סינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום מצמחי סוואנה ניאוטרופיים מקומיים לנוסחאות ננו-פיטוקוסמטיות ניתנות להרחבה

Liryel Silva Gasparetto; Matheus Antônio Novaes; Cassiane Maria Vianna Campos; Juliana Alejandra Sanchez Torres; Vitor Hugo Brito Salentim; Lucas de Alcântara Sica de Toledo; Elizabete de Souza Cândido; Octávio Luiz Franco

doi:10.3791/70521

מאמר שיטה

סינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום מצמחי סוואנה ניאוטרופיים מקומיים לנוסחאות ננו-פיטוקוסמטיות ניתנות להרחבה

DOI:

10.3791/70521

⸱

29 במאי 2026

Liryel Silva Gasparetto^*¹^,² , Matheus Antônio Novaes^*¹ , Cassiane Maria Vianna Campos¹ , Juliana Alejandra Sanchez Torres¹ , Vitor Hugo Brito Salentim¹ , Lucas de Alcântara Sica de Toledo¹ , Elizabete de Souza Cândido¹^,² , Octávio Luiz Franco¹^,²

¹S-Inova Biotech, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Universidade Católica Dom Bosco, ²Centro de Análises Proteômicas e Bioquímicas, Programa de Pós-graduação em Ciências Genômicas e Biotecnologia, Universidade Católica de Brasília

^* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

עבודה זו מתארת פרוטוקול לסינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום באמצעות תמצית הצמח Stryphnodendron adstringens , מין מהסוואנה הניאוטרופית המקומית, ולאחר מכן שילובם והערכתם בנוסחת סרום קוסמטית.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה מתאר פרוטוקול לסינתזה ירוקה של ננו-חלקיקים מבוססי מגנזיום באמצעות תמציות אתנול של Stryphnodendron adstringens, מין צמח יליד הסוואנה הניאוטרופית, ושילובם בנוסחאות ננו-פיטוקוסמטיות. ההליך כולל איסוף והכנת חומר מהצומח, ואחריו הפקת אתנול, שבה פיטוכימיקלים פועלים כסוכני חיזור ומייצבים ליוני מגנזיום. ננו-חלקיקים מסונתזים בתנאים מבוקרים באמצעות מגנזיום כלוריד ותמציות צמחים, מה שמאפשר תהליך ידידותי לסביבה ללא חומרים מפחיתים רעילים. תכונות ננו-חלקיקים מאופיינות באמצעות פיזור אור דינמי ומיקרוסקופ כוח אטומי להערכת התפלגות הגודל, המורפולוגיה וההתנהגות הקולואידית. הפרוטוקול מתאר עוד את שילוב הננו-חלקיקים המסונתזים בנוסחת סרום קוסמטית. היציבות מוערכת בתנאי אחסון מבוקרים על ידי ניטור תכונות אורגנולפטיות, pH וצמיגות. שיטה זו מספקת גישה ניתנת לשחזור וברת קיימא לייצור ננו-חלקיקי מגנזיום המתווכים על ידי צמחים ולהערכת יישומם בפורמולציות קוסמטיות.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תחום הפיטוגאוגרפיה של סראדו, שמרכיב את תצורת הסוואנה הניאוטרופית הגדולה ביותר בדרום אמריקה, מייצג את אזור הסוואנה הטרופית המגוון ביותר בעולם. מערכת אקולוגית זו מכילה אלפי מיני צמחים עשירים במטבוליטים משניים כגון פלבונואידים, פוליפנולים, טרפנים וחומצות פנוליות, שרבים מהם מתועדים על פעילויות נוגדי חמצון, אנטי-דלקתיות ופוטופרוטקטיביות המעניינות את תעשיות הקוסמטיקה והתרופות 1,2,3,4 . פיטוכימיקלים אלו משולבים באופן נרחב כמרכיבים פעילים בעלי ערך גבוה בנוסחאות קוסמטיות פונקציונליות. בנוסף לפעילותם הביולוגית, קבוצות הפונקציונליות של הידרוקסיל וקרבוניל הקיימות בפוליפנולים ופלבונואידים רבים מאפשרות להן לפעול כסוכני חיזור ומייצב טבעיים ליוני מתכת בתמיסה ^5,6. תכונה כימית זו נחקרת יותר ויותר בננוטכנולוגיה ירוקה לסינתזה של ננו-חלקיקי מתכת, ומייצגת הזדמנות מבטיחה אך לא נחקרה לפיתוח פורמולות קוסמטיות ברות קיימא שמקורן במגוון ביולוגי ניאוטרופי 2,3,4,5,6.

באופן מסורתי, ננו-חלקיקים (NPs) יוצרו בשיטות מלמעלה למטה, שבהן חומרים בתפזורת מפורקים לחלקיקים בגודל ננומטרי באמצעות שיטות פיזיקליות כמו אבלציה בלייזר או ספטרינג, ושיטות מלמטה למעלה, שבהן NPs נבנים מיחידות קטנות יותר באמצעות מסלולים כימיים או ביולוגיים⁷. בעוד ששיטות כימיות ופיזיקליות יעילות, הן לעיתים קרובות מתבססות על תגובות רעילות, צריכת אנרגיה גבוהה וציוד מורכב. דבר זה הוביל לעליית גישות כימיה ירוקה, המדגישות קיימות, ידידותיות לסביבה ובטיחות^בייצור ננו-חומרים.

במסגרת זו, סינתזה ירוקה של NPs זכתה לתשומת לב רבה. היכולת של פיטוכימיקלים צמחיים לפעול בו-זמנית כסוכנים מפחיתים, מייצבים ומכבידים, המאפשרת סינתזה יעילה של NPs של מתכות ומתכת אוקסיד, בשילוב עם מגבלות שיטות קונבנציונליות, הדורשות ציוד מיוחד, תנאים קיצוניים ומייצרות פסולת רעילה, מצדיקה פיתוח פרוטוקול סינתזה ירוק הפועל בתנאים מתונים, היא ניתנת להרחבה. ואינו מייצר תוצרי לוואי^{מסוכנים} 6,7,8,9. מבין חלקיקי חמצת המתכת שנחקרו באסטרטגיה זו, ננו-חלקיקי מגנזיום (MgNPs) מציגים יתרונות משמעותיים על פני ננו-חלקיקי כסף (AgNPs) וננו-חלקיקי תחמוצת אבץ (ZnO NPs), שכן MgNPs אינם מראים נטייה להצטברות ביולוגית, מציגים ציטוטוקסיות נמוכה יותר בתאים אנושיים, ומוכרים על ידי מנהל המזון והתרופות של ארצות הברית (FDA) כחומרים בטוחים בדרך כלל ליישומים אנושיים¹⁰^.¹¹. בנוסף, MgNPs המסונתזים באמצעות תמציות צמח Cerrado צפויים לשלב את התכונות נוגדי החמצון והאנטיבקטריאליות של מגנזיום עם הפיטוכימיקלים הביואקטיביים הנמצאים בתמצית, ובכך לשפר את ערכם הפונקציונלי האסתטי בהשוואה למקבילות מסונתזות קונבנציונליות¹⁰.

בתעשיית הקוסמטיקה, יישום הננוטכנולוגיה חולל מהפכה בפיתוח מוצרים על ידי שיפור אספקת המוצרים, היציבות והיעילות של הרכיבים הפעילים¹¹. NPs יכולים לחדור עמוק יותר לעור, לספק שחרור מבוקר ולהגן על תרכובות רגישות מפני התפרקות, מה שהופך אותם לבעלי ערך רב לנוסחאות המתמקדות בהזדקנות העור, פיגמנטציה, אקנה^{והגנה מפני} השמש. למרות היתרונות המתועדים הללו, הסינתזה הירוקה של MgNPs באמצעות צמחים מקומיים מסוואנות ניאוטרופיות כסוכני חיזור ליישומים קוסמטיים נותרה ברובה לא נחקרה וחסרה סטנדרטיזציה מתודולוגית, בניגוד למה שדווח רבות על צמחים מאסיה, אפריקה ואירופה 11,12,13,14. רוב המחקרים הקיימים מעניקים תשומת לב מוגבלת לשילוב NPs בנוסחאות קוסמטיות פונקציונליות וליציבותן בתנאי אחסון מבוקרים 11,14,15. הפרוטוקול הנוכחי מסייע למלא את הפער המתודולוגי הזה על ידי שילוב, בשיטה אחת וניתנת לשחזור, את הסינתזה הירוקה של MgNPs מצמחייה ניאוטרופית, את שילובם בסרום פנים ננו-פיטוקוסמטי, והערכה מקיפה של יציבותם הפיזיקוכימית והתפקודית.

המטרה הכוללת של פרוטוקול זה היא לתאר מתודולוגיה סטנדרטית, ניתנת לשחזור וניתנת להרחבה לסינתזה ירוקה של MgNPs באמצעות Stryphnodendron adstringens, צמח יליד הסוואנות הניאוטרופיות של סראדו, כסוכן מפחית ומייצב, ובכך לנצל את תכונותיו הביואקטיביות הפנימיות בנוסחת סרום פנים. פיתוח MgNPs מסונתזים מ-S. adstringens ליישומים מקומיים בבני אדם מהווה פורמולציה ננו-חדשה המוגנת כיום תחת בקשת פטנט ברזילאי (BR 10, 2025 015416 1). העיצוב הניסויי המוצע מייצג גישה בת-קיימא וביוקומפטיבית לייצור NP, תוך הימנעות משימוש בסוכנים מפחיתים רעילים הנפוצים בסינתזת NP קונבנציונלית, תוך הקלה על שילוב פיטוכימיקלים עם פעילות ביולוגית פוטנציאלית. פרוטוקול זה מתאים במיוחד לחוקרים המחפשים שיטות ידידותיות לסביבה לייצור ננו-חלקיקים ליישומים קוסמטיים, פרמצבטיים או ביו-רפואיים, במיוחד כאשר קיימות תמציות צמחיות עשירות בפלבנואידים ופוליפנולים. מכיוון שתרכובות אלו פועלות כסוכנים טבעיים להפחתת ומייצב, ניתן להתאים את הפרוטוקול בקלות למינים צמחיים אחרים עם פרופילים פיטוכימיים דומים, מה שמאפשר יישומו בצמחייה מקומית מאזורים ביוגאוגרפיים שונים בהתאם לזמינות המקומית של חומר צמחי.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. חומר צמחי

בחירה ותיעוד
1. בחרו צמחים בריאים של S. adstringens הגדלים באזורים מייצגים של הסביבה הטבעית לאיסוף קליפות. רשמו את מיקום הדגימה, תאריך האיסוף, הקואורדינטות הגאוגרפיות באמצעות מכשיר GPS ותנאי הסביבה המקומיים בזמן האיסוף.
2. לבצע זיהוי בוטני באמצעות ספרות טקסונומית מיוחדת למיני סוואנה ניאוטרופיים. אשר את הזיהוי על ידי התייעצות עם טקסונום מוסמך¹⁷.
3. לאסוף ולהפריד חומר צמחי מייצג לתיעוד הרבריום, כולל מבנים וגטטיביים ורבייה (למשל, עלים, פרחים, פירות וענפים קטנים).
  הערה: לאסוף חומר הרבריום בנפרד מהקליפה המשמשת להליכים ניסיוניים. לחץ וייבש את חומר הצמח באמצעות טכניקות הרבריום סטנדרטיות, התקן דגימות שובר והפקיד אותן בהרבריום מוכר כדי להבטיח מעקב.
אוסף קליפות
1. אספו את הקליפה מגזע עץ S. adstringens בשלבים 31–39 (Biologische Bundesanstalt, Bundessortenamt ו-Chemische Industrie) (Biologische Bundesanstalt, Bundessortenamt and Chemische Industrie) בשלבים 31–39, התואמים לשלב הצמיחה הצמחית כפי שתואר במחקרים פנולוגיים קודמים^16,17.
  הערה: אחסן את החומר שנאסף בשקית כהה כדי למנוע פירוק מטבוליטים משניים ולמנוע פירוק מטבוליטים משניים.
קביעת לחות
1. שקלו את דגימות הקליפה באמצעות איזון אנליטי. חלק את החומר לשלוש שכפולים ורשם את המשקלים ההתחלתיים.
2. הניחו את דגימות הקליפה בתנור בטמפרטורה של 105 מעלות צלזיוס. ייבשו את הדגימות עד שהן מגיעות למשקל קבוע.
  הערה: משקל קבוע מושג כאשר שתי מדידות רצופות שונות לא יותר מ-1 מ"ג, מה שמעיד על הסרת לחות מלאה.
3. הוציאו את הדגימות מהתנור, תנו להן להתקרר לטמפרטורת החדר, ותרשמו את המשקל הסופי. חשב את תכולת הלחות והחומר היבש באמצעות המשוואות הבאות:
  
  חומר יבש (%) = 100 - לחות (%)
  כאשר:
  W1 = משקל המיכל הריק
  W2 = משקל המיכל + הדגימה לפני הייבוש
  W3 = משקל המיכל + דגימה לאחר הייבוש

2. הכנת תמצית

הערה: כל ההליכים הכוללים חומרים מסוכנים בוצעו בהתאם להנחיות בטיחות כימיות מוכרות בינלאומית¹⁸.

שטפו את הקליפה הטרייה שנאספה במים זורמים כדי להסיר אדמה, אבק וזיהומים על פני השטח.
הניחו את דגימות הקליפה בתנור בטמפרטורה של 36°C למשך 72 שעות. טחנו את הקליפה המיובשת באמצעות טחנת סכין כדי לקבל אבקה דקה.
שקלו 200 גרם של קליפה אבקתית והעבירו אותה לבקבוק ארלנמאייר. הוסף 1000 מ"ל של 98% אתנול.
אזהרה: אתנול דליק מאוד. התנהל הרחק ממקורות ההצתה ועבוד באזור מאוורר היטב.
אטום את הבקבוקון ושמור אותו בטמפרטורת החדר במשך 72 שעות, מוגן מאור. ערבבו את התערובת פעם ב-24 שעות.
סנן את התמצית תחילה דרך רשת מתכת ואז דרך כותנה באמצעות משפך להסרת שאריות.

3. הערכת פעילות נוגדי חמצון

הכינו תמיסת DPPH של 100 מ"מ (2,2-דיפניל-1-פיקרילהידרזיל) במתנול.
אזהרה: מתנול הוא רעיל ודליק מאוד. תלבשו מכסה אדים ותלבשו ציוד מגן אישי מתאים. DPPH הוא מגרה ועלול להיות מזיק אם נשאף או נבלע. הימנעו ממגע ושאיפה ישירה.
הערה: הגנו על התמיסה מאור על ידי ביצוע הבדיקה בתנאי תאורה חלשה, וזהירו בטיפול במתנול ו-DPPH, ותמיד יש לבצע זאת עם כפפות.
מדלל את תמצית הקליפה האתנולית של S. adstringens במתנול כדי לקבל ריכוזים הנעים בין 0.1% ל-5% (v/v). הכינו תמיסות ויטמין C בריכוזים זהים לבדיקה חיובית.
זרקו 100 מיקרוליטר תמיסת DPPH לכל באר של לוח עם 96 בארות.
הוסיפו 50 מיקרו ליטר של תמצית או תמיסת ויטמין C לכל באר.
הערה: השתמש ב-DPPH + מתנול כבקרה שלילית ובמתנול בלבד כבקרה השלילית. בצע את כל המדידות במצב מרובע.
דגרו את הצלחת במשך 30 דקות בטמפרטורת החדר בחושך.
מדדו את הספיגה ב-515 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.
חשב פעילות איסוף רדיקלי באמצעות המשוואה הבאה:

כאשר:
בקרת ABS = ספיגת DPPH + מתנול
דגימת ABS = ספיגת DPPH + תמצית

4. ניתוח קיום תאים

תרבית פיברובלסטים עוריים אנושיים תקינים (NHDF) במדיום RPMI-1640, בתוספת 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין–סטרפטומיצין. שמור על תאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO₂.
זרעו תאים לפלטות של 96 בארות ב-3 × 10^תאים לבאר ודגרו במשך 24 שעות.
החליפו את המדיום ב-100 מיקרוליטר של מדיום טרי והוסיפו 50 מיקרוליטר של תמצית. דגרה ל-24 שעות.
הסר את המדיום והוסיף 10 מיקרוליטר של תמיסת MTT לכל באר. דגרו במשך 4 שעות כדי לאפשר היווצרות פורמזן.
אזהרה: מגיב MTT הוא רעיל ויש לטפל בו עם כפפות וציוד מגן מתאים. הימנע מקשר עין ועור ועיניים.
מוסיפים 60 מיקרוליטר של תמיסת מסיסות (HCl באיזופרופנול) כדי להמיס את הגבישים.
אזהרה: חומצה כלורית היא קורוזית ועלולה לגרום לכוויות קשות. לטפל בציוד מגן מתאים ולעבוד עם מכסה אדים. איזופרופנול דליק ויש לטפל בו הרחק ממקורות ההצתה באזור מאוורר היטב.
מדדו את הספיגה ב-540 ננומטר באמצעות ספקטרופוטומטר.
הערה: בדיקות קיום תאים בוצעו בקבוצות ביקורת מטופלות ולא מטופלות, כאשר כל מצב נותח בבארות מרובעות.
חשב את כדאיות התאים באמצעות:
חיוניות תא (%) = (תמצית דגימת ABS/בקרת תאים ABS) x 100
כאשר:
בקרת תאי ABS = ספיגת בארות בקרה לא מטופלות המכילות תאים ומדיום תרבית בלבד.
ABS Sample Extract = ספיגת בארות המכילות תאים שטופלו בתמצית הצמח.

5. סינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום

הוסיפו 9890 מיקרוליטר מים מזוקקים לצינור תגובה סטרילי.
הוסיפו 100 מיקרוליטר של תמצית צמחים.
מוסיפים 10 מיקרוליטר של 1 M MgCl₂ כדי לקבל ריכוז סופי של 10 מ"מ.
אזהרה: מגנזיום כלוריד עלול לגרום לגירוי. התנהגו עם ציוד מגן מתאים והימנעו ממגע עם עיניים ועור.
הערה: תגובת הבסיס מורכבת מ-1% תמצית (v/v) + 10 mM MgCl₂ בנפח כולל של 10 מ"ל. כדי למקסם את היווצרות NP, ניתן להתאים את ריכוז התמצית תוך שמירה על הנפח הסופי וריכוז MgCl₂.
מערבבים היטב כדי להומן את התמיסה.
דגירה ב-75 מעלות צלזיוס למשך 18 שעות.
אזהרה: טמפרטורות גבוהות עלולות לגרום לכוויות. השתמש בציוד מגן מתאים בעת טיפול בדגימות מחוממות.
הערה: שינוי צבע עשוי להעיד על היווצרות ננו-חלקיקים.
אפשר לתערובת להתקרר לטמפרטורת החדר לפני האפיון.

6. אפיון ננו-חלקיקים

פיזור אור דינמי (DLS)
1. העבר ~750 מיקרוליטר של השעיית ננו-חלקיקים לתא מדידה.
2. הכניסו את התא לתוך המכשיר ובצעו מדידות בטמפרטורה של 25 מעלות צלזיוס.
3. רכישת נתוני גודל החלקיקים באמצעות מצב זיהוי מתאים.
4. נתח כל דגימה בשלושה עותקים עם חמישה תת-ריצות לכל מדידה.
מיקרוסקופיית כוח אטומי (AFM)
1. הפקיד 10 מיקרוליטר של ננו-חלקיקים על מיקה שנחתכה זה עתה.
2. ייבשו את הדגימה במייבש למשך 2 שעות.
3. שטפו בעדינות את יריעת המיקה שלוש פעמים עם 20 מיקרוליטר מים מזוקקים מסוננים. החזירו את הדגימה למייבש ואפשרו לה להתייבש בטמפרטורת החדר למשך שעתיים נוספות.
  הערה: שטיפה מסירה מלחים עודפים ומשפרת את איכות התמונה.
4. הגדר את מיקרוסקופ הכוח האטומי על ידי ביצוע הגדרת מכשירים ויישור לייזר בהתאם להוראות היצרן. לצלם תמונות שטח של ה-NPs עם שטח סריקה של 500 ×-500 ננומטר.
  הערה: AFM משמש להערכה איכותית של מחוספסות פני השטח ולהמחשת המאפיינים המורפולוגיים של MgNPs המסונתזים מ-S. adstringens, ליצירת תמונות תלת-ממדיות ברזולוציה גבוהה.

7. ניסוח ננו-פיטוקוסמטיקה

פאזה מחוממת
1. שקלו 29.7 גרם מים מטוהרים, 0.50 גרם הידרוקסיאתיל צלולוז (HEC), ו-3 גרם גליצרין במיכלים נפרדים.
2. הניחו את המים במערבל מגנטי וחממו ל-70–75 מעלות צלזיוס עם ערבוב עדין.
3. הוסיפו HEC בהדרגה למים המחוממים תוך כדי ערבוב כדי למנוע הצטברות.
  הערה: הידרציה עשויה לדרוש 15–30 דקות.
4. מוסיפים גליצרין ומערבבים עד שהם הומוגניים.
שלב הקירור
1. בכוסות נפרדות, יש לשקול 30 גרם מים מטוהרים, 3 גרם ניאצינמיד, 33.3 גרם MgNPs מסונתזים מ-S. adstringens, 0.3 גרם חומצה היאלורונית במשקל מולקולרי נמוך, ו-0.2 גרם אלכוהול בנזיל וחומצה דהדרואצטית ליצירת שלב הקירור.
2. המיס את הניאצינמיד לחלוטין במים בטמפרטורת החדר.
3. הוסף חומצה היאלורונית וערבב עד לאחידות.
4. הוסף S. adstringens MgNPs וערבב בעדינות.
5. הוסף חומר משמר ומערבב.
מיקסינג
1. קרר את הפאזה המחוממת ל-~40 מעלות צלזיוס.
2. הוסיפו את שלב הקירור לאט לשלב המחומם בזמן הערבוב.
3. מדוד את ה-pH של הנוסחה. לנוסחאות סרום המכילות ניאצינמיד, pH יעד של 5.0–6.5 הוא מתאים.
  הערה: ניאצינמיד יציב סביב pH ניטרלי או מעט חומצי. השתמש בכמויות קטנות של חומצה ציטרית או נתרן הידרוקסיד כדי לכוון את ה-pH במידת הצורך.

8. הערכת יציבות קוסמטית

יציבות ראשונית (12 ימים)
1. הכינו ארבע דגימות משוכפלות של הסרום הקוסמטי במיכלים אטומים.
2. חשוף את הדגימות לשישה מחזורי הקפאה-הפשרה רצופים. אחסון הדגימות ב-50 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ואז בטמפרטורה של −5 מעלות צלזיוס למשך 24 שעות, והשלים מחזור מלא אחד כל 48 שעות.
3. לאחר כל מחזור, יש לתעד תכונות אורגנולפטיות על ידי בדיקה ויזואלית של הנוסחה לשינויים במראה, בצבע, בריח ובהפרדת פאזה.
4. מדדו pH של ארבע הדגימות בטמפרטורת החדר, באמצעות מד pH דיגיטלי מכויל. קבעו צמיגות באמצעות ויסקומטר סיבובי בהתאם להוראות יצרן הציוד.
  הערה: וריאציות ≤10% הן מקובלות. שינויים העולים על סף זה עשויים להעיד על חוסר יציבות בנוסחה ויש לחקורם לעומק. אם הנוסחה עוברת את המחקר הראשוני, יש לבצע בדיקת יציבות מואצת.
יציבות מואצת (90 ימים)
1. הכינו שמונה דגימות מהפורמולה הקוסמטית. אחסן ארבע דגימות בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס וארבע דגימות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
2. הערכה ב-0, 1, 7, 15, 30, 60 ו-90 יום.
3. הערך ותיעוד תכונות אורגנולפטיות על ידי בדיקה ויזואלית של הנוסחה לשינויים במראה, בצבע, בריח ובהפרדת פאזה.
4. מדדו pH של הדגימות בטמפרטורת החדר, באמצעות מד pH דיגיטלי מכויל. קבעו צמיגות באמצעות ויסקומטר סיבובי בהתאם להוראות יצרן הציוד.
  הערה: הערכת היציבות בוצעה בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי סוכנות המעקב הבריאותי הברזילאית¹⁹. בארצות הברית, בדיקות יציבות פועלות לפי המלצות ה-FDA²⁰. באיחוד האירופי, הערכת יציבות עומדת בתקנה (EC) מס' 1223/2009²¹, המחייבת הכללת דוח בטיחות מוצרי קוסמטיקה (CPSR). נספח I של תקנה זו דורש נתוני יציבות מתועדים לתמיכה בבטיחות ובחיי המדף של הנוסחה הקוסמטית, כאשר הבדיקות מתבצעות בדרך כלל בהתאם להנחיות המותאמת ISO/TR 18811:2018²², "הנחיות לבדיקות יציבות של מוצרי קוסמטיקה".

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

תהליך הייבוש של קליפת הצמח הוא שלב קריטי בשימור תרכובות ביואקטיביות ובהבטחת יישומן בתעשיות המזון, התרופות והקוסמטיקה. לעומת זאת, ייבוש לא מספק עלול לגרום להכהות מופרזת, אובדן ארומה, זיהום מיקרוביאלי ופירוק של תרכובות ביואקטיביות, ובכך לפגוע באיכות הקליפה הגולמית. טבלה 1 מסכמת את הקריטריונים המשמשים להבחנה בין חומר צמחי מיובש כראוי או לא נכון.

יחד, גורמים אלו מדגישים כי ייבוש מספק אינו רק טכניקת שימור אלא גורם מכריע בשמירה על הערך הפונקציונלי ו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול המוצג כאן מתאר תהליך שכפול לסינתזה ירוקה של MgNPs באמצעות תמצית S. adstringens ושילובם בנוסחת סרום ננו-פיטוקוסמטית. מספר שלבים קריטיים להבטחת תוצאות אמינות. ראשית, יש לתקן בקפידה איסוף ותיעוד חומרי צמחים, כולל רישום מדויק של קואורדינטות גאוגרפיות, תנאי סביבה ושלב פנולוגי, שכן שונות בפיזיולוגיה של הצמח ותכולת מטבוליטים משנית יכולה להשפיע ישירות על הרכב התמצית, ולכן על יעילות הפחתת וייצוב NP^16,17.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין ניגוד עניינים. מקורות המימון לא היו מעורבים בתכנון המחקר, איסוף הנתונים, הניתוח, הפרשנות או ההחלטה לפרסם את התוצאות.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים רוצים להודות לאוניברסידאדה הקתולית דום בוסקו ולאוניברסידאדה הקתולית ברזיליה על תמיכתן במהלך בניית העבודה הזו. עבודה זו נתמכה גם על ידי Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq), Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF), Financiadora de Estudos e Projetos (FINEP), ו-Fundação de Apoio à Pesquisa do Mato Grosso do Sul (FUNDECT).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
לוחות 96 בארות	סיגמא-אלדריץ'	M0812	בדיקות תאים
בנזיל אלכוהול & חומצה דהדרואצטית	סיגמא-אלדריץ'	1,09,626	חומר משמר
צינורות צנטריפוגה (15 מ"ל / 50 מ"ל)	פלקון (קורנינג)	430766	טיפול בדגימות
חומצה ציטרית	סיגמא-אלדריץ'	C0759	התאמת pH
חממת CO₂	תרמופישר סיינטיפיק	3110	חממת CO₂ המשמש לתרבות תאים
חומר מסנן כותנה	ספק מקומי	LH R/260	סינון
דסיקטור	מרק	BAF424002141	ייבוש
DPPH (2,2-דיפניל-1-פיקרילהידראזיל)	סיגמא-אלדריץ'	D9132	בדיקת נוגדי חמצון
תנור ייבוש	Nova & Eacute; טיקה	400/5NDR	תנור לייבוש חומר צמחי
תנור קל	סולידסטיל	SSE-85L	תנור המשמש לבדיקות יציבות קוסמטיות
בקבוקי ארלנמאייר 1000 מ"ל	וידרולבור	76200B01000	חילוץ
אתנול (98%)	דינמיקה-קימיקה עכשווית	עמ' 10.0051.015.36	ממס חילוץ
סרום בקר עוברי (FBS)	גיבקו (תרמו פישר)	ES-009-C	תוספת
מקפיא	גלופאר	GTPC-575	מקפיא המשמש לבדיקות יציבות
גליצרין	בוטיקה בוטניקה	TBV084.003904.086	חומר לחות
חומצה היאלורונית (משקל מולקולרי נמוך)	בוטיקה בוטניקה	J201220136	סוכן הידרציה
חומצה כלורית (HCl)	סיגמא-אלדריץ'	1,00,317	מסיסות MTT
הידרוקסיאתילצלולוז (HEC)	בוטיקה בוטניקה	AH230641697	מעבה
איזופרופנול	סיגמא-אלדריץ'	100995	מסיסות MTT
טחנת הסכינים	7LAB	920Willye 4× 4 להבים	טחינת עלים, שורשים, זרעים ופקעות
מגנזיום כלוריד (MgCl₂)	סיגמא-אלדריץ'	1,01,872	סינתזת ננו-חלקיקים
Magnetic stirrer– פלטת חימום	איקה	5030000	מיקסינג
מתנול	סיגמא-אלדריץ'	900641	בדיקת DPPH
דפי מיקה	תרמופישר סיינטיפיק	NC9655733	הכנה ל-AFM
קורא מיקרופלט	תרמופישר סיינטיפיק	Multiskan GO 1510-03581	קורא מיקרופלט
מגיב MTT	סיגמא-אלדריץ'	CT01-5	בדיקת כחיות תאים
תאי NHDF	BCRJ	0089	פיברובלסטים דרמליים אנושיים
ניאצינמיד	בוטיקה בוטניקה	211847	מרכיב פעיל
תנור	טרמו סיינטי	PR305225M	ייבוש
פניצילין– סטרפטומיצין	גיבקו (תרמו פישר)	15140122	אנטיביוטיקה
מד pHm	דיג'ימד	DM-220	משמש למונוטורינג pH בבדיקות יציבות
פיפטות וטיפים	אפנדורף	30078551	טיפול בנוזלים
מים מזוקקים / מטוהרים	מרק (מילי-קיו)	ZIX7010T0C	שימוש כללי
מקרר	מטאלפריו	VB40W	מקרר המשמש לבדיקות יציבות
ויסקומטר סיבובי	נובוטסט	VISC-5SA	משמש למדידת צמיגות במבחני יציבות
RPMI-1640 בינוני	גיבקו (תרמו פישר)	11875093	תרבית תאים
קנה מידה	BEL Engeneering	HPBG-2285	משקל לשקילת חומרים
מיקרוסקופ סורק	שימדזו	SPM-9700HT	AFM, מיקרוסקופ גלאי סורק
נתרן הידרוקסיד (NaOH)	דינמיקה-קימיקה עכשווית	עמוד 10.0594.024.00	התאמת pH
ספקטרופוטומטר	תרמופישר סיינטיפיק	A51119700C	ספיגה
ויטמין C (חומצה אסקורבית)	סיגמא-אלדריץ'	PHR1008	שליטה חיובית
Zetasizer Pro	מלוורן אנליטי	Zetasizer Pro	לפיזור אור דינמי וגודל זטה

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Stryphnodendron adstringens

סינתזה ירוקה של ננו-חלקיקי מגנזיום מצמחי סוואנה ניאוטרופיים מקומיים לנוסחאות ננו-פיטוקוסמטיות ניתנות להרחבה

במאמר זה

סיכום

תקציר

מבוא

פרוטוקול

תוצאות

דיון

גילויים

תודות

חומרים

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מאמרים קשורים