כאן אנו מציגים פרוטוקול המשלב ניתוח פיטוכימית, אפיון גזים כרומטוגרפיה–ספקטרומטריית מסה, ובדיקות מאומתות ב-vivo להערכת הפעילויות האנטי-דלקתיות, משככות הכאבים והנוגדות חום של Terminalia mantaly, ומספק מסגרת שכפולה להערכה פרמקולוגית של צמחי מרפא.
מאמר מחקר
* These authors contributed equally
כאן אנו מציגים פרוטוקול המשלב ניתוח פיטוכימית, אפיון גזים כרומטוגרפיה–ספקטרומטריית מסה, ובדיקות מאומתות ב-vivo להערכת הפעילויות האנטי-דלקתיות, משככות הכאבים והנוגדות חום של Terminalia mantaly, ומספק מסגרת שכפולה להערכה פרמקולוגית של צמחי מרפא.
תרופות סינתטיות לדלקת, כאב וחום הן יעילות אך לעיתים קרובות גורמות לתופעות לוואי, מה שמגביר את העניין בחלופות טיפוליות שמקורן בצמחים. Terminalia mantaly H. Perrier, ששימש באופן מסורתי ברפואה האפריקאית, זוכה לאימות מדעי מוגבל. מחקר זה מציג פרוטוקול ניסיוני משולב המשלב סקר פיטוכימי, ניתוח כמותי של תרכובות פנוליות ופלבונואידיות, אפיון כרומטוגרפיית גז–ספקטרומטריית מסה (GC-MS), ובדיקות פרמקולוגיות ב-in vivo להערכת הפוטנציאל הטיפולי של התמצית המתנולית של T. mantaly. סקר פיטוכימי אישר נוכחות של מספר מחלקות ביואקטיביות, וניתוח GC–MS זיהה עשרים רכיבים, כולל חומצות שומן, פיטוסטרולים, טוקופרולים ותרכובות ביואקטיביות נוספות עם תכונות אנטי-דלקתיות ונוגדי חמצון ידועות. הערכה פרמקולוגית ב-in vivo בחולדות הראתה פעילות אנטי-דלקתית תלויה במינון במודל בצקת כפות הרגל המושרה על ידי קאראג'ינן, הארכה משמעותית של השהיה הכאב-גמילה בבדיקת הטבילה בזנב, והפחתה בפירקסיה הנגרמת על ידי שמרים. במינונים גבוהים יותר, התמצית הראתה השפעות דומות לתרופות סטנדרטיות כמו דיקלופנק ופארצטמול. הערכות רעילות חריפה וציטוטוקסיות הצביעו על פרופיל בטיחות חיובי בטווח המינון שנבדק. יחד, ממצאים אלו מאשרים את השימוש האתנורפואי ב-T. mantaly ומדגימים מסגרת ניסויית שחזורית לקישור הרכב פיטוכימי לפעילות פרמקולוגית. הפרוטוקול מספק נקודת ייחוס מתודולוגית מעשית לחוקרים החוקרים צמחי מרפא ותומך בפיתוח חומרים שמקורם בצמח לניהול מצבים דלקתיים וחימיים.
דלקת, כאב וחום הם תהליכים פתולוגיים מקושרים שמאחורי מגוון רחב של מחלות חריפות וכרוניות. למרות שתרופות סינתטיות כגון נוגדי דלקת לא-סטרואידיים, קורטיקוסטרואידים ופארצטמול נשארים עמוד התווך של הטיפול, השימוש ארוך הטווח בהם קשור לעיתים קרובות לגירוי במערכת העיכול, סיבוכי כליה, רעילות כבדותופעות לוואי נוספות. מגבלות אלו עוררו עניין גובר בצמחי מרפא כחלופות בטוחות וברות קיימא יותר לניהול מצבים דלקתיים וחומים. מוצרים טבעיים מוכרים היטב בזכות המגוון העשיר של מולקולות ביואקטיביות, רבות מהן משמשות כמובילים לפיתוח תרופות מודרניות. בהקשר זה, T. mantaly, חבר במשפחת Combretaceae, זכה לתשומת לב בשל השימוש האתנו-רפואי שלו במערכות המסורתיות האפריקאיות לטיפול בזיהומים, מחלות מערכת העיכול והפרעות דלקתיות 2,3. למרות הרלוונטיות המסורתית שלה, מחקרים פרמקולוגיים שיטתיים המאמתים את הפוטנציאל הטיפולי שלה נותרו מוגבלים. במיוחד, קיימת מחסור במחקרים מקיפים המשלבים סקר פיטוכימיים, הערכות ביולוגיות בחיים ושיטות פרופיל כימיות מתקדמות, כגון GC–MS. התמודדות עם פער זה חיונית להוכחה מדעית של יישומיו הפולקלוריים ולזיהוי תרכובות עופרת פוטנציאליות לשימוש פרמצבטי4. במחקר הנוכחי, התמצית המתנולית של T. mantaly עברה הערכה פיטוכימית ופרמקולוגית מפורטת. הניתוח הראשוני אישר את נוכחותם של מטבוליטים מרכזיים, כולל פנוליקה, פלבנואידים, טאנינים, סאפונינים וטרפנואידים, שכולם ידועים כתורמיםלהשפעות אנטי-דלקתיות, משככי כאבים וחמצון חמצון. בדיקות כמותיות הראו כי התמצית הכילה רמות משמעותיות של תרכובות פנוליות ופלבונואידיות, עם ערכים דומים לסטנדרטים ייחוסיים, מה שמעיד על פוטנציאל נוגד חמצון חזק.
מודלים של בעלי חיים שימשו משום שהתגובות הפרמקולוגיות שנבדקו כוללות מסלולים דלקתיים, עצביים ורגולטוריים משולבים שאינם ניתנים לשחזור במבחנה. בדיקות in vivo סיפקו ראיות פרמקולוגיות ברורות לפעילות ביולוגית. התכונות האנטי-דלקתיות (בצקת כפות הרגליים הנגרמת על ידי קאראג'ינן), משכך כאבים (טבילה בזנב) ואנטי-פירקטית (פירקסיה הנגרמת על ידי שמרים) נבדקו בעכברים, והראו פעילות אנטי-דלקתית תלויה במינון, בדומה לזו של דיקלופנק סודיום במינונים גבוהים יותר. באופן דומה, התמצית שיפרה את זמני ההטמעה בזנב בעכברים, ואישרה את יעילותה המשככת כאבים, בעוד שמודלים של פירקסיה שנגרמו על ידי שמרים הראו השפעות אנטי-פירטיות בולטות, הקרובות לאלו של פאראצטמול6. פרופיל כימי באמצעות ניתוח GC–MS סיפק תובנות עמוקות יותר לגבי ההרכב הביואקטיבי שלו. זוהו בסך הכל 20 תרכובות, כולל 3,5-דיהידרוקסיים-6-מתיל-2,3-דיהידרו-4H-פירן-4-אחד, חומצה לינולאית, γ-סיטוסטרול, סקוואלן וויטמין E. תרכובות אלו מתועדות היטב בזכות תכונותיהן נוגדי חמצון, נוגדות דלקת והגנה על הלב, התומכות בתוצאות הפרמקולוגיות שנצפו 7,8. חשוב לציין כי הערכות רעילות חשפו השפעות ציטוטוקסיות זניחות, מה שהדגיש את בטיחותה במינונים שנבדקו. יחד, מחקר זה מטפל בפער קריטי על ידי מתן ראיות פיטוכימיות ופרמקולוגיות לערך הרפואי של T. mantaly. הממצאים לא רק מאשרים את יישומיו המסורתיים, אלא גם מדגישים את הפוטנציאל שלה כמקור טבעי לתרכובות עופרת לפיתוח טיפולים חדשניים נגד דלקות והפרעות נלוות. המודלים הניסיוניים במחקר זה משקפים בעיקר תגובות דלקתיות חריפות ונוציספטיביות, ולכן מספקים ראיות פרמקולוגיות ראשוניות ולא אינדיקציה ישירה ליעילות טיפולית כרונית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
כל הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות בינלאומיות לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה ועמדו בהמלצות ה-OECD. פרוטוקול המחקר אושר על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים (IACUC) של אוניברסיטת בהאאודין זכריה, מולטאן. (מס' אישור: 3 /UREC/2025). נעשו כל המאמצים למזער את סבל בעלי החיים ולהפחית את מספר בעלי החיים בשימוש.
1. הכנת תמצית מתנולית שלמה של T. mantaly (TMWM)
2. הערכת תכולת הפנול הכוללת (שיטת פולין–צ'יוקלטאו)
3. הערכת תכולת הפלבונואידים הכוללת (שיטת כלוריד האלומיניום)
4. ניתוח כרומטוגרפיית גז–ספקטרומטריית מסה (GC–MS)
5. פעילות אנטי-דלקתית (בצקת רגליים הנגרמת על ידי קאראג'ינן)
6. פעילות משככת כאבים (בדיקת טבילה בזנב)
7. פעילות אנטי-פירטית
8. מחקרי רעילות חריפה
9. ניתוח סטטיסטי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הגישות הניסיוניות שתוארו במחקר זה הניבו נתונים ניתנים לשחזור במבחנה ובחיים שאפשרו הערכת ההרכב הפיטוכימי והפעילות הפרמקולוגית של התמצית המתנולית של T. mantaly. כל המדידות הניסיוניות בוצעו בשכפולים, והתוצאות מוצגות כסטיית תקן ממוצעת ± (SD). המשמעות הסטטיסטית בין הקבוצות נקבעה באמצעות ANOVA חד-כיווני ואחריו מבחן פוסט-הוק של טוקי, כאשר p < 0.05 נחשבו למובהקים.
הערכת תכולת הפנול והפלבונואידים הכוללת באמצעות מבחני פולין–צ'יוקלטו ואלומיניום כלוריד הניבה ערכי ספיגה עקביים לאורך מדידות שכפו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
במחקר זה נעשה שימוש בשילוב של אפיון פיטוכימי ומודלים פרמקולוגיים מבוססים ב-vivo להערכת הפוטנציאל האנטי-דלקתי, משכך הכאבים והאנטי-פילרטי של התמצית המתנולית של T. mantaly. המודלים הניסיוניים המשמשים בשימוש נרחב במחקר מוצרים טבעיים ומספקים מסגרת מעשית להערכה ראשונית של פעילות ביולוגית.
זמני השמירה הניתנים לשחזור של התרכובות תומכים במורכבות הכימית של התמצית ומספקים בסיס לבדיקות ממוקדות נוספות. רכיבים אלו קשורים לעיתים קרובות לפעילויות נוגדות דלקת ונוגדי ח...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מצהירים כי אין ניגודי עניינים הקשורים לעבודה זו.
עבודה זו נתמכה על ידי דיקן המחקר המדעי, סגן הנשיא ללימודים מתקדמים ומחקר מדעי, אוניברסיטת המלך פייסל, ערב הסעודית (מענק מס' KFU260979)
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| עכברי ויסטר אלבינו | בית בעלי חיים מוסדי | לא זמין | בעלי חיים ניסיוניים |
| כלוריד אלומיניום | סיגמא-אלדריץ' | 237051 | בדיקת פלבונואידים |
| ברואר' שמרים | סיגמא-אלדריץ' | YSC2 | השראה לפירקסיה |
| קאראג'ינן | סיגמא-אלדריץ' | C1013 | השראה בצקת כפות הרגל |
| צנטריפוגה | אפנדורף | 5810R | עיבוד דגימות |
| דיקלופנק נתרן | סיגמא-אלדריץ' | D6899 | תקן נוגד דלקת |
| מדחום רקטלי דיגיטלי | אומרון | MC-246 | מדידת טמפרטורת רקטלי |
| Digital vernier caliper | מיטוטויו | 500-196-30 | מדידת עובי כפות רגל |
| מים מזוקקים | פנימי | לא זמין | ממס |
| Folin– תגובת Ciocalteu | סיגמא-אלדריץ' | F9252 | בדיקה פנולית |
| חומצה גאלית | סיגמא-אלדריץ' | G7384 | תקן פנולי |
| מערכת GC–MS | אג'ילנט טכנולוגיות | 7890B– 5977A | פרופילינג פיטוכימי |
| פריזמת GraphPad | תוכנת GraphPad | גרסה 8.0 | תוכנת ניתוח סטטיסטי |
| מתנול (דרגת HPLC) | מרק | 106009 | ממס חילוץ |
| מחט אוראלית ל-Gavage | אינסטק | FTP-20-38 | מתן אוראלי |
| פאראצטמול | סיגמא-אלדריץ' | P0300000 | תקן משככי כאבים ואנטי-פירטים |
| אשלגן אצטט | מרק | 104820 | בדיקת פלבונואידים |
| אידוי סיבובי | Bü צ'י | R-200 | ריכוז התמצית |
| רוטין | סיגמא-אלדריץ' | R5143 | תקן פלבונואיד |
| פחמת נתרן | מרק | 106392 | בדיקה פנולית |
| UV– ספקטרופוטומטר נראה | שימאדזו | UV-1800 | מדידת ספיגה |
| אמבט מים (תרמוסטטי) | ממרט | WNB14 | בדיקת טבילה בזנב |
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה