הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

השלכות קליניות של מטריצת הסרום מטלופרוטאנאז-12 וגידול קדרין-13 לתת-סוג מולקולרי וטיפול מותאם אישית בסרטן הריאות

136 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70633

⸱

28 באפריל 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Respiratory and Critical Care Medicine IV (RICU), Xingtai People's Hospital, 2Department of Respiratory and Critical Care Medicine I, Xingtai People's Hospital, 3Department of Medical Oncology II, Xingtai People's Hospital, 4Department of Respiratory and Critical Care Medicine, Huanghua Development Zone Boai Hospital

במאמר זה

סיכום

מחקר זה מעריך את מטריצת הסרום מטלופרוטינאז-12 (MMP-12) וקדרין-13 (CDH13) כסמנים ביולוגיים משלימים בסרטן הריאות. סמנים אלו מתואמים לתתי-סוגים מולקולריים, תגובת טיפול והישרדות, ותומכים בשימוש הפוטנציאלי שלהם בתת-סוג, סטרטיפיקציה של טיפול והערכה פרוגנוסטית.

תקציר

סרטן הריאות נותר גורם מוביל לתמותה הקשורה לסרטן ברחבי העולם, בעיקר בשל ההטרוגניות הביולוגית שלו, אבחנות תכופות בשלבים מאוחרים ומגבלות בבדיקות מולקולריות מקיפות שלו. סמנים ביולוגיים בודדים לעיתים אינם מספיקים להכוונת קבלת החלטות קליניות, מה שמדגיש את הצורך במדדים משלימים וקליניים אפשריים שמשלבים ביולוגיה מערכתית וביולוגיה ספציפית לגידולים. במחקר קוהורט מרכזי זה, נרשמו 262 חולים עם סרטן ריאות. רמות מטאלופרוטאינאז-12 (MMP-12) במטריצת הסרום נמדדו באמצעות בדיקת אימונוסורבנט מקושרת באנזים (ELISA), והבעה של קדהרין-13 (CDH13) הוערכה באמצעות אימונוהיסטוכימיה (IHC) באמצעות ציון אימונוריאקטיבי מאומת (IRS). תת-סוג מולקולרי התקבל מבדיקות קליניות שגרתיות, והקשר לתגובה לטיפול ולתוצאות הישרדות הוערך באמצעות מודלים לוגיסטיים מרובי משתנים ומודלים של רגרסיה קוקס. MMP-12 ו-CDH13 הראו התפלגות הפוכה בין תת-הסוגים המולקולריים (P < 0.001), כך שגידולים שעברו שינוי ב-EMP-12 (EGFR)/קינאז לימפומה אנפלסטית (ALK) הציגו MMP-12 נמוך יותר ו-CDH13 גבוה יותר, בעוד שגידולים מסוג מוטנטי ופראי של סרקומת עכברוש קירסטן הראו דפוס הפוך. ביטוי גבוה יותר של ליגנד מוות מתוכנת 1 (PD-L1) היה בעקביות קשור לעלייה ב-MMP-12 ולהפחתת CDH13 (כל ה-P < 0.05). MMP-12 מוגבר היה קשור באופן עצמאי לירידה בשיעור תגובה אובייקטיבי (ORR) (יחס סיכויים מותאם [OR] = 0.662, P < 0.001) והישרדות נמוכה יותר (יחס סיכון ללא התקדמות [PFS] [HR] = 1.382; שיעור הישרדות כללי [OS] HR = 1.421; שניהם P < 0.001), בעוד ש-CDH13 גבוה יותר חזה שיפור בתגובה (OR מותאם = 1.201, P < 0.001) והישרדות (PFS HR = 0.884; OS HR = 0.862; שניהם P < 0.001). החתימה המשולבת של MMP-12 גבוה ו-CDH13 נמוך זיהתה תת-קבוצה עם תוצאות גרועות משמעותית (PFS HR = 2.281; דופק OS = 2.506; P < 0.001). ממצאים אלו מצביעים על כך ש-MMP-12 בסרום ו-CDH13 של הגידול עשויים לשמש כסמנים ביולוגיים משלימים לתת-סוג מולקולרי, סטרטיפיקציה טיפולית והערכה פרוגנוסטית בסרטן הריאות.

מבוא

סרטן הריאות נותר נטל בריאותי עולמי דומיננטי, עם כמעט 2.5 מיליון מקרים חדשים וכ-1.8 מיליון מקרי מוות ברחבי העולם בשנת 2022. למרות התקדמות משמעותית בסקר, הדמיה וטיפול מערכתי, ההישרדות נשארת מוגבלת עבור מטופלים רבים, משום שסרטן הריאות הוא הטרוגני ביולוגית ולעיתים מאובחן בשלבים מתקדמים 2,3,4,5. לכן, אונקולוגיה מדויקת הפכה למרכזית בטיפול עכשווי בסרטן ריאות, במיוחד בסרטן ריאות לא-תאים קטנים (NSCLC), שבו שינויים במניעים מעשיים מגדירים תת-קבוצות מולקולריות עם היסטוריות טבעיותורגישויות טיפול מובחנות. הנחיות הפרקטיקה הקלינית ממליצות על פרופיל מולקולרי רחב במחלות מתקדמות, כולל EGFR, ALK, KRAS, ROS1, BRAF, MET exon 14 skipping, RET, ERBB2 (HER2) ו-NTRK, לצד הערכת סמנים חיסוניים כגון PD-L1 7,8,9,10. התפתחויות אלו שינו את התוצאות עבור אוכלוסיות נבחרות, אך גם יצרו צווארי בקבוק קליניים חדשים. הרקמה עשויה להיות לא מספקת לבדיקות מקיפות, זמן הטיפול עלול לעכב החלטות טיפוליות, והגישה לריצוף איכותי מהדור הבא משתנהבין מערכות בריאות שונות. גם כאשר יש בדיקות מולקולריות זמינות, טיפול מונחה ביומרקר נשאר לא מושלם משום שהמצב המולקולרי אינו תופס במלואו מצבי מיקרו-סביבה של הגידול המשפיעים על תגובת הטיפול והעמידות. ביטוי PD-L1 נפוץ אך יש לו מגבלות מוכרות כמנבא עצמאי, ועומס המוטציה של הגידול כולל שונות וחוסר ודאות משמעותית בשימוש האופטימלי שלו 6,9,10. מציאויות אלו מדגישות צורך מעשי בסמנים ביולוגיים משלימים שהם ניתנים להרחבה, בעלי מידע ביולוגי, ומסוגלים להעשיר תת-סוגים מולקולריים וסטרטיפיקציה של טיפול כאשר המידע הגנומי אינו שלם, מתעכב או מעורפל.

שיפוץ פרוטאוליטי של מטריצת החוץ-תאית ומיקרו-סביבת הגידול הוא אחד מהממד הביולוגי המוערך יותר ויותר כסימן היכר של ממאירות וכגורם קובע לתגובה טיפולית. מטאלופרוטאינאזות מטריקס (MMPs) מווסתות פלישה, אנגיוגנזה, תנועת תאי חיסון ואיתות ציטוקינים, ובכך מקשרות תוכניות פנימיות גידוליות להקשרים דלקתיים וסטרומליים11. מבין האנזימים הללו, מטריקס מטלופרוטאנאז-12 (MMP-12), הידוע גם כאלסטאז מקרופאג', זכה לתשומת לב בסרטן הריאות משום שהוא מתבטא בספקטרום של גידולי ריאות אנושיים ונראה כי קשור לפנוטיפים אגרסיביים ולתוצאות גרועות יותר12. מעבר לביטוי הרקמתי שלו, MMP-12 ניתן למדידה במחזור הדם, מה שהופך אותו לאטרקטיבי כסמן ביולוגי זעיר פולשני עם פוטנציאל שימושי למעקב סדרתי13. ניתוחים מולטי-סרטניים עדכניים תמכו עוד יותר ברלוונטיות הקלינית של MMP-12 באדנוקרצינומה ריאתית, והציעו תפקידים חיזויים ותחזיתיים שדורשים חקירה מעמיקה יותר בקבוצות קליניות14. חשוב לציין כי סמנים ביולוגיים במחזור הדם משמשים יותר ויותר להשלמת בדיקות רקמה באונקולוגיה, ויש עניין גובר במדדים מבוססי דם שמשקפים לא רק את עומס הגידול אלא גם את הדינמיקה החיסונית והסטרומלית שמעצבת את הרגישותלטיפול מערכתי. בסרטן הריאות, שבו אימונותרפיה וטיפול ממוקד מופעלים לעיתים קרובות, סמנים ביולוגיים המשקפים את מיקרו-סביבת הגידול עשויים להיות בעלי ערך מיוחד להבנת הטרוגניות בטיפול, עמידות מוקדמת והצורך בשילוב גישות16. הקשר ביולוגי וקליני זה מניע הערכה ממוקדת של MMP-12 בסרום מעבר לאות אבחון, במיוחד כסמן מועמד הקשור לתתי-סוגים מולקולריים ולמסלולים טיפוליים.

במקביל, קדהרין 13 (CDH13), המכונה גם T קדהרין או H קדרין, מייצג ציר מכניסטי מובחן הרלוונטי להבדלת גידולים, איתות הידבקות ופלסטיות אפיתלית. CDH13 הוא קדרין לא טיפוסי המעוגן לממברנה באמצעות קטע גליקוזילפוספטידילינוזיטול, ותואר באופן נרחב כמדכא גידולים במספר מאירויות17. ב-NSCLC, השתקה אפיגנטית של CDH13 באמצעות היפרמתילציה של פרומטר דווחה שוב ושוב ונקשרה להתקדמות הגידול ולתכונות קליניקופתולוגיות שליליות18,19. ראיות מטא-אנליטיות ואינטגרטיביות תומכות עוד יותר בכך שהיפרמתילציה של CDH13 נפוצה יותר ב-NSCLC מאשר ברקמת ריאה תקינה וייתכן שיש לה רלוונטיות אבחנתית20,21. מעבר לערכו כסימן לטרנספורמציה ממאירה, סטטוס CDH13 עשוי להיפגש באופן סביר עם רגישות הטיפול. מחקרים ניסיוניים קישרו את מתילציה של CDH13 פרומוטר וביטוי משתנה לפנוטיפים של עמידות לציספלטין במודלים של סרטן ריאות, מה שמעלה את האפשרות ש-CDH13 משקף תוכניות ביולוגיות הקשורות לתגובת טיפול והתאמת גידולתחת לחץ טיפול. נתונים אלו ממקמים יחד את CDH13 כסמן ביולוגי מבוסס רקמה עם השלכות פוטנציאליות על ביולוגיית הסיכון וסטרטיפיקציה טיפולית. בניגוד לבדיקות מולטי-אומיקס מורכבות, ניתן להעריך את CDH13 באמצעות אימונוהיסטוכימיה בתהליכי פתולוגיה שגרתיים, מה שמאפשר תרגום מעשי אם הוא מספק מידע מצומצם מעבר לסמנים קליניים ומולקולריים קיימים.

יחד, MMP-12 ו-CDH13 מייצגים מכתבים ומנגנונים ביולוגיים משלימים זה לזה. MMP-12 הוא מדד בסירקולציה שעשוי ללכוד הפעלה חיסונית וסטרומלית ועיצוב מחדש מונע פרוטאז, בעוד ש-CDH13 הוא סמן ברמת הרקמה המשקף הידבקות מדכאת גידול וויסות אפיגנטי. אנו משערים ששילוב צירים אלו יכול לשפר את ההסקה הקלינית בשני תחומים מרכזיים המגדירים אונקולוגיה מדויקת בסרטן הריאות. ראשית, מסגרת ביומרקר משולבת של סרום ורקמה עשויה לספק מידע משלים לתת-סוג מולקולרי, בין אם על ידי קישור לשינויים במניעים מעשיים ולמצבי סמן ביולוגי חיסוניים או על ידי זיהוי פנוטיפים ביולוגיים קוהרנטיים העוקבים עם מחלקות מולקולריות ספציפיות כאשר בדיקות גנומיות מוגבלות 2,6,8,10 . שנית, החתימה המשולבת עשויה להנחות טיפול מותאם אישית על ידי שיפור סיווג הסיכון ועל ידי התאמה לבחירת הטיפול ותוצאות בין פרדיגמות טיפול ממוקדות ואימונותרפיה, שבהן העמידות היא רב-גורמית וסמנים בודדים אינם מספקים 9,10,23. בהקשר זה, הגישה שלנו היא בכוונה פרגמטית. במקום להחליף את האבחון המולקולרי, הוא שואף להשלים אותם על ידי מתן מדידות ניתנות להרחבה ותואמות קליניקה, שניתן לקבל במהירות ולפרשן לצד הגנוטיפ, PD-L1 והשלב. אסטרטגיה זו עשויה להיות שימושית במיוחד במצבים אמיתיים שבהם רקמות נדירות, ביופסיות חזרתיות אינן מעשיות, או שהשאלה הקלינית אינה רק האם קיים גורם מסוים, אלא כיצד לצפות רגישות לטיפול וסיכון להתפתחות אצל מטופל בודד.

בהתאם לכך, במחקר הקבוצה הנוכחי, אנו מעריכים את ההשלכות הקליניות של MMP-12 בסרום ושל גידול CDH13 על פני תתי-סוגים מולקולריים של סרטן הריאות ומסלולי הטיפול. באופן ספציפי, אנו בוחנים האם סמנים ביולוגיים אלה, בנפרד ומשולבים, קשורים למחלקות מולקולריות מרכזיות ולקבוצות טיפוליות, והאם הם מוסיפים מידע פרוגנוסטי הרלוונטי לניהול מותאם אישית. אנו גם ממקמים עבודה זו בתוך מערכת אקולוגית רחבה יותר של גישות חלופיות, כולל DNA גידול בסירקולציה, פרופילינג מתילציה ומודלים רב-מודליים המשלבים תכונות קליניות, דימות ומולקולריות24,25. החידוש של המחקר שלנו אינו בהצעת סמנים ביולוגיים חדשים ליחידים, אלא בשילוב מכוון של אות פרוטאז במחזור עם סימן הידבקות ואפיגנטי מבוסס רקמה כדי להתמודד עם שאלה קלינית שניתן לפעול: כיצד להשלים תת-סוגים מולקולריים והתאמה אישית של טיפול באמצעות מדידות אפשריות בפרקטיקה שגרתית. על ידי לכידת ממדים משלימים של אינטראקציות גידול-מארח מערכתיות וביולוגיה פנימית בין גידול, מסגרת אינטגרטיבית זו חורגת מעבר למחקרים קודמים שהעריכו MMP-12 או CDH13 בנפרד. גישה כזו עשויה לספק גשר מעשי בין פתולוגיה אבחנתית לטיפולים מדויקים, עם יישומים פוטנציאליים במתן עדיפות לבדיקות מולקולריות, הקשר של אי-התאמה בין סמנים ביולוגיים, ושיפור תכנון טיפול מותאם אישית מבוסס סיכון.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

כל ההליכים עמדו בתקנות המוסדיות והלאומיות ואושרו על ידי ועדת האתיקה של בית החולים העם של שינגטאי (מס' 2024-124). הדרישה להסכמה מדעת בכתב בוטלה משום שנעשה שימוש בנתונים קליניים שנאספו באופן שגרתי ובדגימות שאריות. כל הנתונים הושמרו אנונימיים לפני הניתוח.

עיצוב המחקר, ההגדרה והסכמטיקה הכוללת
מחקר זה נערך כקבוצת תצפית מרכזית אחת שנועדה להעריך את ההשלכות הקליניות של MMP-12 בסרום ושל גידול CDH13, בנפרד ובשילוב, לתת-סוג מולקולרי של סרטן הריאות ולטיפול מותאם אישית. המחקר בוצע בבית החולים של העם שינגטאי. זוהו מטופלים זכאים שנוהלו בין ינואר 2021 ליוני 2022, ונרשמו 262 מטופלים עוקבים שעמדו בקריטריוני הכללה וההדרה שנקבעו מראש.

תהליך העבודה הכולל של הלימוד מוצג באיור 1. הסכימה מתארת את התהליך המלא מזיהוי המטופל ועד לניתוח, כולל סינון ורישום מטופלים, אפיון קליניקופתולוגי בסיסי ופרופיל מולקולרי המבוסס על בדיקות קליניות שגרתיות, איסוף ועיבוד של סרום טרום-טיפול, הכנת רקמת הגידול לאימונוהיסטוכימיה CDH13, כימות של MMP-12 בסרום, דירוג אימונוריאקטיבי CDH13, סיווג טיפול קו ראשון ומסלולי טיפול לאחר מכן, ותוצאה אורכית הערכה, כולל תגובה לטיפול, הישרדות ללא התקדמות, והישרדות כללית. הסכימה מבחינה בין ניתוחי אבחון ותת-סוגים מולקולריים לבין ניתוחי טיפול ותוצאות, ומציינת את נקודות הזמן בהן נאספו הדגימות הביולוגיות, נוצרו תוצאות מולקולריות, החל טיפול ובוצעו הערכות מעקב.

סינון משתתפים, קריטריוני זכאות והפשטת נתונים קליניים
מטופלים פוטנציאליים זכאים זוהו ממערכת המידע של בית החולים ומרשימת הפתולוגיה במהלך חלון ההרשמה שנקבע מראש (ינואר 2021 עד יוני 2022). סרטן הריאות הראשוני אובחן באמצעות היסטופתולוגיה, בתוספת סקירה קלינית רב-תחומית בעת הצורך. נרשמו מטופלים בוגרים עוקבים שעמדו בכל קריטריוני הזכאות. קריטריוני ההכללה כללו סרטן ריאות ראשוני שאושר היסטולוגית, זמינות דגימת סרום לפני הטיפול שהושגה לפני תחילת כל טיפול אנטי-גידולי (ולפני ניתוח במטופלים שעברו כריתה ראשית), זמינות רקמת גידול מספקת לאימונוהיסטוכימיה של CDH13, וזמינות מידע מולקולרי על תת-סוג שנוצר כחלק מטיפול קליני שגרתי. מטופלים עם היסטוריה מתועדת של גידול ממאיר נוסף לפני ההרשמה, מטופלים עם נפח סרום לא מספק או פגיעה בשלמות הדגימה, מטופלים ללא רקמת גידול מוערכת להערכת CDH13, ומטופלים שקיבלו טיפול אנטי-סרטני מערכתית לפני איסוף דם בסיסי.

נתונים קליניקופתולוגיים וטיפוליים נלקחו מרשומות רפואיות אלקטרוניות באמצעות טופס דוח מקרה סטנדרטי עם הגדרות משתנים מוגדרות מראש וכללי קידוד. המשתנים שנרשמו כללו דמוגרפיה (גיל ומין), חשיפה לעישון, מצב ביצועים של קבוצת האונקולוגיה השיתופית המזרחית (ECOG), מחלות נלוות, ממצאי דימות בסיסיים, תת-סוג היסטולוגי, שלב הגידול-גושום-גרורות (TNM) (בהתאם למערכת השלבים בפרקטיקה קלינית שגרתית במהלך תקופת המחקר), פרמטרים בסיסיים במעבדה, ומידע מפורט על טיפול (כולל משטר קו ראשון, תאריכי התחלה, שינויים במינון ומעברי טיפול). חשיפה לעישון נמדדה בשנות חפיסה כך: שנות חפיסה = (סיגריות ביום ÷ 20) × שנות עישון. כאשר היסטוריית העישון אינה שלמה או לא עקבית בין הרשומות, משתנה העישון סווג כלא ידוע, והמקור תועד כאי-התאמה ביומן ההפשטה; ההיעדרות טופלה בהתאם לתוכנית הניתוח הסטטיסטית שנקבעה מראש.

איסוף דגימות, עיבוד ואחסון
דם ורידי היקפי נאסף בתחילת הטיפול האנטי-גידולי. הסרום הופרד בצנטריפוגה ב-1,500 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר. הסופרנטנט של הסרום הועבר לקריוביאלים בעלי קשר נמוך מבלי להפריע לשכבת התא. הסרום חולק למנות של 200–500 מיקרוליטר כדי למזער מחזורי הקפאה–הפשרה, והאלקוטים אוחסנו בטמפרטורה של −80 מעלות צלזיוס עד ניתוח האצוות. התקופה בין איסוף הדם להקפאה לכל דגימה נרשמה, ודגימות עם זמן איסוף להקפאה העלה על שעתיים לא נלקחו.

נהלי בקרת איכות טרום אנליטיים מוגדרים מראש יושמו על ידי תיעוד המוליזה וליפימיה בעיבוד. דגימות שעברו המוליזציה נראית לעין הוצאו מכימות ELISA. אליקווטים בסרום הופשרו על קרח מיד לפני הבדיקה, מעורבבים בהיפוך עדין, וצונו בצנטריפוגה ב-2,000 × גרם למשך 5 דקות להסרת חלקיקים במידת הצורך. נמנעו מערבולת ומערבולת חזקה כדי למנוע היווצרות בועות וארטיפקטים אופטיים במהלך מדידות הספיגה.

רכישת רקמת הגידול וההכנה
נאספה רקמת גידול מהליכים אבחנתיים שגרתיים (ביופסיה, ברונכוסקופיה, ביופסיית מחט ליבה או כריתה כירורגית). הרקמה התקבעה בפורמלין ניטרלי עם בופר לפי פרקטיקה פתולוגית סטנדרטית והוטמעה בפרפין. חתכים (3–4 מיקרון) הוכנו על שקופיות טעונות לאימונוהיסטוכימיה. שקופיות לא מוכתמות אוחסנו בסביבה יבשה בטמפרטורת החדר ונצבעו במרווח זמן מוגדר מראש כדי למזער את התדרדרות האנטיגן. נשמר יומן שרשרת שמירה שקישור מזהי דגימות לקודי מחקר שאינם מזוהים. הפתולוג שביצע את דירוג CDH13 היה עיוור לערכי MMP-12 בדם, תת-סוג מולקולרי, טיפול ותוצאות.

כימות MMP-12 בסרום באמצעות בדיקת אימונוסורבנט המקושרת באנזימים (ELISA)
דם ורידי היקפי נאסף לפני כל טיפול אנטי-גידולי, רצוי בתוך 7 ימים לפני ביופסיה או תחילת הטיפול. סרום MMP-12 נמדד באמצעות ערכת ELISA מסחרית של MMP-12 לאדם. כל אליקווט סרום הופש פעם אחת על הקרח, ערבב בעדינות, ונבדק בהכפלה לפי הוראות הערכה. עקומה סטנדרטית נוצרה על כל לוח באמצעות דילול סדרתי של התקן הרקומביננטי שסופק, והספיגה נקראה ב-450 ננומטר עם תיקון ייחוס באמצעות קורא מיקרופלט. הריכוזים חושבו על ידי התאמת עקומת רגרסיה לוגיסטית בת ארבעה פרמטרים. כדי להבטיח עמידות אנליטית, נכללו סרום בקרת איכות פנימית (QC) על כל לוח ונעקבו לדיוק בתוך הבדיקה ובין הבדיקות (מקדמי יעד שונים התואמים לאימות הבדיקה). אם התוצאות ירדו מתחת לגבול התחתון של הכמות, חצי מהגבול הזה הוקצה לניתוח סטטיסטי; אם התוצאות עברו את הגבול העליון, המדידה חזרה על עצמה לאחר דילול מתאים. כדי למזער את השפעות האצווה, הדגימות הוקצו באקראי בין הלוחות, וסט זהה של סראות QC נכללה בכל פלטה כדי לעקוב אחרי שונות בין הלוחות. אנשי המעבדה שביצעו את ELISA היו עיוורים לקיבוץ קליני ולתוצאות.

גידול CDH13 אימונוהיסטוכימיה וניקוד אימונוריאקטיבי
אימונוהיסטוכימיה של CDH13 בוצעה על חתכי גידול מוטמעים בפרפין עם פורמלין, תוך שימוש בנוגדן ראשוני מאומת נגד CDH13. קומפלקסים של אנטיגן-נוגדנים זוהו באמצעות מערכת גילוי מבוססת פולימר, והצביעה נראתה באמצעות 3,3′-דיאמינובנזידין (DAB). תהליך צביעה זהה הוחל על כל דגימות המחקר; שקופיות עובדו בכמות, ונכללו בקרות מתאימות.

בלוקים של פרפין חולקו ב-3–4 מיקרון, הופרפו בקסילן, והודרו מחדש באמצעות אתנול מדורג למים מזוקקים. שחזור אפיטופים מונע חום בוצע בבופר ציטראט (10 מ"מ, pH 6.0) באמצעות מיקרוגל בטמפרטורה של 95–100 מעלות צלזיוס למשך 15 דקות, ולאחר מכן קירור לטמפרטורת החדר למשך 20 דקות. פעילות פרוקסידאז אנדוגנית נרגעה עם 3% מי חמצן למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר, וחסימת חלבון בוצעה באמצעות תמיסת חסימת סרום רגילה למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. החתכים עברו דגירה עם הנוגדן האנטי-CDH13 הראשי במהלך הלילה בטמפרטורה של 4°C. לאחר השטיפה, המגיב המשני מבוסס הפולימר הוחל במשך 20–30 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן בוצע ויזואליזציה עם כרוגן 3.3′-DAB למשך 3–5 דקות תחת ניטור מיקרוסקופי. המקטעים צובקו בהמטוקסילין, יובשו באמצעות אתנול מדורג, נוקו בקסילן, והותקנו במדיום קבוע להתקנה.

בקרות איכות פנימיות נכללו בכל ריצת צביעה. חתך רקמה חיובי ידוע ל-CDH13 עובד במקביל כקבוצת ביקורת חיובית, והנוגדן הראשי הושמט בביקורת השלילית. הרצה התקבלה רק כאשר מערכת הביקורת החיובית הראתה את דפוס ההצבעה הצפוי בעוצמה מתאימה, והבקרה השלילית לא הראתה צביעה ספציפית. צביעה חזרה על עצמה עבור ריצות עם רקע מופרז, ביצועי שליטה כושלים, או עם אות לא ספציפי שפוגע בפרשנות.

ביטוי CDH13 נמדד באמצעות ציון אימונוראקטיבי (IRS) שנגזר מעוצמת הצביעה ויחס תאי הגידול החיוביים. שני פתולוגים מוסמכים דירגו את כל השקופיות באופן עצמאי תוך עיוורון למדידות סמן ביולוגי בדם, תת-סוג מולקולרי, טיפול ותוצאות. ציונים סותרים נפתרו באמצעות סקירה משותפת במיקרוסקופ רב-ראשי, ודוח ה-IRS שהוכרע נרשם. עוצמת הצביעה הוקצתה ל-0 (ללא צביעה), 1 (חלשה), 2 (בינונית) או 3 (חזקה). שיעור תאי הגידול החיוביים הוקצה ל-0 (0%), 1 (1–10%), 2 (11–50%), 3 (51–80%) או 4 (81–100%). ה-IRS חושב כך: IRS = ציון עוצמה × ציון פרופורציה. ערכי ה-IRS נעו בין 0 ל-12. ביטוי נמוך של CDH13 הוגדר כ-IRS ≤ 3, בהתבסס על סף נפוץ לניקוד אימונורי. IRS נשמר הן כמשתנה רציף והן כקטגוריה דיכוטומית לניתוחים במורד הזרם, כולל השוואות תת-קבוצות ומודלים משולבים של סמנים ביולוגיים. ההסכמה הבין-צופים הוערכה במדגם אקראי מוגדר מראש שכללה 30% מהמקרים באמצעות סטטיסטיקת קאפה משוקללת, והליך הדגימה, הערכת ההסכמה והחלטות השיפוט תועדו במסלול ביקורת.

תת-סוג מולקולרי וסיווג טיפול
מידע על תת-הסוג המולקולרי התקבל מבדיקות קליניות שגרתיות שנערכו על רקמת גידול אבחנתית. התוצאות הושגו באמצעות בדיקות מאומתות קלינית שיושמו בטיפול סטנדרטי, כולל בדיקות מבוססות PCR ממוקדת, פאנלים ממוקדים לרצף מהדור הבא, אימונוהיסטוכימיה ופלואורסצנציה בשטח. לכל מטופל נרשמו סוג הבדיקה, מקור הדגימה, הצהרת ההתאמה ותאריך הדיווח. המטופלים סווגו לפי מצב שינוי דרייבר שניתן לפעול, כולל מוטציות מפעילות EGFR, סידורי ALK, סידורי ROS1, מוטציות KRAS, מוטציות BRAF, שינויים מדלגים על אקסון 14 ב-MET, סידורי RET, שינויים ב-ERBB2 ומיזוג NTRK. ציון היחס בין הגידול ל-PD-L1 נרשם במקום בו בוצע, והביטוי של PD-L1 סווג לפי השכבות שבהן השתמשו בפרקטיקה השגרתית במהלך תקופת המחקר. כל קטגוריות תת-הסוגים המולקולריים הוגדרו מראש לפני הניתוח. כאשר דווחו יותר משינוי פעולה אחד, חולים חולקו לפי כלל סיווג היררכי מוגדר מראש שהעדיף שינויים עם השלכות טיפוליות מונחות גנוטיפ בסדר הבא: מוטציות EGFR, סידורי ALK, סידורי ROS1, מוטציות BRAF, שינויים מדלגים על אקסון 14 ב-MET, סידורי RET, שינויים ב-ERBB2, מיזוגי NTRK ומוטציות KRAS.

מידע הטיפול נלקח מרשומות רפואיות, כולל משטר קו ראשון, תאריכי התחלה והפסקה, וקווי טיפול נוספים. הניהול הראשוני סווג לקטגוריות טיפול בלעדיות שהוגדרו מראש: טיפול ממוקד מונחה גנוטיפ, טיפול מבוסס מעכבי נקודות ביקורת חיסונית, טיפול מבוסס כימותרפיה, וניהול רב-מודאלי הכולל ניתוח עם טיפול מערכתי סביבי ניתוח לפי הצורך. תאריך האינדקס הוגדר כתאריך תחילת הטיפול הסיסטמי הקו הראשון; עבור מטופלים שנוהלו באמצעות כריתה ראשית, תאריך האינדקס היה תאריך הניתוח, והטיפול המערכתי שלאחר מכן סווג כאדג'ובנט לפי הרשומה הקלינית. לניתוחים שעסקו בטיפול מותאם אישית, המטופלים סווגו במשותף לפי תת-סוג מולקולרי וקטגוריית טיפול, וריכוזי MMP-12 בסרום והביטוי של CDH13 הגידול הושוו בין מחלה חיובית לנהג ושלילי למחלה, ובין קבוצות טיפול ממוקדות וקבוצות טיפול מבוססות מעכבי נקודות ביקורת חיסונית.

הגדרות תוצאות ומעקב
תאריך האינדקס הוגדר כתאריך תחילת טיפול אנטי-גידולי קו ראשון. עבור מטופלים שנוטלו בניתוח ראשוני, תאריך האינדקס הוגדר כתאריך הניתוח; טיפול מערכתי מאוחר יותר סווג כאדג'ובנטי או פליאטיבי לפי הרשומה הרפואית. כל מטופל עוקב מתאריך האינדקס ועד המוות, תאריך המגע האחרון המאומת, או תאריך הצנזורה המנהלית, לפי מה שקרה קודם. משך המעקב נרשם בחודשים, ולכל נקודת סיום נשמרו מדד האירוע ותאריך האירוע או הצנזורה המתאים. התוצאות נקבעו באמצעות הפשטה מובנית של התיק הרפואי האלקטרוני, כולל דוחות רדיולוגיה, תיעוד מרפאת אונקולוגיה, רשומות אשפוז ומעקב טלפוני בעת הצורך. נעשה שימוש בטופס דוח מקרה מוגדר מראש, והוחלו כללי ההיררכיה האחידים של המקור. כאשר התאריכים או הסיווגים היו שונים בין הרשומות, הסתירות נפתרו על ידי מתן עדיפות לדוחות רדיולוגיה עכשוויים ולהערות החלטה טיפוליות; הערך הסופי שנקבע והמקורות התומכים בו תועדו. נוהל יומן מעקב המתעד תאריכי דימות, מעברי טיפול, אשפוזים וניסיונות מגע כדי למזער אובדן במעקב ולהבטיח מעקב.

תגובת הגידול הוערכה בחולים עם מחלה מדידה לפי גרסה 1.1 של RECIST. התגובה הכוללת הטובה ביותר סווגה כתגובה מלאה, תגובה חלקית, מחלה יציבה או מחלה מתקדמת. קצב התגובה האובייקטיבי הוגדר כתגובה מלאה או חלקית, וקצב שליטה במחלה כתגובה מלאה, תגובה חלקית או מחלה יציבה. תאריכי תגובה והתקדמות נקבעו בהתבסס על הראיות המתועדות המוקדמות ביותר.

הישרדות ללא התקדמות (PFS) הוגדרה כמרווח מתאריך האינדקס ועד להופעה הראשונה של התקדמות המחלה או מוות מכל סיבה, לפי מה שקרה קודם. ההתקדמות נקבעה בעיקר מדוחות רדיולוגיה המתעדים התקדמות לפי RECIST 1.1. כאשר הרדיולוגיה אינה זמינה בזמן ההידרדרות הקלינית, התקדמות מתועדת על ידי הרופאים התקבלה אם היא קשורה במפורש להחמרת עומס הגידולים וגורמת לשינוי בניהול האנטי-סרטני. מטופלים ללא אירוע בתאריך ההערכה האובייקטיבית האחרונה צונזרו, מה שמאשר את היעדר ההתקדמות. אם קו טיפול מערכתי חדש החל ללא תיעוד מפורש של ההתקדמות, נבדק ההדמיה וסופק תיעוד קליני עכשווי. אם לא ניתן היה לאמת את ההתקדמות, המטופלים צונזרו בהערכה הרנטגונית האחרונה לפני שינוי הטיפול, וכלל ההחלטה שהוחל נרשם.

הישרדות כוללת (OS) הוגדרה כמרווח מתאריך האינדקס ועד למוות מכל סיבה. המצב החיוני נקבע באמצעות רשומות בית חולים והערות מעקב במרפאות חוץ, בתוספת אישור טלפוני מובנה בעת הצורך. תאריך המוות נרשם כמתועד בתיק הרפואי או, כאשר לא היה זמין, כתאריך שאושר על ידי המשפחה במהלך מעקב מעקב, עם תיעוד תומך שנרשם ביומן המעקב. מטופלים שהיו בחיים במועד המגע המאומת האחרון צונזרו.

יושמה זרימת עבודה סטנדרטית של מעקב המותאם למסלולי טיפול שגרתיים. במהלך טיפול מערכתי פעיל, תועדו הערכות קליניות בכל מחזור טיפול, והערכות רדיוגרפיות חוזרות במרווחים קבועים נקבעו לפי פרוטוקול קליני, כאשר שיטת ההדמיה והתאריך נרשמו לכל הערכה. לאחר סיום הטיפול הקו הראשון או במהלך מעקב לאחר הניתוח, נרשמו ביקורי מעקב והערכות דימות בהתאם ללוח הזמנים של המוסד. כאשר לא ניתן היה להשלים מעקב פרונטלי, נערך מעקב טלפוני מובנה לאישור המשך הטיפול, תיעוד אשפוזים במרווחים, אישור מצב המחלה כפי שתועד בהדמיה חיצונית, כאשר רלוונטי, ואישור מצב הישרדות. כל הביקורים שהוחמצו, ניסיונות בלתי נגישים והסיבות להפסקת המעקב תועדו. לפני סיווג מטופל כאבוד במעקב, ניסו ליצור קשר לפחות פעמיים נוספות בימים שונים, וכל ניסיון נרשם.

נשמרה הפרדה פרוצדורלית בין הערכת סמנים ביולוגיים לבין הערכת התוצאה. אנשי הצוות שביצעו מדידת MMP-12 בסרום וניקוד CDH13 היו עיוורים לתוצאות קליניות. הפשטת התוצאה בוצעה ללא גישה לתוצאות הסמנים הביולוגיים כאשר היה אפשרי. תהליך שיפוט דו-שלבי הוחל עבור נקודות קצה של התקדמות ותגובה. תקציר מיומן הקצה סיווג אירועים ותאריכים לפי הכללים שנקבעו מראש, ולאחר מכן קלינאי בכיר סקר באופן עצמאי את ההקצאות. אי-התאמות נפתרו באמצעות סקירה משותפת של דוח הרדיולוגיה המקורי, הערות האונקולוגיה ולוח הזמנים של הטיפול, ונשמר מסלול ביקורת של כל החלטות ההכרעה.

בוצעו בדיקות עקביות לזיהוי רצפים בלתי סבירים, כולל אירועים המתוארכים לפני תאריך האינדקס, מעברי טיפול ללא הערכות תואמות, או תאריכי פטירה ללא תיעוד תומך. מקרים שסומנו תושרו על ידי חזרה למסמכי המקור ועדכון מערך הנתונים עם הערת תיקון מתוארכת שמפרטת את סיבת השינוי ואת הראיות התומכות.

ניתוח סטטיסטי
ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות SPSS (גרסה 26.0) ו-R (גרסה 4.3.0). משתנים רציפים הוצגו כסטיית תקן ממוצעת ± או חציון (טווח בין-רבעוני), לפי הצורך, ומשתנים קטגוריים הוצגו כספירות ואחוזים. השוואות קבוצתיות השתמשו במבחנים פרמטריים או לא-פרמטריים לפי הצורך, עם חי-ריבוע או מבחני פישר המדויקים לנתונים קטגוריים. כל המבחנים היו דו-צדדיים, כאשר P < 0.05 נחשבו למובקות סטטיסטית.

משתנים נבחרו מראש בהתבסס על רלוונטיות קלינית וראיות קודמות, ואותו סט משתנים יושם על מודלים קשורים לתמיכה בהשוואתיות. משתני ההתאמה המרכזיים כללו גיל, מין, חשיפה לעישון, שלב TNM, מצב ביצועי ECOG ותת-סוג היסטולוגי, עם התאמה נוספת לקבוצת הטיפול כאשר יעד הניתוח הוא תת-סוג מולקולרי באוכלוסיות מטופלות. רב-קולינאריות הוערכה באמצעות גורמי אינפלציה של שונות, וקולינאריות בעייתית טופלה באמצעות כללי הפחתת משתנים מוגדרים מראש. דווחו יחסי הסתברויות מותאמים עם רווחי ביטחון של 95% וערכי P דו-צדדיים. מספר המשתנים המשולבים במודלים הלוגיסטיים ורגרסיית Cox הרב-משתנית הוגדר מראש והוגבל ביחס למספר אירועי התוצאה כדי למזער את הסיכון להתאמת יתר. יחס האירועים למשתנה נותר מקובל (≥10) לכל המודלים. לתוצאות מולקולריות רב-קטגוריות, הותקנו מודלים של רגרסיה לוגיסטית רב-נומית, או שבוצעו סדרת השוואות לוגיסטיות בינאריות באמצעות קטגוריית ייחוס מוגדרת מראש, ואסטרטגיית המודלים הוצגה בבירור.

הישרדות ללא התקדמות והישרדות כוללת נותחו באמצעות הערכות קפלן–מאייר, ועקומות הישרדות הושוו באמצעות מבחן דירוג לוגריתם. הקשרים בין סמנים ביולוגיים לתוצאות נמדדו באמצעות רגרסיית סיכונים פרופורציונליים של קוקס, תוך דיווח על יחסי סיכון עם רווחי ביטחון של 95%. מודלים מרובי משתנים של קוקס נבנו באמצעות משתנים קליניים-פתולוגיים מוגדרים מראש, כולל תת-סוג מולקולרי וקטגוריית טיפול, כדי להעריך את ההשלכות לטיפול מותאם אישית. הנחת הסיכונים הפרופורציונליים אושרה באמצעות אבחון שארית של שונפלד וגרפים של הישרדות בלוגריתם-מינוס-לוגם. אם הנחת הסיכונים הפרופורציונליים הופרה עבור משתנה קו-משתנה, הבעיה טופלה באמצעות גישה מוגדרת מראש כגון סטרטיפיקציה על אותו משתנה או הכללת מונח אינטראקציה תלוי זמן, ודווח המפרט הסופי של המודל.

נתונים חסרים טופלו באמצעות אסטרטגיה מוגדרת מראש. כאשר החסרות הייתה מינימלית, בוצעו ניתוחים מלאים של מקרים; אחרת, השתמשו בהטלאות מרובות עם משוואות שרשרתיות, כולל כל המשתנים במודלים האנליטיים. נוצרו עשרה מערכי נתונים מיוחסים, והערכות מאגדות חושבו באמצעות כללי רובין. בניתוחים שכללו השוואות של תתי-סוגים מרובים או נקודות קצה מרובות, קצב הגילוי השגוי נשלט באמצעות הליך מוגדר מראש, או שהניתוחים סומנו בבירור כחוקרים כדי להבטיח שקיפות לגבי ריבוי.

מערך הנתונים של הניתוח ננעל לפני התאמת המודל, ונשמר מילון נתונים מקיף שהגדיר כל משתנה, יחידה, סכמת קידוד וטווח מותר לכל משתנה. דגימות בקרת איכות כפולות על פני לוחות בדיקה נכללו כדי לכמת שונות בין לוחות ולניטור סטייה. לצורך ניקוד באימונוהיסטוכימיה, תועדו רובריקת הניקוד, הליכי עיוורון והערכת ההסכמה בין הצופים, ויומני שיפוט נשמרו למקרים סותרים. יושמו בדיקות טווח מתוכנתות ובדיקות עקביות לוגית בין משתנים מרכזיים, כולל תאריך אינדקס, תאריך איסוף דגימה, תאריך תחילת הטיפול ותאריכי תוצאה. כל הסקריפטים הסטטיסטיים ויומני הפלט המבוקרים בגרסאות נשמרו כדי לאפשר שכפול מלא של זרימת העבודה האנליטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

הרכבת קוהורטים ותפוצת תת-הסוגים המולקולריים
זרימת העבודה הכוללת של הלימוד מסוכמת באיור 1. בסך הכל, נכללו 262 חולים רצופים עם סרטן ריאות וחולקו לארבעה תת-סוגים מולקולריים רלוונטיים קלינית: EGFR (n = 92), ALK (n = 48), KRAS (n = 54), וסוג פראי (n = 68). תכונות קליניקופתולוגיות בסיסיות שונות בין תת-סוגים (טבלה 1). חולים עם שינויים ב-EGFR ו-ALK היו צעירים בממוצע מאלו שבקבוצות KRAS וקבוצות סוג בר (P = 0.006), בעוד שחשיפה למין ולעישון גברים היו נפוצות ...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה מעריך את התפקידים המשלימים של MMP-12 בסרום ושל גידול CDH13 כגישה משולבת לסמן ביולוגי לתמיכה בפרשנות קלינית של תת-סוגים מולקולריים וסטרטיפיקציה טיפולית בסרטן הריאות. ההשערה המרכזית נובעת מהתפקידים הביולוגיים המשלימים של שני הסמנים הביולוגיים הללו: MMP-12, פרוטאז בסירקולציה המשקף שיקום חיסוני-סטרומלי ואגרסיביות גידולית, ו-CDH13, מדכא גידולים מבוסס רקמה המקושר לוויסות אפיגנטי ופלסטיות אפיתליאלית 26,27,28,29,30

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם ניגודי עניינים.

תודות

אנו מודים בכנות לתרומתם של הצוות הרפואי והסיעודי בבית החולים העממי שינגטאי על תמיכתם בגיוס מטופלים, איסוף נתונים קליניים ועיבוד דגימה ביולוגית. מחקר זה נתמך על ידי פרויקט תוכנית המחקר והפיתוח של מפתחות שינגטאי (מס' 2024ZC116).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
נוגדן, אנטי-CDH13 (T-cadherin)אבקאם, קיימברידג', בריטניהAB15126נוגדן ראשי לאימונוהיסטוכימיה; מאומת לרקמת FFPE
צנטריפוגה (קירור מהיר)אפנדורף, המבורג, גרמניה5424 Rמשמש להפרדת סרום והבהרת דגימות
ערכת מצע DABZSGB-Bio, בייג'ינג, סיןZLI-9017לזיהוי כרומוגני באימונוהיסטוכימיה
קורא מיקרופלט ELISABioTek Instruments, ווינוסקי, ארה"בELx800משמש לקריאת ספיגה ב-450 ננומטר עם תיקון ייחוס
פורמלין (10% נייטרל עם בופר)חברת Sinopharm Chemical Reagent, שנגחאי, סין10009218לקיבוע של ביופסיה ודגימות רקמה כירורגית
ערכת צביעת המטוקסילין ואיאוסיןסולארביו, בייג'ינג, סיןG1120לצורך צביעת נגד ובקרת איכות של מחסניות IHC
ערכת ELISA אנושית MMP-12אבקאם, קיימברידג', בריטניהAB246533מדידה כמותית של מטריצת הסרום מטלופרוטאנז-12
מיקרוסקופ (שדה בהיר)ניקון, טוקיו, יפןאקליפס E200שימש להערכת צביעת חיסון CDH13 וניקוד
מיקרוטוםLeica Biosystems, וצלר, גרמניהRM2235לחתך רקמה מוטמעת בפרפין ב-3– 4 ומיקרו; עובי m
מדיום הרכבהסולארביו, בייג'ינג, סיןS2100להרכבה קבועה של מחסנית לאחר צביעת IHC
תחנת הטמעת פרפיןLeica Biosystems, וצלר, גרמניהEG1150להכנת בלוקי רקמת FFPE
מלח זרחן (PBS)Gibco, Thermo Fisher Scientific, ארה"ב10010023משמש לכביסה בזמן צביעת IHC
מערכת זיהוי פולימריםMXB Biotechnologies, פוז'ואו, סיןDAB-0031ערכת גילוי משני ל-IHC
R תוכנה סטטיסטיתקרן R למחשוב סטטיסטי, וינה, אוסטריהגרסה 4.3.0משמש לניתוח סטטיסטי ומידול
צינורות מפריד סרוםBD Vacutainer, פרנקלין לייקס, ארה"ב367988לאיסוף דם ורידי פריפרי
תוכנת סטטיסטיקה SPSSIBM Corp., ארמונק, ארה"בגרסה 26.0משמש לניתוח סטטיסטי של נתונים רציפים וקטגוריים
מקררים לאחסוןקורנינג בע"מ, קורנינג, ארה"ב430488קריוביאלים בעלי קישור נמוך לזיהוי דגימות סרום
אמבט מים (לשאיפת אנטיגן)גרנט אינסטרומנטס, קיימברידג', בריטניהJBN26שומר על טמפרטורה קבועה במהלך שליפת אנטיגנים

מקורות

  1. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: Globocan estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  2. Bhatt, A., Yone, N., Lalla, M., Jeon, H., Cheng, H. Molecular diagnosis, clinical trial representation, and precision medicine in minority patients with oncogene-driven lung cancer. Cancers (Basel). 17 (12), 1950(2025).
  3. Cognigni, V., et al. Molecular heterogeneity of small cell lung cancer and new therapeutic possibilities: A narrative review of the literature. Transl Lung Cancer Res. 14 (4), 1441-1455 (2025).
  4. Herbst, R. S., et al. Molecular residual disease analysis of adjuvant osimertinib in resected egfr-mutated stage ib-iiia non-small-cell lung cancer. Nat Med. 31 (6), 1958-1968 (2025).
  5. Huang, D., et al. Molecular subtypes and targeted therapeutic strategies in small cell lung cancer: Advances, challenges, and future perspectives. Molecules. 30 (8), 1731(2025).
  6. Luo, J., et al. Hiding in plain sight: Nut carcinoma is an unrecognized subtype of squamous cell carcinoma of the lungs and head and neck. Nat Rev Clin Oncol. 22 (4), 292-306 (2025).
  7. Mosleh, B., et al. Sex-based differences in lung cancer susceptibility and molecular genetics in the 2020s. Heliyon. 11 (2), e42089(2025).
  8. Skoulidis, F., et al. Molecular determinants of sotorasib clinical efficacy in kras(g12c)-mutated non-small-cell lung cancer. Nat Med. 31 (8), 2755-2767 (2025).
  9. Wang, Y., et al. Immunotherapy for advanced-stage squamous cell lung cancer: The state of the art and outstanding questions. Nat Rev Clin Oncol. 22 (3), 200-214 (2025).
  10. Zhu, Y., et al. Heterogeneity of molecular subtyping and therapy-related marker expression in primary tumors and paired lymph node metastases of small cell lung cancer. Virchows Arch. 486 (2), 243-255 (2025).
  11. Cesar, M. C. M., et al. Peptides derived from the pou domain of brn2 show antitumor activity against murine melanoma model cells in vitro and in vivo. Cancer Chemother Pharmacol. 95 (1), 67(2025).
  12. Chang, Z., et al. Simultaneous detection of mmp-1 and mmp-12 using au-se nanoprobe for advancing nsclc diagnosis. Anal Chem. 97 (8), 4452-4460 (2025).
  13. Fan, X., et al. The mir-23a/27a/24-2 cluster promotes postoperative progression of early-stage non-small cell lung cancer. Mol Ther Oncolytics. 24, 205-217 (2022).
  14. Fung, N. H., et al. Targeting the human β(c) receptor inhibits inflammatory myeloid cells and lung injury caused by acute cigarette smoke exposure. Respirology. 27 (8), 617-629 (2022).
  15. Ji-Hong, Y., et al. Baicalein attenuates bleomycin-induced lung fibroblast senescence and lung fibrosis through restoration of sirt3 expression. Pharm Biol. 61 (1), 288-297 (2023).
  16. Kumar, S., Parveen, S., Swaroop, S., Banerjee, M. Tnf-α and mmps mediated mucus hypersecretion induced by cigarette smoke: An in vitro study. Toxicol In Vitro. 92, 105654(2023).
  17. Li, Y. Q., et al. Prediction and validation of common targets in atherosclerosis and non-small cell lung cancer influenced by atorvastatin. BMC Complement Med Ther. 23 (1), 415(2023).
  18. Mitsune, A., et al. Upregulation of leukocyte immunoglobulin-like receptor b4 on interstitial macrophages in copd; their possible protective role against emphysema formation. Respir Res. 22 (1), 232(2021).
  19. Spix, B., et al. Lung emphysema and impaired macrophage elastase clearance in mucolipin 3 deficient mice. Nat Commun. 13 (1), 318(2022).
  20. Ando, F., et al. Combination of plasma mmps and pd-1-binding soluble pd-l1 predicts recurrence in gastric cancer and the efficacy of immune checkpoint inhibitors in non-small cell lung cancer. Front Pharmacol. 15, 1384731(2024).
  21. Colmenares, V., Hedman, A., Hesslow, A., Wahlin, B., Södergren, A. Cohort study of serological biomarkers for interstitial lung disease in patients with rheumatoid arthritis. Scand J Rheumatol. 53 (6), 386-395 (2024).
  22. Gonzalez-Avila, G., et al. Matrix metalloproteinases and stress hormones in lung cancer progression. J Oncol. 2022, 5349691(2022).
  23. Hung, W. Y., et al. Blocking mmp-12-modulated epithelial-mesenchymal transition by repurposing penfluridol restrains lung adenocarcinoma metastasis via upa/upar/tgf-β/akt pathway. Cell Oncol (Dordr). 44 (5), 1087-1103 (2021).
  24. Kowalczyk, A., et al. Effective voltammetric tool for simultaneous detection of mmp-1, mmp-2, and mmp-9; important non-small cell lung cancer biomarkers. Biosens Bioelectron. 229, 115212(2023).
  25. Lam, T. Y. W., et al. Ism1 protects lung homeostasis via cell-surface grp78-mediated alveolar macrophage apoptosis. Proc Natl Acad Sci U S A. 119 (4), e2019161119(2022).
  26. Li, J., et al. Development of a coagulation‑related gene model for prognostication, immune response and treatment prediction in lung adenocarcinoma. Oncol Lett. 29 (6), 290(2025).
  27. Ratajczak-Wielgomas, K., Kmiecik, A., Dziegiel, P. Role of periostin expression in non-small cell lung cancer: Periostin silencing inhibits the migration and invasion of lung cancer cells via regulation of mmp-2 expression. Int J Mol Sci. 23 (3), 1240(2022).
  28. Sakamoto, S., et al. Claudin-11 enhances invasive and metastatic abilities of small-cell lung cancer through mt1-mmp activation. Cancer Sci. 116 (6), 1773-1784 (2025).
  29. Spix, B., et al. Endolysosomal cation channels and lung disease. Cells. 11 (2), 304(2022).
  30. Ding, P., Peng, B., Li, G., Sun, X., Wang, G. Glucosamine-phosphate n-acetyltransferase 1 and its DNA methylation can be biomarkers for the diagnosis and prognosis of lung cancer. J Clin Lab Anal. 36 (9), e24628(2022).
  31. Hsu, J. L., Leu, W. J., Hsu, L. C., Hsieh, C. H., Guh, J. H. Doxazosin inhibits vasculogenic mimicry in human non‑small cell lung cancer through inhibition of the vegf‑a/ve‑cadherin/mtor/mmp pathway. Oncol Lett. 27 (4), 170(2024).
  32. Hwang, K. E., et al. Salinomycin suppresses tgf-β1-induced emt by down-regulating mmp-2 and mmp-9 via the ampk/sirt1 pathway in non-small cell lung cancer. Int J Med Sci. 18 (3), 715-726 (2021).
  33. Kim, S. Y., et al. Inhibition of a549 lung cancer cell migration and invasion by ent-caprolactin c via the suppression of transforming growth factor-β-induced epithelial-mesenchymal transition. Mar Drugs. 19 (8), 465(2021).
  34. Li, C., et al. Foxp3 facilitates the invasion and metastasis of non-small cell lung cancer cells through regulating vegf, emt and the notch1/hes1 pathway. Exp Ther Med. 22 (3), 958(2021).
  35. Lu, T., Zheng, C., Fan, Z. Cardamonin suppressed the migration, invasion, epithelial mesenchymal transition (emt) and lung metastasis of colorectal cancer cells by down-regulating adrb2 expression. Pharm Biol. 60 (1), 1011-1021 (2022).
  36. Xu, F., et al. Inhibition of non-small cell lung cancer by ferroptosis and apoptosis induction through p53 and gsk-3β/nrf2 signal pathways using qingrehuoxue formula. J Cancer. 14 (3), 336-349 (2023).
  37. Xu, S., et al. Diallyl disulfide attenuates ionizing radiation-induced migration and invasion by suppressing nrf2 signaling in non-small-cell lung cancer. Dose Response. 19 (3), 15593258211033114(2021).
  38. Zheng, Y., et al. Shashen-maidong decoction inhibited cancer growth under intermittent hypoxia conditions by suppressing oxidative stress and inflammation. J Ethnopharmacol. 299, 115654(2022).
  39. Malmros, K., et al. Diagnostic gastrointestinal markers in primary lung cancer and pulmonary metastases. Virchows Arch. 485 (2), 347-357 (2024).
  40. Zhou, H., et al. Metformin inhibits migration and epithelial-to-mesenchymal transition in non-small cell lung cancer cells through ampk-mediated gdf15 induction. Eur J Pharmacol. 985, 177127(2024).
  41. Mangang, K. N., Rao, G. S. N. K. Lung cancer biomarkers. Clin Chim Acta. 580, 120707(2026).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

ELISA
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.