הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

השפעות משככי כאבים ונוגדות דלקת של סוכן הציפוי שושאן ג'ינלווהאן ומנגנון העור שלו

238 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70480

⸱

30 באפריל 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Qingdao Academy of Chinese Medicinal Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, 2State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co. Ltd, 4State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Laboratory of Epigenetics and Immunology, West China Institute of Women and Children's Health, NHC Key Laboratory of Chronobiology, Department of Obstetric and Pediatric, Key Laboratory of Birth Defects and Related Diseases of Women and Children of MOE, State Key Laboratory of Biotherapy, West China Second University Hospital, Sichuan University

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

מחקר זה מציג גישה משולבת להערכת ההשפעות המשככות הכאבים והאנטי-דלקתיות של חומר הציפוי למשכך כאבים Xueshan Jinluohan. ההשפעות היו תלויות באזור ובזמן, וניתוח טרנסדרמלי זיהה את בנזוילקונין כרכיב העיקרי החודר עם שחרור מבוקר דיפוזיה.

תקציר

תכשירים מקומיים לרפואה סינית מסורתית (TCM) משמשים באופן נרחב לניהול מצבים דלקתיים וכאבים, משום שהם מספקים השפעות טיפוליות מקומיות תוך הפחתת תגובות לוואי מערכתיות פוטנציאליות. עם זאת, המאפיינים הפרמקודינמיים והמנגנונים הטרנסדרמליים שעומדים מאחורי רבות של נוסחאות קליניות עדיין לא מאופיינים מספיק. סוכן הציפוי להקלה על כאב Xueshan Jinluohan (XJCA), נוסחה תרופתית טיבטית, נרשם בדרך כלל לכאב דלקתי, אך השפעת אזור המריחה, משך הפעולה והתרומה היחסית של השפעות מקומיות לעומת מערכתיות לא הוערכו באופן שיטתי. מחקר זה קובע מסגרת מתודולוגית משולבת ב-in vivo–in vitro לבחינת פרמטרים אלו. נעשה שימוש במספר מודלים משלימים של בעלי חיים להערכת פעילות משככת כאבים מרכזית והיקפית ותגובות דלקתיות חריפות, שאפשרו הערכת השפעות אזוריות, זמן ומקומיות לעומת תלויות מערכתיות. במקביל, מערכת תאי דיפוזיה של פרנץ בשילוב עם ספקטרומטריית מסה טנדם (UPLC-MS/MS) בעלת ביצועים גבוהים במיוחד (UPLC-MS/MS) שימשה לאפיון קינטיקת הספיגה העור של שני אלקלואידים עיקריים, בנזואילקונין ואקוניטין. XJCA הראה השפעות משמעותיות של משככי כאבים ואנטי-דלקתיים התלויים בשטח ובזמן, ושטחי יישום גדולים יותר היו קשורים לתרומה מערכתית גבוהה יותר ליעילות המשכך כאבים. ניתוח קינטי טרנסדרמלי גילה שבנזוילקונין הראה שטף יציב גבוה בהרבה ושחרור מבוקר דיפוזיה התואם למודל היגוצ'י, בעוד שאקוניטין הראה חדירות נמוכה יותר ופרופיל שחרור מורכב יותר. ממצאים אלו מקשרים התנהגות מסירה טרנסדרמלית לתוצאות פרמקודינמיות שנצפו ומספקים מסגרת מובנית להערכה ואופטימיזציה של נוסחאות TCM מקומיות.

מבוא

דלקת וכאב הם תגובות פיזיולוגיות ופתולוגיות קשורות זו לזו שממלאות תפקיד מרכזי בהגנה של הגוף מפני פציעה וזיהום. עם זאת, דלקת וכאב מתמשכים או מופרזים, כגון אוסטיאוארתריטיס, דלקת מפרקים שגרונית, או כאב פוסט-טראומטי, עלולים להוביל לנזק לרקמות שעלול לפגוע קשות בתפקוד הפיזי ובבריאות הנפשית של המטופלים 2,3. נכון להיום, הטיפולים הקליניים לדלקת וכאב מתבססים בעיקר על תרופות אנטי-דלקתיות שאינן סטרואידיות (NSAIDs) (כגון דיקלופנק, איבופרופן) ואופיאטים. בעוד ש-NSAIDs משמשים באופן נרחב בשל השפעותיהם האנטי-דלקתיות ומשככי כאבים, מתן דרך הפה גורם לעיתים קרובות לגירוי במערכת העיכול, נזק לכלייתי וסיכונים קרדיווסקולריים4. אופיאטים, למרות שהם משככי כאבים חזקים, קשורים להתמכרות, דיכוי נשימתיותופעות לוואי חמורות נוספות. כתוצאה מכך, יש צורך קליני גובר בחלופות בטוחות יותר. תכשירים מקומיים, שמובילים תרופות ישירות לאתר הפעולה, מציעים פתרון אסטרטגי להפחתת תופעות הלוואי המערכתיות הללו. עם זאת, יעילותן תלויה מאוד ביכולת התרופה להתגבר על מחסום העור, גורם שיכול להגביל את יכולת התרגום של ממצאים פרה-קליניים, במיוחד עבור מולקולות גדולות יותר או כאלה עם ליפופיליות נמוכה 8,9. לכן, פיתוח טיפולים חלופיים בטוחים ויעילים, במיוחד תכשירים מקומיים עם פעולה מקומית וחשיפה מערכתית מינימלית, הפך למוקד מחקר בפרמקולוגיה.

תכשירים מקומיים ל-TCM בעלי היסטוריה ארוכה של יישום בטיפול בדלקת וכאב. היתרונות שלהם כוללים פעולה ישירה באתר הפגע, הפחתת תופעות לוואי מערכתיות ושחרור תרופות ממושך10,11. XJCA הוא ג'ל ליצירת סרט TCM המשמש קלינית, המורכב ממספר רכיבים צמחיים. הוא נמצא בשימוש נרחב בסין להקלה על כאב ודלקת הנגרמים מאוסטאוארתריטיס, פגיעות ברקמות רכות ונוירלגיה 12,13,14. עם זאת, הראיות המדעיות ליעילותו מוגבלות, ומאפיינים פרמקודינמיים מרכזיים, כגון הקשר בין שטח היישום ליעילות, מהלך הפעולה בזמן וההבדל בין השפעות מקומיות למערכתיות, נותרו לא ברורים. פערים אלו מונעים את היישום הקליני הרציונלי של XJCA.

ספיגה דרמלית היא גורם מרכזי המשפיע על ההשפעה הטיפולית של תכשירים מקומיים. כמחסום העיקרי, העור מגביל את חדירת התרופות למחזור הדם המערכתי או לרקמות המקומיות. עבור XJCA, הבנת מאפייני הספיגה הטרנסדרמלית של המרכיבים הפעילים היא קריטית להבהרת ההשפעות הפרמקודינמיות שלו ולאופטימיזציה של צורת המינון. מחקרים קודמים על תכשירים ל-TCM הראו כי אלקלואידים (למשל, נגזרות אקוניטין) הם רכיבים פעילים חשובים עם השפעות אנטי-דלקתיות ומשככות כאבים 17,18. בנזוילקונין ואקוניטין הם שני אלקלואידים עיקריים ב-XJCA 19,20, ותכולם והתנהגותם הטרנסדרמלית עשויים להשפיע ישירות על יעילות ה-XJCA. עם זאת, אין דיווח על הספיגה הטרנסדרמלית של שני המרכיבים הללו ב-XJCA, ולא על המאפיינים הקינטיים ומנגנוני השחרור שלהם.

כדי למלא את פער המחקר הזה, מחקר זה שואף לפתח ולאמת מסגרת מתודולוגית שיטתית להערכת נוסחאות TCM טופיקליות, תוך שימוש ב-XJCA כמחקר מקרה. המטרה הייתה להדגים גישת הערכה משולבת הכוללת: (1) מודל(ים) פרמקודינמיים בחיים שנועדו לנתח השפעות אתר היישום, משך הטיפול והיחס בין מתן תרופות מקומי לעומת מערכתי על היעילות; ו-(2) הערכה קינטית טרנסדרמלית במבחנה באמצעות תאי דיפוזיה של פרנץ ו-UPLC-MS/MS למדידת ספיגה ושחרור דרך העור של אלקלואידים פעילים מרכזיים. השענו כי היעילות הפנימית של XJCA, במיוחד התלות באזור ובזמן, מונעת בעיקר על ידי הקינטיקה הטרנסדרמלית של מרכיביו המרכזיים. על ידי קישור פרמטרי יעילות ב-vivo לנתונים קינטיים במבחנה מתאימים, גישה זו מספקת הבנה מכנית של האופן שבו העברה טרנסדרמלית משפיעה על הפרמקודינמיקה של הכנות TCM מקומיות.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נערך בהתאם להנחיות לסקירה אתית של רווחת בעלי חיים במעבדה (GB/T 35892-2018) ולדעות המנחות על טיפול הומני בבעלי חיים במעבדה. כל ההליכים בבעלי חיים אושרו על ידי ועדת האתיקה הניסיונית של אוניברסיטת צ'נגדו לרפואה סינית מסורתית (אישור מס' TCM-09-315).

בעלי חיים ניסיוניים ומגורים
עכברי קונמינג חסרי פתוגנים (SPF) (20~25 גרם, זכר/נקבה = 1:1) ועכברי SPF Sprague-Dawley (SD) (180~200 גרם) שימשו. בעלי החיים הוחזקו בתנאים מבוקרים: מחזור אור/חושך של 12 שעות, טמפרטורה של 23 ± 2 מעלות צלזיוס, ולחות של 60% ± 5%, עם גישה חופשית למזון ולמים. כדי להעריך באופן מקיף את הפרופיל המשכך כאבים והאנטי-דלקתי של XJCA, נעשה שימוש בסדרה של מודלים של עכברים ב-in vivo. בדיקת הלוח החם בחנה את סף הכאב המתווך המרכזי; מבחן הפורמלין הבחין בין נוירוגני (שלב I) לכאב דלקתי (שלב II); בדיקת בצקת האוזן שנגרמה על ידי קסילן העריכה פעילות אנטי-דלקתית חריפה; ומבחן ההתפתלות שנגרם מחומצה אצטית מדמה כאב דלקתי ויסרלי. שימו לב ש-XJCA הוא ג'ל מוכן לשימוש ליצירת סרט. אין צורך בהכנה נוספת לפני ההגשה.

השפעת אזור היישום על יעילות משככת כאבים ונוגדת דלקת
עכברי קונמינג SPF חולקו באקראי ל-4 קבוצות (זכר/נקבה = 1:1): קבוצת ביקורת נורמלית (NC), קבוצת XJCA קטנה (1×1 ס"מ, 1 ס"מ2) (XJCASAAG), קבוצת XJCA בגודל בינוני (1×2 ס"מ, 2 ס"מ2) (XJCAMAAG), וקבוצת XJCA גדולה (1.5×2 ס"מ, 3 ס"מ2) (XJCALAAG). XJCA הוחל על 0.015 גרם לס"מ 2 (0.15 מ"ל לעכבר) במשך 7 ימים רצופים. קבוצת NC קיבלה תמיסת מלח רגילה באותו אופן. ב-120 דקות לאחר המתן האחרון, הוערכה יעילות משכך הכאבים באמצעות בדיקות הפלטה החמה והפורמלין.

במבחן הפלטה, העכברים עברו סינון מראש על ידי הצבתם על פלטה חמה בטמפרטורה קבועה שנשמרה על 55 ± 0.5 מעלות צלזיוס. נרשמה השהיה של משיכת כפות רגליים (PWL), ורק עכברים עם PWL בסיסי בין 5 ל-30 שניות נבחרו (n = 40, זכר/נקבה = 1:1). לאחר 7 ימי טיפול, נמדד PWL במרווחים של 30 דקות 3 פעמים, והערך הממוצע נרשם. הוחל זמן חיתוך של 60 שניות כדי למנוע נזק לרקמות.

בבדיקת הפורמלין (n = 40, זכר/נקבה = 1:1), לאחר 7 ימי טיפול, הוזרק 1% פורמלין (1 מ"ל/ק"ג) תת-עורית לכף הרגל האחורית הימנית. מיד לאחר ההזרקה, העכברים הוכנסו לתאי תצפית נפרדים. התנהגויות הקשורות לכאב (ליקוק, הרמה ובריחה) נרשמו במהלך שלב I (0–10 דקות, כאב נוירוגני) ושלב II (15–30 דקות, כאב דלקתי). ההזרקה המוצלחת אושרה על ידי נפיחות נראית לעין של כף הרגל.

הערכת יעילות משככי כאבים ונוגדי דלקת תלויה בזמן
מאה עשרים עכברי קונמינג SPF חולקו באקראי לשלוש קבוצות (n = 10 לכל נקודת זמן, זכר/נקבה = 1:1): קבוצת מודל ביקורת (MC), קבוצת XJCALAAG (1.5×2 ס"מ, 3 ס"מ2), וקבוצת ביקורת חיובית לדיקלופנק דיאתילאמין אמולג'ל (DDE). ה-XJCA (0.015 גרם/ס"מ 2, 0.15 מ"ל/עכבר) וה-DDE (0.016 גרם/ס"מ2, 0.15 מ"ל/עכבר) יושמו במשך 7 ימים רצופים, בעוד שקבוצת ה-MC קיבלה סליין רגיל. בשעה 2, 4, 6 ו-8 שעות לאחר המתן האחרון, בוצעו גם בדיקת בצקת האוזן שנגרמה על ידי קסילן וגם בדיקת ההתפתלות שנגרמה על ידי חומצה אצטית.

בבדיקת בצקת האוזן שנגרמה על ידי קסילן, הונחו 30 מיקרוליטר קסילן על שני צידי האוזן הימנית (קבוצת MC קיבלה סליין תקין), ולאחר 60 דקות, העכברים הורדמו בפנטוברביטל נתרן (30 מ"ג/ק"ג, i.p.) והוקרבו; דיסקי האוזן (בקוטר 8 מ"מ) נקודבו ונשקלו לאחר מכן. דרגת בצקת האוזן חושבה כמשקל דיסק האוזן הימנית פחות משקל הדיסק של האוזן השמאלית, ושיעור העיכוב נקבע כ-[(דרגת בצקת קבוצת MC – דרגת בצקת קבוצת הטיפול) / דרגת בצקת קבוצת MC] × 100%. מכה עגולה באוזן (קוטר 8 מ"מ) נלקחה מאותו מיקום על האוזניים השמאלית והימנית, ורקמת האוזן נשקלה באמצעות מאזן אלקטרוני.

בבדיקת ההתפתלות שנגרמה על ידי חומצה אצטית, תמיסת חומצה אצטית 0.6% (0.1 מ"ל / 10 גרם) הוזרקה לתוך הפריטונה, וזמני תגובה של התפתלות (הארכת הגפה האחורית, התכווצות בטן וסיבוב הגוף) נרשמו תוך 20 דקות. מיד לאחר הזרקת חומצה אצטית, העכברים הוכנסו לכלובי תצפית אישיים. קצב עיכוב ההתפתלות חושב לפי הנוסחה הבאה: [(זמני התפתלות בקבוצת ה-MC – זמני הפיתול בקבוצת הטיפול)/זמני התפתל בקבוצת ה-MC]×100%.

השוואה בין יעילות משכך כאבים מקומית לעומת מערכתית
כדי להפריד בין משכי כאבים מוגבלים מקומית מהשפעות הנובעות מספיגה דרמלית והפצה מערכתית, תכננו שני משטרי מתן עם הגדרות תפעוליות ברורות. השפעה מקומית מתייחסת לפעולה של התרופה באתר הממוקם ברקמות ישירות מתחת או סמוך לאתר היישום, עם תרומה מועטה מהתרופה במחזור הדם. לעומת זאת, ההשפעה המערכתית מתייחסת למשכך כאבים המתווך על ידי תרופה שנכנסה לדם ופועלת באתרים מרכזיים או היקפיים מרוחקים מאתר היישום. בדקנו ישירות את ההשערה שהגדלת שטח היישום מובילה לספיגה מערכתית גבוהה יותר של התרופה, ולכן מייצרת השפעות משככי כאבים גבוהות יותר מאלו הנובעות מפעולה מקומית בלבד, על ידי שמירה על מינון ליחידת שטח קבועה תוך שינוי השטח הכולל המטופל. עיצוב זה מאפשר לכימות כיצד קנה המידה המרחבי של החשיפה קובע את הזמינות הביולוגית המערכתית ואת התרומה הנובעת מההשפעות המתווכות מערכתית.

שלושים עכברי קונמינג עם SPF (עם PWL של 5~30 שניות במבחן הפלטה החמה) חולקו באקראי ל-3 קבוצות (n = 10 לקבוצה, זכר/נקבה = 1:1): קבוצת NC, קבוצת תרופות מקומיות (TMG), וקבוצת תרופות מערכתיות (SMG). XJCA ניתנה במינון קבוע של 0.015 גרם לס"מ רבוע, בנפח של 0.15 מ"ל, במשך 7 ימים רצופים.

ל-TMG, הנוסחה הונחה על אזור מקומי בעור הגפה האחורית. עבור ה-SMG, כדי לדמות ספיגה מערכתית מוגברת, הנוסחה הוחלתה על אזור משולב הכולל את הגפיים האחוריות והעור האחורי, תוך שמירה על אותו מינון ליחידת שטח (0.015 גרם לס"מ רבוע). עיצוב זה הבטיח שכמות ה-XJCA הכוללת שהוחלה על קבוצת ה-SMG תהיה גבוהה יחסית מזו של קבוצת TMG, מה שהקל על פוטנציאל גבוה יותר לספיגה טרנסדרמלית במחזור המערכתית. ב-120 דקות לאחר המתן האחרון, PWL נמדדה במבחן הפלטה החמה (3 פעמים במרווחים של 30 דקות, ערך ממוצע נרשם). על ידי השוואת TMG (השפעה מקומית דומיננטית) ל-SMG (השפעה מקומית + מערכתית), יכולנו לנתח את תרומת התפלגות התרופות המערכתית לשיכוך הכאב הכולל.

מחקר בליעה חוץ-גופית טרנסדרמלית
המחקר השתמש בתאי דיפוזיה של פרנץ עם שטח דיפוזיה אפקטיבי של 1.76625 ס"מ רבוע. תא הדיפוזיה של פרנץ הוא התקן הזהב להערכת ספיגה דרך העור. המערכת מורכבת מתא תורם (המכיל את נוסחת הבדיקה), תא קולטנים (מלא בבופר פיזיולוגי), ועור מנותק ביניהם. מולקולות התרופות מתפזרות דרך העור אל תמיסת הקולטן, ודגימות נאספות לאורך זמן כדי לכמת את קינטיקת החדירה. העור הבטני שנלקח מחולדות SD שהורדמו בפנטוברביטל נתרן (30 מ"ג/ק"ג, i.p.) הוכן בקפידה על ידי הסרת שומן תת-עורי, שטוף במי מלח רגילים והושרה במי מלח רגילים במשך 24 שעות. חשוב להגן על שלמות שכבת הקרנית. אין למתוח, לקפל או לגעת במשטח האפידרמיס. החדירות של העור מושפעת מאוד ממצב הלחות שלו. זמן ההידרציה מניב תוצאות שחוזרות.

העור המוכן הותקן בין תא התורם לקולטן, כאשר שכבת הקרנית פונה לתא התורם. הצד התורם קיבל 200 מיקרוליטר של XJCA (שווה ערך ל-0.06 גרם של תרופה גולמית), בעוד שתא הקולטן מולא ב-15 מ"ל תמיסת קבלה (30% אתנול: 70% PBS, ששוחרר על ידי סוניקציה במשך 15 דקות), נשמר בטמפרטורה של 32 ± 0.5 מעלות צלזיוס תחת ערבוב מגנטי רציף ב-350 r·min⁻1. יש לפנות את תמיסת הקבלה באמצעות סוניקציה למשך 15 דקות לפני השימוש כדי למנוע היווצרות בועות במהלך הניסוי.

דגימות של מ"ל אחד נאספו מתא הקולטנים ב-2, 4, 6, 8, 10, 12, 20 ו-24 שעות, בכל פעם מולאו בנפח שווה של תמיסת קבלה טרייה מחוממת מראש (32 מעלות צלזיוס).

הערה: התמיסה החלופית חייבת להיות באותה טמפרטורה כדי למנוע תנודות טמפרטורה שעלולות להשפיע על קינטיקת הדיפוזיה. הדגימות שנאספו סיננו דרך ממברנות מיקרופוריות של 0.22 מיקרון ונותחו לאחר מכן על ידי UPLC-MS/MS בתוך 24 שעות. עקב חוסר היציבות של האקוניטין, יש לנתח דגימות תוך 24 שעות מהאיסוף, או להוסיף מייצבים. אם ניתוח מיידי אינו אפשרי, יש להפריד את הדגימות ולאחסן אותן בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס, אך לאמת את יציבותן בתנאים אלו לפני ההתקדמות.

תנאי UPLC-MS/MS
ניתוח כרומטוגרפי בוצע באמצעות עמודת Agilent ZORBAX SB-C18 (2.1 × 100 מ"מ, 1.8 מיקרון) שנשמרה בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס, עם קצב זרימה של 0.3 מ"ל לדקה ונפח הזרקה של 2 מיקרו ליטר. השלב הנייד כלל אצטוניטריל (A) ותמיסת אצטט אמוניום של 0.1 מול/ליטר המכילה 0.5 מ"ל/ליטר חומצה אצטית קרחונית (B), תוך שימוש בתוכנית הגרדיאנט הבאה: 0–5 דקות (26%–45% A), 5–7 דקות (45%–74% A), 7–10.1 דקות (74%–90% A), 10.1–12 דקות (90% A), 12–12.1 דקות (90%–26% A), ו-12.1–15 דקות (26% A).

זיהוי ספקטרומטרי מסה בוצע באמצעות מקור יינון אלקטרוספריי (ESI) במצב יוני חיובי בהגדרות הבאות: טמפרטורת גז ייבוש 500°C, זרימת גז ייבוש 5 ליטר לדקה, לחץ נבולייזר 50psi, טמפרטורת גז מעטפת 500°C, זרימת גז מעטפת 11 ליטר לדקה, מתח נימי 5500 וולט, ואיסוף נתונים במצב ניטור תגובה מרובה (MRM). המעברים והפרמטרים של MRM נקבעו כך: אקוניטין (m/z 646.6→586.4, זמן השהייה 100 ms, DP 102.930 V, CE 49.810 V) ובנזוילקונין (m/z 604.4→105.1, זמן שהייה 100 ms, DP 105.120 V, CE 74.270 V).

אימות שיטה וניתוח נתונים
אימות השיטה בוצע על ידי הערכת ספציפיות, ליניאריות, דיוק, יציבות וחזרתיות. הספציפיות אושרה על ידי ניתוח תמיסת קבלה ריקה, תמיסה סטנדרטית ותמיסת דגימה כדי לאשר את היעדר הפרעות מחומרים אנדוגניים. לצורך ליניאריות, נבנו עקומות סטנדרטיות על ידי מיפוי שטח השיא מול ריכוז באמצעות שיטת רגרסיית הריבועים המינימליים. הדיוק הוערך הן באמצעות בדיקות תוך-יומיות (6 שכפולים) והן בין-יומיות (2 שכפולים במשך 3 ימים) באמצעות תמיסה סטנדרטית של 50 ng/mL, המובעת כסטיית תקן יחסית (RSD) של אזורי שיא. היציבות הוערכה על ידי קביעת אזור השיא של RSD של תמיסות הדגימה ב-0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 18 ו-24 שעות. החזרתיות אושרה על ידי מדידת אזור השיא של RSD משישה הכנות מקבילות של מדגם. תמיסות המלאי הסטנדרטיות הוכנו על ידי שקילה מדויקת של 2.5 מ"ג כל אחד של בנזואילקונין ואקוניטין, ואז המסה בתערובת איזופרופנול:דיכלורומתאן (1:1) להשגת ריכוז סופי של 25 מיקרוגרם/מ"ל. לתמיסת הבדיקה, כמות מתאימה מהדגימה הועברה לצינור צנטריפוגה ועברה צנטריפוגה במהירות גבוהה בעוצמה של 12,000 x גרם למשך 5 דקות, ולאחר מכן נאסף הסופרנטנט לניתוח.

כמות החדירה המצטברת (Qn, ng/cm2) בכל נקודת זמן חושבה באמצעות הנוסחה הבאה:

Qn = [(Cn × V + ΣCi × Vi) / A]

כאשר:
Qn: כמות החדירה המצטברת בזמן הדגימה n (ng/cm2).
Cn: ריכוז התרופה בתמיסה המקבלת בזמן הדגימה ה-nn (ng/mL).
Ci: ריכוז התרופה בתמיסה המקבלת בזמן הדגימה i (ng/mL).
V: נפח התמיסה המקבל (15 מ"ל).
Vi: נפח דגימה בכל נקודת זמן (1 מ"ל).
א: אזור דיפוזיה אפקטיבי של תא הדיפוזיה פרנץ (1.76625ס"מ רבוע).

עקומת כמות הזמן (Q-t) המצטברת של חדירה צוירה כאשר Qn הוא הקואורדינטה והזמן (t, h) כהאבסיסה. החלק הליניארי של עקומת Q-t עבר רגרסיה ליניארית, והשיפוע של משוואת הרגרסיה נלקח כשטף טרנסדרמלי במצב יציב (Js, ng/cm2/h).

עקומת Q-t הותאמה למודל מסדר אפס (Q = kt + b), למודל מסדר ראשון (ln(Q max - Q) = -kt + lnQmax), ולמודל היגוצ'י (Q = kt1/2 + b), כאשר Qmax הוא כמות החדירות המצטברת המקסימלית, k הוא קבוע הקצב, ו-b הוא החתך. ההתאמה הוערכה באמצעות מקדם קורלציה (R2), כאשר R2 גבוה יותר הצביע על התאמה טובה יותר.

ניתוח סטטיסטי
הנתונים הגולמיים של כל מבחני ההתנהגות ב-in vivo ונתוני הכרומטוגרפיה הגולמיים של UPLC-MS/MS עבור מחקר החדירה במבחנה מסופקים כקבצים משלימים 1 ו-2, בהתאמה. כל הנתונים הניסיוניים הוצגו כסטיית תקן ממוצעת ± (x̄ ± SD). הניתוח הסטטיסטי בוצע באמצעות GraphPad Prism 9.0. ניתוח שונות חד-כיווני (ANOVA) ואחריו מבחן השוואה מרובה של דאנט שימש להשוואת הבדלים בין קבוצות. p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תלות ביעילות משככי כאבים ונוגדי דלקת באזור היישום
XJCA הראה מתאם חיובי בין אזור היישום ליעילות משככת כאבים/אנטי-דלקתית במודלים של עכברים, לאחר 7 ימים רצופים של מתן במינון קבוע של 0.03 גרם לס"מ רבוע. במבחן הפלטה החמה, קבוצת NC הציגה את ממוצע ה-PWL הקצר ביותר, מה שמעיד על תגובת הכאב החזקה ביותר. לעומת זאת, קבוצות שטופלו ב-XJCA הראו הארכה תלויה בשטח של PWL: קבוצות XJCASAAG, XJCAMAAG ו-XJCALAAG כולן הראו הבדלים משמעותיים לעומת קבוצות NC (אי...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

דלקת וכאב הם תהליכים פתולוגיים מורכבים הכוללים מסלולי איתות מרובים. תכשירים מקומיים זוכים להעדפה הולכת וגוברת, כיוון שהם יכולים לפעול במדויק על נגעים ולמזער תגובות לוואי מערכתיות21,22. מחקר זה בהצלחה קבע ואימת מסגרת מתודולוגית שיטתית להערכת נוסחאות TCM מקומיות, תוך שימוש ב-XJCA כמקרה הדגמה. הגישה המשולבת, המשלבת מודלים אסטרטגיים של בעלי חיים בחיים עם ניתוח טרנסדרמלי כמותי במבחנה, הוכיחה את עצמה כיעילה בבדיקת ההשערה שיעילות ה-in v...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.

תודות

מחקר זה נתמך על ידי תוכנית המלגאים של טיישאן של מחוז שאנדונג (tsqn20250730), אוניברסיטת סצ'ואן-אנטרפרייז (Tibet Rhodiola Pharmaceutical Holding Co., Ltd.) פרויקט שיתוף הפעולה (24H0764, 24H1043) ותכנית המלגות ביאן קו של אוניברסיטת שאנדונג לרפואה סינית מסורתית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.22 & mu; מסנני ממברנה מיקרו-נקבובייםמיליפורסיגמא, ברלינגטון, מסצ'וסטס, ארה"בGSWP04700
חומצה אצטיתCNW Technologies GmbHN3800060דרגת כרומטוגרפיה
אצטוניטרילמרק KGaAI1241129242דרגת ספקטרומטריית מסה
אקוניטיןחברת טכנולוגיית התרופות צ'נגדו למייטיאן בע"מ.DSTDW00060220 מ"ג, &GE; 98% טוהר
עמוד Agilent ZORBAX SB-C18אג'ילנט2.1 & פעמים; 100 מ"מ, 1.8 & mu; m
אצטט אמוניוםתגובת כלליתP1492146דרגה אנליטית
בנזואילקוניןחברת טכנולוגיית התרופות צ'נגדו למייטיאן בע"מ.DSTDB00550220 מ"ג, &GE; 98% טוהר
דיכלורומתאןCINC Chemical Co., Ltd.P3048495דרגה אנליטית
דיקלופנק דיאתילמין אמולג'ל (DDE)נוברטיס פארמה בייג'ינג בע"מH20020176
תמיסת פורמליןSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10010061
תאי דיפוזיה של פרנץשנזן רויטואו אינסטרומנטס אנליטיים בע"מRT806
תוכנת GraphPad Prism 9.0GraphPad Software, Inc.גרסה 9.0
איזופרופנולתגובת כללית0530240601Dדרגת כרומטוגרפיה
סליין רגילSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.SY15931
פנטוברביטל נתרןסיגמא-אלדריץ', סנט לואיס, מיזורי, ארה"בP3761
מים מטוהריםחברת המזון והמשקאות של גואנגג'ואו ווטסון בע"מ.מספר אצווה 20240717C
עכברי קונמינג SPFצ'נגדו אנסוול ביוטכנולוגיה בע"מ.רישיון: SYXK (סצ'ואן) 2019-049
עכברי SPF ספרג-דוליבייג'ינג ספייפו ביוטכנולוגיה בע"מרישיון: SYXK (בייג'ינג) 2024-0010
מערכת UPLC-MS/MSAgilent Technologies, סנטה קלרה, קליפורניה, ארה"באג'ילנט 1260 אינפיניטי
סוכן משככי כאבים שושאן ג'ינלווהאן (XJCA)טיבט פארמה בע"מ.Z20010095
קסילןSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.10023418

מקורות

  1. Kang, S. Y., Ryu, Y. Editorial: Chronic inflammation and related diseases: From mechanisms to therapies. Int J Mol Sci. 24 (13), (2023).
  2. Liu, Y., et al. The analgesic effects of Yu-Xue-Bi tablet (YXB) on mice with inflammatory pain by regulating LXA4-FPR2-TRPA1 pathway. Chin Med. 19 (1), 104(2024).
  3. Lara, C. O., Burgos, C. F., Moraga-Cid, G., Carrasco, M. A., Yévenes, G. E. Pentameric ligand-gated ion channels as pharmacological targets against chronic pain. Front Pharmacol. 11, 167(2020).
  4. Yang, E. L., et al. Abietane-type diterpenoids from Nepeta bracteata Benth and their anti-inflammatory activity. Front Chem. 10, 944972(2022).
  5. Allen, H. N., Hestehave, S., Duran, P., Nelson, T. S., Khanna, R. Uncoupling the CRMP2-Ca(V)2.2 interaction reduces pain-like behavior in a preclinical osteoarthritis model. bioRxiv. , (2024).
  6. Ochandarena, N. E., Niehaus, J. K., Tassou, A., Scherrer, G. Cell-type specific molecular architecture for mu opioid receptor function in pain and addiction circuits. Neuropharmacology. 238, 109597(2023).
  7. Singh, S., Awasthi, R. Berberine HCl and diacerein loaded dual delivery transferosomes: Formulation and optimization using Box–Behnken design. ADMET DMPK. 12 (3), 553-580 (2024).
  8. Madawi, E. A., et al. Polymeric nanoparticles as tunable nanocarriers for targeted delivery of drugs to skin tissues for treatment of topical skin diseases. Pharmaceutics. 15 (2), (2023).
  9. Li, L., et al. Evaluation of physical and chemical modifications to drug reservoirs for stimuli-responsive microneedles. Drug Deliv Transl Res. 15 (7), 2390-2414 (2025).
  10. Wang, Q., et al. Naturally derived anti-inflammatory compounds from Chinese medicinal plants. J Ethnopharmacol. 146 (1), 9-39 (2013).
  11. Kheoane, P. S., et al. Anti-inflammatory effects of orally and topically administered nanoformulations of Malva parviflora root extracts, and Prunus persica and Cupressus sempervirens exudates. Pharmacol Res Mod Chin Med. 17, 100685(2025).
  12. Zhenping, W., Yanxiu, L., Kun, G., Lei, Z. Clinical observation of Xueshan Jinluohan plastic for relieving pain in the treatment of 66 patients with osteoarthritis. J Clin Med Pract. , (2013).
  13. Kui, S., Guiming, L. Xueshan Jinluohan odynolysis plastics for postherpetic neuralgia: Observation of clinical efficacy. China Pharm. , (2007).
  14. Hai-Yan, W., Lei, Z., Ya-Fang, Z., Xue, J. Clinical observation on Xueshan Jinluohan analgesic film in treating 66 patients with rheumatoid arthritis with syndrome of blood stasis and obstructive arthralgia. Tianjin J Tradit Chin Med. , (2014).
  15. Zhao, L., et al. Topical drug delivery strategies for enhancing drug effectiveness by skin barriers, drug delivery systems and individualized dosing. Front Pharmacol. 14, 1333986(2023).
  16. Kathe, K., Kathpalia, H. Film forming systems for topical and transdermal drug delivery. Asian J Pharm Sci. 12 (6), 487-497 (2017).
  17. Xue, M., et al. Illumination on chemical compounds from Qufeng Zhitong capsule and its potential pharmacological mechanism against rheumatoid arthritis based on UHPLC/Q-Orbitrap-MS combined with network pharmacology analysis. Int J Anal Chem. 2022, 7863435(2022).
  18. Zhao, P., et al. Aconitine and its derivatives: Bioactivities, structure-activity relationships and preliminary molecular mechanisms. Front Chem. 12, 1339364(2024).
  19. Ling-Li, L., Lan-Xia, W., Ling, N., Xi, Y. Determination of safflower glucoside I and gentiopicrin in Xueshan Jinluohan pain-relief liniment by HPLC. Chin Tradit Pat Med. 34 (3), 499-502 (2012).
  20. Xiang, G., Guo, S., Wu, C., Wang, S., Zhang, Y. Deciphering the mysteries of Aconitum pendulum: Unique identification of various processed products and characteristic chemical markers. Arab J Chem. 17 (2), 105585(2024).
  21. Yang, C., et al. Development and evaluation of a Chinese herbal gel for analgesic and anti-inflammatory effects. Pak J Pharm Sci. 36 (4 Suppl), 1261-1269 (2023).
  22. Zhang, W., et al. Nicotine in inflammatory diseases: Anti-inflammatory and pro-inflammatory effects. Front Immunol. 13, 826889(2022).
  23. Zhan, M. X., et al. Ulinastatin exhibits antinociception in rat models of acute somatic and visceral pain through inhibiting the local and central inflammation. J Pain Res. 14, 1201-1214 (2021).
  24. Liu, C., et al. Investigation of the permeation enhancer strategy on benzoylaconine transdermal patch: The relationship between transdermal enhancement strength and physicochemical properties of permeation enhancer. Eur J Pharm Sci. 138, 105009(2019).
  25. Jiang, Z., Liu, S., Li, Y., Yuan, S. Study on the absorption mechanism of glucocorticoids in the stratum corneum. Colloids Surf B Biointerfaces. 256 (Pt 1), 114984(2025).
  26. Fabbrocini, G., et al. Skin needling to enhance depigmenting serum penetration in the treatment of melasma. Plast Surg Int. 2011, 158241(2011).
  27. Costa, R., Costa Lima, S. A., Gameiro, P., Reis, S. On the development of a cutaneous flavonoid delivery system: Advances and limitations. Antioxidants (Basel). 10 (9), (2021).
  28. Li, Z., et al. Analgesic and neuroprotective effects of Baimai ointment on diabetic peripheral neuropathy. J Ethnopharmacol. 292, 115122(2022).
  29. Lei, Y., et al. Formulation and evaluation of a drug-in-adhesive patch for transdermal delivery of colchicine. Pharmaceutics. 14 (10), (2022).
  30. Sirisha Mulukuri, N. V. L., et al. Statistical modeling, optimization and characterization of andrographolide loaded emulgel for its therapeutic application on skin cancer through enhancing its skin permeability. Saudi Pharm J. 32 (6), 102068(2024).
  31. Cohen, E., Lee, Y. C. A mechanism-based approach to the management of osteoarthritis pain. Curr Osteoporos Rep. 13 (6), 399-406 (2015).
  32. Boehnke, K. F., Gagnier, J. J., Matallana, L., Williams, D. A. Cannabidiol product dosing and decision-making in a national survey of individuals with fibromyalgia. J Pain. 23 (1), 45-45 (2022).
  33. Pan, S. Y., et al. New perspectives on Chinese herbal medicine (Zhong-Yao) research and development. Evid Based Complement Alternat Med. 2011, 403709(2011).
  34. Sana, E., et al. Topical delivery of curcumin-loaded transfersomes gel ameliorated rheumatoid arthritis by inhibiting NF-κB pathway. Nanomedicine (Lond). 16 (10), 819-837 (2021).
  35. Ya-Nan, H., et al. New understanding of aconitine hydrolysis pathway: Isolation, identification and toxicity evaluation based on intermediate products. Arab J Chem. 15 (11), 104255(2022).
  36. Shakeel, F., et al. Investigating antiarthritic potential of nanostructured clove oil (Syzygium aromaticum) in FCA-induced arthritic rats: Pharmaceutical action and delivery strategies. Molecules. 26 (23), (2021).
  37. Zhou, C., et al. Benzoylaconine modulates LPS-induced responses through inhibition of toll-like receptor-mediated NF-κB and MAPK signaling in RAW264.7 cells. Inflammation. 44 (5), 2018-2032 (2021).
  38. Jin, X., et al. Aconitine – a promising candidate for treating cold and mechanical allodynia in cancer-induced bone pain. Biomed Pharmacother. 161, 114284(2023).
  39. Tao, H., et al. Pharmacokinetics and pharmacology of aminoalcohol-diterpenoid alkaloids from Aconitum species. J Ethnopharmacol. 301, 115726(2023).
  40. Teaima, M. H., et al. Enhanced transdermal delivery of bisoprolol hemifumarate via combined effect of iontophoresis and chemical enhancers: Ex vivo permeation/in vivo pharmacokinetic studies. Pharmaceutics. 13 (5), (2021).
  41. Liu, X., et al. The inhibition of PPARα protein degradation alleviates the cardiotoxicity of Tiebangchui by regulating fatty acid metabolism. J Ethnopharmacol. 348, 119838(2025).
  42. Abdella, S., Afinjuomo, F., Song, Y., Upton, R., Garg, S. Mucoadhesive buccal film of estradiol for hormonal replacement therapy: Development and in vivo performance prediction. Pharmaceutics. 14 (3), (2022).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

TCMFranz Diffusion CellUPLC MS MSBenzoylaconineAconitine
צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.