השאריתי ושיקולים ביומכניים.
הליך איסוף דגימות
איסוף הדגימה בוצע בלעדית על שיני התמיכה של תותבות חלקיות נשלפות (RPDs) בין נקודות זמן T0 ו-T3. המשתתפים התבקשו תחילה לגרגר ביסודיות עם מים כדי להסיר שאריות מזון שנותרו. לפני איסוף הדגימות, שן התמיכה שנבחרה בודדה באמצעות גלילי כותנה לשמירה על סביבת עבודה יבשה. שתי נקודות נייר סטריליות (מס' 35; 04 מחודדת) הוכנסו לסולקוס החניכיים בצד המזיאלי והדיסטלי של פני השטח הבוקליים של השן ונשארו במקום למשך דקה. נקודות הנייר הועברו לאחר מכן למיקרוצינור סטרילי המכיל 1.5 מ"ל תמיסת מלח רגילה והועברו למעבדה מיקרוביולוגית ייעודית. הדגימות אוחסנו בטמפרטורה של -20°C עד לתהליך בידוד ה-DNA.
הכנת DNA חיידקי והגברה:
בדיקת פרודונטוסקרין (טבלת החומרים) שימשה לזיהוי T. denticola, T. forsythia ו-P. gingivalis באמצעות RT-PCR26. המבחן כולל: הכנת DNA; הגברה בזמן אמת PCR באמצעות מגבים ספציפיים (תערובת להגברה חיידקית אוניברסלית, תערובת להגברה של חיידקים אופורטוניסטיים, ותערובת להגברת DNA גנומי אנושי); והקלטה ופרשנות של תוצאות ההגברה.
חילוץ ה-DNA בוצע באמצעות ערכת חילוץ DNA (טבלת חומרים), בהתאם להנחיות היצרן כדי להבטיח איכות DNA מיטבית. הבדיקה עושה שימוש בניתוח PCR איכותי בזמן אמת עם תערובת PCR אטומה בפרפין. תערובת זו כוללת בקרה פנימית לאימות תקפות ריצת ה-PCR ובקרת קליטת דגימה (SIC) להערכת איכות החילוץ ולאישור DNA מספק להגברה מדויקת.
הגברת PCR בוצעה באמצעות רצועות וכובעים מיוחדים, עם תגובות הכוללות תמיסת טאק-פולימראז, תערובת מאסטר מתחת לשכבת פרפין, דגימת DNA ושמן מינרלי. תוכנית ה-PCR היא כדלקמן: (i) דנאטורציה ראשונית ב-80 °C למשך 30 שניות, (ii) דנאטורציה ב-94 °C למשך דקה ו-30 שניות, (iii) 5 מחזורים של 30 שניות ב-94 °C (דנאטורציה), 15 שניות ב-64 מעלות צלזיוס (קישור והארכת פריימר, זיהוי פלואורסצנציה), (iv) 45 מחזורים של 10 שניות ב-94 מעלות צלזיוס (דהנאטורציה), 15 שניות ב-64°C (קישור פריימר והארכה, זיהוי פלואורסצנציה), (v) 5 שניות ב-94°C (דנאטורציה סופית).
זיהוי פלואורסצנציה בוצע בערוצי הגילוי Fam ו-Hex, למעט צינור No5, שהכיל את הסמן (שם זוהה פלואורסצנציה בערוצי פאם ורוקס). תהליך ההגברה בוצע באמצעות מחזורי חום בזמן אמת (טבלת החומרים). מערכת ה-Software RealTime למכשיר (גרסה 7.9) שימשה לרישום אוטומטי, פרשנות וניתוח כמותי של נתוני ההגברה של PCR, מה שאפשר הערכת עומס פתוגן מדויקת.
עומסים מיקרוביאליים יוצגו כ"Lg (מקבילים גנומיים/דגימה)". התוצאות הוצגו בשלושה טווחים בדוח בדיקת פארודונטוסקרין לכל מטופל, בהתבסס על רמות העומס החיידקיים כדלקמן: P. gingivalis (תקין <5.0; בינוני ≥5.0; חמור >6.0); T. forsythia (נורמלי <5.0; בינוני ≥5.0; חמור >5.5); ו-T. denticola (תקין <3.5; בינוני ≥3.5; חמור >5.0).
בדיקה קלינית
הבדיקה הקלינית כללה בדיקה מעמיקה של מצב החניכיים של השיניים האבוטמנטיות והלא-אבוטמנטיות ב-T0 ו-T3. מדד הפלאק (PI) הוערך באמצעות גלאי דנטלי לפי קריטריוני סילנס-לו (0-3)27. מצב החניכיים הוערך בשש נקודות על פני השן באמצעות מדד החניכיים (GI) לפי הקריטריונים הבאים: 0, ללא דלקת; 1, דלקת קלה; 2, דלקת עם דימום חניכיים במהלך חקירה; 3, דלקת קשה עם אפשרות לדימום חניכיים ספונטני28.
עומק החקירה (PD) נמדד באמצעות גלאי ויליאמס מהשוליים החניכיים ועד לסוף עומק הכיס הקליני29. ניידות השיניים (TM) נקבעה על ידי מישוש דו-ידני בכיוונים אופקיים ואנכיים, בהתאם לקריטריון30 של מילר.
כל המשתתפים במחקר קיבלו טיפול חניכיים לא כירורגי מספק לפני הבדיקה הקלינית, כולל הסרת פלאק וחשבון דנטלי באמצעות קנה מידה אולטרסוני. הנבדקים קיבלו גם הדרכה בהליכי היגיינת הפה, כגון צחצוח שיניים וניקוי שיניים תותבות, וכן קיבלו ייעוץ להסרת שיניים תותבות בלילה.
ניתוח סטטיסטי
הנתונים נותחו באמצעות Microsoft Excel ו-IBM SPSS Statistics for Windows. סטטיסטיקה תיאורית (ממוצע, סטיית תקן וטווח) חושבה עבור גיל, עומסים מיקרוביאליים ומדדי חניכיים, כולל PI, GI, PD ו-TM. שינויים בפרמטרים קליניים ומיקרוביולוגיים בין לפני (T0) ל-3 חודשים לאחר ההחדרה (T3) הוערכו באמצעות מבחן דירוג חתום של וילקוקסון לנתונים זוגיים לא-פרמטריים. מבחן פישר המדויק (סימולציית מונטה קרלו, דו-צדדית) שימש להערכת נתונים קטגוריים הקשורים לסיווג עומס מיקרוביאלי. מקדם הקורלציה של ספירמן (ρ) שימש להערכת קשרים בין עומסים מיקרוביאליים לפרמטרים חניכיים. ערך p < 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית בכל הניתוחים.