גירוי אוזניים דרך העור בשילוב עם דדוקציה סונשי דינגטונג הקלו על פגיעה פתולוגית ברחם ושינויים הקשורים לדלקת במודל חולדה של דיסמנוריאה ראשונית עם קיפאון צ'י וסטאזיס דם, בליווי ביטוי mRNA משתנה של PPAR-γ2 ו-COX-2.
מאמר מחקר
* These authors contributed equally
גירוי אוזניים דרך העור בשילוב עם דדוקציה סונשי דינגטונג הקלו על פגיעה פתולוגית ברחם ושינויים הקשורים לדלקת במודל חולדה של דיסמנוריאה ראשונית עם קיפאון צ'י וסטאזיס דם, בליווי ביטוי mRNA משתנה של PPAR-γ2 ו-COX-2.
דיסמנוריאה ראשונית עם קיפאון צ'י ודפוס סטאזיס דם קשורה לדלקת וכאב ברחם, והטיפולים הפרמקולוגיים הנוכחיים עלולים לגרום לתופעות לוואי. מחקר זה העריך את ההשפעות הטיפוליות המשולבות של אלקטרוסטימולציית נקודת האוזן (TEAP) וסוכרת סונשי דינגטונג (SDD) במודל עכברוש של קיפאון צ'י ודיסמנוריאה ראשונית של סטאזיס דם. שלושים ושש נקבות חולדות ספרג–דולי הוקצו באקראי לקבוצות הבלנק, מודל, SDD, TEAP, TEAP PLUS SDD ואיבופרופן. המודל הושר באמצעות סנסיטיזציה של אסטרדיול בנזואט, גירוי מאמץ משולב לאפינפרין הידרוכלוריד ומתן אוקסיטוצין. חולדות קיבלו תמיסת מלח תקינה, SDD, איבופרופן או TEAP בנקודות אוזניים מוגדרות למשך שבעה ימים. מורפולוגיית הרחם נבדקה באמצעות צביעת המטוקסילין ואאוזין. רמות הרחם של IL-1β, IL-6, TNF-α, PGF2α ו-PGE2 נמדדו באמצעות ELISA, וביטוי ה-mRNA ברחם PPAR-γ2 ו-COX-2 נמדד באמצעות PCR בזמן אמת. חולדות מודל הראו ניוון אפיתל ברחם, חדירת נויטרופילים, עלייה בביטוי IL-1β, IL-6, TNF-α, PGF2α ו-COX-2, והפחתה בביטוי mRNA של PGE2 ו-PPAR-γ2. TEAP או SDD לבדו הפכו חלקית את השינויים הפתולוגיים והמולקולריים הללו, בעוד ששילוב TEAP עם SDD יצר שיפורים בולטים יותר, עם השפעות דומות לאלו שנצפו בקבוצת האיבופרופן. ממצאים אלו מצביעים על כך ש-TEAP בשילוב עם SDD מקל על פגיעות פתולוגיות ברחם ושינויים הקשורים לדלקת בעכברים של קיפאון צ'י ודיסמנוריאה ראשונית (QSBSPD), וכי השפעות אלו קשורות לוויסות ביטוי ה-mRNA של PPAR-γ2 ו-COX-2.
דיסמנוריאה ראשונית (PD), המכונה גם כאב וסת פונקציונלי, מאופיינת בהופעת דיסמנוריאה ללא פתולוגיה אורגנית מזוהה בתוך איברי הרבייה1. נשים הסובלות מדיסמנוריאה חמורה לעיתים קרובות מוצאות את עצמן לא מסוגלות לבצע משימות יומיומיות, מה שמשפיע משמעותית על איכות חייהן ומחייב התערבות פרמקולוגיתלהקלה בתסמינים. הספרות הקיימת מצביעה על כך שהיא קשורה לגורמים שונים, כולל פרוסטגלנדינים (PGs), אסטרוגן, פרוגסטרון, וזופרסין, אוקסיטוצין (OT), מערכת החיסון, השפעות נוירואנדוקריניות ושינויים ברמות סידן מיקרואלמנטים3. במקביל, גורמים דלקתיים, כגון גורם נמק הגידול (TNF) ואינטרלוקין-6 (IL-6), יכולים לגרום לסינתזה או להפרשה של PGs. תהליך זה מוביל להתכווצות יתר של שרירי הרחם, מה שמוביל לכאב איסכמי ולפרקינסון4. כיום, ניהול הפרקינסון ברפואה מודרנית מסווג בעיקר לטיפול כללי, טיפול פרמקולוגי והתערבות כירורגית. בין האפשרויות הפרמקולוגיות, נעשה שימוש תכוף בתרופות נוגדות דלקת שאינן סטרואידיות (NSAIDs) כגון איבופרופן. עם זאת, השימוש ב-NSAIDs קשור לתופעות לוואי משמעותיות במערכת העיכול, ושימוש ממושך או כבד עלול לגרום לסיבוכים כמו כיבי קיבה ודימום במערכת העיכולהעליונה. לכן, זיהוי ופיתוח אסטרטגיות בטוחות ויעילות יותר לטיפול בפרקינסון הוא הכרחי והכרחי.
עדויות הולכות ורבות מצביעות על כך שדיסמנוריאה ראשונית קשורה לעיתים קרובות לדפוס עודף ברפואה הסינית המסורתית, שביניהם קיפאון צ'י וסטאזיס דם נצפים לעיתים קרובות קלינית. בדפוס זה, פגיעה בתנועת הצ'י וזרימת הדם נחשבות כתורמות לקיפאון הרחם, לכיווץ מופרז של הרחם ולכאב. לכן, שיטות טיפוליות שמווסתות צ'י, מפעילות את זרימת הדם, מחממת את המרידיאנים ומקלה על כאב הן נפוצות בשימוש במצב זה. טיפול בנקודת האוזניים הוא התערבות חשובה שאינה פרמקולוגית ברפואה הסינית המסורתית. הוא פשוט ליישום ושימש להקלה על כאב על ידי ויסות מסלולי משככי כאבים נוירואנדוקריניים ואנדוגניים7. מרקם סונשי דינגטונג (SDD), נוסחה מבוססת ניסיון קליני שפותחה על ידי מחלקת הגינקולוגיה בבית החולים פוז'ואו לרפואה סינית מסורתית, שימשה לטיפול בדיסמנוריאה המאופיינת בקיפאון צ'י וקיפאון דם. הנוסחה מבוססת על העיקרון הטיפולי של ויסות צ'י ודם, קידום זרימת הדם, חימום המרידיאנים והקלה על כאבי הווסת. SDD מכיל את שישיאו סאן, המורכב מטיפאה אבקנים (פוהואנג) וצואה טרוגופטרורי (וולינגז'י), יחד עם ריזומה קיפרי (שיאנגפו), מור (מויאו), רמולוס סינמומי (גואיז'י), רדיקס וריזומה קלמטידיס צ'יננסיס (ויילינגשיאן), הרבה סליבי צ'יננסיס (שיג'יאנצ'ואן), ריזומה קורידאליס יאנהוסואו (ינחוסואו), רדיקס אנג'ליקה סיננסיס (דנגווי), הרבה ארטמיסיאה אנומלה (ליו-ג'ינו), ופרוקטוס פואניקולי (שיאוהוישיאנג). עם זאת, היעילות הניסיונית של SDD, במיוחד בשילוב עם גירוי אלקטרוסטימלי טרנס-עורי בנקודת האוזן, לא הוערכה באופן שיטתי במודל בעלי חיים מבוקר של קיפאון צ'י ודיסמנוריאה ראשונית של סטאזיס דם.
קולטנים מופעלים על ידי פרוקסיזום (PPARs), השייכים למשפחת קולטני ההורמונים הגרעיניים, הם קולטנים המופעלים על ידי ליגנד החיוניים לויסוי תהליכים מטבוליים תוך-תאי רבים. ישנם שלושה תתי-סוגים מובחנים של PPARs, הידועים כ-PPAR-α, PPAR-β/δ, ו-PPAR-γ8. ממצאים עדכניים מצביעים על כך ש-PPAR-γ2 מתבטא במגוון רחב של רקמות ומפגין קשר משמעותי לתהליכים דלקתיים9. לפי הדוח, PPAR-γ מדכא את הביטוי של IL-6, ציקלואוקסיגנז-2 (COX-2), אנדותלין-1, סינתאז תחמוצת החנקן, מטריקס מטלופרוטאנאז-9, ג'לטינאז ומולקולות הידבקות, באמצעות ביטול גורם גרעיני κB, חלבון-1 המופעל, וממיר אותות ומפעיל מסלולי איתות שעתוק, ובכך מעכב את התגובה הדלקתית10. בנוסף, הואנג ואחרים 11 מציינים כי COX-2 ו-PPAR-γ2 עשויים לשמש כמטרות קריטיות המעורבות בפתופיזיולוגיה של קיפאון צ'י והפרעות קיפאון דם (QSBS).
לכן, מחקר זה חקר את ההשפעות הטיפוליות של אלקטרוסטימולציית נקודת אוזניים טרנס-עורית (TEAP), SDD, ואת היישום המשולב שלהן במודל עכברים של קיפאון צ'י ודיסמנוריאה ראשונית של סטאזיס דם. על ידי שילוב היסטופתולוגיה של הרחם, פרופיל מתווך דלקתי, מדידת פרוסטגלנדין וניתוח mRNA הקשור ל-PPAR-γ2/COX-2, מטרת מחקר זה הייתה להעריך האם טיפול פנימי וחיצוני המבוסס על רפואה סינית מסורתית יכול לספק הגנה מוגברת מפני דלקת רחם הקשורה לדיסמנוריאה. החידוש בעבודה זו טמון בהערכה הניסויית של TEAP בשילוב נוסחת SDD מבוססת ניסיון קליני במודל QSBSPD (קיפאון צ'י מבוקרת וסטאזיס דם) ודיסמנוריאה ראשונית (QSBSPD) ובחקירת הקשר הפוטנציאלי שלה לציר הרגולציה הדלקתי PPAR-γ2/COX-2.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הצהרה אתית
כל נהלי בעלי החיים נבדקו ואושרו על ידי מעבדת הביוטכנולוגיה של פוג'יאן אמברי, מספר אישור ועדת אתיקה לבעלי חיים: IACUC FJABR2024031202). בצע את כל הניסויים בבעלי חיים בהתאם לפרוטוקול הטיפול והשימוש המוסדי המאושר.
הכנה ל-SDD ואיבופרופן
SDD כוללת את שישיאו סאן (9 גרם), שיאנגפו (9 גרם), מויאאו (6 גרם), גויז'י (9 גרם), ויילינגשיאן (12 גרם), שיג'יאנצ'ואן (20 גרם), יאנחוסואו (12 גרם), דאנגגווי (9 גרם), ליו-ג'ינו (15 גרם) ושיאוהוישיאנג (5 גרם). שישיאו סאן מורכבת מפוהואנג (4.5 גרם) ווולינגג'י (4.5 גרם). כל הרכיבים הצמחיים שימשו כגרגירים מרוכזים ומופיעים בטבלת החומרים. הכינו SDD על ידי המסה של 106 גרם גרגירים מרוכזים ב-200 מ"ל מים רותחים כדי לקבל ריכוז סופי של 0.53 גרם למ"ל חומר גולמי שקולה. ערבבו היטב עד שהגרגרים נמסים לחלוטין, אפשרו לתמיסה להתקרר לטמפרטורת החדר, והעבירו אותה באמצעות גאבאז' תוך-קיבתי ב-2.5 מ"ל/ק"ג בכל מנשה. הכינו את תליין האיבופרופן לפי הריכוז הנדרש למדידת תוך-קיבה. ניתן איבופרופן במינון 0.02 גרם לקילו כטיפול ביקורת חיובי.
בעלי חיים וקבוצות
השתמשו ב-36 חולדות Sprague-Dawley בוגרות בריאות בדרגה מסוימת ללא פתוגנים, בגילאי 2–3 חודשים ומשקל 200 ± 20 גרם, ללא היסטוריה של הריון או הזדווגות. שמרו על החולדות במחזור אור/חושך של 12 שעות ו-12 שעות בטמפרטורה של 22 ± 2 מעלות צלזיוס ולחות יחסית של 50%–70%, עם גישה חופשית לאוכל סטנדרטי ומים לשתייה. לאחר שבוע של הסתגלות, חלקו את העכברים באקראי לשש קבוצות (n = 6 לכל קבוצה): בלנק, מודל, SDD, TEAP, SDD + TEAP, וקבוצות איבופרופן.
הכנת וניהול מודל QSBSPD
בניסוי זה נעשה שימוש במודל המקובל של דיסמנוריאה הנגרמת מ-OT. בקיצור, מחזורי הירימה של חולדות הוערכו באמצעות מריחות נרתיקיות. חולדות נחשבו כשירים להכללה במחקר אם נקבע שמשך מחזור הירימה שלהן היה 4–5 ימים.
למעט הקבוצה הריקה, העכברים בקבוצות הניסוי קיבלו הזרקה תת-עורית של אסטרדיול בנזואט ואפינפרין הידרוכלוריד מדי יום במשך 10 ימים. לאחר הזרקת הידרוכלוריד אפינפרין במינון של 0.9 מ"ג/ק"ג ביום, נחשפו החולדות לגירויים משולבים שונים (א: גירוי אקוסטי: החולדות נחשפו לגירויים אקוסטיים (90 דציבלים, 1 קילוהרץ) למשך 5 דקות לפעם, 3–4 פעמים ביום, עם מרווח של שעתיים בכל פעם. ב: גירוי אור: חולדות נחשפו לגירויים של אור מהבהב במשך 5 דקות לפעם, 3–4 פעמים ביום, עם מרווח של שעתיים בין כל פעם. ג: גירוי חשמלי: חולדות עברו גירוי חשמלי (פולסים דו-פאזיים בגל מרובע) בתדר 30–35 וולט, כאשר זרם חילופין הוחלף למשך 0.3 שניות כל 2 שניות. הגירוי ניתן במשך 5 דקות כל 2 שעות, 2–4 פעמים ביום. D: ריסון: חולדות הוכנסו לכלוב ריסון שנבנה מתיל תיל באורך של כ-25 ס"מ וקוטרו כ-5 ס"מ. ברגע שנכנסו לכלוב, הקצוות היו מהדקים כדי לשתק את החולדות ולהגביל את תנועתן לשעתיים, פעם ביום). בנוסף, בימים 1 ו-10, העכברים קיבלו הזרקה תת-עורית של 5.0 מ"ג/ק"ג/יום של אסטרדיול בנזואאט, ובימים 2–9 קיבלו 2.5 מ"ג/ק"ג/יום.
החל מהיום החמישי של הזרקת האסטרדיול בנזואט, העכברים קיבלו מתן תוך-קיבתי של תרופות שונות במשך 7 ימים, פעמיים ביום בשעה 10:00 בבוקר ו-16:00, למעט קבוצת האיבופרופן, שקיבלה פעם ביום בשעה 10:00 בבוקר. בקבוצות הריק, המודל ו-TEAP, החולדות קיבלו 2.5 מ"ל/ק"ג של תמיסת מלח תקינה. בקבוצות SDD ו-TEAP+SDD, החולדות קיבלו 2.5 מ"ל/ק"ג של SDD (שהוכן כ-106 גרם תרופה גולמית מומסת ב-200 מ"ל מים, 0.53 גרם למ"ל); מינון זה הומר מהמינון הקליני היומי של מבוגרים של 106 גרם בהתבסס על שקילות שטח פני הגוף, מה שהוביל למינון שווה ערך לעכברים. בקבוצת האיבופרופן, החולדות קיבלו 0.02 גרם לקילוגרם של השעיית איבופרופן. בקבוצות TEAP ו-TEAP+SDD, העכברים קיבלו גירוי TEAP החל מהיום החמישי לאחר הזרקת אסטרדיול בנזואט. חבר את האלקטרודות לנקודות האוזניים הדו-צדדיות של ג'יאוגן, שנמן, ניישנגג'יצ'י ונייפןמי, כפי שהוגדר לפי תקן שדווח קודם לכן למיקום נקודות דיקור בעכברים12. נקודות אלו ממוקמות בחלל הקונכל הדו-צדדי באוזן, המעורבב על ידי עצב הוואגוס. האלקטרודות חוברו למכשיר טיפול אלקטרוני במחטים, שסיפק גל רציף למשך 20 דקות (תדר: 20 הרץ; עוצמה: 1 mA), פעם ביום. חולדות קבוצת TEAP+SDD עברו TEAP לאחר הבדיקה הראשונה של SDD מדי יום. הגירוי הסופי של TEAP בוצע לפני ההזרקה התוך-פריטוניאלית של ה-OT.
ב-24 שעות לאחר הזרקת האסטרדיול בנזואט האחרונה, כלומר ביום ה-11, שעה לאחר המתן התוך-קיבה האחרון, למעט קבוצות הבלנק וה-TEAP, העכברים בקבוצות אחרות קיבלו 2 U OT לכל עכבר עם הזרקה תוך-צפקית. העכברים בקבוצת TEAP עברו הזרקה תוך-פריטוניאלית של OT במינון של 2 U לעכברוש לאחר הגירוי הסופי של TEAP. העכברים בקבוצה הריקה לא קיבלו זריקת OT. פרוטוקול זה הצליח להקים מודל עכברוש של QSBSPD. הבחירה הכוללת של בעלי החיים, הכנת המודלים, לוח הזמנים למתן התרופה, פרמטרי גירוי TEAP ומיקומי נקודות האוזניים מסוכמים באיור 1.
צביעת רייט-גימסה
מחזור הירימה נקבע על ידי צביעת רייט-גימסה של מריחות נרתיקיות. מטוש כותנה סטרילי הונח בתמיסת נתרן כלוריד 0.9% והוכנס בעדינות לתוך תעלת הנרתיק. המטוש סובב 1–2 פעמים כדי לאסוף תאי פילינג נרתיקיים, והדגימה נמרחה באופן שווה על מגלש זכוכית נקי בכיוון אחד. הממרח יובש באוויר בטמפרטורת החדר. נוסף תמיסת צביעת רייט-גימסה לכיסוי הממרח ודגרה במשך 5 דקות. לאחר מכן נוספה נפח שווה של מלח עם בופר זרחן לתמיסת הצביעה, והצביעה נמשכה עוד 5 דקות. המגלשה נשטפה בעדינות שלוש פעמים במים אולטרה-טהורים, יובשה באוויר ונבדקה תחת מיקרוסקופ קל. שלב מחזור הירימה זוהה לפי סוגי התאים הדומיננטיים, כולל תאי אפיתל גרעיניים, תאי אפיתל קורנפיידים ולויקוציטים.
איסוף דגימות
העכברים הונחו בקופסת הרדמה עם ריכוז איזופלוראן שנקבע על 3% עד 5%. לאחר שהעכברים איבדו את ההכרה, הם הועברו לשולחן הניתוחים והוחזקו תחת הרדמה עם מסכה. הריכוז ירד ל-1.5% עד 2.5%. פרוות הבטן של העכברוש נגזרה באמצעות מספריים ולאחר מכן חוטאה באמצעות אלכוהול מקומי. נוצר חתך בקוטר 2–3 ס"מ לאורך קו הבטן החציוני. צד אחד של הרחם, יחד עם הרצועות שלו, הוסר החוצה, ורקמת השומן שהדביקה למשטח הרחם הוסרה. רקמת הרחם בודדה בקפידה. אם העכברוש עדיין חי לאחר הדגימה, יש להמתים אותו באמצעות חנק CO₂.
צביעת המטוקסילין ואאוזין (HE)
רקמות הרחם נקבעו, הוטמעו בפרפין וחולקו בעובי של 5 מיקרון. החלקים עברו שעווה פעמיים בקסילן למשך 10 דקות כל אחד. המקטעים הודרו מחדש ברצף באתנול מוחלט פעמיים למשך 5 דקות כל אחד, ואחר כך 95%, 90%, 80% ו-70% אתנול במשך 5 דקות כל אחד. החלקים נשטפו במים אולטרה-טהורים. בוצעה צביעת המטוקסילין במשך 5 דקות, והחלקים נשטפו במים עד שלא נותר צבע עודף. החלקים הוטבלו במי מלח עם בופר פוספט למשך 5 דקות לצורך הכחול. החלקים נצבעו באאוזין למשך דקה אחת ושוטפו במים. לאחר מכן, החלקים יובשו ב-95% אתנול למשך 10 דקות ואתנול מוחלט למשך 10 דקות, נוקו בקסילן במשך 10 דקות, והותקנו בשרף נייטרלי. תמונות מייצגות צולמו באמצעות מיקרוסקופ אור או סורק שקופיות דיגיטלי.
מבחן אימונוסורבנט מקושר באנזימים (ELISA)
רקמות הרחם הטריות נשטפו עם מי מלח מקוררים מראש עם פוספאט כדי להסיר שאריית דם. כל דגימת רקמה נשקלה, נחתכה לחתיכות קטנות והומוגנית במי מלח מקוררים מראש עם בופר פוספט ביחס רקמה לבופר של 1:9. ההומוגנט עבר צנטריפוגה ב-5000 × גרם למשך 5–10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, והסופרנטנט נאסף לניתוח מאוחר יותר. רמות IL-1β, IL-6, TNF-α, PGF2α ו-PGE2 נמדדו באמצעות ערכות ELISA לעכברים לפי הוראות היצרן. כל המגבים ורצועות המיקרופלטה היו מאוזנות לטמפרטורת החדר לפני השימוש. תקנים או דגימות (50 מיקרוליטר) נוספו לבארות המיועדות. נוגדן גילוי מצומד פרוקסידאז (100 מיקרוליטר) נוסף לכל באר למעט הבארות הריקות, והצלחת נאטמה ודגרה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות. הנוזל נזרק, וכל באר נשטפה חמש פעמים עם בופר שטיפה מדולל. לאחר מכן נוספו 50 מיקרוליטר של מצע A ו-50 מיקרוליטר של מצע B לכל באר, ואחריהם דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס בחושך למשך 15 דקות. לאחר מכן נוספה תמיסת עצירה (50 מיקרוליטר) לכל באר, והצפיפות האופטית נמדדה ב-450 ננומטר בתוך 15 דקות. ריכוזי המדגם חושבו מהעקומות הסטנדרטיות.
PCR כמותי בזמן אמת (qRT-PCR)
סך ה-RNA הופק מרקמות רחם באמצעות תגובת חילוץ RNA מלאה לפי הוראות היצרן. בקצרה, הרקמה טוחנה בחנקן נוזלי, והוספה 1 מ"ל של תגובת חילוץ RNA. הליזאט דוגר בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות. לאחר מכן נוסף כלורופורם (200 מיקרוליטר), והתערובת נערכה בעוצמה במשך 15 שניות, דגרה בטמפרטורת החדר במשך 5 דקות, וצנטריפוגה ב-12,000 × גרם למשך 12 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. הפאזה המימית הועברה לצינור חדש, מעורבבת בעדינות עם נפח שווה של איזופרופנול, ודגרה בטמפרטורה של −20°C למשך 15 דקות. הדגימות צונטרו ב-12,000 × גרם במשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, הסופרנטנט הושלך, והכדור של ה-RNA נשטף עם 75% אתנול. הכדור יובש באוויר והומס במים ללא RNase. ריכוז וטוהר ה-RNA נקבעו באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרו-נפח. ה-DNA הגנומי הוסר, ו-cDNA סונתז בהתאם להוראות התגובה ההפוכה. להסרת DNA גנומי, כל ה-RNA הונח עם מגיב הסרת DNA גנומי בטמפרטורה של 42°C למשך 5 דקות ואז הונח על הקרח. תמלול הפוך בוצע בטמפרטורה של 50 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, ואחריו 75 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות לסיום התגובה.
PCR בזמן אמת בוצע באמצעות תערובת qPCR מבוססת SYBR Green. כל תגובה של 20 מיקרוליטר כללה 2 מיקרוליטר cDNA, 0.4 מיקרוליטר פריימר קדמי, 0.4 מיקרוליטר פריימר הפוך, 10 מיקרוליטר של 2× SYBR qPCR, ו-7.2 מיקרוליטר מים ללא נוקלאז. ה-qPCR בוצע בתוכנית הרכיבה הבאה: 95 מעלות צלזיוס למשך דקה אחת; 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס ל-20 שניות, 56 מעלות צלזיוס ל-20 שניות, ו-72 מעלות צלזיוס ל-38 שניות; לאחר מכן ניתוח עקומת התכה. GAPDH שימש כבקרה פנימית, והביטוי היחסי של mRNA חושב בשיטת 2−ΔΔCt . כל דגימה ביולוגית נמדדה בשלושה עותקים טכניים. ערך ה-Ct הממוצע של הטריפליקטים הטכניים שימש לחישוב ΔCt וביטוי mRNA יחסי עבור כל שכפול ביולוגי. רצפי הפריימרים הם כדלקמן: PPAR-γ2, קדימה 5′-CGGAAGCCCTCTGTGACTT-3′ והפוך 5′-CTCGATGGCTTCACGTCCA-3′; COX-2, קדימה 5′-AACCAGGGTGAACTTGTCTATTAG-3′ ואחורי 5′-GGTCGGTGTGTGTGTCACTGA-3′; GAPDH, קדימה 5′-GGTGTCTCCTGCGACTTCA-3′ ואחורי 5′-GGTGGTCCAGGTTCTTACTC-3′.
ניתוח סטטיסטי
הנתונים נותחו באמצעות תוכנה סטטיסטית. כל הנתונים הכמותיים הוצגו כסטיית תקן ממוצעת ±. לניתוח qRT-PCR, נמדדו תחילה ממוצע משולש הטכני עבור כל שכפול ביולוגי, ובוצע ניתוח סטטיסטי באמצעות ערכי השכפול הביולוגי. השוואות בין קבוצות מרובות בוצעו באמצעות ניתוח חד-כיווני של שונות, ואחריו מבחני Bonferroni לאחר מבחנים כאשר הנתונים עמדו בהנחות של נורמליות והומוגניות של שונות. המובהקות הסטטיסטית הוגדרה כ-P < 0.05.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
סינון מחזור הירימה בעכברים
תוצאות צביעת רייט-גימסה הראו כי המריחות הנרתיקיות בפראואסטרוס הציגו בעיקר תאי אפיתל גרעיניים, עם כמות קטנה של קרטינוציטים. גרעיני תאי האפיתל הללו נראו מוכתמים קלות, מוגדלים והראו סימני התמוססות. באוסטרוס, הריחות התאפיינו בדומיננטיות של תאי אפיתל גדולים ונשירים קרטיניים. בפוסטאסטרוס הייתה נוכחות משמעותית של תאי אפיתל קרטיניים יחד עם אוכלוסייה קטנה של לויקוציטים. באנסטרוס, המריחות סומנו במספר משמעותי של לויקוציטים ועלי...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
PD הוא כאב בטן תחתונה שמופיע לפני ובמהלך הווסת ללא נזק אורגני מזוהה באזורים המיניים או האגן1. לפי הסקר, כ-45%–90% מהנשים ברחבי העולם חוות דיסמנוריאה, כאשר 10% עד 25% סובלות מדיסמנוריאה חמורה13. לכן, חיוני לזהות התערבויות בטוחות ויעילות יותר לפרקינסון ולהבהיר עוד יותר את המנגנונים הבסיסיים שלהן.
כיום, הפרוטוקול המוכר להשראת מודל PD בעכברים כולל סימולציה של תסמיני דיסמנוריאה באמצעות מתן אסטרוגן וריפוק בעיסוק. שיטה ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.
מחקר זה נתמך על ידי פלטפורמת החדשנות למדעי הבריאות והטכנולוגיה של פוז'ואו - "פלטפורמת החדשנות המורשת של רפואה סינית מסורתית בפוז'ואו" (מענק מס' 2021-S-wp3) ופרויקט קרן המדע הטבעי של פוג'יאן - "בהתבסס על מסלול איתות PPAR-gamma-2 / COX-2, מנגנון הגירוי החשמלי דרך העור בשילוב עם דקוקציה סונשי דינגטונג בקיפאון צ'י ודיסמנוריאה ראשונית של סטאזיס דם באמצעות רגולציה" (מענק מס' 2022J01121509).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 0.9% sodium chloride solution | חברת Heilongjiang Qiqin למוצרי בריאות בעלי חיים | 240314A03 | שטיפת רקמות והכנת דגימות |
| 1× phosphate-buffered saline (PBS) | Biosharp | BL601A | שטיפת רקמות, הומוגניזציה ב-ELISA והליכי צביעה |
| מערכת גירוי אקוסטי ואור | מיוצר באופן מותאם אישית במתקן בעלי חיים | מיוצר בהתאמה אישית | גירוי לחץ משולב במהלך בניית מודל QSBSPD |
| שקופיות מיקרוסקופ דביקות | Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd. | 80312-3161 | הכנת חתכי פרפין ומריחות נרתיקיים |
| סורק שקופיות דיגיטליות אוטומטי | Guangzhou Guangying Cell Technology Co., Ltd. | GCell-60 | הדמיה דיגיטלית של חתכים צבועים ב-HE |
| מייבש רקמות אוטומטי | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-TS | התייבשות רקמות לפני הטבעה בפרפין |
| מיקרוסקופ ביולוגי | Nikon | E200MV | תצפית על מריחות נרתיקיים וחתכי רקמות צבועים |
| בלון גז CO2 ותא הרגעה | מרכז בעלי החיים של בית החולים Fuzhou לרפואה סינית מסורתית | מערכת CO2 מוסדית | הרגעת בעלי חיים |
| לוח קירור לתחנת הטבעה | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL | הטבעה בפרפין |
| מטחנת קריוגנית | Shanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd. | TISS-24 | הומוגניזציה של רקמות |
| Danggui (Radix Angelicae Sinensis) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A1070343 | מרכיב SDD; גרגירים מרוכזים |
| מים שעברו טיפול DEPC | Meilunbio | MA0018 | ריאגנט qRT-PCR |
| מכשיר טיפול בדקירת מחטים אלקטרוני | Suzhou Medical Appliance Factory Co., Ltd. | SDZ-II | גירוי TEAP ועירוי חשמלי |
| מאזניים אלקטרוניים אנליטיים | Sartorius Balance Beijing Co., Ltd. | BS 224S | שקילה של דגימות וריאגנטים |
| אאוזין | Epredia | 7111 | צביעת HE |
| אפינפרין הידרוכלוריד | TargetMol | 119091 | בניית מודל QSBSPD |
| אסטרדיול בנזואט | Sigma-Aldrich | E8515 | בניית מודל QSBSPD |
| אתנול | Xilong Scientific Co., Ltd. | 240403A1 | עיבוד רקמות והתייבשות |
| Guizhi (Ramulus Cinnamomi) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A2060533 | מרכיב SDD; גרגירים מרוכזים |
| המטוקסילין | Epredia | 7211 | צביעת HE |
| מתלה איבופרופן | Shanghai Johnson & Johnson Pharmaceutical Co., Ltd. | H20000359 | תרופה שליטה חיובית; 20 מ"ג/מ"ל |
| Liujinu (Herba Artemisiae Anomalae) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A210A413 | מרכיב SDD; גרגירים מרוכזים |
| צנטריפוגה מיני מהירה | Hunan Xiangyi Laboratory Instrument Development Co., Ltd. | WTL-4K | הכנת דגימות |
| מיקרו-צנטריפוגה מקוררת | Beckman Coulter | Microfuge 22R | הפקת RNA והכנת תמצית רקמות |
| קורא מיקרופלטות | Guangdong Danli Technology Co., Ltd. | K3 | מדידת ספיגה ב-ELISA באורך גל של 450 ננומטר |
| משקפים למיקרוסקופ | Jiangsu Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd. | 80340-1630 | הכנת שקופיות מיקרוסקופ |
| דגירה לתבניות | Shanghai Lichen Bangxi Instrument Technology Co., Ltd. | W0704 | דגירה במהלך תהליכי צביעה או בדיקה |
| Moyao (Myrrh) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | 1107853 | מרכיב SDD; גרגירים מרוכזים |
| בלזם ניטרלי | Meilunbio | MB9899 | הרכבת חתכי רקמות צבועים |
| NovoScript Plus All-in-one 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix | Novoprotein | E047-01A | תעתוק הפוך |
| NovoStart SYBR qPCR SuperMix Plus | Novoprotein | E096-01B | הגברה ב-qRT-PCR |
| זריקת אוקסיטוצין | Anhui Fengyuan Pharmaceutical Co., Ltd. | 220906-4 | גרירה של מודל QSBSPD |
| שעווה פרפין | Hualing | 20220918 | הטבעה בפרפין |
| מערכת PCR | Bio-Rad | PTC-100 | נוהלים הקשורים ל-PCR |
| Puhuang (Pollen Typhae) | Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd. | A2092143 | מרכיב SDD; גרגירים מרוכזים; מרכיב של Shixiao San |
| פריימרים qRT-PCR עבור PPAR-γ2, COX-2 ו-GAPDH | Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd. | סינתזה מותאמת אישית | פריימרים qRT-PCR |
| ערכת ELISA ל-IL-1β של חולדות | Meimian Biotechnology | MM-0047R2 | ערכת ELISA |
| ערכת ELISA ל-IL-6 של חולדות | Meim |
בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה
בקש הרשאה