מאמר שיטה

ביסוס פרוטוקול סטנדרטי של מניפולציית צביטה של עמוד השדרה עבור מודל חולדות לאסטמה של ילדים

9 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70623

⸱

1 באוקטובר 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Massage, Nanjing University of Chinese Medicine

במאמר זה

סיכום

מאמר זה מציג פרוטוקול סטנדרטי למניפולציה של צביטה בעמוד השדרה (SP) במודל של חולדות צעירות עם אסמה. פרוטוקול זה הפחית דלקת במערכת הנשימה, תגובתיות-יתר ואת remodeling (שינוי מבני) במודל של אסמה המושרה על ידי OVA. המחקר עשוי להניח את היסודות לחקירה מכניסטית ולתרגום קליני.

תקציר

אסתמה היא המחלה הדלקתית הכרונית השכיחה ביותר של דרכי הנשימה בילדים, והיא מאופיינת בדלקת כרונית של דרכי הנשימה, תגובתיות יתר של דרכי הנשימה (AHR) ושינוי מבני של דרכי הנשימה (remodeling). ברפואה סינית מסורתית (TCM), מניפולציית צביט עמוד השדרה (SP) היא טכניקת עיסוי פדיאטרית נפוצה לניהול אסתמה ומחלות ילדות אחרות. למרות היסטוריה של שימוש קליני הנפרשת על פני יותר מ-1,000 שנים, SP נותרת במידה רבה לא מוכרת מחוץ לסין. יתרה מכך, המנגנונים העומדים בבסיס ה-SP טרם אופיינו באופן מספיק. מאמר זה מתאר פרוטוקול ישים וסטנדרטי ל-SP המשחזר את ההליכים החיוניים המשמשים בפרקטיקה הקלינית. יישום הפרוטוקול שיפר את הדלקת בדרכי הנשימה, את ה-AHR ואת השינוי המבני של דרכי הנשימה במודל חולדה צעירה של אסתמה. כדי להגביר את השחזוריות, פרמטרים פרוצדורליים מרכזיים הותקנו כסטנדרט, כולל לחץ האצבעות, תדירות המניפולציה, מספר החזרות ומשך ההתערבות. הפרוטוקול הסטנדרטי במחקר זה עשוי לשמש כנקודת ייחוס למחקרים נוספים על סטנדרטיזציה של SP והמנגנונים העומדים בבסיסה באסתמה פדיאטרית ניסויית.

מבוא

אסטמה פדיאטרית מאופיינת בדלקת כרונית של דרכי הנשימה, תגובתיות יתר של דרכי הנשימה (AHR), ועיצוב מחדש של דרכי הנשימה1,2. היא מתחילה לעיתים קרובות בילדות המוקדמת והיא המחלה הכרונית השכיחה ביותר בקרב ילדים בגיל בית ספר. הטיפולים הקונבנציונליים הנוכחיים כוללים קורטיקוסטרואידים בשאיפה, אגוניסטים של בטא-2 (β₂-receptor agonists), חסמי קולטני לוקוטריאנים, וטיפולים ביולוגיים3,4. עם זאת, רק 44.1% מהילדים ו-55.4% מהמתבגרים עם אסטמה מגיעים לשליטה נאותה במחלה ברחבי העולם5. יתרה מכך, מתן חוזר של קורטיקוסטרואידים סיסטמיים או בשאיפה עלול לתרום לעיכוב בצמיחה בקרב ילדים עם אסטמה שאינה תחת שליטה טובה6.

כטיפול חיצוני מסורתי, עיסוי (המכונה גם tuina בסין) הוא יעיל מבחינת עלות, נסבל היטב ונחשב בדרך כלל לבטוח עבור ילדים. עיסוי משמש מזה זמן רב הן בסין והן במדינות המערב למניעה ולטיפול באסתמה בילדים7. סקירות שיטתיות ומטא-אנליזות דיווחו על תוצאות חיוביות של טיפול בעיסוי בניהול אסתמה בילדים7,8. מניפולציה של צביטה של עמוד השדרה (SP) היא טכניקה קלאסית המיושמת באופן נרחב בעיסוי פדיאטרי סיני מסורתי. לפי תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית (TCM), גרייה של ערוצי ה-Governor Vessel (GV) וה-Bladder (BL) לאורך הגב מווסתת את תפקוד איברי ה-Zang-Fu, ובכך שומרת על הומאוסטזיס סיסטמי ומונעת או מטפלת במחלה9,10,11. מחקרים קודמים הראו כי SP לא רק שיפר תסמינים וסימנים אטופיים בילדים, אלא גם הפחית דלקת כרונית בדרכי הנשימה במודל של חולדות צעירות עם אסתמה12,13,14. בנוסף לשימושו הקליני, SP מיושם נפוצות כהתערבות בריאותית ביתית11,15. למרות היסטוריה קלינית המשתרעת על פני יותר מאלף שנים, SP נותר לא מוכר יחסית מחוץ לסין, והמנגנונים העומדים בבסיסו לא נחקרו באופן נרחב. לכן, מודלים סטנדרטיים של בעלי חיים חיוניים להבנת המנגנונים של SP ולתמיכה בהערכה ויישום מדעיים רחבים יותר שלו.

מספר מחקרים קבעו פרוטוקולי עיסוי סטנדרטיים למחקר בבעלי חיים. מחקר קודם פיתח פרוטוקול סטנדרטי של ליטוף גב או בטן במהירות של כ-20 cm/s ובלחץ של 100 mm H₂O כדי לעכב תגובות עירור קרדיווסקולריות16. לאחרונה, הוכח כי גירוי תחושתי חוזר חד-כיווני של עמוד השדרה לאורך ה-GV באמצעות מעורר מכני מקדם רמיodeling סינפטי בקליפת המוח הפרה-פרונטלית המדיאלית במודל של עכבר מתבגר עם אוטיזם. בפרוטוקול זה, הופעל לחץ בינוני של כ-30–50 g במהירות של כ-15.3 cm/s מבלי לגרום לאי-נוחות או לפגיעה. הגירוי ניתן באופן חד-כיווני מהאזור הזנבי (caudal) אל העורף (האזור האוקסיפיטלי) פעמיים ביום למשך 10 min לאורך תקופה של 21 ימים17. עם זאת, מניפולציה ידנית שונה באופן מהותי מגירוי מכני, ושום מכשיר מכני אינו משחזר כיום את התנועות האופייניות של SP. יתרה מכך, למרות שמספר מחקרים בחנו את המנגנונים של SP במודלים של חולדות עם אסתמה והפרעות פדיאטריות אחרות18, לא נקבע פרוטוקול סטנדרטי להגדרת כוח הגירוי והמהירות הנדרשים ל-SP במחקרי בעלי חיים. לכן, פיתוחו של פרוטוקול SP סטנדרטי הוא חיוני לשיפור השחזוריות ולהקל על חקירות מנגנוניות.

אסמה אלרגית היא הפנוטיפ השכיח ביותר של אסמה בילדים19. בהתאם לכך, רגישות ואתגר לאובאלבומין (OVA) הן השיטות הנפוצות ביותר להקמת מודל ניסויי של אסמה בילדים20. חולדות מתאימות במיוחד לבדיקת התערבויות מבוססות עיסוי מכיוון שגודל גופן הגוף שלהן מקל על מניפולציה ידנית. בנוסף, מודלים של חולדות משחזרים באופן מהימן מאפיינים פתולוגיים מרכזיים של אסמה אלרגית, כולל דלקת עם נטייה ל-Th2, AHR ובנייה מחדש של דרכי הנשימה21.

מחקרים קודמים הוכיחו כי SP הפחית דלקת בדרכי הנשימה בחולדות צעירות לאחר רגישות ואתגר ל-OVA11,14. לפיכך, המחקר הנוכחי נועד לבסס פרוטוקול SP סטנדרטי עבור מודל של חולדות צעירות לאסתמה פדיאטרית, כדי להקל על חקירות עתידיות של המנגנונים העומדים בבסיס ה-SP. פרוטוקול סטנדרטי זה מספק מסגרת ניסויית הדירה למחקרים מכניסטיים ולמחקרים תרגומיים עתידיים על SP במודלים של חיות לאסתמה פדיאטרית.

פרוטוקול

מחקר זה אושר על ידי ועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים של אוניברסיטת נאנג'ינג לרפואה סינית (מספר 202306A032). כל ההליכים בוצעו בהתאם להנחיות המכונים הלאומיים לבריאות (NIH) לטיפול ושימוש בבעלי חיים במעבדה ולהנחיות ARRIVE 2.0.

נעשה שימוש ב-30 חולדות זכרים בני 3 שבועות מסוג Sprague-Dawley (SD), נקיות מפתוגנים ספציפיים (SPF), שמשקלן היה 45–55 g. החולדות שוכנו (שלוש בכל כלוב) במתקן מחסום SPF תחת מחזור אור/חושך של 12 h, בטמפרטורה של 22 ± 2 °C ובלחות יחסית של 30%–40%, עם גישה חופשית למזון סטנדרטי ומים. בהתבסס על מחקרים קודמים שהשתמשו במודלים של חולדות צעירות עם אסתמה11,14, נקבע גודל המדגם כדי למזער את השימוש בבעלי חיים בהתאם לעקרון ההפחתה (reduction) של ה-3Rs. לאחר תקופת אקלימטיזציה של 7 ימים, נרשם משקל הגוף הבסיסי, ולכל חולדה הוקצה מספר זיהוי ייחודי. החולדות חולקו לשכבות לפי משקל הגוף הבסיסי ולאחר מכן הוקצו בתוך כל שכבה לאחת מחמש קבוצות באמצעות טבלת מספרים אקראיים, עם יחס הקצאה של 1:1:1:1:1 (n = 6 לכל קבוצה): ביקורת (CN), אסתמה (AS), אסתמה + SP (AS+SP), אסתמה + methylprednisolone (AS+MP), ואסתמה + SP + methylprednisolone (AS+SP+MP). רצף ההגרלה וההקצאה לקבוצות נוצרו על ידי חוקר שלא היה מעורב בהתערבויות העוקבות או בהערכות התוצאים.

קריטריוני ההכלילה היו חולדות זכר בריאות מסוג SPF SD בגיל 3 שבועות, שמשקלן בקו הבסיס היה 45–55 g, שהפגינו דפוס נשימה תקין ופעילות גופנית רגילה. חולדות הוצאו מהמחקר אם הפגינו סימני מחלה או סטייה במשקל הגוף של >20% מהממוצע של הקוהורט במהלך תקופת ההסתגלות, או אם מתו לפני השלמת שלב ההתערבות. לאורך כל הפרוצדורה נעשה שימוש בציוד מגן אישי מתאים, כולל חלוק מעבדה, מסכה חד-פעמית וכפפות. גופות חיות ורקמות הוכנסו לשקיות סיכון ביולוגי דו-שכבתיות ואוחסנו בטמפרטורה של −20 °C לפני ההשלכה. מצע מזוהם הושלך כפסולת מוצקה של סיכון ביולוגי, וחפצים חדים הושלכו למכלי חפצים חדים מאושרים ועמידים לדקירה. לצורך איסוף רקמות סופי, ה diberikan 20% urethane (במינון של 5 mL/kg, i.p.), ואנסטזיה עמוקה אוששה על ידי היעדר רפלקס נסיגה של הגפה והיעדר רפלקס קרניתי.

1. הקמה של מודל אסתמה בחולדות צעירות

הערה: הפרוצדורה הבאה שימשה להקמת מודל של אסתמה בחולדות צעירות12.

  1. הכינו את תרחיף ה-OVA/Al(OH)₃ מיד לפני כל הזרקה. המיסו 2 mg של Grade V OVA ישירות לתוך 1 mL של ג'ל 4% Al(OH)₃, וערבבו ב-vortex עד לקבלת תרחיף הומוגני.
    הערה: ודאו שהתרחיף הומוגני לפני ההזרקה. אם מתרחשת שקיעה, ערבבו ב-vortex למשך זמן קצר כדי להחזיר את התערובת למצב של תרחיף. אחסנו את התרחיף על קרח והשתמשו בו תוך 2 h מההכנה.
  2. הזריקו 1 mL של תרחיף OVA/Al(OH)₃ תוך-peritoneally בימים ניסויים 1, 8 ו-15. הזריקו 1 mL של תמיסת סליין סטרילית (0.9% NaCl) לחולדות בקבוצת ה-CN לפי אותו לוח זמנים.
  3. בצעו חשיפה (Challenge) לחולדות לתמיסת 2% Grade II OVA מהיום הניסויי ה-21 ועד היום ה-42 באמצעות נבולייזר אולטרסוני. בצעו את שתי החשיפות העוקבות האחרונות עם 3% OVA כדי להשרות החמרה לאחר הרגישה.
  4. בצעו נבוליזציה מדי יומיים למשך 30 min לאורך תקופה של 3 שבועות. הניחו כל חולדה באופן אינדיבידואלי בתא חשיפה אטום המחובר לנבולייזר אולטרסוני (תדר אולטרסוני: 1.7 MHz ± 10%; קצב נבוליזציה: ≥3 mL/min; קוטר חלקיקים: <5 µm).
    הערה: ודאו את ההקמה המוצלחת של מודל האסמה על ידי תצפית על עיטישים, ניעור ראש בזמן הנשימה, נשימה עם פה פתוח, התכווצות שרירי הבטן וצפצופים (wheezing).

2. תפעול ויישום של תוכנת מערכת ה-Finger TPS

  1. החדירו את תקע החיישן בצורה אנכית לממשק של לוח המעגלים. חברו את לוח המעגלים למחשב באמצעות כבל USB-C באורך של כ-40 cm כדי לאפשר גמישות תפעולית מספקת.
  2. חטאו את הידיים ואת מגיני האצבעות. הכניסו את האגודל והאצבע הימנית של המפעיל לתוך שרוולי האצבע המצוידים בחיישנים. מקמו את החיישנים הגמישים במרכז כריות האצבעות והבטיחו מגע הדוק וללא קמטים עם העור.
  3. בצעו כיול מערכת ובקרת איכות עבור מדידת כוח
    1. בדקו את החיישנים ואת כבלי החיבור לפני כל מפגש אימון של המפעיל וודאו שהמכשיר מחובר כראוי.
    2. בחרו ב-"N" כיחידת המדידה והגדירו את טווח המדידה ל-−3.5 עד 32 N.
    3. וודאו שלא מופעל כוח חיצוני על החיישנים. הפעילו את פונקציית ה-"Tare" כדי לאפס את המערכת.
    4. הקליטו את קו הבסיס ללא עומס למשך 30 s. התחילו במדידת כוח רק כאשר השונות בקו הבסיס נשארת מתחת ל-0.02 N.
    5. חזרו על הליך האיפוס בכל פעם שמיקום החיישן או הדוקות של השרוול משתנים, או כאשר נצפה סחף בקו הבסיס.
    6. השתמשו במערכת Finger TPS כדי לנטר את הכוח המופעל במהלך אימון המפעיל. שמרו על כוח של 5 ± 0.6 N במהלך back stroking ועל 12 ± 2 N במהלך SP, תוך שמירה על המהירות והתדירות שנקבעו.
    7. קבלו את עקומת הכוח רק כאשר קו הבסיס נשאר יציב, לא מתרחשות הפרעות באות או רוויה, והכוח המופעל נשאר בטווחים המוגדרים.
  4. בצעו מניפולציית back-stroking ו-SP תוך ניטור עקומת הכוח הדינמית. התאימו את הדוקות של שרוולי האצבעות לפי הצורך עד לקבלת עקומת כוח יציבה.
  5. תרגלו את המניפולציות תוך ניטור עקומת הכוח בזמן אמת. שמרו על כוח יעד של 5 ± 0.6 N ומהירות של כ-5 cm/s במהלך back stroking, ושמרו על כוח יעד של 12 ± 2 N בתדירות של 6–8 חזרות/דקה במהלך SP. הגדירו את המפעיל כבעל כשירות רק לאחר שחמישה ניסיונות תרגול רצופים עומדים בקריטריונים של טכניקת המניפולציה, כוח האצבע ותדירות ה-SP.
    הערה: הגדירו את המפעיל כ đủ מוסמך רק לאחר השגה עקבית של כוח היעד ופרמטרי התנועה. הסירו את מגיני האצבעות לפני ביצוע הליך ה-SP הפורמלי כדי למנוע גירוי תחושתי נוסף של החולדות. עם זאת, אין להתחשב באף אחד מבדיקות השחזור הבין-מפעילים במחקר זה בעת אימוץ פרוטוקול זה כייחוס למחקר ה-SP.

3. פרוצדורה מפורטת של מניפולציית צביטה של עמוד השדרה

  1. החזיקו את החולדה בעדינות במצב שכיבה על הבטן על כף יד אחת. תמכו את הגפיים הקדמיות על ידי חישוק עדין של בתי השחי הקדמיים עם האגודל והאצבע, ואפשרו לגפיים הקדמיות להשתלשל באופן טבעי. ודאו שהחולדה נשארת רגועה עם נשימה יציבה. אם מתרחשים קולקולציות, מאבקים או הפרשות, שחררו את החולדה ואפשרו לה להתרגל למשך 2–3 min לפני מיקום מחדש (איור 1).
  2. ליטפו את הגב פעמיים מאזור הכתף לבסיס הזנב לאורך ה-Governor Vessel (GV) באמצעות האצבע המורה, האמה והקמיצה של יד ימין. הפילו כוח של כ-5 N כדי להרגיע את החולדה לפני ה-SP.
  3. צבטו את העור בבסיס הזנב באמצעות האגודל הימני הממוקם מאחור והאצבע והאמה הממוקמות מלפנים. הרימו את העור בעדינות, לאחר מכן סובבו והקידו את האצבעות באופן קרניאלי לאורך עמוד השדרה לכיוון Dazhui (GV14). הימנעו מגרימה לסימנים ברורים של אי-נוחות. שמרו על לחץ אצבעות של כ-12 N ובצעו את המניפולציה בתדירות של 6–8 חזרות/min. בצעו 15 חזרות מיום ניסוי 1 עד יום 21, ו-25 חזרות מיום 22 עד יום 44.
  4. חזרו על הליך ליטוף הגב המתואר בשלב 3.2 כדי לסיים את מפגש הטיפול ולהרגיע את החולדה.
    הערה: על פי תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית (TCM), ה-SP מבוצע לאורך עמוד השדרה כדי לעורר את מרידיאני ה-GV וה-BL (איור 2). ה-GV נמתח לאורך קו האמצע הדורסלי מבסיס הזנב ועד Dazhui (GV14), בעוד שמרידיאן ה-BL נמצא כ-3–6 mm לטרלית לקו האמצע, בהתאם לגודל הגוף22. Dazhui (GV14) ממוקם בנקודת האמצע בין החוליה הצווארית השביעית לחוליה החזה הראשונה. הגבירו את מספר חזרות ה-SP עם הגיל כדי לחקות את משטר הטיפול הקליני. במהלך ליטוף הגב, ודאו שהחולדה נשארת רגועה, נושמת בשלווה ולא מראה התנהגות הגנתית. במהלך ה-SP, צפויות קשת גב קלה ופריסת שפם ללא השתנה, הפרשה, מאבק אלים, קולקולציות או ניסיונות בריחה שנגרמו מלחץ.

4. פרוטוקולי התערבות

  1. הקצה חולקים לקבוצת ה-CN שלא יקבלו התערבות ספציפית למחלה. טפל בחולקים בעדינות למשך זמן זהה לזה של קבוצת ה-AS+SP כדי לשלוט בהשפעות הטיפול. הזרק תמיסת סלין נורמלית תוך-בטנית (1 mL/kg) לפי אותו לוח זמנים שבו נעשה שימוש להזרקות מתילפרדניזולון.
  2. העמד את החולקים בקבוצת ה-AS לתהליכי רגישות ואתגר ל-OVA. השתמש באותם נהלי טיפול ובבקרת הזרקות סלין שנעשה בהם שימוש עבור קבוצת ה-CN.
  3. העמד את החולקים בקבוצת ה-AS+SP לתהליכי רגישות ואתגר ל-OVA. בצע את פרוטוקול ה-SP פעם ביום לפני השראת המודל.
  4. העמד את החולקים בקבוצת ה-AS+MP לתהליכי רגישות ואתגר ל-OVA. הזרק מתילפרדניזולון (10 mg/kg; 2 mg/mL שהומס בסלין) בהזרקה תוך-בטנית 30 דקות לפני כל אתגר OVA.
  5. העמד את החולקים בקבוצת ה-AS+SP+MP לאותם נהלים ששימשו עבור קבוצת ה-AS+MP. בצע את פרוטוקול ה-SP פעם ביום לפני הזרקת המתילפרדניזולון.
    הערה: למעט קבוצות ה-AS+SP וה-AS+SP+MP, החל את אותם נהלי טיפול על כל שאר הקבוצות כדי לשלוט בהשפעות טיפול לא ספציפיות. השתמש במזרקים סטריליים חד-פעמיים לכל ההזרקות והשלך מחטים למכלי חדים עמידים לניקור. הכנס את מחט ההזרקה התוך-בטנית לצד קו האמצע של הבטן כדי למזער את הסיכון לפגיעה באיברים פנימיים. כדי לשלוט בגירוי מגע בקבוצות שאינן SP, ליטף את החולקים ארבע פעמים במהלך אותה התערבות של קבוצת ה-SP מדי יום. השתמש באותו נוהל ליטוף גב שבו נעשה שימוש עבור קבוצות ה-SP.

תוצאות

משקל הגוף הוא מדד חשוב לצמיחה בחולדות צעירות. לא נצפו הבדלים משמעותיים במשקל הגוף בין חמש הקבוצות לפני הטיפול הניסויי. בעקבות השראת מודל האסמה, קבוצת ה-AS הראתה משקל גוף נמוך משמעותית מקבוצת ה-CN (P = 0.000; איור 3A). בהשוואה לקבוצת ה-AS, קבוצת ה-AS+SP הראתה משקל גוף גבוה משמעותית (P = 0.008; איור 3A), בעוד שקבוצת ה-AS+MP לא הראתה הבדל משמעותי (P = 0.975; איור 3A). באופן דומה, קבוצת ה-AS+SP+MP לא הראתה עלייה משמעותית במשקל הגוף בהשוואה לקבוצת ה-AS (P = 0.925; איור 3A). התוצאות מרמזות כי SP מקדם עלייה במשקל במהלך מודל של אסמה פדיאטרית וטיפול במתילפרניזולון (MP) בחולדות צעירות.

בעקבות אתגר ה-OVA, חולדות מקבוצת ה-CN לא הראו סימנים של מצוקה נשימתית, כולל קוצר נשימה, עיטושים, הנהון של הראש, נשימה עם פה פתוח, כיווץ שרירי הבטן או צפצופים. לעומת זאת, חולדות מקבוצת ה-AS הראו ביטויים טיפוסיים של אסתמה בילדים, כולל קוצר נשימה, עיטושים, הנהון של הראש ונשימה עם פה פתוח. סימנים קליניים אלו הוקלו באופן ניכר לאחר טיפול ב-SP, MP, או בשילוב של שניהם.

כדי להעריך את ההשפעות האנטי-דלקתיות של SP בחולדות צעירות עם אסתמה ניסויית, נדגמו רקמות ריאה לאחר הרדמה עמוקה באמצעות 20% urethane (5 mL/kg, i.p.) בהתאם לנהלים שתוארו בעבר12. צביעת Hematoxylin and eosin (HE) וניתוח של ביטוי גנים פרו-דלקתיים בוצעו כדי להעריך דלקת כרונית בדרכי הנשימה, בעוד שצביעת Masson שימשה להערכת עיצוב מחדש (remodeling) של דרכי הנשימה. תגובתיות יתר של דרכי הנשימה (AHR) הוערכה באמצעות פלתיסמוגרפיה של הגוף כולו (WBP) על ידי מדידת pause מוגבר (Penh).

בעקבות פרוטוקולי צביעה שגרתיים של HE ו-Masson23, נתחי ריאה נצבעו בהמטוקסילן ואאוזין ודורגו עבור דלקת פרי-ברונכיולרית באמצעות סולם 0–4 מותאם24. קבוצת מודל האסטמה הציגה ציוני דלקת גבוהים באופן מובהק מקבוצת ה-CN (P = 0.000). בהשוואה לקבוצת ה-AS, הקבוצות AS+SP, AS+MP ו-AS+SP+MP הראו כולן ציוני דלקת מופחתים באופן מובהק (P = 0.005, P = 0.006, ו-P = 0.000, בהתאמה), ללא הבדלים מובהקים בין שלוש קבוצות הטיפול (איור 4A, טבלה 1).

שחזור דרכי הנשימה הוערך על ידי כימות של השקעת קולגן מסביב לברונכיולות באמצעות צביעת Masson. השקעת הקולגן בוטאה כשטח חיובי לקולגן מנורמל להיקף קרום הבסיס (µm2/µm). קבוצת ה-AS הראתה השקעת קולגן גבוהה משמעותית מזו של קבוצת ה-CN (P = 0.000). בהשוואה לקבוצת ה-CN, קבוצות ה-AS+SP וה-AS+MP הראו השקעת קולגן גבוהה במידה מתונה יותר (P = 0.050 ו-P = 0.051, בהתאמה), אך השקעת קולגן נמוכה משמעותית מזו של קבוצת ה-AS (P = 0.001 עבור שתי ההשוואות). קבוצת ה-AS+SP+MP לא הראתה הבדל משמעותי מקבוצת ה-CN (P = 0.105), אך הראתה השקעת קולגן מופחתת משמעותית בהשוואה לקבוצת ה-AS (P = 0.001). לא נצפו הבדלים משמעותיים בין שלוש קבוצות ההתערבות (איור 4B, טבלה 1).

עקומות כוח מייצגות שהתקבלו באמצעות מערכת Finger TPS מוצגות ב-איור 5. במהלך הכשרת המפעיל, עקומת הכוח שנרשמה בזמן תנועת הפיגור (back stroking) נותרה יציבה בערך של 5 N (איור 5A), בעוד שעקומת הכוח שנרשמה במהלך SP הראתה שיאי כוח חוזרים התואמים למניפולציית הצביטה, כאשר הכוח המופעל נשמר בתוך טווח המטרה שהוגדר מראש (איור 5B). פרופילי כוח אלו מדגימים את מאפייני הכוח הסטנדרטיים ששימשו במהלך הכשרת המפעיל.

לוח הזמנים הניסיוני הכולל מסוכם ב-איור 6. לאחר תקופת אקלימטציה של 7 ימים, בוצע תהליך רגישות ל-OVA בהתאם ללוח הזמנים שצוין, ולאחריו אתגרי OVA חוזרים. SP ניתן לקבוצות AS+SP ו-AS+SP+MP במהלך תקופת ההתערבות שנקבעה, בעוד שמתילפרדניזולון ניתן לפני אתגר ה-OVA בקבוצות הטיפול המתאימות. הערכת WBP ואיסוף רקמות בוצעו לאחר האתגר האחרון (איור 6).

פלתיסמוגרפיה של הגוף השלם נמצאת בשימוש נרחב להערכת Penh במכרסמים בהכרה וללא הגבלה, מבלי לגרום לפגיעה משמעותית או למצוקה25. למרות ש-Penh הוא מדד עקיף המושפע מתזמון הנשימה ומגורמים סביבתיים, מדידה ישירה של התנגדות דרכי הנשימה דורשת הרדמה וטרכיאוסטומיה, אשר עלולות לשנות את הפיזיולוגיה של דרכי הנשימה26. עם זאת, דווח כי Penh נמצא במתאם עם מדידות פולשניות של התנגדות הריאות27. עשרים וארבע שעות לאחר חשיפה אחרונה ל-OVA, חולדות הוכנסו לתאי מדידה ללא הגבלה ונחשפו באופן סדרתי ל-PBS בערפלה, ולאחר מכן לאצטילכולין (Ach) בריכוזים של 3.125, 6.25, 12.5, 25, ו-50 mg/mL. כל חשיפה לערפלה נמשכה 2 min ולאחריה תקופת הקלטה של 5-min28. קבוצת ה-AS הראתה ערכי Penh גבוהים באופן מובהק מאשר קבוצת ה-CN, בעוד שטיפול ב-SP, MP, או שילוב של שניהם הפחית באופן מובהק את ערכי ה-Penh (P = 0.005; Figure 3B). תוצאה זו הצביעה על כך ש-SP שיפר את התפקוד הנשימתי בחולדות עם אסתמה, ממצא שעדיין דורש תיקוף נוסף, בשילוב עם מדידות ישירות של התנגדות דרכי הנשימה (Raw).

Interleukin-4 (IL-4) מעורר דלקת אוזינופילית המתווכת על ידי Th2, בעוד ש-tumor necrosis factor-α (TNF-α) תורם ל-AHR ולremodeling של דרכי הנשימה, כאשר שניהם ממלאים תפקידים מרכזיים בפתוגנזה של אסתמה בילדים29. על מנת להעריך את דלקת דרכי הנשימה באופן מעמיק יותר, כמותו של הביטוי של IL-4 ו-TNF-α ברקמות ריאה נמדדה באמצעות quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). בהשוואה לקבוצת ה-CN, קבוצת ה-AS הראתה עלייה מובהקת בביטוי של IL-4 ו-TNF-α (P = 0.000 ו-P = 0.000, בהתאמה; Figure 3C,D). הביטוי של שני הציטוקינים הופחת באופן מובהק לאחר טיפול ב-SP או MP, והשילוב של SP ו-MP הניב את ההפחתה הגדולה ביותר (P = 0.001 ו-P = 0.000, בהתאמה; Figure 3C,D).

figure-results-1
איור 1: פרוצדורה מפורטת של מניפולציית צביטה של עמוד השדרה (SP) בחולדות. (A) החזיקו את החולדה בתנוחה שכיבה על כף יד המבצע. (B) צבטו את העור בבסיס הזנב. (C) הרימו את העור שנצבט. (D) סובבו והניעו את האצבעות לכיוון קרניאלי לאורך עמוד השדרה לעבר Dazhui (GV14). אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של איור זה.

figure-results-2
איור 2: איור סכמתי של כלי השליט (GV), מרידיאן השלפוחית (BL), ונקודת Dazhui (GV14) בחולדות. הדיאגרמה ממחישה את המיקום האנטומי של ה-GV, מרידיאן ה-BL, ונקודת Dazhui (GV14), המשמשים כאתרי היעד למניפולציית צביטה של עמוד השדרה. אנא לחצו כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: השפעות של מניפולציית לחיצת קוצים על משקל הגוף, תגובתיות-יתר של דרכי הנשימה וגורמי דלקת ריאתיים בחולדות צעירות. (A) השוואת משקל הגוף בין הקבוצות הניסיוניות. (B) השוואת ערכי pause מוגבר (Penh). (C) ביטוי גנים יחסי של interleukin-4 (IL-4) ברקמת ריאה. (D) ביטוי גנים יחסי של tumor necrosis factor-α (TNF-α) ברקמת ריאה. הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. *P < 0.05 ו- **P < 0.01 לעומת קבוצת ה-CN; #P < 0.05 ו- ##P < 0.01 לעומת קבוצת ה-AS. אנא לחצו כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-4
איור 4: שינויים היסטופתולוגיים מייצגים ברקמת ריאה. (A) צביעת Hematoxylin and eosin (HE) המראה דלקת פרי-ברונכיולרית. (B) צביעת Masson trichrome המראה שקיעת קולגן ושינוי מבני (remodeling) של דרכי הנשימה. התמונות צולמו בהגדלה של 200×. סרגלי קנה מידה = 100 µm. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מורחבת של איור זה.

figure-results-5
איור 5: עקומות כוח מייצגות שהוקלטו במהלך מניפולציה של צביטה בעמוד השדרה באמצעות מערכת Finger TPS. (A) עקומת כוח שהוקלטה במהלך מניפולציה של ליטוף הגב. (B) עקומת כוח שהוקלטה במהלך מניפולציה של צביטה בעמוד השדרה (SP). נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-6
איור 6: לוח זמנים ניסויי. אנא לחצו כאן כדי להציג גרסה מוגדלת של איור זה.

קבוצהמדד דלקת ב-HEשטח קולגן/היקף קרומי הבסיס (μm²/μm)
CN1.10 ± 0.252.50 ± 0.43
AS2.32 ± 0.50**4.23 ± 0.53**
AS+SP1.66 ± 0.27##3.12 ± 0.56*##
AS+MP1.67 ± 0.31##3.12 ± 0.50*##
AS+SP+MP1.34 ± 0.27##3.01 ± 0.33##

טבלה 1: מדדי היסטופתולוגיה של הריאה. דלקת פרי-ברונכיולרית הוערכה באמצעות צביעת HE, ושינוי מבני של דרכי הנשימה (airway remodeling) נמדד כשטח חיובי לקולגן שנורמל להיקף קרומי הבסיס (µm2/µm). הנתונים מוצגים כממוצע ± SD (n = 5 לכל קבוצה). *P < 0.05 ו-**P < 0.01 לעומת קבוצת ה-CN; #P < 0.05 ו-##P < 0.01 לעומת קבוצת ה-AS.

דיון

רגישות ואתגר לאובאלבומין (OVA) הם אחד המודלים הניסיוניים הנפוצים ביותר לחקר אסתמה בילדים30,31. המחקר הנוכחי הדגים כי פרוטוקול סטנדרטי של מניפולציית צביט עמוד השדרה (SP) הקל על דלקת כרונית בדרכי הנשימה, תגובתיות יתר של דרכי הנשימה (AHR) וremodeling (עיצוב מחדש) של דרכי הנשימה. מחקרים קליניים קודמים הראו כי עיסוי פדיאטרי מסורתי, כולל SP, משפר אסתמה ומחלות אלרגיות אחרות בילדים11,13,32. בנוסף, מחקרים קודמים בבעלי חיים הדגימו כי SP הפחית דלקת בדרכי הנשימה במודלים של חולדות צעירות עם אסתמה על ידי ויסות מיקרוביוטת המעי12,15. המחקר הנוכחי הדגים עוד כי יישום של פרוטוקול SP סטנדרטי שיפר דלקת כרונית בדרכי הנשימה, AHR ו-remodeling של דרכי הנשימה במודל של חולדות צעירות עם אסתמה. יתרה מכך, SP הגביר את ההשפעות הטיפוליות של methylprednisolone (MP) תוך הפחתת תופעות הלוואי שלו המעכבות גדילה.

שיטת ה-SP מיושמת בסין כבר למעלה מ-1,000 שנים ונותרת אחת מטכניקות העיסוי הפדיאטרי הנפוצות ביותר למניעה וטיפול באסמה ובמחלות ילדות אחרות12,15,33,34,35. למרות ההיסטוריה הארוכה של יישומה הקליני, ה-SP נותרת אינה מוכרת יחסית מחוץ לסין. על פי תיאוריית הרפואה הסינית המסורתית, מרידיאני ה-GV וה-BL רצים לאורך עמוד השדרה או בסמיכות לו ומתקשרים עם האיברים הפנימיים. כתוצאה מכך, ההנחה היא שגירוי של מרידיאני ה-GV וה-BL מווסת את תפקודי האיברים הפנימיים, ממודל את הפעילות החיסונית ומגביר את העמידות למחלות. ה-SP כולל צביטה, הרמה, סיבוב והקדמה של העור לאורך עמוד השדרה, ובכך מגרה הן את מרידיאן ה-GV והן את מרידיאן ה-BL. מניפולציה זו מפעילה בו-זמנית כוחות דחיסה ומתיחה על העור ועל הפסציה שמתחתיו, ומייצרת גירוי מכני מתון. בפרקטיקה הקלינית, מניפולציית ליטוף עדינה של הגב מבוצעת באופן שגרתי לפני ואחרי ה-SP כדי להפחית את עוצמת הגירוי ולשפר את נוחות המטופל. ליטוף הגב כולל תנועות ליטוף עדינות כלפי מטה לאורך הגב והוא נפוץ מאוד בעיסוי פדיאטרי. לפיכך, בהתבסס על עקרונות של רלוונטיות קלינית, היתכנות, פשטות ויכולת שחזור, הפרוטוקול הסטנדרטי משלב הן את ה-SP והן את מניפולציית ליטוף הגב.

מחקרים קודמים הדגימו כי SP מפחית דלקת הן בריאות והן בהיפוקמפוס באמצעות מנגנונים של ויסות חיסוני12,36. אסתמה בילדים מאופיינת בדלקת עם נטייה ל-Th2 הקשורה באופן הדוק להפרעות בויסות החיסוני37. מחקרים ניסויים קודמים דיווחו כי ליטוף ביד או במברשת ויסות את התגובות החיסוניות בעכברים כאשר בוצע בלחץ של 100–150 mmH₂O (7–11 mmHg) ובמהירות של כ-3 cm/s38. בנוסף, מחקר קליני דיווח כי ליטוף שבוצע במהירות של כ-1–10 cm/s נתפס כנעים יותר39. בהתבסס על ממצאים אלה, הפרוטוקול הסטנדרטי אימץ כוח ליטוף של הגב של 5 ± 0.6 N ומהירות של 5 cm/s כדי להשיג אפקט הרגעה מתאים. הלחץ, התדירות ומספר חזרות ה-SP נקבעו על בסיס מחקרים קודמים12,15 ובדיקות קשורות של קבוצות מחקר אחרות40,41. למרות שמחקרים קודמים ביצעו סטנדרטיזציה לליטוף גב ידני (20 cm/s; כ-100 mmH₂O) או לגירוי GV מכני (30–50 g; כ-15.3 cm/s) כדי להשיג עיכוב קרדיווסקולרי או לעודד עיצוב מחדש סינפטי במכרסמים, SP ידני מייצג התערבות ביומכנית נבדלת המסתמכת על משוב תחושתי ופרופריוצפטי, ולכן לא ניתן לשחזר אותה באופן מלא באמצעות מכשירים מכניים קיימים. הבחנה זו מדגישה את חשיבותם של פרוטוקולים המיושמים באופן סטנדרטי על ידי המטפל למחקר תרגומי עתידי על התערבויות תחושתיות לאסתמה אלרגית.

מחקרים רבים שפורסמו בסינית הדגימו כי SP מווסת את התפקוד החיסוני ומדכא דלקת42,43,44. עם זאת, למיטב הידע הנוכחי, אף מחקר קודם מחוץ לקבוצת המחקר של המחבר לא תיקף את הלחץ והמהירות של SP לצורך חקר מחלה ספציפית במודלים של חיות למחלת אסתמה פדיאטרית. מחקרים קודמים בחנו את המכניזמים העומדים בבסיס ה-SP במודלים של חולדות צעירות עם אסתמה, כולל ויסות של מיקרוביוטת המעי, הגברה של ייצור חומצות שומן קצרות שרשרת, שיפור בתפקוד שרירי הנשימה (למשל, חוזק הסרעפת), והפחתה של דלקת בדרכי הנשימה ושל תפקוד ריאתי לקוי11. המחקר הנוכחי התמקד בעיקר בביסוס פרוטוקול סטנדרטי ולא בהסבר מקיף של מכניזמי הפעולה העומדים בבסיסו. מערכת למדידה והקלטה של לחץ מגע בדיוק גבוה שימשה לתיקוף הכוח המופעל הן במהלך ליטוף הגב והן במהלך SP, בעוד שהמהירות והתדירות של המניפולציות תוקננו בהתאם למחקרים קודמים. חולדות נבחרו כיוון שגודל גופן מאפשר טיפול יציב והחלה ידנית של SP תוך דמיון רב לפרוצדורה הקלינית. ליטוף הגב בוצע באמצעות אצבעות של יד אחת, כפי שנעשה בפרקטיקה קלינית פדיאטרית. בשל גופן הקטן של החולדות, ה-SP בוצע עם שלוש אצבעות של יד אחת במקום עם שתי ידיים, תוך שמירה על המאפיינים הביומכניים החיוניים של הטכניקה הקלינית. התאמה זו משחזרת באופן הדוק את הגירוי של מרידיאני ה-GV וה-BL במודל החולדה. מכיוון שפרמטרי המדידה עשויים להשתנות בין מערכות שונות למדידת לחץ מגע, תיקוף המניפולציה הידנית בהתבסס על התגובות ההתנהגותיות של החולדות במהלך ליטוף הגב ו-SP עשוי להניב שחזור גבוה יותר מאשר הסתמכות בלבד על מדידות כוח ספציפיות למכשיר. מחקרים קודמים הדגימו גם כי ליטוף גב מפעיל השפעות נוגדות דיכאון בחולדות צעירות שעברו CUMS9, אם כי SP הניב השפעות טיפוליות גדולות משמעותית. כתוצאה מכך, ההשפעות המיטיבות שנצפו במחקר הנוכחי עשויות לשקף בחלקן את תרומתו של ליטוף הגב בנוסף להשפעות העיקריות של SP.

יש להכיר במספר מגבלות. ראשית, גודל המדגם היה קטן יחסית, דבר שעשוי להגביל את החוזק ואת היכולת להכליל את הממצאים. שנית, המחקר הנוכחי התמקד בעיקר בביסוס ובתיקוף של פרוטוקול SP סטנדרטי; לפיכך, הוא בחן רק קבוצה מוגבלת של תוצאות מכניסטיות ולא תיאר באופן מקיף את המנגנונים הביולוגיים שבבסיס התופעה. בהתאם לכך, לא בוצע תיקוף מכניסטי, הכולל ספירת תאים דלקתיים ב-BALF, רמות IgE ספציפיות ל-OVA, פרופיל ציטוקינים של Th2 (לדוגמה, IL-5, IL-13) וניתוח של מסלולי איתות תוך-תאיים. תוצאה זו הצביעה על כך ש-SP שיפר את תפקוד הנשימה בחולדות עם אסתמה, ממצא שעדיין דורש תיקוף נוסף בשילוב עם מדידות ישירות של התנגדות דרכי הנשימה (Raw). שלישית, כל המניפולציות בוצעו על ידי מפעיל מיומן אחד, והשחזור בין מפעילים מיומנים שונים לא הוערך. לבסוף, לא נכללה קבוצת התערבות של ליטוף גב בלבד כדי להבדיל בין ההשפעות העצמאיות של ליטוף הגב לאלו של SP. מחקרים עתידיים צריכים לכלול גדלי מדגם גדולים יותר, להעריך שחזור בין מפעילים, לשלב קבוצות ביקורת נוספות ולחקור לעומק את המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס ההשפעות הטיפוליות של SP.

גילויים

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי עניינים להצהיר עליהם. במהלך תהליך הכנת כתב היד, לא נעשה שימוש בכלי בינה מלאכותית להכנת מסמך זה. המחברים נושאים באחריות מלאה לשלמות וLדיוק של כתב היד הסופי.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (Kiong Ying, ראש פרויקט, מספר 81973970, בהסתמך על אוניברסיטת ננג'ינג לרפואה סינית). המחברים מודים למכון לרפואת ילדים, למעבדה המפתח של ג'יאנגסו לבריאות ילדים ורפואה סינית, ולמעבדה המפתח למחקר דיקור רפואי ורפואה של משרד החינוך על אספקת המקומות, המכשירים והציוד.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
ג'ל 4%Al(OH)3Shanxi ZHHC Biomedical Technology Co., LTD, ChinaBS010N/A
Ach (אצטילכולין)Sigma, USAA2251N/A
שקופיות מיקרוסקופ עם הדבקהCitotest, Jiangsu, ChinaREF.188105
P/N.80312-3161		N/A
שקיות לפסולת ביו-סיכוניתNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.HJ421-2008N/A
מכונה לייבוש רקמה ביולוגיתKedee, Zhejiang, ChinaKD-HIIN/A
מכונה להטמעה של רקמה ביולוגיתKedee, Zhejiang, ChinaKD-BMN/A
מכונה לפריסת רקמה ביולוגיתKedee, Zhejiang, ChinaKD-PIN/A
Buxco Research SystemsDSI Buxco,Wilmington, NC,USAPFTN/A
מערבל מתכוונן (MX-S)DLAB, Beijing, China8031102000N/A
צנטריפוגה לפלטות מיקרוScilogex, USASCI-CF2800M E050S11B000798N/A
סבון נקי (Clean bench) Sanfa, Shanghai, ChinaSF-CJ-1AN/A
צנטריפוגה קונבנציונליתDLAB, Beijing, ChinaD100BE: 9031001011N/A
כפפות סטריליות חד-פעמיותShanghai Kebang Medical Latex Equipment Co., Ltd.22010739https://www.sh-kebang.com/products_detail/6.html
מאזניים אלקטרונייםJinghai, ShanghaiYP3001NN/A
מאזניים אלקטרונייםJinghai,  Shanghai, ChinaYP3001NN/A
מערכת Finger TPSPressure Profile System, Inc, USAגרסת תוכנה רלוונטית: Chameleon 2018https://pressureprofile.com/body-pressure-mapping/finger-tps
 מיקרוסקופ אופטי פלואורסצנטיOlympus, Tokyo, JapanDP70N/A
סטריליזטור קיטור בלחץ גבוהTomy, JapanSX-500N/A
צנטריפוגת הקפאה מהירהEppendorf5418RN/A
ערכה לצביעת Masson trichromaticSolarbio, Shanghai, ChinaG1340N/A
מיקרופיפטורים וטיפים סטרילייםeppendorfJ48931Lhttps://www.eppendorf.com/hk-en/Products/Liquid-Handling/All-Pipettes-Dispensers-Automated-Liquid-Handlers/Eppendorf-Reference2-p-PF-222171
מיקרוטומיםLeica, GermanRM2145N/A
MP (מתיל-פרדניזולון סודיום סוצינאט)Shyndec, Shanghai, ChinaH20070007N/A
ספקטרופוטומטר NanoDrop LiteThermo Fisher Scientific, USAnd-ndl-pr-2yrw-cccN/A
 בקר התזה (Nebulization controller)Emka, FranceVENT4:14554N/A
מעטפות אטומות אטומותNanjing Kongdu printing Co., Ltd201701N/A
OVA (Grade II)Sigma, USAA5253N/A
OVA (Grade V)Sigma, USAA5503N/A
ערכת PCRYeasen, Shanghai, China11201ES08N/A
מכל לפסולת חדה עמיד לדקירהNanjing Xinyuan plastic Co., Ltd.KMT-15YN/A
ערכה לשעתוק הפוךBio.vazyme, Nanjing, ChinaR323N/A
צנטריפוגות קטנותHettich, GermanMIKRO 220R D-78532N/A
כדורי כותנה יבשים סטרילייםZHENDE, Zhejiang, China202203121Bhttps://www.zhende.com/index.php?g=product&m=index&a=info&id=13
TrizolBio.vazyme, Nanjing, ChinaR771N/A
מקפיא לאחסון אולטרה-קרThermo Fisher Scientific, USA950GP-ULTSN/A
מרסס אולטרסוניJiangsu Yuwell Medical Instruments Co., Ltd., China402AIN/A
מערכת ViiATM7 ל-PCR בזמן אמתLife TechnologiesTM , Singapore278882021N/A
פלטיסמוגר למסע הגוף השלםScrieq, Canada1185162,1184031,1185898מחסנית נשיפה FV-FXM1-01,FX1: FV-FXM1 ET, מחסנית שאיפה FX1: FV-FXM1-IA

מקורות

  1. Bateman ED, et al. Global strategy for asthma management and prevention: GINA executive summary. Eur Respir J. 2008;31(1):143-178.
  2. Lizano-Barrantes C, et al. Impact of treatment adherence and inhalation technique on asthma outcomes of pediatric patients: A longitudinal study. Front Pharmacol. 2024;15:1340255.
  3. Vähätalo I, et al. Long-term adherence to inhaled corticosteroids and asthma control in adult-onset asthma. ERJ Open Res. 2021;7(1).
  4. Yılmaz İ, et al. Biological therapy management from the initial selection of biologics to switching between biologics in severe asthma. Tuberk Toraks. 2023;71(1):75-93.
  5. García-Marcos L, et al. Asthma management and control in children, adolescents, and adults in 25 countries: A Global Asthma Network phase I cross-sectional study. Lancet Glob Health. 2023;11(2):e218-e228.
  6. Kelly HW, et al. Effect of inhaled glucocorticoids in childhood on adult height. N Engl J Med. 2012;367(10):904-912.
  7. Wu J, Yang XW, Zhang M. Massage therapy in children with asthma: A systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2017:5620568.
  8. Yue QJ, et al. Effect of pediatric massage in the treatment of chronic persistent asthma in children: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. J Hainan Med Univ. 2019;25:1260-1266.
  9. Wu R, et al. Traditional pediatric massage enhanced hippocampal GR, BDNF, and IGF-1 expressions and exerted an antidepressant effect in an adolescent rat model of CUMS-induced depression. Neuroscience. 2024;542:47-58.
  10. Lin L, Yu L, Zhang S, Liu J. The positive effect of mother-performed infant massage on infantile eczema and maternal mental state: A randomized controlled trial. Front Public Health. 2022;10:1068043.
  11. Lin L, et al. Traditional pediatric massage enhanced skeletal muscle mass in OVA-exposed adolescent rats via regulating the SCFAs-FFAR2-IGF-1/AKT pathway. Front Microbiol. 2024;15:1492783.
  12. Xiong Y, Noraas AU, Yang X. The effect of chiropractic manipulation on atopic symptoms and gut microbiota in children with atopy. J Li Shizhen Tradit Chin Med. 2017;28:2440-2442.
  13. Liu Y, Gu Y, Xiong Y. Wrist-ankle acupuncture combined with spine-pinching manipulation for allergic rhinitis in children: A randomized controlled trial. World J Acupunct Moxibustion. 2019;29:259-263.
  14. Zhu Y, et al. Chiropractic therapy modulated gut microbiota and attenuated allergic airway inflammation in an immature rat model. Med Sci Monit. 2020;26:e926039.
  15. Lu W, Fang M, Yang X. Observation on the influence of parent-child massage on children's psychological and behavioral problems. Chin Med Mod Distance Educ China. 2025;23(4):75-78.
  16. Lund I, Lundeberg T, Kurosawa M, Uvnäs-Moberg K. Sensory stimulation (massage) reduces blood pressure in unanesthetized rats. J Auton Nerv Syst. 1999;78(1):30-37.
  17. Chen YN, et al. Repetitive unidirectional spinal tactile stimulation engages microglial BMAL1 pathways to promote synaptic remodeling in the medial prefrontal cortex of adolescent VPA-exposed mice. J Neuroinflammation. 2025;23(1):23.
  18. Gorrell LM, et al. Spinal manipulation characteristics: A scoping literature review of force-time characteristics. Chiropr Man Therap. 2023;31(1):36.
  19. Papadopoulos NG, Miligkos M, Xepapadaki P. A current perspective of allergic asthma: From mechanisms to management. Handb Exp Pharmacol. 2022;268:69-93.
  20. Nials AT, Uddin S. Mouse models of allergic asthma: Acute and chronic allergen challenge. Dis Model Mech. 2008;1(4-5):213-220.
  21. Martin JG, Tamaoka M. Rat models of asthma and chronic obstructive lung disease. Pulm Pharmacol Ther. 2006;19(6):377-385.
  22. QDV, et al. Construction of an acupoint atlas for experimental rats. Acupunct Res. 2025;50(11):1339-1351.
  23. Dong L, et al. Hypoxic hUCMSC-derived extracellular vesicles attenuate allergic airway inflammation and airway remodeling in chronic asthma mice. Stem Cell Res Ther. 2021;12(1):4.
  24. Muhamad SA, et al. Intranasal administration of Lignosus rhinocerotis (Cooke) Ryvarden (Tiger Milk Mushroom) extract attenuates airway inflammation in a murine model of allergic asthma. Exp Ther Med. 2019;17(5):3867-3876.
  25. Vaickus LJ, Bouchard J, Kim J, Natarajan S. Assessing pulmonary pathology by detailed examination of respiratory function. Am J Pathol. 2010;177(4):1861-1869.
  26. Glaab T, Taube C, Braun A, Mitzner W. Invasive and noninvasive methods for studying pulmonary function in mice. Respir Res. 2007;8(1):63.
  27. Lomask M. Further exploration of the Penh parameter. Exp Toxicol Pathol. 2006;57(Suppl 2):13-20.
  28. Leung SY, et al. Effect of transforming growth factor-beta receptor I kinase inhibitor 2,4-disubstituted pteridine (SD-208) in chronic allergic airway inflammation and remodeling. J Pharmacol Exp Ther. 2006;319(2):586-594.
  29. Ogulur I, et al. Type 2 immunity in allergic diseases. Cell Mol Immunol. 2025;22(3):211-242.
  30. Lee JH, Son SH, Kim NJ, Im DS. NJK14047 suppression of the p38 MAPK pathway ameliorates OVA-induced allergic asthma during sensitization and challenge periods. Biomol Ther (Seoul). 2023;31(2):183-192.
  31. Li J, et al. Establishment of a juvenile mouse asthma model induced by postnatal hyperoxia exposure combined with early OVA sensitization. Heliyon. 2024;10(1):e23291.
  32. Wei J, Yang X. Efficacy of pediatric tuina on spleen deficiency syndrome and allergic constitution in children with bronchial asthma during the remission period: A study of 29 cases. J Pediatr Tradit Chin Med. 2023;19(3):86-89.
  33. Gao J, He J. Fifty-eight cases of allergic rhinitis treated with spine-pinching manipulation and acupuncture in Switzerland. World J Acupunct Moxibustion. 2010;20(3).
  34. Hu Y, et al. Clinical study of Yupingfeng Powder combined with spine-pinching manipulation for cough variant asthma in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2024;53(2):369-371.
  35. Yao D, Zhang Y, Deng L. Effect of spine-pinching manipulation on asthma control in children. Heilongjiang J Tradit Chin Med. 2020;49(2):157-158.
  36. Zhang X, et al. Traditional pediatric massage exerted an antidepressant effect and activated the IGF-1/NRF2 pathway in CUMS-exposed adolescent rats. J Neuroimmunol. 2025;400:578554.
  37. Lan J, McCray A, Brown E, Eddens T. Early-life viral infections and asthma: New cells and ideas. Curr Opin Pediatr. 2025;37(6):597-605.
  38. Major B, et al. Massage-like stroking boosts the immune system in mice. Sci Rep. 2015;5:10913.
  39. Ackerley R, Carlsson I, Wester H, Olausson H, Backlund Wasling H. Touch perceptions across skin sites: Differences between sensitivity, direction discrimination, and pleasantness. Front Behav Neurosci. 2014;8:54.
  40. Li Q, et al. Experimental study on the effects of different durations of spine-pinching manipulation on immune function in rats with Wei Qi deficiency. Jiangsu J Tradit Chin Med. 2017;49(9):75-77.
  41. Tang Q, Shen L, Lin L. Effects of spine-pinching manipulation with different stimulation intensities on hippocampal inflammation-related factors and behavioral disorders in autistic rats. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(7):1264-1270.
  42. Li Z, et al. Effects of spine-pinching therapy on thoracic duct lymph flow and mesenteric lymphatic microcirculation in rats with spleen deficiency. China J Tradit Chin Med Pharm. 2025;40(8):4246-4250.
  43. Ma W, et al. Effects of spine-pinching intervention on anorexia in young rats based on the 2-AG/CB1/AMPK1 pathway. Shaanxi J Tradit Chin Med. 2025;46(2):159-164.
  44. Tang Q, et al. Effects of spine-pinching manipulation on BDNF and CREB protein expression in different brain regions of rats with autism spectrum disorder. J Hunan Univ Chin Med. 2025;45(2):259-266.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

מודל אסתמה בחולדותדלקת דרכי הנשימהתגובתיות יתר של דרכי הנשימהעיצוב מחדש של דרכי הנשימהעיסוי פדיאטרירפואה סינית מסורתיתסטנדרטיזציה של פרוטוקולאסתמה ניסויית

מאמר זה פורסם

הסרטון יגיע בקרוב

צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.