כאן, אנו מציגים פרוטוקול המשתמש בקליפס חבל חד-פעמי ליצירת מודל גסטרקטומיה בשרוול העכבר. מודל זה מראה תמותה נמוכה לאחר הניתוח, זמן ניתוח קצר יותר, ותוצאות טיפוליות הדומות לטכניקות תפירה מסורתיות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
* These authors contributed equally
כאן, אנו מציגים פרוטוקול המשתמש בקליפס חבל חד-פעמי ליצירת מודל גסטרקטומיה בשרוול העכבר. מודל זה מראה תמותה נמוכה לאחר הניתוח, זמן ניתוח קצר יותר, ותוצאות טיפוליות הדומות לטכניקות תפירה מסורתיות.
דגמי העכברים הנוכחיים של גסטרקטומיה בשרוול (SG) מסתמכים רבות על תפירה ידנית – הליך טכני תובעני עם זמני ניתוח ממושכים, תמותה גבוהה סביב הניתוח ועקומת למידה תלולה. דבר זה מגביל את הנגישות שלהם לחוקרים שאינם כירורגיים. כדי להתמודד עם צוואר בקבוק זה, פיתחנו פרוטוקול SG פשוט המשתמש בקליפסים חד-פעמיים, המשמשים בדרך כלל בניתוחי מערכת העיכול הקליניים. בעכברי C57BL/6J ששמנו על ידי תזונה, הגישה המבוססת קליפס הפחיתה את זמן הניתוח הממוצע ב->50% (20.9 ± 3.2 לעומת 43.9 ± 3.0 דקות) ושיפרה באופן משמעותי את ההישרדות במשך 12 שבועות בהשוואה לתפר המסורתי. השיטה השיגה תוצאות מטבוליות דומות, כולל ירידה ממושכת במשקל, שיפור סבילות לגלוקוז, הגברת רגישות לאינסולין והפחתת סטיאטוזיס בכבד. ראוי לציין שהדגם אינו דורש מומחיות מיקרוכירורגית מיוחדת או מכשירי סיכות, שלרוב אינם זמינים ליישומים בעכברים. אנו ממליצים על שיטה מבוססת קליפים זו לחוקרים, במיוחד אלו ללא הכשרה כירורגית מתקדמת, שמעדיפים יעילות פרוצדורלית ויכולת שחזור במחקרים מכניים של ניתוחי בריאטריה. למנתחים המעוניינים לתרגום קליני ישיר, טכניקות מבוססות תפר נשארות מועדפות, אם כי עם ניהול סביב ניתוח מחמיר יותר.
ניתוח בריאטרי מוכר באופן נרחב כהתערבות היעילה ביותר להשמנת יתרון קיצונית וסיבוכים הנלווים לה1. מודל הגסטרקטומיה בשרוול העכבר (SG) הוא כלי חשוב לחקר השינויים הפתופיזיולוגיים והמנגנונים הפוטנציאליים הקשורים לניתוח בריאטרי. מודל זה מועיל כי הוא מאפשר שימוש בזני עכברים מהונדסים גנטית, כגון כאלה עם הדחפת גנים או ביטוי יתר. מודלים של עכברים שקל לשחזר, מאפשרים שליטה קפדנית בתנאי הניסוי ומאפשרים מניפולציה ניסיונית הם חיוניים לתרגום קליני2.
מודל SG הקונבנציונלי של עכברים משתמש בטכניקות מבוססות תפרים לייצור שקית קיבה צינורית. שיטה זו כוללת מספר שלבים כירורגיים מדויקים ודורשת בדרך כלל מיומנות טכנית משמעותית. טכניקות מייצגות כוללות SG-שכבהאחת 3,4 ו-SG-למברט 5,6, עם זמן ניתוח ממוצע של כ-30 עד 45 דקותב-7. כתוצאה מכך, ביצוע SG בקבוצה של עשרה עכברים דורש בדרך כלל 5-7.5 שעות של זמן ניתוח. במחקרים הכוללים מספר קבוצות ניסוי, סשנים כירורגיים מצטברים עשויים להימשך 2-3 ימים רצופים. לוחות זמנים פרוצדורליים ממושכים עלולים להכניס מגבלות לוגיסטיות ושונות בתנאים סביב הניתוח, המשפיעים על עקביות ניסוי ומעקב לאחר הניתוח. חוקרים בחנו גישות חלופיות לפיתוח מודלים נגישים יותר של עכבר-SG. גישות בסיוע סיכות (SG-stapler)7,8 וגישות מבוססות קליפס (SG-clip)9,10,11 מייצגות שיפורים בולטים. שיטות אלו מייעלות היבטים מסוימים של היווצרות שקיות קיבה ומפחיתות את הדרישות הטכניות הכרוכות בתפירה ידנית, ובכך תומכות באימוץ רחב יותר בסביבות מחקר עם רמות ניסיון ניתוחיות משתנות. טכניקת SG-סטאפלר מתמודדת עם מגבלות מעשיות ביישומי עכברים בשל זמינות מוגבלת של מכשירי סיכות בגודל מתאים, מה שהוביל לשימוש תדיר יותר במודלים של חולדות. לגבי גישת קליפס SG, מחקרים קודמים השתמשו בדרך כלל בקליפס טיטניום אחד עד שניים בתוספת תפרים נלווים 9,10,11. המשטח הפנימי החלק של קליפסי טיטניום סטנדרטיים מספק מיקום רקמתי לא אופטימלי, מה שמצריך קיבוע נוסף להבטחת אמינות פרוצדורלית ושלמות קיבה.
בהסתמך על תכונות מודלי SG-סטפלר ו-SG-קליפ, פרוטוקול זה מציג מודל SG עכברי שפותח באמצעות קליפים חד-פעמיים. קליפים אלו משמשים לעיתים קרובות בכריתת כיס ראש, כריתת תוספתן וניתוחים נוספים במערכת העיכול. בפרוצדורות אלו, הם מהדקים היטב רקמות כמו צינור הציסטיק השארי, שורש התוספתן וכלי הדם, ובכך מבטלים את הצורך בחיזוק תפר נוסף. קיימים גדלים שמתאימים לאורך קיבת העכבר. מודל ה-SG-clip החדש הזה פשוט, אמין ומציג יעילות טיפולית הדומה לזו של מודל התפרים המסורתי.
ראוי לציין כי SG מבוסס תפרים נותר מועדף כאשר המחקר שואף לשחזר טכניקת ניתוח קלינית, לחקור השפעות ביומכניות או ביולוגיות ספציפיות לתפר, או דורש דיוק אנטומי מרבי. לחוקרים בעלי מיומנויות מיקרוכירורגיה מתקדמות, שיטות תפירה ידנית משקפות פרוצדורות אנושיות ולכן מתאימות יותר לנאמנות תרגומית. לעומת זאת, מודל קליפ הליגציה מציע חלופה יעילה, יעילה ונגישה השומרת על קפדנות ניסויית תוך הרחבת היישום של SG עכברי עכברים במגוון סביבות מחקר – במיוחד כאשר המומחיות הכירורגית מוגבלת.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
פרוטוקול זה עומד בהנחיות האתיקה הבינלאומיות לרווחת בעלי חיים ואושר על ידי ועדת רווחת בעלי החיים והאתיקה הניסיונית של אוניברסיטת ג'ינאן (מספר אישור: 20240227-0073).
הערה: שלושים עכברי בר זכרים מסוג C57BL/6J (בני שמונה שבועות), במשקל 22-25 גרם, שוכלו בסביבה ייחודית ללא פתוגן (SPF) עם טמפרטורת חדר של 20-26 מעלות צלזיוס ו-12/12 שעות לסירוגין בין יום/לילה. לאחר הסתגלות לתזונה עתירת שומן במשך 4 שבועות, העכברים חולקו באקראי לקבוצות SC (SG עם קליפ), SS (SG עם תפר) ו-SH (שמה עם תפר) עם 10 עכברים בכל קבוצה.
1. הכנה לפני הניתוח
2. הליכים כירורגיים
3. טיפול לאחר הניתוח
4. מדדי גילוי
הערה: הישרדות של 4 שבועות ללא סיבוכים משמעותיים לאחר ניתוח בעכברים נחשבת לניתוח מוצלח.
5. ניתוח סטטיסטי
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הקריטריון להצלחת הניתוח הוגדר כעכברים ששרדו יותר מ-4 שבועות לאחר הניתוח מבלי לחוות סיבוכים חמורים. מקרי מוות שהתרחשו לאחר השבוע הרביעי לאחר הניתוח מיוחסים לסיבוכים. במהלך 12 שבועות רצופים של תצפית לאחר הניתוח, נרשם מקרה מוות אחד בקבוצת ה-SC ביום ה-24 לאחר הניתוח עקב זיהום פצע ובטן שנגרם מתפרים, בעוד תשעת העכברים הנותרים שרדו עד השבוע ה-12. בקבוצת ה-SS, סך הכל חמישה עכברים מתו, כאשר נקודות המוות התרחשו בימים 5, 7 ו-12 לאחר הניתוח, וכן בשבועות 7 ו-12 לאחר הניתוח. שני מקרי המוות הראשונים יו...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מודל SG של עכברים הוקם באמצעות קליפסים חד-פעמיים, מה שהוביל להליך כירורגי פשוט, יעיל וניתן לשחזור. הטכניקה המבוססת קליפס הראתה בעקביות יעילות טיפולית הדומה לזו של מודל SG המבוסס תפר קונבנציונלי, תוך הפחתת זמן ניתוח ושיפור שיעורי ההישרדות לאחר הניתוח.
טכניקת הניתוח של מודל תפר SG בעכבר אינה מורכבת מטבעה, ורבים מהמנתחים המנוסים בתפירת כלי דם יכולים לבצע הליך זה בהצלחה. סקירה שכללה 82 מחקרים דיווחה על שיעור תמותה ממוצע לאחר ניתוח של 17% בדגם SG1...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.
עבודה זו נתמכה על ידי קרן המדע הטבעי של מחוז גואנגדונג (2021A1515011261), קרן המחקר הבסיסי והיישומי של גואנגג'ואו (2024A03J0659) ופרויקט מדעי וטכנולוגיית הבריאות של גואנגג'ואו (20251A011020).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| פתרון אנרדי | פרוספריך | HC-3566 | עיקור עור החזה והבטן |
| 75% אלכוהול | מקלין | E885996-500 מ"ל | נקה את שולחן הניתוחים |
| מכונת הרדמה לבעלי חיים | יויאןביו | יויאן-ABS | ציוד הרדמה לעכברים |
| אפליקטור | האנגג'ואו קאנגג'י | Φ 10 מ"מ ופעמים; 330 מ"מ | מפעיל קליפס חד-פעמי |
| קליפס קשירה חד-פעמי | האנגג'ואו קאנגג'י | KJ-JZJ02XL | צור שרוול קיבה |
| עיפרון אלקטרוכירורגי | יויאןביו | ג'מיני (מופעל על סוללה) | המוסטזיס אלקטרוקואגולציה במהלך הניתוח. |
| להבטיח | מעבדות אבוט | H20181147 | דיאטה נוזלית |
| גלוקומטר ורצועות בדיקה | ACCU-CHEK | הדריך אותי | ניטור סוכר בדם |
| תוכנת GraphPad | סן דייגו, קליפורניה, ארה"ב | GraphPad Prism 9 | סטטיסטיקות וניתוח נתונים |
| כרית חימום | RTtech | RT-jr01 | שמרו על טמפרטורת גוף חמימה לעכבר במהלך הניתוח |
| דיאטה עתירת שומן | ריסרץ' דיאטס, בע"מ | D12492 | 60 קלורי אחוז שומן |
| איזופלוראן | הנעה אחורית | R510-22 | תרופות הרדמה |
| מלוקסיקאם | אלדין | M129228-25 גרם | תרופות משככות כאבים לאחר ניתוח |
| כלים מיקרוכירורגיים | ביוטיים | FS500 | ביצוע ניתוחי בעלי חיים |
| רטרקטור עכבר | צ'יו פוק | CP-ckq | משיכה ניתוחית בטנית בעכברים |
| תפרים כירורגיים | ג'ינחואן מדיקל | CR537/KCR631 | תפרים כירורגיים |
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.