הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

הערך האבחוני של LINC00426 בסוכרת סוג 2 ובמחלת כליות סוכרתית והשפעותיה הרגולטוריות על תאי הכליה

70 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70109

⸱

26 ביוני 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Nephrology, Tianyou Hospital, Wuhan University of Science and Technology, 2Department of Endocrinology, Changsha Central Hospital, 3Nephrology Department, Shanghai Putuo District People's Hospital, 4Cardiology Department, The Third Xiangya Hospital of Central South University, 5Health Clinic, General Office of Nanning Municipal People's Government

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

ירידה בוויסות LINC00426 מקדמת את התקדמות מחלת הכליות הסוכרתית (DKD) על ידי גרימת אפופטוזיס בתאי הכליה והגברת הדלקת.

תקציר

המחקר בוחן את הערך האבחוני של LINC00426 בסוכרת סוג 2 (T2DM) ובמחלת כליות סוכרתית (DKD), יחד עם השפעותיה הרגולטוריות על תאי הכליה. המחקר כלל 280 חולי סוכרת סוג 2 (146 מקרים של DKD), ו-186 אנשים בריאים בביקור שביקרו באותה תקופה. תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (RT-qPCR) באמצעות שעתוק הפוך אישרה כי LINC00426 הסרום יורד בוויסות אצל חולים עם T2DM ו-DKD. ניתוח מאפייני הפעלה של מקלט (ROC) העריך את ערך האבחון של LINC00426 עבור T2DM ו-DKD. רגרסיה לוגיסטית רב-משתנית זיהתה גורמי סיכון עצמאיים ל-DKD. LINC00426 הראה ערך אבחנתי לשתי המחלות והיה קשור שלילית ליחס אלבומין לקריאטינין בשתן (UACR). הורדת הרגולציה שלו חזה באופן עצמאי את התפתחות DKD. סביבה עם גלוקוז גבוה (HG) מעכבת ביטוי LINC00426 בתאי HK-2 ו-HGMC. בדיקת CCK8, ציטומטריית זרימה ובדיקות אימונוסורבנט הקשורות לאנזימים אישרו כי HG גם מדכא התרבות תוך קידום אפופטוזיס ודלקת. לעומת זאת, ביטוי יתר של LINC00426 מגביר את יכולת ההתרבות של תאי HK-2 ו-HGMC, מעכב אפופטוזיס ומפחית תגובות דלקתיות. הפחתת ויסות LINC00426 עלולה להחמיר את התקדמות ה-DKD על ידי עיכוב התרבות תאי הכליה (HK-2 ו-HGMC) וקידום אפופטוזיס ותגובות דלקתיות.

מבוא

סוכרת סוג 2 (T2DM) היא הפרעה מטבולית כרונית1. דיווחים מצביעים על כך שסוכרת סוג 2 וסיבוכיה הפכו לדאגה משמעותית בבריאות הציבורהעולמית, ומסכימים על בריאות האדם וההתפתחות החברתית. עקב הרגלי חיים לא בריאים שנרכשולאורך זמן, השכיחות של סוכרת סוג 2 עולה מדישנה. נפרופתיה סוכרתית (DN) שונתה שמה למחלת כליות סוכרתית (DKD) בשנת 2007. כסיבוך נפוץ של סוכרת סוג 28, שיעורי השכיחות והתמותה שלו בקרב חולי סוכרת ממשיכים לעלות מדישנה. DKD לעיתים נשאר סמוי אצל חולים עם סוכרת10 ממושכת או מופיע בפתאומיות11. DKD יכול לגרום לבעיות בתפקוד הכליות ולנזק לאנדותליאל12,13. DKD מתבטא בעיקר באובדן שתן של מולקולות גדולות כמו חלבונים בעקבות נזק למערכת סינון הכליה. עם זאת, עבור מטופלים, סמנים ביוכימיים בדם (גלוקוז בצום, אינסולין) משמשים כסטנדרט הזהב לאבחון סוכרת סוג 2, אך DKD עדיין קשה לזיהוי. שיטות טיפול קונבנציונליות אינן מזהות או מעריכות במהירות התקדמות DKD15. לכן, העלאת המודעות למחלה וזיהוי סמנים אבחנתיים חדשים הם חיוניים למניעה ולטיפול הן ב-T2DM והן ב-DKD.

בשנים האחרונות, המעורבות של RNA ארוך ולא מקודד (lncRNA) בפונקציות מגוונות כגון חיסון16, ויסות סרטן ומטבוליזם הפכה למוכרת יותרויותר. הראיות המצטברות כיום מעורבות ביטוי lncRNA לא מוסדר בפתוגנזה של מחלות כרוניות מורכבות, במיוחד DKD18,19. לדוגמה, ז'אנג ואח' זיהו באמצעות ריצוף בתפוקה גבוהה כי lncRNA evf-2 מתקשר עם hnRNP, ומקדם התפתחות DKD על ידי שיפור הביטוי של גנים הקשורים למחזור התאים וגורמים דלקתיים. במודל עכברוש DKD, זוהה USR0000B2476D lncRNA כמעורב בוויסות החיסון21. LINC00426 הוא lncRNA שהתגלה לאחרונה ומשחק תפקיד חשוב בוויסות גורמי דלקת22. מחקרים השוואתיים של מיקרו-מאריים עדכניים מצביעים על כך LINC00426 עשוי להיות פוטנציאל כביומרקר להתפתחות סוכרת סוג 2 (T2DM)23. יתרה מזאת, אסטרטגיות ביואינפורמטיקה תפסו את מעורבות LINC00426 בוויסות מערכת החיסון בתוך קרצינומהשל תאי הכליה. מחקרים רבים גם הדגישו את המעורבות המרכזית של דלקת בסוכרתו-DKD 25 בסוכרת וב-DKD. מחקרים קיימים הראו כי סוכרת סוג 226 ומחלות טרום-סוכרת27, כולל תסמונת מטבולית28, השמנה29 ומחלת לב מטבולית קרדיווסקולרית30, כולם קשורים לעומס דלקתי גבוה. בנוסף, סיבוכים מיקרווסקולריים סוכרתיים, כגון נוירופתיה31, נפרופתיה32 ורטינופתיה33, וכן סיבוכים מקרווסקולריים34, הם כולם תגובות דלקתיות כרוניות. לכן, חקר הקשר בין LINC00426 ל-T2DM ו-DKD חשוב מאוד לגילוי סמנים אבחנתיים חדשים ולגילוי המנגנונים של DKD. עם זאת, הספרות הנוכחית לגבי תפקיד LINC00426 ב-TD2M ו-DKD נותרה מוגבלת, ללא ראיות קליניות שמבהירות את דפוס הביטוי שלה, ערך הסיכון העצמאי ויעילות האבחון בחולי DKD.

כדי למלא את הפער המחקרי הזה, המחקר הנוכחי כלל 466 משתתפים, זיהה ביטוי LINC00426 בסרום באמצעות RT-qPCR, זיהה גורמי סיכון עצמאיים ל-DKD באמצעות רגרסיה לוגיסטית, והעריך עוד את הפוטנציאל האבחוני של LINC00426 ל-T2DM ו-DKD באמצעות ניתוח ROC. הממצאים שלנו מבהירים באופן ראשוני את מאפייני הביטוי והמשמעות הקלינית של LINC00426 ב-DKD, ובכך ממלאים את פער הידע הקיים ומספקים תובנות חדשות על פתוגנזה של DKD וחקר הביומרקרים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה אושר על ידי ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים השלישי שיאנגיה של אוניברסיטת סנטרל סאות'. כל המטופלים ובני משפחותיהם הביעו תמיכה וחתמו על טפסי הסכמה מדעת בכתב.

אוסף דגימות
גודל המדגם חושב באמצעות תוכנת G*Power. רמת המובהקות (α) נקבעה על 0.05, עוצמה סטטיסטית (1-β) על 0.8, גודל ההשפעה (f) על 0.25, ושיעור נשירה של 10% נלקח בחשבון. תוצאות החישוב הראו כי נדרשו לפחות 123 משתתפים בכל קבוצה כאשר חקרו את קבוצות הביקורת, סוכרת סוג 2 ו-DKD. במחקר עצמו, 186 משתתפים נכללו בקבוצת הביקורת, 134 מטופלים בקבוצת T2DM, ו-146 מטופלים בקבוצת DKD. כולם היו מתנדבים שקיבלו טיפול בבית החולים השלישי שיאנגיה של אוניברסיטת סנטרל סאות' מיולי 2022 עד יוני 2023. מתוכם, 72 מטופלים לא חוו סיבוכים, בעוד ש-208 מטופלים הגיעו עם סיבוך אחד או יותר. הסיבוכים כללו בעיקר נוירופתיה סוכרתית, רטינופתיה סוכרתית ומחלת כליות סוכרתית (DKD), כאשר 146 מטופלים אובחנו עם DKD. סיווג הסוכרת נקבע על בסיס אינסולין בצום ורמות סוכר בצום; חולים עם סוכרת סוג 1 הוצאו מהחוק כדי למנוע עמימות אבחנתית. מקרים של סוכרת הריונית ומצבים מיוחדים של סוכרת לא הוחרגו.

קריטריוני ההכללה היו: גיל ≥ 18; רשומות רפואיות מלאות ותיעוד זמין; עמידה בהנחיות הסיניות לשנת 2020 למניעה וטיפול בסוכרת סוג 237. קריטריוני ההדרה כללו הפרעות פסיכיאטריות נלוות, פגיעה קוגניטיבית או חוסר יכולת לשתף פעולה עם המחקר; מצבים זיהומיים חריפים; כשל באיברים; וגידולים ממאירים.

נבחרה קבוצת ביקורת של 186 אנשים בריאים שעברו בדיקות רפואיות שגרתיות באותה תקופה. משתתפי קבוצת הביקורת חייבים לעמוד בקריטריונים הבאים: ללא היסטוריה של סוכרת או הפרעות מטבוליות אחרות; סוכר בדם בצום תקין (<6.1 מ"מ/ליטר), גלוקוז לאחר הארוחה שעתיים (<7.8 מ"מ"ל/ליטר), והמוגלובין מגליקט (<5.7%); וללא היסטוריה של מחלות כליות או סיבוכים, עם סימנים תקינים בתפקוד הכליה (קצב סינון גלומרולרי, יחס אלבומין לקריאטינין בשתן).

בדיקות אינדיקטורים הקשורים לסוכרת
מידע דמוגרפי בסיסי נרשם עבור כל משתתף במחקר בעת הקבלה. למחרת בבוקר, נאספו 5 מ"ל דם ורידי מכל נבדק במצב צום לבדיקת מדדים ביוכימיים. רמות הסוכר בצום (FBG) נותחו באמצעות מד סוכר בדם35. המוגלובין הגליקטי (HbA1c) נמדד באמצעות אנלייזר HbA1c אוטומטילחלוטין 36. דגימות השתן נאספו בתוך 24 שעות מהכללת המחקר. ריכוז האלבומין בשתן נמדד באמצעות אנלייזר חלבון37 באמצעות שיטת הטורבידימטריההחיסונית 38. מידת הפגיעה הכלייתית בחולי DKD הוערכה לפי יחס אלבומין לקריאטינין בשתן (UACR), מדד מבוסס להערכת פגיעה כלייתית מוקדמת והתקדמות מחלה ב-DKD 3,39.

תרבית תאים ועיבוד
נרכשו תאי אפיתל כליה אנושיים HK-2 ותאי מזנגיה גלומרולריים HGMC. באופן ספציפי, תאי HK-2 תורבדו במדיום K-SFM שכלל 10% סרום בקר עוברי, בתוספת תמיסת אנטיביוטיקה של 1%. תאי HGMC גודלו בתווך מלא של תא ראשוני. התאים נשמרו באינקובטור של 37 מעלות צלזיוס ו-5%CO2 . מעבר וטרנספקציה בוצעו כאשר המפגש עלה על 70%. לצורך השראה עם גלוקוז גבוה (HG), תאים זרעו בלוחות של 6 בארות ונחשפו ל-30 מ"מ D-גלוקוז ב-2 מ"ל מדיום תרבית בכל באר למשך 48 שעות (HK-2 40 ותאי HGMC41). קבוצת ביקורת עם סוכר נמוך טופלה ב-5.5 מ"מ D-גלוקוז + 24.5 מ"מ מניטול.

רצף האורך המלא של LINC00426 שוכפל לפלסמיד הביטוי האאוקריוטי pcDNA3.1 כדי לבנות את הפלסמיד pcDNA3.1 LINC00426 הבעה מופרזת. וקטור pcDNA3.1 הריק שימש כבקרה שלילית. העברת תאים בוצעה באמצעות תגובת ליפופקטמין 3000 לפי הוראות היצרן. בקצרה, תאי HK-2 ו-HGMC שהושרו על ידי HG הוזרעו ללוחות של 6 בארות והועברו בנקודת מפגש של 70%–80%. לכל באר, 2.5 מיקרוגרם DNA פלסמיד (pcDNA 3.1 או pcDNA3.1 LINC00426) מעורבבים עם 5 מיקרוליטר של תגובת ליפופקטמין 3000 ב-250 מיקרוליטר Opti-MEM למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר, לפי מחקר קודם10. קומפלקס הטרנספקציה נוסף לאחר מכן טיפה לתאים במדיום תרבית מלא. לאחר 6 שעות של דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, המדיום הוחלף במדיום טרי, והתאים גודלו במשך 42 שעות נוספות לפני הניסויים הבאים.

חילוץ RNA מלא ושעתוק הפוך
הדם שנותר עבר צנטריפוגה נוספת ב-3000 x גרם למשך 15 דקות, והסופרנטנט נאסף ואוחסן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס. סך כל ה-RNA הופק מדגימות סרום ותאים בשיטת טריזול-פנול-כלורופורם, שהושקע עם אתנול בנפח שווה לפי מחקרים קודמים42. ריכוז וטוהר ה-RNA הוערכו באמצעות ספקטרופוטומטר UV. סך ה-cDNA סונתז מדגימות באמצעות תערובת התגובה RT באמצעות מגבר גנים PCR. תנאי התגובה היו 42°C למשך 15 דקות, ואחריהן 85°C במשך 5 שניות. הדגימות נשמרו לזמן קצר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.

תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת בשעתוק הפוך (RT-qPCR)
RT-qPCR בוצע באמצעות מיקס מאסטר של SYBR qPCR. ביטוי הסרום LINC00426 נמדד באמצעות מכשיר PCR כמותי. הנתונים נורמו באמצעות β-tubulin כגן ייחוס פנימי, שחושב באמצעות שיטת 2−ΔΔCt . ערך ה-Ct הממוצע של β-tubulin היה כ-25, ונע בין 23 ל-27 בכל דגימות הסרום. מקדם השונות של Ct (CV) היה 2.5%. ANOVA חד-כיווני לא הראה הבדל משמעותי בערכי Ct של β-tubulin בין קבוצות הביקורת, T2DM ו-DKD, מה שמאשר את ביטויו היציבים ואת התאמתו כייחוס פנימי לנרמול LINC00426 הסרום. הפריימרים המעורבים בתגובה מופיעים בטבלה משלימה 1. תנאי תגובה: קדם-דנאטורציה ב-95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות; 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס ל-10 שניות ו-60 מעלות צלזיוס ל-30 שניות; הארכה סופית ב-60 מעלות צלזיוס למשך 15 שניות.

ניתוח כתמים מערביים
ניתוח הכתמים המערביים בוצע בהתאם לפרוטוקולים הניסיוניים שנקבעו. בקצרה, התאים עברו ליזה עם בופר ליזיס RIPA בתוספת קוקטייל מעכב פרוטאז 1%. לאחר דגירה בטמפרטורת החדר למשך 30 דקות, בוצעה כימות חלבון. דגימות החלבון עברו דנוי בטמפרטורה של 95 מעלות צלזיוס, וכמויות שוות של חלבון של 30 מיקרוגרם הופרדו על ידי SDS-PAGE, ולאחר מכן אלקטרוטרנספרנס לממברנות PVDF של 0.45 מיקרון. הממברנות נחסמו בחלב דל שומן בטמפרטורת החדר במשך שעתיים. נוגדנים ראשוניים נגד Bax, Bcl-2, Caspase-3, IκBα ו-p-P65 דוללו ב-1:1000 עם TBST, בעוד β-אקטין דולל ב-1:3000. הממברנות הוטמעו בנוגדנים ראשוניים במהלך הלילה בטמפרטורה של 4°C. בהמשך, הממברנות דוגרו עם נוגדנים משניים צמודים לפרוקסידאז חזרת בטמפרטורת החדר למשך שעה. רצועות חלבון הוצגו באמצעות מצע ECL על מערכת הדמיית ג'ל. ערכי פס אפור נמדדו באמצעות תוכנת ImageJ.

ערכת ספירת תאים-8 (CCK8)
עיכול תאים שעברו טרנספקט עם 0.25% טריפסין (ללא EDTA) למשך כ-3 דקות, ואז צנטריפוגה ב-800 x גרם למשך 5 דקות. אסוף את הכדור ותשהה מחדש במדיום תרבית התאים. זרע 100 מיקרוליטר של תליית תא (2 x 103 תאים) ללוח עם 96 בארות. לאחר דגירה של 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5%CO2 כדי לאפשר היצמדות לתא, מוסיפים 10 מיקרוליטר של תמיסת CCK8. התוספת הראשונית של פתרון CCK8 מוגדרת כ-0 h. הספיגה ב-450 ננומטר נמדדת באמצעות קורא מיקרופלט ב-0, 24, 48 ו-72 שעות.

ציטומטריית זרימה
השפעת הטרנספקציה על אפופטוזיס התאים הוערכה באמצעות תמיסת הצביעה של אנקסין V-פלואורסאין איזותיוציאנאט (FITC)/פרופיליום יודיד (PI). לאחר הטרנספקציה, התאים עוכלו באותו תהליך עיכול טריפסין שתואר לעיל. התאים נשטפו עם מי מלח מפוזר פוספט (PBS) והושעו מחדש. כדורי תאים נאספו בצנטריפוגציה בעוצמה של 800 x גרם למשך 5 דקות. העבר 100 מיקרו-ליטר (בערך 1 x10 5 תאים) לצינור ציטומטריית זרימה, צנטריפוגה ב-800 x גרם למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר והשליך את הסופרנאנט. השעיית תאים ב-195 מיקרוליטר Annexin V-FITC עם בופר קשירה. הוסף לתערובת 5 מיקרוליטר Annexin V-FITC ותמיסת צביעת PI של 10 מיקרוליטר, ואז מערבב היטב. דגרו בחושך בטמפרטורת החדר למשך 20 דקות. לאחר מכן, הניחו את צינור הציטומטריה של הזרימה המטופלת באמבט קרח לאחסון זמני. לפני הניתוח, סנן את תליית התא דרך מסנן רשת של 200 מיקרון והשלים מחדש. אסוף אותות תאים באמצעות מערכת ציטומטריית זרימה תחת עירור ב-488 ננומטר/636 ננומטר.

מבחן אימונוסורבנט מקושר באנזימים (ELISA)
ציטוקינים דלקתיים של תאים נמדדו באמצעות ערכות ELISA זמינות מסחרית לפקטור נמק גידול אלפא (TNF-α), אינטרלוקין-6 (IL-6), IL-1 בטא (IL-1β). הליך הגילוי הספציפי הוא כדלקמן: מוסיפים 100 מיקרוליטר מהתקן המדולל כראוי לבארות הסטנדרטיות. הוסיפו 100 מיקרוליטר של מדיום בסיסי של תאים לכל הבארות הריקות. הוסיפו 50 מיקרוליטר של סופרנטנט תא ו-50 מיקרוליטר של בופר גילוי 1x לבארות הדגימה. לאחר מכן, מוסיפים 50 מיקרוליטר מתמיסת נוגדנים לזיהוי לבארות המתאימות. כסו את המיקרופלטה ודגרו בטמפרטורת החדר במשך שעתיים. להשליך את הנוזל מהבארות ולשטוף 6 פעמים עם בופר שטיפה. כדי להשיג תוצאות מיטביות, ודא שהבארות מיובשות היטב. הוסף שוב 100 מיקרולטר תמיסת סטרפטווידין לכל באר, אטום את הצלחת, ודוגר בטמפרטורת החדר למשך 45 דקות. לבסוף, מוסיפים 100 מיקרוליטר של מצע כרומוגני, ואז דגרו אותם בחושך למשך 20 דקות. לאחר מכן מוסיפים 100 מיקרוליטר של תמיסת עצירה ומערבבים בעדינות. התמיסה תופיע כעת כנוזל צלול, צהבהב, בעוצמות משתנות. מדדו את הצפיפות האופטית (OD) של התמיסה ב-450 ננומטר ו-630 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט. ההבדל בין שני הערכים הללו תואם לריכוז הגורם הדלקתי בדגימה.

ניתוח סטטיסטי
הנתונים עובדו ונותחו באמצעות תוכנה סטטיסטית מסחרית זמינה. כל תוצאות הניסוי כללו שלושה שכפולים תקפים. השוואות בין-קבוצות השתמשו במבחני t של דגימות עצמאיות וניתוח שונות (ANOVA). בוצעו השוואות מרובות באמצעות שיטת טוקי. עקומת ROC שימשה להערכת ערך האבחון של LINC00426 עבור T2DM ו-DKD. ניתוח רגרסיה לוגיסטית העריך גורמי סיכון ל-DKD. P < 0.05 הצביע על מובהקות סטטיסטית עבור תוצאות הנתונים המתאימים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

השוואת מאפייני בסיס בין אנשים בריאים לבין חולי סוכרת סוג 2
המחקר כלל 280 מטופלים עם סוכריות סוג 2 ו-186 אנשים בריאים כביקורת. ניתוח הרשומות הרפואיות של המשתתפים (ראו טבלה 1) גילה כי הגיל הממוצע של קבוצת הביקורת היה 58.91 ±-17.63 שנים, לעומת 59.50 ±-17.14 שנים עבור חולי סוכרת סוג 2. עם זאת, לא היו הבדלים משמעותיים במגדר או בהשמנה בין שתי קבוצות המטופלים. השוואה נוספת גילתה כי בהשוואה לקבוצת הביקורת, חולי סוכרת סוג 2 היו בעלי מדד מסת גוף גבוה משמעותית (...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

DKD מייצג סיבוך מיקרווסקולרי חמור ב-T2DM. הביטוי המוקדם ביותר שלו הוא נוכחות מיקרואלבומינוריה; זיהוי זה בשלבים מוקדמים עלול לעכב את התקדמות DKD. עם זאת, מיקרואלבומינוריה חסרה רגישות בניתוח שתן שגרתי ולכן לעיתים קרובות מתעלמים ממנה43. מחקר זה מצא כי LINC00426 מופחתת אצל חולי סוכרת סוג 2 ויש לו ערך אבחוני הן לסוכרת סוג 2 והן לסוכרת הקאוונית. יתרה מזאת, LINC00426 עשוי למנוע DKD על ידי הפחתת אפופטוזיס בתאי אפיתל כלייתי HG והורדת רמות דלקת תאית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

אין ניגוד עניינים במחקר זה.

תודות

לא רלוונטי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.25% trypsinGibco25200056
Annexin V-FITC Apoptosis Detection KitBeyotimeC1062S
Antibiotics for cell cultureGibcoR-015-10
Aristo specific protein detectorGOLDSITEGPP-100
Bax AntibodyCell signaling Technology2772
BCA protein assay kitBeyotimeP0013B
Bcl-2 (124) Mouse Monoclonal AntibodyCell signaling Technology15071
beta-Actin (13E5) Rabbit Monoclonal AntibodyCell signaling Technology4970
Blood glucose monitorYuwell710
Caspase-3 AntibodyCell signaling Technology9662
CCK-8 reagentSigma96992
ChamQ Universal SYBR qPCR Master MixVazymeQ711
ChloroformSigma-AldrichC2432
Clarity Western ECL SubstrateBio-Rad1705061
Constant-temperature cell incubatorSaiLunDHP-9032
D-GlucoseMedChemExpressHY-B0389
Flow cytometerBeckman coultedCytoFLEXChloroform
Fluorescent quantitative PCR instrumentRocheLight Cycler 96
Foetal bovine serumSigma-AldrichF0193
Fully automated glycated haemoglobin analyserHanyu medicalHLC-723G11פנול
Gene PCR amplifierBio RadS1000
Glomerular mesangial cells, HGMCSunncell Biotechnology Co., Ltd.SNP-H252
Human Basic IL-1 beta ELISA KitInvitrogenECH002
Human IL-6 ELISA KitInvitrogenEH2IL6
Human kidney epithelial cells, HK-2Sunncell Biotechnology Co., Ltd.SNL-165
Human TNF alpha ELISA KitInvitrogenKAC1751
IkappaB alpha (L35A5) Mouse Monoclonal AntibodyCell signaling Technology4814
K-SFM mediumInvitrogen17005-042
Lipofectamine 3000 InvitrogenL3000015
MannitolSigma-AldrichM9647
Multifunctional enzyme-linked immunosorbent assay readerTECANGENios Plus
NF-kappaB p65 (D14E12) Rabbit Monoclonal AntibodyCell signaling Technology8242
non-fat milkBiosharpBS102-500g
Opti-MEM™ I Reduced Serum MediumInvitrogen31985062
P3000 ReagentInvitrogenL3000-015
PBS bufferSangon BiotechE607080
פנולSigma-AldrichP1037
Phospho-NF-kappaB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit Monoclonal AntibodyCell signaling Technology3033
Primary cell complete mediumSunncell Biotechnology Co., Ltd.SNPM-H252
Prime Script RT reagent KitTakaraRR037A
PVDF membranesMerck Millipore SE1M003M00
rotease and phosphatase inhibitor cocktailBeyotimeP1045
TrizolInvitrogen15596026CN
Ultraviolet spectrophotometerThermoNanodrop 2000

מקורות

  1. Amerkamp, J., Benli, S., Isenmann, E., Brinkmann, C. Optimizing the lifestyle of patients with type 2 diabetes mellitus - systematic review on the effects of combined diet-and-exercise interventions. Nutr Metab Cardiovasc Dis. 35 (5), 103746(2025).
  2. Mousavi, F. S., et al. Assessing renal function as a predictor of adverse outcomes in diabetic patients undergoing percutaneous coronary intervention. Acta Cardiol. 79 (7), 824-832 (2024).
  3. He, Y., et al. Predictive efficacy assessment of serum beta(2)-microglobulin combined with urinary albumin-to-creatinine ratio for renal function deterioration in type 2 diabetic patients with kidney disease. Am J Transl Res. 17 (12), 9982-9995 (2025).
  4. Wang, M., et al. Association of dietary live microbe intake with diabetic kidney disease in patients with type 2 diabetes mellitus in us adults: A cross-sectional study of nhanes 1999-2018. Acta Diabetol. 61 (6), 705-714 (2024).
  5. Saeedi, P., et al. Global and regional diabetes prevalence estimates for 2019 and projections for 2030 and 2045: Results from the international diabetes federation diabetes atlas, 9(th) edition. Diabetes Res Clin Pract. 157, 107843(2019).
  6. National Kidney Foundation. Kdoqi clinical practice guideline for diabetes and ckd: 2012 update. Am J Kidney Dis. 60 (5), 850-886 (2012).
  7. Tuttle, K. R., et al. Diabetic kidney disease: A report from an ada consensus conference. Am J Kidney Dis. 64 (4), 510-533 (2014).
  8. Du, N., Zhang, X., He, C., Zhang, Z. Mir-423-5p mediates linc00886 regulation of ovarian cancer aggressiveness and immune evasion via the tlr4/myd88/nf-kappab/pd-l1 pathway. Hereditas. 162 (1), 184(2025).
  9. Joshi, S. R., et al. Therapeutic potential of alpha-glucosidase inhibitors in type 2 diabetes mellitus: An evidence-based review. Expert Opin Pharmacother. 16 (13), 1959-1981 (2015).
  10. Chen, S., et al. Predicting and validating the regulation of podocyte injury and treatment of diabetic kidney disease by yinhuo tang. J Vis Exp. (220), e67939(2025).
  11. Zahra, S., et al. Prevalence of nephropathy among diabetic patients in north american region: A systematic review and meta-analysis. Medicine (Baltimore). 103 (38), e39759(2024).
  12. Wang, Y., Liu, T., Liu, W., Zhao, H., Li, P. Research hotspots and future trends in lipid metabolism in chronic kidney disease: A bibliometric and visualization analysis from 2004 to 2023. Front Pharmacol. 15, 1401939(2024).
  13. Shi, M., et al. Integrated transcriptomic and secretome proteomic analysis of hyperglycemia-stimulated endothelial cells and screening of target compounds. J Vis Exp. (226), e69578(2025).
  14. Sagoo, M. K., Gnudi, L. Diabetic nephropathy: An overview. Methods Mol Biol. 2067, 3-7 (2020).
  15. Kopel, J., Pena-Hernandez, C., Nugent, K. Evolving spectrum of diabetic nephropathy. World J Diabetes. 10 (5), 269-279 (2019).
  16. Chen, Y., Li, Z., Chen, X., Zhang, S. Long non-coding rnas: From disease code to drug role. Acta Pharm Sin B. 11 (2), 340-354 (2021).
  17. Yao, D., Zhang, B., Zhan, X., Zhang, B., Li, X. K. Predicting lncrna-disease associations based on a dual-path feature extraction network with multiple sources of information integration. ACS Omega. 9 (32), 35100-35112 (2024).
  18. Wang, Z., et al. Lncrna meg3 alleviates diabetic cognitive impairments by reducing mitochondrial-derived apoptosis through promotion of fundc1-related mitophagy via rac1-ros axis. ACS Chem Neurosci. 12 (13), 2280-2307 (2021).
  19. Ting, K. H., Yang, P. J., Tsai, P. Y., Lee, C. Y., Yang, S. F. Correlations between the long noncoding rna meg3 and clinical characteristics for diabetic kidney disease in type 2 diabetes mellitus. Diabetol Metab Syndr. 16 (1), 260(2024).
  20. Zhang, C., et al. Lncrna evf-2 exacerbates podocyte injury in diabetic nephropathy by inducing cell cycle re-entry and inflammation through distinct mechanisms triggered by hnrnpu. Adv Sci (Weinh). 11 (47), e2406532(2024).
  21. Lan, F., Zhao, J., Liang, D., Mo, C., Shi, W. Comprehensive analysis of cuproptosis-related cerna network and immune infiltration in diabetic kidney disease. Heliyon. 10 (16), e35700(2024).
  22. Zhou, B., et al. Linc00426 promotes the progression of atherosclerosis by regulating mir-873-5p/srrm2 axis. Cytokine. 191, 156938(2025).
  23. Ma, Q., et al. Long non-coding rna screening and identification of potential biomarkers for type 2 diabetes. J Clin Lab Anal. 36 (4), e24280(2022).
  24. Xiang, Z., et al. Potential prognostic biomarkers related to immunity in clear cell renal cell carcinoma using bioinformatic strategy. Bioengineered. 12 (1), 1773-1790 (2021).
  25. Mobeen, A., et al. Nf-kappab signaling is the major inflammatory pathway for inducing insulin resistance. 3 Biotech. 15 (2), 47(2025).
  26. Aktas, G. Exploring the link: Hemogram-derived markers in type 2 diabetes mellitus and its complications. World J Diabetes. 16 (7), 105233(2025).
  27. Balci, S. B., Atak, B. M., Duman, T., Ozkul, F. N., Aktas, G. A novel marker for prediabetic conditions: Uric acid-to-hdl cholesterol ratio. Bratisl Lek Listy. 125 (3), 145-148 (2024).
  28. Basaran, E., Aktas, G. J. O. E., Diseases, M. Waist-to-height ratio as a novel marker of metabolic syndrome in patients with type 2 diabetes mellitus. Exploration of Endocrine and Metabolic Diseases. , (2025).
  29. Duman, T. T., Tel, B. M. A., Bilgin, S., Dervisevic, A., Aktas, G. Evaluation of the effects of intermittent fasting on clinical and laboratory parameters in metabolic syndrome. Experimental Biomedical Research. 8 (2), (2025).
  30. Cosgun, M., Cosgun, Z., Kalfaoglu, M. E., Aktas, G. Systemic inflammatory markers and epicardial fat volume as predictors of cardiometabolic risk in type 2 diabetes. Postgrad Med J. , (2025).
  31. Aktas, G. Serum c-reactive protein to albumin ratio as a reliable marker of diabetic neuropathy in type 2 diabetes mellitus. Biomol Biomed. 24 (5), 1380-1386 (2024).
  32. Aktas, G., Duman, T. T., Atak Tel, B. Controlling nutritional status (conut) score is a novel marker of type 2 diabetes mellitus and diabetic microvascular complications. Postgrad Med. 136 (5), 496-503 (2024).
  33. Aktas, G. Association between the prognostic nutritional index and chronic microvascular complications in patients with type 2 diabetes mellitus. J Clin Med. 12 (18), (2023).
  34. Aktas, G. An overview of the role of serum uric acid to high-density lipoprotein cholesterol ratio in type 2 diabetes mellitus and in other inflammatory and metabolic conditions. Minerva Med. 116 (5), 405-415 (2025).
  35. Ohuche, I. O., Chikani, U. N., Oyenusi, E. E., Onu, J. U., Oduwole, A. Correlates of fasting blood glucose among children living with hiv in a nigerian tertiary hospital: A cross-sectional study. BMC Pediatr. 20 (1), 458(2020).
  36. Girlescu, N., et al. Thanatochemical study of glycated hemoglobin in diabetic status assessment. Medicina (Kaunas). 57 (4), (2021).
  37. Yu, G. Z., et al. Persistent hematuria and kidney disease progression in iga nephropathy: A cohort study. Am J Kidney Dis. 76 (1), 90-99 (2020).
  38. Zhao, H., et al. Branched-chain amino acids contribute to diabetic kidney disease progression via pkm2-mediated podocyte metabolic reprogramming and apoptosis. Nat Commun. 16 (1), 7846(2025).
  39. Mao, L., Yin, R., Yang, L., Zhao, D. Elucidating the function of clusterin in the progression of diabetic kidney disease. Front Pharmacol. 16, 1573654(2025).
  40. Cheng, D., et al. Moringa isothiocyanate activates nrf2: Potential role in diabetic nephropathy. AAPS J. 21 (2), 31(2019).
  41. Geng, Z., et al. Lncrna zfas1 regulates the proliferation, oxidative stress, fibrosis, and inflammation of high glucose-induced human mesangial cells via the mir-588/rock1 axis. Diabetol Metab Syndr. 14 (1), 21(2022).
  42. Dalmadi, A., Miloro, F., Abdu, A., Kis, A., Havelda, Z. Remote precursor elements can modulate rna induced silencing complex-loading efficiency of mir168 in arabidopsis. Plant J. 122 (3), e70195(2025).
  43. Vigersky, R. A. An overview of management issues in adult patients with type 2 diabetes mellitus. J Diabetes Sci Technol. 5 (2), 245-250 (2011).
  44. Zou, L. X., Hou, Z. L., Qian, C. H., Wang, X., Sun, L. Performance of novel biomarkers for prediction of diabetic kidney disease in patients with diabetes mellitus. Ann Med. 57 (1), 2562996(2025).
  45. Liu, T., et al. Serum high mobility group box 1 as a potential biomarker for the progression of kidney disease in patients with type 2 diabetes. Front Immunol. 15, 1334109(2024).
  46. Oshima, M., et al. Trajectories of kidney function in diabetes: A clinicopathological update. Nat Rev Nephrol. 17 (11), 740-750 (2021).
  47. Wang, S., et al. Grk2 protein mediates the anril, a lncrna, to affect the proliferation and apoptosis of kasumi-1 cells. Front Biosci (Landmark Ed). 29 (10), 362(2024).
  48. Yang, P. J., Ting, K. H., Tsai, P. Y., Su, S. C., Yang, S. F. Association of long noncoding rna gas5 gene polymorphism with progression of diabetic kidney disease. Int J Med Sci. 21 (11), 2201-2207 (2024).
  49. Li, B., Wu, Z., Xu, H., Ye, H., Yang, X. Downregulation of lncrna xloc_032768 in diabetic patients predicts the occurrence of diabetic nephropathy. Open Med (Wars). 19 (1), 20240903(2024).
  50. Liu, H., et al. A panel of four-lncrna signature as a potential biomarker for predicting survival in clear cell renal cell carcinoma. J Cancer. 11 (14), 4274-4283 (2020).
  51. Zhu, H., et al. Functional long noncoding rnas (lncrnas) in clear cell kidney carcinoma revealed by reconstruction and comprehensive analysis of the lncrna-mirna-mrna regulatory network. Med Sci Monit. 24, 8250-8263 (2018).
  52. Lu, X., et al. Glycemic status affects the severity of coronavirus disease 2019 in patients with diabetes mellitus: An observational study of ct radiological manifestations using an artificial intelligence algorithm. Acta Diabetol. 58 (5), 575-586 (2021).
  53. Wang, M. H., Liu, Z. H., Zhang, H. X., Liu, H. C., Ma, L. H. Hsa_circrna_000166 accelerates breast cancer progression via the regulation of the mir-326/elk1 and mir-330-5p/elk1 axes. Ann Med. 56 (1), 2424515(2024).
  54. Barutta, F., Bellini, S., Canepa, S., Durazzo, M., Gruden, G. Novel biomarkers of diabetic kidney disease: Current status and potential clinical application. Acta Diabetol. 58 (7), 819-830 (2021).
  55. Casagrande, V., Federici, M., Menghini, R. Timp3 involvement and potentiality in the diagnosis, prognosis and treatment of diabetic nephropathy. Acta Diabetol. 58 (12), 1587-1594 (2021).
  56. Ye, S., et al. Lipidomics profiling reveals serum phospholipids associated with albuminuria in early type 2 diabetic kidney disease. ACS Omega. 8 (39), 36543-36552 (2023).
  57. Thipsawat, S. Early detection of diabetic nephropathy in patient with type 2 diabetes mellitus: A review of the literature. Diab Vasc Dis Res. 18 (6), 14791641211058856(2021).
  58. Zhang, Z., et al. Association of estimated glomerular filtration rate from serum creatinine and cystatin c with new-onset diabetes: A nationwide cohort study in china. Acta Diabetol. 58 (9), 1269-1276 (2021).
  59. Yan, P., et al. Association of remnant cholesterol with chronic kidney disease in middle-aged and elderly chinese: A population-based study. Acta Diabetol. 58 (12), 1615-1625 (2021).
  60. Fonseca-Montano, M. A., Cisneros-Villanueva, M., Coales, I., Hidalgo-Miranda, A. Linc00426 is a potential immune phenotype-related biomarker and an overall survival predictor in pam50 luminal b breast cancer. Front Genet. 14, 1034569(2023).
  61. Li, H., et al. Author correction: Linc00426 accelerates lung adenocarcinoma progression by regulating mir-455-5p as a molecular sponge. Cell Death Dis. 15 (8), 564(2024).
  62. Wu, K., et al. Nf-kappab p65 mediated lnc-traf3ip2 exacerbates renal fibrosis in diabetic kidney disease. Acta Diabetol. 62 (11), 1915-1927 (2025).
  63. Wu, K., et al. Cytosolic hmgb1 accumulation in mesangial cells aggravates diabetic kidney disease progression via nfkappab signaling pathway. Cell Mol Life Sci. 81 (1), 408(2024).
  64. Hao, J., Li, H., Yu, W. Xanthohumol ameliorates diabetic kidney disease through suppression of renal fibrosis by regulating snhg10/mir-378b. Front Pharmacol. 16, 1532517(2025).
  65. Rodriguez, F., et al. Real-world diagnosis and treatment of diabetic kidney disease. Adv Ther. 38 (8), 4425-4441 (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

רפואהגיליון 232גיליון 232החודש ב-JoVEגיליוןסוכרת מסוג 2אבחנה
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.