$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
אישור אתי התקבל מוועדת הביקורת של IATRC. כל ההליכים הכוללים דגימות שתן אנושיות עמדו בעקרונות הצהרת הלסינקי. התקבלה הסכמה מדעת בכתב מכל המשתתפים, וכל הדגימות הושמרו על אנונימיות כדי להגן על הסודיות.
עיצוב חיישנים וסימולציה נומרית
השלב הראשון בתכנון חיישן הוא להריץ סימולציה אלקטרומגנטית. CST Microwave Studio משמש ליצירת הפריסה, הכוללת תהודה המורכבת מסליל ספירלי עגול (CSI) בטור עם קבל אינטרדיגיטל (IDC). יש נקודת חיבור למערכת יחסים מרחוק בין החלקים האלה שמאפשרת להם לעבוד יחד אופטית25. לשיפור הביצועים, מתווספים שני סטאבים פתוחים של הילברט פרקטלי לצומת CSI-IDC כדי להפחית את שולי השדה האלקטרומגנטי והעיוות. מבנה לולאה אחורית נוסף גם למישור הקרקע כדי להפוך את תגובת מסנן הפס לדחייה יציבה יותר ולשפר את דיוק המדידה26. העיצוב עובד בצורה הטובה ביותר על מצע FR4 סטנדרטי וזול (εr≈ 4.3, עובי 1.6 מ"מ) ויש לו תהודה תפעולית ראשית ב-1.22 GHz. השתמשנו בתוכנה ליצירת וניתוח מודל מעגל שקול עם אלמנטים מרוכזים כדי לבדוק את פרמטרי ה-S המדומים. זה הבטיח שהתוצאות מסימולציות אלקטרומגנטיות ומעגלים מלאות יהיו זהות27. הבחירה ב-LDR כאלמנט הממיר אופטי נבעה מיתרונותיו הייחודיים בארכיטקטורת החישה המיקרוגלית הספציפית הזו. בניגוד לפוטודיאודות או פוטוטרנזיסטורים, שדורשים מעגלי הטיה מורכבים ומציעים יחס זרם-אור לא ליניארי, ה-LDR מספק מודולציה פסיבית, ליניארית ורחבת טווח התנגדות בתגובה לעוצמת האור הפוגעת. היסט ליניארי זה בהתנגדות מודולציה ישירה של S21 של רזונטור המיקרוגל הסמוך מבלי להכניס רעש מעגל פעיל או לדרוש התניה נוספת של האות. יתרה מזאת, העלות הנמוכה, טביעת הרגל הקומפקטית של ה-LDR והאינטגרציה החלקה עם תת-ה-FR4 — שאינה דורשת קווי הטיה חיצוניים — תואמים את המטרה הכוללת של חיישן נקודת טיפול פשוט, זול ולא פולשני.
כדי להקשר את החיישן המוצע בנוף הרחב של טכנולוגיות גילוי אוראה, יש צורך בהשוואה קצרה לשיטות מוכרות. בדיקות ביוכימיות, כמו שיטת האוראז האנזימטי, מייצגות את תקן הזהב הקליני, ומציעות דיוק ורגישות גבוהים (מגבלות גילוי נמוכות עד 1–5 מ"ג/ד"ל) אך דורשות ציוד מעבדה ייעודי, צוות מיומן וזמני תגובה טיפוסיים של 30–60 דקות, מה שמגביל את השימושיות שלהם בסביבות נקודת טיפול. רצועות בדיקה אנזימטיות מספקות חלופה מהירה (2–5 דקות), זולה, חצי-כמותית, המתאימה לשימוש ביתי; עם זאת, הם מסתמכים על פרשנות קולורימטרית, שיכולה להיות סובייקטיבית, ומציעים רגישות מוגבלת למדידת ריכוז מדויקת. חיישנים אלקטרוכימיים, כולל חיישני אוריאה אמפרומטריים ופוטנציומטריים, משיגים רגישות גבוהה ומאפשרים זיהוי בזמן אמת, אך לעיתים קרובות דורשים ייצור אלקטרודות מורכב וקיבוע אנזימים, וסובלים מבעיות יציבות הנובעות מהתדרדרות אנזימים לאורך זמן. לעומת זאת, חיישן המיקרוגל המבוקר אופטית המוצע מציע שילוב ייחודי של מאפיינים: קישור אופטי לא פולשני מבטל מגע ישיר של הדגימה עם אלמנטים חישה, ומפחית את סיכון הזיהום; זמן המדידה הוא פחות מ-30 שניות; ייצור על מצע FR4 זול ממזער עלות; והקשר הליניארי בין ריכוז האוריאה לאובדן ההחדרה (S21) מפשט את הכיול. בעוד שהרגישות הנוכחית (1.42 × 10-4 למ"ג/מול/סנטימטר3) מתאימה לסיווג קטגורי של טווחי אוריאה קליניים רלוונטיים (150–450 מ"ג/ד"ל), אופטימיזציה נוספת עשויה לשפר את גבולות הגילוי הדומים למקבילים אלקטרוכימיים. בסך הכול, החיישן תופס נישה משלימה, ומעדיף פשטות, מהירות וניידות ליישומים בנקודת טיפול שבהם דיוק מעבדה אינו חיוני.
ייצור חיישנים
פוטוליתוגרפיה סטנדרטית מעבירה את העיצוב המוגמר ללוח FR4 מצופה נחושת, חד-צדדי. פוטומסק ברזולוציה גבוהה משמש ליצירת דפוס החיישן על תת-קרקע שעבר למינציה עם פוטוריזיסט. הדפוס מפותח ונחרט בתמיסה של כלוריד ברזל (FeCl₃). לאחר חריטה וניקוי, מחברי SubMiniature גרסה A (SMA) מולחמים בקפידה ליציאות המיקרוסטריפ של הכניסה והפלט, כך שניתן יהיה לחבר את ציוד המדידה28. תהליך זה יוצר חיישן פעיל ופרופיל נמוך שמוכן לבדיקה.
הקמה ניסיונית וכיול
באמצעות כבלים קואקסיאליים איכותיים, החיישן המומצא מחובר למנתח רשת וקטורית (VNA), בדומה לסדרת Agilent PNA. באמצעות ערכת כיול מכנית, מתבצע כיול מלא בשני פורטים (פתוח, קצר, עומס, דרך) בקצוות הכבל כדי להיפטר משגיאות מדידה שיטתיות. כדי למדוד את פרמטרי ה-S של החיישן, ה-VNA מוגדר לעבור בין 0.1 GHz ל-4GHz עם הספק יציאה של -10 dBm29.
הכנת דגימת שתן והליך מדידה
משתתפים שמסכימים לתת דגימות שתן מתבקשים לעשות זאת. פלטפורמת בדיקה קבועה מוצבת למדידה: מערכת מרחוק ממוקמת ישירות מתחת למחסנית זכוכית נקייה שממוקמת במרכז האזור הפעיל של החיישן. ראשית, נלקח מדידת S21 בסיסית כאשר ה-LDR מואר על ידי מקור אור בעוצמה קבועה וללא דגימה. לאחר מכן, טיפה של שתן במשקל 0.01 מ"ל מוזרת על אמצע מגלש הזכוכית. ספקטרום S21 מוקלט שוב עם אותה כמות אור. התכונות האופטיות של הדגימה, התלויות באוריאה, משנות את ההתנגדות של ה-LDR, מה שגורם לשינוי מדיד ב-|S21| ב-1.22 GHz30. כדי למנוע זיהום צולב, מנקה את מחסנית הזכוכית במים מזוקקים ואתנול בין כל מדידת דגימה. דגימות שתן טריות נאספו מעשרה מתנדבים בריאים (חמישה גברים, חמישה נשים; בגילאי 25–45). ריכוזי האוריאה הבסיסיים, שנמדדו באמצעות מנתח כימיה קלינית, נעו בין 150 ל-450 מ"ג/ד"ל. כדי לקבוע טווח בדיקות מבוקר, הדגימות סווגו לשלוש קבוצות ריכוז: נמוכות (150–250 מ"ג/ד"ל), בינוניות (251–350 מ"ג/ד"ל), וגבוהות (351–450 מ"ג/ד"ל), עם עשר דגימות בכל קטגוריה. כל הדגימות נותחו תוך שעתיים מהאיסוף, אוחסנו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס כאשר לא היו בשימוש, והתאזנו לטמפרטורת החדר לפני המדידה. אליקווט של 0.01 מ"ל הוחל על מחסנית זכוכית נקייה בכל בדיקה, כאשר הסלייפים נוקו באמצעות 70% אתנול ומים מזוקקים בין המדידות למניעת זיהום צולב30.
רכישת נתונים וניתוח
המידע העיקרי שנלקח מכל מדידה הוא גודל S21 (בדציבל) בתהודה של 1.22 גיגה-הרץ. מערך נתונים זה משמש ללימוד אלגוריתם K-Nearest Neighbors (KNN) שפועל בתוכנה כמו MATLAB. המודל משתמש בגודל S21 כדי לחלק את רמות האוריאה לקבוצות כמו "נמוך", "ביניים" ו"גבוה"31. כמו כן, ניתן למדוד את רגישות הריכוז של החיישן על ידי הצגת השינוי ב-|S21| (Δ|S21|) נגד השינוי בריכוז האוריאה (ΔC). השיפוע של הקשר הליניארי הזה, C = ΔS / ΔC, מראה את הרגישות. כדי להעריך עמידות חיישנים ואמינות מדידה, נערך מחקר חזרתיות עם 45 מדידות לכל קטגוריית ריכוז אוריאה (נמוך: 150–250 מ"ג/ד"ל, ביניים: 251–350 מ"ג/ד"ל, גבוה: 351–450 מ"ג/ד"ל) במשך שלושה ימים עצמאיים, בסך הכל 135 מדידות. מקדם השונות נע בין 0.67% ל-1.07% בכל הקטגוריות, מה שמעיד על חזרתיות מדידה מצוינת. אי-הוודאות במדידה נמדדה בהתאם למסגרת מדריך לביטוי אי-ודאות במדידה (GUM), ששילבה אי-ודאות מסוג A (שונות סטטיסטית ממדידות חזרות) עם תרומות מסוג B מכיול VNA (±0.05 dB), תנודות טמפרטורה (±0.01 dB/°C) ושינויים במיקום הדגימה (±0.02 dB). אי-הוודאות המורחבת (k=2, רווח ביטחון 95%) נע בין ±0.38 dB ל-±0.56 dB, בהתאם לקטגוריית הריכוז. רגישות הריכוז, שמקורה ברגרסיה ליניארית של Δ|S21| לעומת ΔC, חושב כ-1.42 × 10-4 ל(mg/mol/cm3), עם רווח ביטחון של 95% × 10-4 עד 1.49 × 10-4 per (mg/mol/cm3) ומקדם קביעה (R2) של 0.94. אי-הוודאות היחסית המורחבת ברגישות הייתה ±6.2% (k = 2), מה שמאשר שהרגישות המדווחת חזקה סטטיסטית והחיישן מדגים ביצועים שחזוריים המתאימים ליישומים בנקודת טיפול.