הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

יצירת תרביות אורגנואידי גידול מקו תאי אדנוקרצינומה ריאתית

298 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70387

⸱

12 ביוני 2026

 ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Genetics and Development of Complex Phenotypes, School of Life Sciences, Fudan University, 2Shanghai Key Laboratory of Lung Inflammation and Injury, Department of Pulmonary Medicine, Zhongshan Hospital, 3National Demonstration Center for Experimental Biology Education, School of Life Sciences, Fudan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מציגים שיטה מהירה, טהורה וחסכונית ליצירת אורגנידים של גידול מקו התאים A549, המתאימה לבדיקות ראשוניות ולמטרות חינוכיות.

תקציר

כאן, אנו מתארים פרוטוקול ליצירת אורגנידים גידוליים שמקורם בקו התאים (CDTOs) מקו תאי אדנוקרצינומה ריאתית אנושית A549. הפרוטוקול כולל הטמעת תאי A549 מורחבים דו-ממדיים במטריג'ל ושמירתם במדיום תרבית תלת-ממדי לתרבית לטווח ארוך. צפיפות זריעה מומלצת של 500 תאים למיקרוליטר נקבעה כתמיכה ביצירת אורגנידים עקביים. ה-CDTO שהתקבלו התאפיינו בצביעה של המטוקסילין ואאוזין (H&E) ואימונופלואורסצנציה (IF). האורגנידים שמרו על ביטוי גבוה של סמני האדנוקרצינומה הריאתית: פקטור השעתוק של בלוטת התריס 1 (TTF-1), חלבון ההידבקות E-Cadherin (ECAD), וחלבון שלד תאי Keratin 7 (KRT7). יתרה מזאת, ביטוי חלבון Zona Occludens 1 (ZO-1) בחיבור הדוק הראה קוטביות לא מבוקרת של אורגנידים גידוליים. פרוטוקול זה מציע פלטפורמה אורגנואידית פשוטה מבחינה טכנית, חסכונית וטהורה למחקר אדנוקרצינומה ריאתית. הפשטות והיכולת לשחזור שלה הופכות אותה גם למתאימה להוראה במעבדה לתואר ראשון, שם היא יכולה לסייע לסטודנטים לרכוש טכניקות בסיסיות של תרבית גידולים אורגנואידי תלת-ממדית במסגרת לוח זמנים מוגבל במעבדה.

מבוא

אורגנואידים הם מבנים תלת-ממדיים (תלת-ממדיים) מאורגנים בעצמם במבחנה, שמקורם בתאי גזע ומסוגלים לשחזר מורכבויות ביולוגיות של איברים אמיתיים במידה ניכרת1. התאים המרכיבים אורגנואידים עשויים להיווצר מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים או מתאי רקמה, כאשר האחרונים כוללים תאי גזע/אב תקינים, תאים ממיינים, ותאי גידול2. בהשוואה למערכות תרביות דו-ממדיות מסורתיות ומודלים של בעלי חיים, אורגנואידים יכולים לחקות בצורה קרובה יותר את התכונות הפיזיולוגיות של גוף האדם תוך מתן גמישות ניסויית גבוהה יותר. כתוצאה מכך, טכנולוגיית האורגנידים יושמה באופן נרחב בפיתוח תרופות3, רפואה מותאמת אישית4, ומודל מחלות5.

מחקרים רבים קבעו מודלים אורגנואידיים למגוון רחב של סוגי סרטן, כולל קולורקטלי6, ערמונית7, לבלב8, קיבה9, כבד10, מרה11, שד12 וגידולים נוירואנדוקריניים. עם זאת, אחד האתגרים המרכזיים במחקר אורגנואידים של גידולים טמון בשמירה על טוהר. לדוגמה, מחקר על סרטן ריאות לא קטן גילה שרק 17% מהאורגנואידים שנמצאו היו גידוליים טהורים, שכן דגימות גידול מכילות לעיתים תערובת של תאים תקינים וממאירים שקשה להפריד במלואם לפני תרבית13. בעיית הזיהום הזו עלולה לגרום להסרת תאי הגידול על ידי התפתחות של תאים שאינם גידוליים, להפריע לקריאות של בדיקות רגישות לתרופות, ולהוביל לניתוחים מולקולריים לא מדויקים, כמו RT-qPCR או Western Blot, שבהם RNA וחלבונים מתאי הגידול מדוללים על ידי פרופורציות בלתי נשלטות של תאים מזהמים.

כדי להתמודד עם בעיה זו, חוקרים בחנו את עיצוב מדיום תרבית סלקטיבי שמנצלים את הפחתת התלות של תאי הגידול בגורמי גדילה מסוימים, ובכך מעכבים צמיחה תקינה של תאים תוך קידום התרחבות תאי הגידול14. בנוסף, מפותחות אסטרטגיות כמו מיון תאים או זיהוי מונוקלונלי לבניית אורגנידים טהורים של הגידול.

פרוטוקול זה מתאר את יצירת אורגנואידים גידולים שמקורם בקו התאים (CDTOs) באמצעות קו תאי אדנוקרצינומה ריאתית אנושית A549, שדווח כי מציג באופן חלקי תכונות דמויות תאי גזע סרטניים, וכן שיפורים בקלונוגניות, פוטנציאל רב-רבטיבי וגידולים בתנאי חוץ-גופה.15. ה-CDTOs שהתקבלו שמרו על ביטוי של סמנים ביולוגיים ייחודיים לקו שושלת: פקטור שעתוק של בלוטת התריס 1 (TTF-1)16, חלבון הדבקה E-Cadherin (ECAD)17, וחלבון שלד תא Keratin 7 (KRT7)16 , והפגינו תכונות פיזיולוגיות אופייניות לאורגנואידים של גידול. מודל זה קל להקים ומכיל רכיבים מוגדרים של תאי סרטן, מה שהופך אותו למתאים לחוקרים חדשים בתחום האורגנואידים של הגידולים או לאלו שמתמודדים עם אובדן זהות גידול בתרביות אורגנית ראשוניות. יישומים פוטנציאליים כוללים בדיקות רגישות ראשוניות לתרופות18, מחקרי מיקרוסביבה של גידול19, והכשרה חינוכית בטכניקות תרבית תלת-ממדית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

טמפרטורת החדר במעבדה היא 22–24 מעלות צלזיוס ונקראת RT. מומלץ להשתמש בצנטריפוגה עם דלי נדנדה. החומרים והציוד בהם משתמשים מופיעים בטבלת החומרים.

1. הקמת אורגנואידים ראשוניים מסוג A549

  1. הכנה ואיסוף תאי A549
    1. הכן צלחת בגודל 6 ס"מ המכילה תאי A549 ב-70% חיבור גוף. חימום טריפל ו-PBS ל-37 מעלות צלזיוס. חשב את כמות התאים ונפח המטריג'ל לפי תכנון הניסוי וטבלה 1.
      1. ההפלה דרשה ממטריגל אליקווט עם יתירות לפחות לשני בארות על הקרח למשך לפחות 60 דקות. הכינו לוחות פוליסטירן וטופלו ב-TC כדי לאפשר לכיפות להישאר חצי כדוריות.
      2. הכינו טרי מדיום דו-ממדי (מדיום הנשר המותאם של דולבקו המכיל 10% סרום בקר עוברי) ומדיום תלת-ממדי (מדיום אורגנואידי ריאות אנושי). מדיום תלת-ממדי יכול להיווצר מערכות מסחריות או לפי עבודותיהם של זאקס, נ. ואחרים ממעבדתו של הנס קלבר20.
        הערה: צלחת בגודל 6 ס"מ יכולה בדרך כלל להניב כ-5,000,000 תאים לאחר העיכול. הפחת את מספר תאי הקלט לעיצוב הניסוי. לוחות המיועדים להדמיה קונפוקלית באמצעות תחתית זכוכית אינם מתאימים למטריג'ל ליצירת צורה תלת-ממדית נכונה.
    2. שאפו את המדיום הדו-ממדי המשומש ושטפו את התאים פעם אחת עם 1 מ"ל PBS כדי להסיר סרום שנותר. שאיפת PBS, הוספת 1 מ"ל של TrypLE מחומם מראש, ודחף את הפלטה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 4 דקות.
    3. התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ. כאשר הציטופלזמה נסוגה והתאים מאבדים קשרים בין-תאיים, הוסף נפח שווה (1 מ"ל) של מדיום דו-ממדי טרי כדי לסיים את התגובה האנזימטית.
    4. הפיפטה בעדינות כדי לנתק ולהחזיר את התאים הדביקים מפני השטח של התרבית. העבר את תליית התא לצינורות צנטריפוגה של 1.5 מ"ל ובצנטריפוגה ב-300 × גרם למשך 3 דקות ב-RT כדי לשחק את התאים.
    5. זרוק את הסופרנטנט ותשהה מחדש את כדור התא במדיה דו-ממדית של 1 מ"ל. לדלל 10 מיקרוליטר תאי תאי תכשיה ל-100 מיקרוליטר ולספור את מספר התאים באמצעות המוסיטומטר. חשב את הנפח הנדרש לפי שלב 1.1.1 ושאיף לצינור צנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל עם קצוות שטופים מראש.
  2. זריעה של תאים שנקטפו לתוך Matrigel
    1. הכינו קרח וקפודי פיפטה במקרר בטמפרטורה של מינוס 20°C למשך דקה והשתמשו בקצוות עם עמידה נמוכה אם אפשר. ודא שלא נשארים גבישים באליקוות של Matrigel ושאין בועות שנוצרות כשהקצה נכנס לתמיסה.
    2. צנטריפוגה את הצינור המכיל תאים שנקטפו ב-300 × גרם ב-RT וזרקו את הסופרנטנט. שים את הצינור על הקרח. השתמש בקצות פיפטה מקוררים מראש כדי לשאוב לאט את נפח המטריג'ל הנדרש והוסף אותו לכדור על הקרח. החזיר את ההשעה רק באמצעות העצירה הראשונה של הפיפטה באיטיות על הקרח. אנא אל תשאירו קרח ליותר מ-10 שניות אם נדרש תצפית.
    3. השתמש בקצוות פיפטה מקוררים מראש ושמור על התערובת על קרח. פזר אליקו אחד מהתערובת למרכז כל באר. משכו את הפיפטה לאט בזמן הזריקה, תוך שימוש רק בעצירה הראשונה כדי למנוע היווצרות בועות.
      הערה: התערובת צריכה ליצור מבנה תלת-ממדי בצורת כיפה במרכז. החזירו את התערובת לפני שתמשיכו לבאר הבאה. אם אפשר, הימנעו משימוש בבארות הקצה והוסיפו PBS לבארות אלו.
    4. דגרו את הפלטה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס באינקובטור של 5% CO₂ למשך 40 דקות כדי לאפשר פולימריזציה ג'לית. לאחר שהמטריג'ל התקשה, הוסף בזהירות מדיום תלת-ממדי לאורך קיר הבאר, והמשך בעיבוד בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
      הערה: הימנעו מיצירת בועות בזמן ההזנה. אם נוצרות בועות, הימנע משימוש בחלק הזה של התערובת.
    5. במהלך הגידול, החלף את המדיום התלת-ממדי כל 3 ימים או בכל פעם שנצפה שינוי צבע (מוורוד לצהוב). בחן את צמיחת האורגנידים תחת מיקרוסקופ הפוך בכל שינוי מדיום, ותיעד מורפולוגיה צילום למעקב אחר התפתחות מבנית.
      הערה: אורגנואידים צריכים להיות צפופים ומסובכים בקוטר הארוך מ-30 מיקרון במקום להתפרק או להתפצל כפי שמצוין על ידי 5000 תאים/מיקרוליטר (איור 1D).

2. קיבוע, הטמעה וחתך של אורגנואידים

  1. הכינו תרביות אורגנואידים בימים 6–9. הסר את מדיום התרבית מלוח התרביות של התא. נתק בעדינות את האורגנואידים על ידי פיפטינג של 1 מ"ל PBS קר, והעבר אותם לצינור של 1.5 מ"ל ששטוף מראש עם 5% BSA כדי למנוע היצמדות. אפשר לאורגנואידים לשקוע באופן טבעי על ידי כוח הכבידה על הקרח ולהסיר בזהירות את הסופרנטנט.
  2. הוסף 1 מ"ל PBS קר כדי להחזיר את הכדור. אפשר לאורגנואידים לשקוע באופן טבעי בכוח הכבידה לפחות 5 דקות ולהסיר בזהירות את הסופרנטנט. אם חלק מהאורגנואידים אינם מצליחים לשקוע, יש לצנטריפוגה לזמן קצר ב-200 × גרם למשך דקה אחת בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס כדי לאסוף אותם. שלב זה יבוצע מספר פעמים וייקרא 'שטיפה קטנה'.
  3. בצע את השטיפה הקטנה פעמיים כדי להסיר שאריות מטריג'ל. אם שאריות ה-Matrigel נשארות, הוסיפו ריכוז סופי של 10 mM EDTA ל-PBS קר בזמן הכביסה.
    אזהרה: העבר את הדגימות למכסה האדים. הוסף 4% פאראפורמלדהיד (PFA) מספיק לכסות את האורגנואידים, וקבע על קרח במשך שעה בתוך מכסה אדים. להשליך את הקיבע ולבצע את השטיפה הקטנה פעמיים. המשך עם שלב 4.1 לצביעת IF.
  4. לאחר שהאורגנואידים מתיישבים בתחתית הצינור, יש להשליך את הסופרנטנט ולחמם את הדגימות באמבט מתכת בטמפרטורה של 70–75 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות כדי למנוע התקשות אגרוזית מהירה במהלך שלב 2.7.
  5. הכינו 3% אגרוז ב-1× PBS, וחממו את התערובת באמבט מים במיקרוגל עד שהיא מומסת לחלוטין ושקופה. הימנעו מהרתחה כדי למנוע אובדן נפח או שינויים בריכוז האגרוז.
  6. החזירו במהירות את האורגנואידים הקבועים ל-30–50 מיקרוליטר של אגרוז 3%, תוך הבטחת פיזור אחיד, וקיררו על קרח במשך 20–30 דקות עד להתקשות, תוך הימנעות מיצירת בועות.
  7. לאחר שתערובת האגרוז-אורגנואיד התקשה, יש להסיר בזהירות את בלוק האגרוז מהצינור באמצעות מחט ולהעביר אותו לקלטת רקמה מסומנת עם רקמה.
  8. יש לטבול ברצף את הקסטה המכילה את בלוק האגרוז בתמיסות אתנול מדורגות (30%, 50%, 70% [ניתן לאחסן ללילה בטמפרטורה של 4°C], 80%, 90%, 95%, 100% ו-100%) לייבוש. דגרו כל שלב על פלטפורמה רועדת ב-20 סל"ד למשך 30 דקות.
  9. המיס מראש את בלוקי השעווה לפרפין בתנור לפני השימוש בטמפרטורה של 65 מעלות צלזיוס. העבר את האורגנואידים המיובשים המוטמעים באגרוז אל הקסילן לניקוי. טבלו פעמיים, כל אחת למשך 15–20 דקות, כדי להסיר שאריות אתנול.
  10. העבר את קלטות הרקמה ברצף לאמבטיית פרפין 1 למשך 45 דקות, ואז לאמבטיית פרפין 2 לעוד 45 דקות.
  11. הנח את קלטות הרקמה ותבניות המתכת בתא הפרפין המותך של תחנת ההטמעה. הסר את האורגנואיד או דגימת הרקמה מהקסטה ומקם אותו במרכז תבנית המתכת. הנח את התבנית על פלטה קרה כדי לקבוע את כיוון הדגימה.
  12. מניחים את קלטת הטישו מעל תבנית המתכת, מלאו בפרפין מותך נוסף, ותנו לה להתקרר על הפלטה הקרה לפחות 60 דקות. לאחר שבלוק הפרפין התגבש לחלוטין, הסר את תבנית המתכת ואחסן את בלוק האורגנואיד המוטמע בפרפין בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לחתיכה.
  13. חתך את בלוקי האורגנואיד המוטבעים בפרפין באמצעות מיקרוטום. ודאו שעובי כל חלק אחיד כדי לאפשר צביעה והדמיה נוספת.
  14. אפשר לחלקים החתוכים לצוף באמבט מים בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס כדי לאפשר התרחבות מלאה של סרטי הפרפין. ודאו שכל חלק מתפשט כשכבה אחת, ללא קמטים; להשליך כל קטע מקופל או חופף.
  15. התקן את החלקים המורחבים על שקופיות מיקרוסקופ דביק על ידי הטמעת המגלשה בזווית קלה מתחת לקטע והרמת אותה אנכית כדי ללכוד את הרקמה. סמן את השקופיות בעיפרון כדי לשמור על זיהוי הדגימה במהלך העיבוד הבא.

3. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E)

  1. אפים את השקופיות המכילות רקמה או חלקי אורגנואיד בתנור של 60°C למשך 1–2 שעות כדי להבטיח הידבקות נכונה ולהסיר את שארית הפרפין.
  2. הסרת שעווה מהחלקים ברצף על ידי הטבילה בקסילן I למשך 15 דקות, קסילן II למשך 15 דקות, ואז התייבש מחדש דרך סדרת אתנול מדורגת של 100%, 100%, 95%, 90%, 80% ו-70% כל אחד למשך 5 דקות. לאחר מכן, שטפו את השקופיות במים מזוקקים כפול (ddH₂O) פעמיים, כל אחת למשך 5 דקות.
  3. צבעו את החלקים בהמטוקסילין במשך 5 דקות, שטפו במי ברז זורמים במשך 1–2 דקות, ואז התמיינו באלכוהול חומצי 1% למשך 2 שניות. שטפו שוב במי ברז למשך 1–2 דקות, ואז הלבנו את הגרעינים במי אמוניה 1% למשך 5 שניות, ואחריהם שטיפה אחרונה במי ברז למשך 1–2 דקות.
  4. ייבשו את החתכים בסדרת אתנול מדורגת של 70%, 80%, 90% ו-95% כל אחד למשך 3 דקות, ואז צבעו עם אאוזין בתמיסת אאוזין מבוססת אלכוהול למשך 10 דקות.
  5. שטוף את החלקים פעמיים באתנול מוחלט, כל אחד למשך 5 דקות.
    הערה: עבור אאוזין מבוסס אלכוהול, יש להבטיח ייבוש של עד 95% אתנול לפני הצביעה. לאאוזין מסיס במים, בצעו צביעה לפני הייבוש.
  6. פנו את החלקים על ידי הטבילה פעמיים בקסילן, כל אחת ל-5 דקות, והשאירו אותם בקסילן עד ההרכבה.
  7. התקן את המחסניות מיד לאחר ההסרה מהקסילן באמצעות מדיום הרכבה ניטרלי בשרף, תוך הימנעות זהירות מבועות אוויר.
  8. ייבשו באוויר את השקופיות המותקנות ב-RT למשך 30–60 דקות, ואז התבוננו תחת מיקרוסקופ קל.
    הערה: התקנה מיידית לאחר ניקוי הקסילן מונעת חמצון ומבטיחה בהירות אופטית.

4. צביעת אימונופלואורסצנציה מלאה

  1. המשך מהשלב 2.4. הוסף 1 מ"ל תמיסת חסימה וחדירות (5% BSA + 0.3% Triton X-100) לגלגור והדגר ב-RT למשך 60 דקות או ב-4°C כנקודת עצירה למשך 1–2 ימים.
  2. לדלל נוגדנים ראשוניים ומשניים בהתאם ליחס המומלץ של היצרן בתמיסת החסימה והחדירה. שטיפה קטנה פעם אחת והוספת 200 מיקרול נוגדנים ראשוניים מדוללים לכדור. דגרו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס במהלך הלילה.
  3. בצע את השטיפה הקטנה 3 פעמים והוסף 200 מיקרוליטר נוגדנים משניים מדוללים לכדור. תדגר ב-RT ל-60 דקות.
  4. לאחר מכן, בצע את השטיפה הקטנה 3 פעמים. הוסיפו 15 מיקרוליטר מדיום התקנה כדי לתלות מחדש את הכדור והניחו את המדיום המכיל אורגנואידים על סלייד זכוכית. מרחי לאט קאברסליפ על המדיום ואטמו את הכיסוי עם לק. אין לדחוס ידנית את הכיסוי ואל תתן למדיום ההרכבה להתפשט במתח הפנים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

התהליך הכללי של פרוטוקול זה כולל הרחבת תאי A549 דו-ממדיים לשלב האקספוננציאלי (איור משלים 1A) ומעבר לחומרים תלת-ממדיים ליצירת אורגנואידים (איור 1A). בעת הקפסולציה במטריג'ל, התאים התרבו והרכיבו את עצמם, בעיקר יוצרים אורגנואידים מונוקלונליים (איור 1B). המורפולוגיה הצפופה והמסובכת שלו הייתה אחידה לאורך כל המעבר (איור משלים 1C). בהשוואה לכך, רוב המבנים הללו היו כדוריים וגדלו בגודלם עם המשך התרבות; שבר נדבק לתחתית הלוח מההתחלה, מה שיצ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

פרוטוקול זה מתאר שיטה ליצירת אורגנידים של גידולים שמקורם בקו התאים A549 אדנוקרצינומה ריאתית, המותאמים לפשטות טכנית, שחזוריות ושימוש חינוכי. שלושה פרמטרים קובעים באופן קריטי את ההצלחה: מצב התא ההתחלתי, ניסוח התווך, והרכב המטריצה. בנוסף, משך התרבית אינו מומלץ לעלות על 14 ימים. להלן פרמטרים מרכזיים ופתרון תקלות.

מצב התא ההתחלתי
התאים נשמרו במספר מעברים נמוך (<20 מעברים) כדי למזער נדידה גנטית וברירה קלונלית. תאים נקטפו במהלך שלב הצמיחה הלוגריתמ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים לחשוף.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי תוכנית ההוראה והלמידה של פודאן, המכון הלאומי למחקר לחומרי הוראה, והתוכנית הלאומית להכשרת כישרונות בתחומים בסיסיים (מס' J1210012), וכן על ידי תוכנית טיפוח תלמידים מצטיינים בתחומים בסיסיים של משרד החינוך (מס' 20211021). איור 1A נוצר ב-BioRender (Joe, Z. (2026) https://BioRender.com/0qi2gmd).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
1.5 mL Micro Centrifuge tubeBiofilCFT003015
A549 [A-549]human non-small cell lung cancer cellsZQXZbioZQ0003STR: Amelogenin: X,Y; CSF1PO: 10,12; D13S317: 11; D16S539: 11,12; D5S818: 11; D7S820: 8,11; TH01: 8,9.3; TPOX: 8,11; vWA: 14. Mycoplasma was negetive when purchased was tested every 2 weeks. Passage number within 10 passages from the P1 aliquots of the purchased batch was used.
Advanced DMEM/F12Gibco12634010
Anti-E Cadherin antibodyAbcam ab231303
Anti-Fade Mounting MediumYEASEN 36307ES08
Anti-HIF-1 alpha antibodyAbcam ab51608
Biological Safety CabinetNuaire LABGARDNU-540
Biological Tissue Embedding MachineKEDEEKD-BM
BSASigma A1933
Cell-Grade BSASigma A1933-100G
CentrifugeEppendorfCentrifuge 5702 RSwing bucket; Mild to low speed.
Centrifuge tubeBiofilCFT920150
Citrate Antigen Retrieval Solution (pH 6.0)ZSGB-BIO ZLI-9065
CryostageKEDEEKD-BL
Cytation 5 Cell Imaging Multimode
 Reader		BiotekCytation 5
Cytokeratin 7 (KRT7) Rabbit mAbAbclonal A4357
DMEMGibco11965092
DMSOSolarbio D8371
Donkey SerumSolarbioSL050
Dulbecco's Modified Eagle MediumGibco11965118
Eclipse Ts2 Inverted MicroscopeNikon Eclipse Ts2
Eosin Staining Solution (Alcohol-Soluble)Servicebio G1001
FBSNobimpexB118-500
Forma Steri-Cycle i160 CO2 IncubatorThermo Scientifici60
Hematoxylin Bluing SolutionServicebio G1040
Hematoxylin Differentiation SolutionServicebio G1040
Hematoxylin Staining SolutionServicebio G1004
HemocytometerSolarbioYA0810
Human Lung Adenocarcinoma Organoid Medium (3D medium)PMO Bio HC1001
Immunohistochemistry (IHC) PenZSGB-BIO ZLI-9305Store in 4°C
Laser Confocal Microscope  FV3000OlympusFV3000Usual parameter range: PMT Voltage: 500 ± 200 V; Laser Transmissivity: 5 ± 3%; Offset: 3 %
Manual Rotary MicrotomeLeicaRM2235
Metal BathALLSHENGMK-3000
Microwave OvenGalanz
Nail PolishLete
Neutral Balsam (Mounting Medium for Microscopy)BeyotimeC0173
Organoid-Specific Extracellular Matrix GelPMO Bio BM1001
PBSWISENT 311-010-CL
Peroxidase Blocking SolutionBeyotime P0100A
PipettesEppendorf312300063/312300020/312400083
Pipettes tipsAxygen14-222-692/14-222-723/14-222-869Consider using low retention tips if possible.
Three-Dimensional ShakerSCILOGEXSK-D3309-ProLow speed.
Tissue Flotation Water BathKEDEEKD-P
Triton X-100VWR92046-34-9
Trypan BlueGibco 15250061
TryPLEGibco12605028
TTF1 Recombinant Monoclonal AntibodyHUABIO HA720067

מקורות

  1. Huch, M., Koo, B. K. Modeling mouse and human development using organoid cultures. Development. , (2015).
  2. Hofer, M., Lutolf, M. P. Engineering organoids. Nat Rev Mater. , (2021).
  3. Kim, M., et al. Patient-derived lung cancer organoids as in vitro cancer models for therapeutic screening. Nat Commun. , (2019).
  4. Al Shihabi, A., et al. Personalized chordoma organoids for drug discovery studies. Sci Adv. , (2022).
  5. Clevers, H. Modeling development and disease with organoids. Cell. , (2016).
  6. Van de Wetering, M., et al. Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients. Cell. , (2015).
  7. Gao, D., et al. Organoid cultures derived from patients with advanced prostate cancer. Cell. , (2014).
  8. Boj, S. F., et al. Organoid models of human and mouse ductal pancreatic cancer. Cell. , (2015).
  9. Yan, H. H. N., et al. A comprehensive human gastric cancer organoid biobank captures tumor subtype heterogeneity and enables therapeutic screening. Cell Stem Cell. , (2018).
  10. Guan, Y., et al. A human multi-lineage hepatic organoid model for liver fibrosis. Nat Commun. , (2021).
  11. Roos, F. J. M., et al. Human branching cholangiocyte organoids recapitulate functional bile duct formation. Cell Stem Cell. , (2022).
  12. Guillen, K. P., et al. A human breast cancer-derived xenograft and organoid platform for drug discovery and precision oncology. Nat Cancer. , (2022).
  13. Dijkstra, K. K., et al. Challenges in establishing pure lung cancer organoids limit their utility for personalized medicine. Cell Rep. , (2020).
  14. Xu, Z., et al. Establishment of novel colorectal cancer organoid model based on tumor microenvironment analysis. Life Med. , (2024).
  15. Xia, H., et al. Identification and isolation of cancer stem cells from A549 cells. Zhongguo Fei Ai Za Zhi. , (2013).
  16. Nakata, J., Whittall, I., Russo, M. G., Su, S., Friedberg, J. Systematic review of lung cancer with breast metastasis. J Thorac Dis. , (2025).
  17. Kumari, P., Dash, S., Samanta, D. E-cadherin a potential biomarker in cancer and a therapeutic target. Biochim Biophys Acta Rev Cancer. , (2025).
  18. Yun, W., et al. Tumor organoids may be more suitable for clinical personalized chemotherapeutic drug screening in lung adenocarcinoma. Front Cell Dev Biol. , (2025).
  19. Monleón-Guinot, I., et al. Morphological characterization of human lung cancer organoids cultured in type I collagen hydrogels a histological approach. Int J Mol Sci. , (2023).
  20. Sachs, N., et al. Long-term expanding human airway organoids for disease modeling. EMBO J. , (2019).
  21. Liu, Y., et al. Modeling lung adenocarcinoma metastases using patient-derived organoids. Cell Rep Med. , (2024).
  22. Peng, K., et al. HIF-1α promotes kidney organoid vascularization and applications in disease modeling. Stem Cell Res Ther. , (2023).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

אורגנואידים מקווי תאיםתאי A549תרבית תאים בתלת-ממדהשכבה במטריגלהיווצרות אורגנואידיםצביעה אימונופלורסצנטיתצביעת המטוקסילין-אאוזיןביטוי סממני גידול
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.