הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

מנגנון ואימות ניסויי של פלבונואידים כוללים של Rhizoma Drynariae בטיפול בדלקת מפרקים גרגרונית

111 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/70849

⸱

5 ביוני 2026

 ,  , 
1School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, 2Quality department, Beijing Tongrentang Kangyang Industry Development Co., Ltd, 3Engineering Research Center of Good Agricultural Practice for Chinese Crude Drugs, Ministry of Education

במאמר זה

סיכום

פלבונואידים כוללים של Rhizoma Drynariae (TFRD) מקלים על דלקת מפרקים גאוטית (GA) על ידי דיכוי חדירת תאי דלקת והפחתת רמות TNF-α, IL-6 ו-IL-17A, בעיקר באמצעות עיכוב מסלולי איתות AKT, MAPK ו-NF-κB, המדגישים את הפוטנציאל הטיפולי האנטי-דלקתי והאימונומומודולטורי שלו.

תקציר

דלקת מפרקים גאוטית (GA) היא מחלת מפרקים דלקתית הנגרמת מהצטברות גבישי מונוסודיום אוראט (MSU) במרחב המפרק וברקמות הסובבות. ברפואה הסינית המסורתית, Rhizoma Drynariae (Gusuibu) נמצאת בשימוש נרחב בטיפול קליני ב-GA, והפלבונואידים נחשבים למרכיבים הביואקטיביים המרכזיים שלה. מחקר זה השתמש בפרמקולוגיה רשתית לבניית רשת רכיב-יעד של פלבונואידים כוללים של Rhizoma Drynariae (TFRD) נגד GA, ובכך זיהה רכיבים מרכזיים, מטרות ליבה ונתיבים קשורים. מודלים של עכברים הוקמו על ידי הזרקה תוך-מפרקית של תליית גביש מונוסודיום אוראט וטופלו ב-TFRD או בביקורת חיובית, קולכיצין, באמצעות גאבאז' אוראלי. לאחר איסוף הדגימות, תוצאות חיזוי מבוססות פרמקולוגיה ברשת אומתו לאחר מכן באמצעות מטבולומיקה של סרום עכברים, מבחן אימונוסורבנט קשור לאנזים (ELISA) וניתוח ווסטרן בלוט. ניתוח פרמקולוגיה ברשת הראה כי השפעות האנטי-GA של TFRD מתווכות דרך מטרות מרכזיות, כולל IL6, AKT1, TNF, EGFR, JUN ו-PTGS2, והן קשורות בעיקר למסלולים הקשורים לדלקת, מערכת חיסון ואפופטוזיס, כגון מסלולי איתות של IL-17, TNF, NF-κB, MAPK, PI3K-AKT, JAK-STAT ומסלולי איתות קולטני T. באופן דומה, מטבולומיקה חשפה גם את התפקידים המרכזיים של התגובה הדלקתית. צביעת המטוקסילין ואאוזין (H&E) אישרה ש-TFRD הפחיתה חדירה לתאים דלקתיים. בדיקת ELISA אישרה כי קבוצת TFRD עיכבה באופן משמעותי את ביטוי הגורמים הדלקתיים TNF-α, IL-6 ו-IL-17A ברקמה סינוביאלית. ניתוח ווסטרן בלוט גילה כי TFRD עיכב את ההיפרפוספורילציה המושרה על ידי GA של AKT, MAPK p38 ו-NF-κB p65 ברקמת הסינוביאלית של חולדות. TFRD יכול להקל ביעילות על השינויים המופעלים על ידי דלקת בעכברי GA על ידי ויסות ישיר של גורמים דלקתיים ונתיבים קשורים.

מבוא

דלקת מפרקים גאוטית (GA) היא מחלת מפרקים דלקתית הנגרמת על ידי הצטברות גבישי מונוסודיום אוראט (MSU) בתוך ובסביבת המפרקים, המעוררים את אזור המפרק 1,2. הפתוגנזה של GA כוללת אינטראקציה מורכבת של נטייה גנטית, השפעות סביבתיות ודיסרגולציה מטבולית, המאופיינת בעיקר בהיפראוריצמיה הנגרמת מייצור יתר של חומצת שתן או הפרשה כלייתית לא מספקת 3,4. דבר זה מוביל להצטברות מערכתית של גבישי אוראט ברקמות הכליות ובמרחבי המפרקים, שם הם מפעילים את מערכת החיסון המולדת ומעוררים מפלים דלקתיים עזים 5,6. בשנים האחרונות, סדרת מחקרים הראו כי השכיחות העולמית של GA עלתה במקביל לעלייה בשכיחות ההשמנה ותסמונת המטבולית, מה שהוביל לפגיעה תפקודית ולהטיל נטל סוציו-אקונומי משמעותיעל המטופלים. אסטרטגיית הטיפול בדלקת מפרקים גרוטית מתמקדת בשליטה בדלקת מפרקים מקומית חריפה ובניהול רמות חומצת שתן לטווח ארוך 8,9. עם זאת, התועלת של תרופות קיימות מוגבלת לעיתים קרובות על ידי פרופילי תופעות הלוואי והתוויות הנגדיות הספציפיות שלהן. לדוגמה, תרופות נוגדות דלקת שאינן סטרואידיות נמנעות בדרך כלל אצל מטופלים עם מחלת כליות כרונית, בשל הסיכון הנלווה להחמרת פגיעה חריפה בכליה10,11. באופן דומה, חומר מוריד האוראט אלופורינול נושא סיכון מתועד היטב לתגובות לוואי עוריות חמורות כגון תסמונת סטיבנס–ג'ונסון, בעוד שבנזברומארון עשוי לגרום לרעילות כבדמשמעותית 11,12,13,14,15. לכן, עדיין קיים צורך דחוף בפיתוח טיפולים בטוחים, רחבים יותר וממוקדים מכנית לניהול יעיל של GA.

ברפואה הסינית המסורתית (TCM), GA משתייכת לקטגוריות אבחנתיות כמו "מחלת ליג'י" (כאב במפרקים), "גאוט בי" (מגור גאוט), ו"יו ג'ואו בי" (עיכוב סטזיס-עכירה). התערבויות ל-TCM ל-GA מציעות את ההשפעות הסינרגטיות באמצעות פעולות נוגדות דלקת ומשככי כאבים, ויסות חילוף החומרים של חומצת השתן, שיפור מיקרו-זרימה ושימור תפקוד המפרקים, מה שהופך אותו לתחום מחקר מרכזי עכשווי 16,17,18,19. Rhizoma Drynariae (Gusuibu) שמקורה בקנה המין היבש של Drynaria fortunei (Kunze) J.Sm., שרך רב-שנתי ממשפחת Polypodiaceae, משמשת לעיתים קרובות בפרקטיקה קלינית לטיפול ב-GA. התרכובות הביואקטיביות של Rhizoma Drynariae מכילות בעיקר פלבונואידים, פנילפרופנואידים, טריטרפנואידים, חומצות פנוליות וגליקוזידים שלהם20,21. מתוכם, פלבונואידים מייצגים את קבוצת התרכובות הנחקרת ביותר בשנים האחרונות 22,23,24. מחקרים קודמים הראו שלפלבונואידיםיש תכונות אנטי-דלקתיות וחדות חמצון בולטות.

מחקרים ראשוניים מצאו כי פלבנואידים כוללים של Rhizoma Drynariae (TFRD) יכולים לדכא ביעילות תגובות דלקתיות בדלקת אוסטאוארתריטיס, דלקת מפרקים שגרונית, ומצבים דלקתיים נוספים במפרקים 26,27,28. עם זאת, המנגנונים הבסיסיים של TFRD נגד GA טרם נחקרו לעומק. לכן, מחקר זה שואף ליישם גישה משולבת המשלבת פרמקולוגיה רשתית, מטבולומיקה וניסויים בביולוגיה מולקולרית כדי לחקור ולאמת את המנגנונים הספציפיים והיעילות הטיפולית של TFRD בטיפול ב-GA. חקירה שיטתית של מנגנונים רב-רכיבים, רב-מטרותיים ורב-מסלולים העומדים בבסיס טיפול ב-TFRD נגד GA צפויה לקדם את גילוי התרופות ולספק אפשרויות חדשניות ופתרונות מעשיים לניהול קליני של GA.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נבדק ואושר על ידי ועדת האתיקה לבעלי חיים של בית החולים הידידות סין-יפן (מס' אישור: zryhyy21-22-08-10) ונערך בהתאם להנחיות מוסדיות לטיפול ושימוש אתי בבעלי חיים במעבדה.

חיזוי וסינון של מטרות הקשורות ל-TFRD ו-GA
המרכיבים הכימיים של Rhizoma Drynariae נאספו ממאגר הנתונים והניתוח של מערכות הרפואה הסינית המסורתית (TCMSP) תוך שימוש במונח החיפוש "Rhizoma Drynariae" כמונח חיפוש29. הסקר לרכיבים ביואקטיביים פוטנציאליים בוצע בהתבסס על קריטריונים של זמינות ביולוגית דרך הפה (OB) ≥ 30% ודמיון תרופתי (DL) ≥ 0.18, 30,31,32. מתוך מאגר התרכובות שנוצר, זוהו ונבחרו רכיבי פלבונואידים בהתאם למבנם הכימי. רכיבי פלבונואידים אלו, שייקראו להלן הפלבנואידים הכוללים של Rhizoma Drynariae (TFRD), שולבו בניתוח במורד הזרם. לאחר שליפת הגנים המטרה הקשורים ל-TFRD ממאגר הנתונים של TCMSP, סמלי הגנים הסטנדרטיים המתאימים שלהם סומנו באמצעות מאגר UniProt33. באמצעות מונח חיפוש "גאוט", נאספו מטרות הקשורות למחלות ממאגר GeneCards כדי לקבוע סט גנים מועמדים34.

הקמת רשת מטרה מורכבת
הצטלבות בין מטרות הקשורות ל-TFRD ל-GA זוהתה והוגדרה כמטרות הטיפוליות המרכזיות המתווכות את השפעות האנטי-GA של TFRD, והסט החופף הוצג באמצעות דיאגרמת ון. בנוסף, נבנתה ונותחה רשת רגולטורית של "TFRD - יעדים - GA" באמצעות תוכנת Cytoscape35.

רשת אינטראקציה בין חלבון לחלבון
היעדים הטיפוליים המרכזיים של TFRD נגד GA יובאו למאגר נתונים מקוון ליצירת רשת אינטראקציה בין חלבון לחלבון (PPI), כאשר ציון האינטראקציה המינימלי הנדרש מוגדר ל"ביטחון גבוה (0.700)"36. רשת ה-PPI אופטימיזציה באמצעות תוכנת Cytoscape, ו-30 היעדים המרכזיים המובילים בדירוג מרכזיות נבחרו ליצירת גרף בר37,38.

ניתוח העשרת מסלולי KEGG
ניתוח העשרת מסלולי KEGG בוצע על מטרות הליבה הללו באמצעות תוכנת R ומסד הנתונים Bioconductor38,39. מסלולים עם ערך p < 0.05 נחשבו מובהקים סטטיסטית. לאחר שהוצא מסלולים הקשורים למחלה ולמטבוליזם, הוצגה ב-Cytoscape רשת אינטראקציה בין מסלול למטרה (Cytoscape). מבין המסלולים הללו, 20 המסלולים המובילים המדורגים לפי ערך P עולה הוצגו בגרף בר.

הכנת תרופות
להכנת תליית גביש מונוסודיום אוראט (MSU), נשקלו 500 מ"ג גבישי MSU באמצעות איזון אנליטי, פוזרו ב-10 מ"ל תמלח רגיל ו-2 מ"ל Tween 80, וחוממו תוך ערבוב מגנטי. התערובת הותאמה לנפח סופי של 20 מ"ל עם מלח רגיל לקבלת מתלה של 25 מ"ג/מ"ל. לאחר האוטוקלב, המתלה נשמר בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש. המינון הקליני הנפוץ ל-TFRD הוא 750 מ"ג ליום למבוגר במשקל 70 ק"ג, המקביל למינון של 67.5 מ"ג למשקל גוף ביום. TFRD הומס במים מזוקקים בריכוז של 6.75 מ"ג/מ"ל ואוחסן בטמפרטורה של 4°C לשימוש מאוחר יותר. לפי שיטת נרמול שטח הגוף, המינון המקביל של קולכיצין (התרופה החיובית) בחולדות שהומרו מהמינון הקליני האנושי (0.6 מ"ג/60 ק"ג) הוא 0.062 מ"ג/ק"ג. תמיסת קולכיצין הוכנה במים מזוקקים בריכוז של 0.0062 מ"ג/מ"ל ואוחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לשימוש מאוחר יותר.

בעלי חיים
בסך הכול שימשו במחקר זה 36 זכרים בני שישה שבועות מסוג Sprague–Dawley (SD) (220 ± 10 גרם) (רישיון בעלי חיים מס' SCXK [ג'ינג] 2025-0008). בעלי החיים אוחסנו במרכז בעלי החיים המעבדה של בית החולים הידידות סין-יפן בתנאי תזונה סטנדרטיים בטמפרטורה של 22–24 מעלות צלזיוס ולחות של 50–70%.

הקמת המודל והתערבות
לאחר שבוע של הסתגלות, חולקו העכברים באקראי לארבע קבוצות (n = 9 כל אחת): ביקורת, מודל, TFRD ותרופה חיובית. האקראיות בוצעה באמצעות טבלת מספרים אקראית. איסוף וניתוח הנתונים בוצעו בתנאים עיוורים. כל הטיפולים ניתנו פעם ביום באמצעות גאווג' אוראלי. כל ההתערבויות בוצעו פעם אחת ביום באמצעות מרווח אוראלי בשעה 08:00 במשך שבעה ימים רצופים. קבוצות הביקורת והמודלים קיבלו תמיסת מלח תקינה (10 מ"ל/ק"ג), בעוד שקבוצות התרופות ה-TFRD והחיוביות קיבלו תסמיני תרופה בנפח שווה ערך (10 מ"ל/ק"ג). ביום הרביעי של ההתערבויות, קבוצת הביקורת הריקה קיבלה הזרקה תוך-מפרקית של מי מלח סטריליים נורמליים, בעוד שחולדות במודל, TFRD, וקבוצות התרופות החיוביות קיבלו הזרקה של גביש MSU כדי לגרום לדלקת מפרקים חריפה עם שיגדון. לפני ההזרקה, חולדות הורדמו באמצעות מערכת הרדמה איזופלורנית. כל עכברוש במודל, TFRD, וקבוצות התרופות החיוביות קיבלו 200 מיקרולטר של תליון MSU לחלל מפרק הקרסול השמאלי. לאחר משיכת המחט, הופעל לחץ עדין באתר ההזרקה עם מטלית כותנה סטרילית למשך מספר שניות כדי למנוע דליפה.

איסוף ועיבוד דגימות
72 שעות לאחר השראת המודל, החולדות הורדמו והונחו על הגב. לאחר חיטוי הבטן, נפתח חלל הפריטונאלי, והמעיים נמשכו בעדינות כדי לחשוף את האאורטה הבטנית. מחט איסוף דם הוכנסה במקביל לכלי הדם כדי לשאוב דם באאורטה בטנית, שהועבר מיד לצינורות הפאריניים שהוקררו מראש באמבט מים קרים. הדגימות צנטריפוגה ב-3000 × גרם למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לקבלת סרום, שנלקח ואוחסן בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס לפרופיל מטבולומי נוסף. בעלי חיים הושמתו לאחר מכן באמצעות חנק CO₂. הפרווה סביב מפרק הקרסול השמאלי גולחה, והעור והשרירים הסובבים הוסרו בזהירות כדי לחשוף את מבנה המפרק השלם. רקמת סינוביאלית, שהופיעה כממברנה לבנה דקה המרפדת את קפסולת המפרק, בודדה בעדינות מהפאשיה הסמוכה באמצעות מלקחיים דקים. דגימות המפרקים שנאספו נקבעו ב-4% פרפורמלדהיד בטמפרטורה של 4°C למשך 72 שעות. לאחר מכן, חלק מרקמת המפרק עבר דה-קלציפיקציה בתמיסת דקאלציפיקציה EDTA, כאשר התמיסה רעננה שבועית למשך 8 שבועות. דקלציפיקציה מלאה אושרה באמצעות בדיקת דקירה במחט: אם נתקלה התנגדות, הדקלציפיקציה נמשכה עד שהרקמה הייתה חדירה לחלוטין.

לאחר דה-קלציפיקציה, מפרקי הקרסול חולקו סגיטית, הונחו בקלטות עיבוד ונחשפו לייבוש אתנול בגרדיאנט. הרקמות נוקו בקסילן, חודרו בפרפין, והוטמעו בבלוקים של פרפין. חתכים בעובי 6 מיקרון נחתכו באמצעות מיקרוטום אוטומטי, צפו על אמבט מים בטמפרטורה של 40 מעלות צלזיוס, והותקנו על מחסניות דבק. לאחר ייבוש בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, החלקים עברו דה-פרפין, צובעו בהמטוקסילין ואאוזין (H&E) לפי הפרוטוקולים הסטנדרטיים, ולבסוף כוסו בבלסם ניטרלי. תמונות שקופיות שלמות צולמו באמצעות סורק שקופיות דיגיטלי.

ניתוח מטבולומיקה של הסרום
דגימות סרום מהמודל ומקבוצות ה-TFRD הופשרו בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס לפני העיבוד. לכל דגימה, 100 מיקרוליטר סרום הועברו לצינור מיקרוצנטריפוגה ושולבו עם 400 מיקרוליטר של ממס חילוץ מקורר מראש (מתנול: אצטוניטריל, 1:1, v/v) המכיל תקנים פנימיים. התערובת עברה מערבולת למשך דקה אחת, ואחריה סוניקציה באמבט מים קרים למשך 10 דקות. לאחר מכן הוא דוגר בטמפרטורה של מינוס 40°C למשך שעה אחת כדי להקל על שקיעת חלבון, ולאחר מכן צנטריפוגה ב-12,000 × גרם למשך 15 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס. הסופרנטנט שהושג לאחר הצנטריפוגה נאסף בקפידה והועבר לבקבוקי אוטודמפלר לניתוח UHPLC–MS. בנוסף, נפחים שווים של סופרנטנט מכל דגימה באותה קבוצה אוחדו ליצירת דגימות בקרת איכות (QC).

לאחר זיהוי מטבוליטים בדגימות סרום משתי הקבוצות, נתוני ספקטרומטריית המסה הגולמיים עובדו על ידי תוכנה ייעודית לזיהוי, חילוץ, יישור ואינטגרציה אוטומטית של פסגות, מה שיצר מטריצת נתונים מובנית של תכונות ספקטרליות של יונים. המאפיינים הספקטרליים שזוהו הותאמו לספריות ספקטרליות מבוססות של מטבולומיקה, כדי לזהות מטבוליטים שמקורם ב-TFRD שנכנסו למחזור מערכתי. תכונות לא מזוהות ואלו המכילים ערכים חסרים יותר הוסרו ממאגר הנתונים. מערך הנתונים שנבחר עבר מחדש אינדוקס ומובנה לפורמטסטנדרטי 40.

הביטוי הדיפרנציאלי של מטבוליטים בין שתי הקבוצות הוערך על ידי חישוב הן שינוי הקיפול (FC, המובע כיחס בין קבוצות) והן מובהקות סטטיסטית (ערך p). מטבוליטים העומדים בסף של |log₂FC| ≥ 1 ו-P < 0.05 הוגדרו כמטבוליטים מבוטאים באופן שונה (DEMs). תוצאות הסינון סוכמו ויזואלית באמצעות שיטות כמו גרפים של הרי געש. המטבוליטים הדיפרנציאליים שנבדקו יובאו לאחר מכן למסד הנתונים של PubChem כדי לקבל את מזהי הקנוניים (CIDs)41. ה-KEGG ID המתאים התקבל לאחר מכן על בסיס ה-CIDs. לבסוף, מזהי KEGG יובאו לפלטפורמת ניתוח מטבולומיקה לביצוע ניתוח העשרת מסלולים מטבוליים ולזהות את מסלולי האיתות הקשורים באופן משמעותי ל-DEMs.

אליסה
דגימות רקמה סינוביאלית הוקפאו במהירות בחנקן נוזלי וטחנו לאבקה דקה. כ-100 מ"ג האבקה נשקלה באמצעות מאזן אלקטרוני מדויק, מעורבב עם 1 מ"ל של PBS קר כקרח, והומוגן על קרח באמצעות הומוגניזר זכוכית. ההומוגנט עבר צנטריפוגה ב-10,000 × גרם למשך 5 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, והסופרנטנט נאסף לזיהוי ELISA מאוחר יותר. לפני הניתוח, ערכת ELISA הורשתה להתאזן לטמפרטורת החדר למשך 30 דקות. כל התגובות, כולל תקנים מדוללים סדרתית, בופר שטיפה, תמיסת נוגדנים מסומנת בביוטין ותמיסת אנזימים צמודה, הוכנו בהתאם להוראות היצרן. לאחר מכן נוספו 100 מיקרוליטר של תקנים בריכוזים ודגימות שונות לבארות המיועדות של המיקרופלטה המצופה מראש. הצלחת נאטמה ודגרה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 90 דקות. לאחר הדגירה, התכולה הושלכה, והבארות נשטפו ארבע פעמים. לאחר מכן, נוספו 100 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים ביוטינילאטית לכל באר, ולאחר מכן דגירה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 60 דקות ושלב שטיפה נוסף. לאחר מכן הוכנס 100 מיקרוליטר של תמיסת אנזים קונוגטיבית, והצלחת דוגרה בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות, ולאחר מכן שטיפה נוספת. לאחר מכן נוסף מצע כרומוגני, והצלחת דגרה בחושך בטמפרטורה של 37°C למשך 10 דקות. התגובה הסתיימה בהוספת 100 מיקרוליטר של תמיסת עצירה, והספיגה נמדדה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט. נבנתה עקומת תקן על ידי התאמת ערכי הצפיפות האופטית (OD) של התקנים לריכוזים המתאימים, וריכוזי הדגימה חושבו בהתאם.

כתם מערבי
רקמות סינוביאליות הוקפאו במהירות וטחנו מכנית לאבקה דקה. חלק מדודד מהאבקה נקטע בנפח מתאים של בופר RIPA קר בתוספת מעכבי פרוטאז ופוספטאז (1:100, v/v), ואחריו דגירה על קרח למשך 30 דקות. הליזטים צונטרו לאחר מכן ב-10,000 × גרם למשך 5 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, והסופרנטנטים נאספו בקפידה. ריכוזי החלבון נמדדו באמצעות בדיקת BCA, וכל הדגימות הותאמו לריכוזים שווים באמצעות בופר RIPA. החלבונים הופרדו באמצעות SDS-PAGE והועברו לממברנות PVDF. הממברנות נחסמו ואז דגרו בנוגדנים ראשוניים (דילול 1:1000), ואחר כך נוגדנים משניים (דילול 1:5000). אותות החלבון הוצגו באמצעות מערכת זיהוי ECL, ועוצמות הרצועות נמדדו באמצעות תוכנת Image Lab (גרסה 5.2.1). רמות הביטוי היחסיות נורמל מול β-אקטין.

ניתוח סטטיסטי
ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות תוכנת SPSS (גרסה 20.0). הנתונים מוצגים כסטיית תקן ממוצעת ± (SD). להשוואות בין קבוצות מרובות, נעשה שימוש בניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA) כאשר ההנחה של הומוגניות שונות התקיימה, ואחריו בוצעה בדיקת LSD להשוואות זוגיות לאחר הוק. אם הומוגניות השונות לא התקיימה, בוצע ANOVA של וולש, ואחריו מבחן T3 של דאנט להשוואות מרובות. ערך p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

רכיבים מרכזיים של TFRD
רכיבים ביואקטיביים פוטנציאליים של Rhizoma Drynariae נאספו ממאגר TCMSP, והניבו 71 מועמדים. 71 המרכיבים הפעילים הללו עברו לאחר מכן תהליך סקר המבוסס על זמינות ביולוגית דרך הפה (OB ≥ 30%) ודומה לתרופה (DL ≥ 0.18), שהוביל לזיהוי 18 תרכובות. שיפור נוסף ברשימה זו חשף כי 10 מהתרכובות הפעילות הללו הן פלבונואידים, כולל: (2R)-5,7-דיהידרוקסיבי-2-(4-הידרוקסיפניל)כרומן-4-1, אוראוסידין, אריודיקטיול (פלוואנון), קמפפרול, נרינגנין, (+)-קטצ'ין, אריודיקטיו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

GA היא צורה נפוצה של דלקת מפרקים דלקתית. נכון להיום, הניהול הקליני מתבסס בעיקר על תרופות נוגדות דלקת שאינן סטרואידיות (NSAIDs), קורטיקוסטרואידיםוסוכנים להורדת שתן. עם זאת, מתן משולב של תרופות אלו גורם למגוון תופעות לוואי למטופלים ומטיל עומס מטבולי משמעותי על הכבד והכליות. זה מזיק במיוחד למטופלים עם פגיעה בכבד או בכליות קיימת מראש. פלבונואידים, קבוצה של תרכובות פוליפנוליות הנפוצות בצמחים, זכו לתשומת לב רבה בשל פעילותם נוגדי חמצון, נוגדות דלק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מדווחים כי אין ניגודי עניינים בעבודה זו.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
4% פאראפורמלדהידסולרביולוגיהP1110
בופר טעינת חלבון פי 5סולרביולוגיהP1040
נוגדן AKTטכנולוגיית איתות סלולרי4691S
תמיסת מדלל נוגדניםביוטכנולוגיה ביוטייםP0268
מאגר ביו-מוליכים  https://www.bioconductor.org/
קולכיציןשנגחאי יואניה בע"מ
מאגר GeneCards  https://www.genecards.org/
המטוקסילין ואאוסין (H&) ה) ערכת צביעהסולרביולוגיהG1120
פלטפורמת MetaboAnalyst 6.0 המקוונת  https://www.metaboanalyst.ca/
ערכת ELISA עכבר IL-17A4a Biotech Co LtdCME0041
ערכת ELISA Mouse IL-64a Biotech Co LtdCME0006
עכבר TNF-α ערכת אליסה4a Biotech Co LtdCME0004
NF-& kappa; נוגדן B p65טכנולוגיית איתות סלולרי8242T
חלב יבש דל שומןסולרביולוגיהD8340
נוגדן MAPK p38אבקלונלA14401
קוקטייל מעכב פוספטאזביוטכנולוגיה ביוטייםP1081
נוגדן Phospho-AKT (Ser473)טכנולוגיית איתות סלולרי4060S
פוספו-NF-& קאפה; נוגדן B p65טכנולוגיית איתות סלולרי3031S
נוגדן MAPK של פוספו-p38אבקלונלAP0526
פנילמתילסולפוניל פלואוריד (PMSF)סולרביולוגיהR0010
ממברנת פוליווינילידין פלואוריד (PVDF)מיליפורIPVH00010
PubChem databashttps://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/
R software www.r project.org/
RIPA Lysis BufferסולרביולוגיהR0010
מים ללא RNaseאמביוןAM9937
חולדות SDמעבדת נהר הוויטל של בייג'ינג טכנולוגיית בעלי חיים בע"מ;
בופר אלקטרופורזה SDS-PAGEסרוויסביוG2144
מאגר מחרוזותhttps://string-db.org/
בופר TBST (10X)סולרביולוגיהT1085
TCMSPhttps://old.tcmsp-e.com
בופר העברת טריס-גליציןסרוויסביוG2017
TFRDבייג'ינג צ'יואנג פארמה בע"מ
UniProt database  https://www.uniprot.org/
β-נוגדן אקטיןביוטכנולוגיה ג'ונגשאן ג'ינגצ'יאוTA-09

מקורות

  1. Keller, S. F., Mandell, B. F. Management and cure of gouty arthritis. Rheum Dis Clin North Am. 48 (2), 479-492 (2022).
  2. Ma, C., et al. Metabolic reprogramming of macrophages by biomimetic melatonin-loaded liposomes effectively attenuates acute gouty arthritis in a mouse model. Adv Sci (Weinh). , e2410107 (2024).
  3. Li, C., et al. Targeting neutrophil extracellular traps in gouty arthritis: insights into pathogenesis and therapeutic potential. J Inflamm Res. 17, 1735-1763 (2024).
  4. Zhang, Y., Chen, S., Yuan, M., Xu, Y., Xu, H. Gout and diet: a comprehensive review of mechanisms and management. Nutrients. 14 (17), 3525 (2022).
  5. Wang, R., et al. Sulforaphane-driven reprogramming of gut microbiome and metabolome ameliorates the progression of hyperuricemia. J Adv Res. 52, 19-28 (2023).
  6. Zhang, S., et al. Mechanism of reactive oxygen species-guided immune responses in gouty arthritis and potential therapeutic targets. Biomolecules. 14 (8), 978 (2024).
  7. GBD 2021 Gout Collaborators. Global, regional, and national burden of gout, 1990-2020, and projections to 2050: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2021. Lancet Rheumatol. 6 (8), e507-e517 (2024).
  8. Towiwat, P., Li, Z. Long-term remission in gout: challenges and future opportunities. Rheumatol Autoimmun. 6, 7-15 (2026).
  9. Chen, S., Li, Z., Deng, X., Gao, L. Advances in understanding the mechanisms of treatment for gouty arthritis: a comprehensive review. Physiol Res. 74 (5), 693-710 (2025).
  10. LaForge, J. M., et al. Non-steroidal anti-inflammatory drugs: clinical implications, renal impairment risks, and AKI. Adv Ther. 40 (5), 2082-2096 (2023).
  11. Klomjit, N., Ungprasert, P. Acute kidney injury associated with non-steroidal anti-inflammatory drugs. Eur J Intern Med. 101, 21-28 (2022).
  12. Anis, T. R., Meher, J. Allopurinol-induced Stevens-Johnson syndrome (SJS). Clin Pharmacol. 15, 99-105 (2023).
  13. Hasegawa, A., Abe, R. Stevens-Johnson syndrome and toxic epidermal necrolysis: updates in pathophysiology and management. Chin Med J (Engl). 137 (19), 2294-2307 (2024).
  14. Gupta, S. S., Sabharwal, N., Patti, R., Kupfer, Y. Allopurinol-induced Stevens-Johnson syndrome. Am J Med Sci. 357 (4), 348-351 (2019).
  15. Sun, W., et al. Risk of hepatotoxicity in patients with gout treated with febuxostat or benzbromarone: a propensity score-matched cohort study. Arthritis Care Res (Hoboken). 77 (9), 1149-1156 (2025).
  16. Guo, J. W., et al. Therapeutic potential and pharmacological mechanisms of traditional Chinese medicine in gout treatment. Acta Pharmacol Sin. 46 (5), 1156-1176 (2025).
  17. Jiang, Z., et al. The correlation between traditional Chinese medicine constitution and hyperuricemia and gout: a systematic review and meta-analysis. Evid Based Complement Alternat Med. 2023, 5097490 (2023).
  18. Wang, S., et al. Traditional herbal medicine: therapeutic potential in acute gouty arthritis. J Ethnopharmacol. 330, 118182 (2024).
  19. Wang, Y. B., Jin, C. Z. Roles of traditional Chinese medicine extracts in hyperuricemia and gout treatment: mechanisms and clinical applications. World J Gastroenterol. 30 (47), 5076-5080 (2024).
  20. Jingying, G., et al. A comprehensive review of Drynariae Rhizoma: botany, traditional applications, and active flavonoid components. J Pharm Pharmacol. 77 (10), 1319-1337 (2025).
  21. Chen, G. Y., et al. Prediction of Rhizoma Drynariae targets in the treatment of osteoarthritis based on network pharmacology and experimental verification. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 5233462 (2021).
  22. Zhang, Y., et al. Total flavonoids from Rhizoma Drynariae (Gusuibu) for treating osteoporotic fractures: implication in clinical practice. Drug Des Devel Ther. 11, 1881-1890 (2017).
  23. Yu, X. B., et al. Chondroprotective effects of Gubitong Recipe via inhibiting excessive mitophagy of chondrocytes. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 8922021 (2022).
  24. Zhang, F., et al. Total flavonoids of Drynariae Rhizoma improve glucocorticoid-induced osteoporosis of rats: UHPLC-MS-based qualitative analysis, network pharmacology strategy and pharmacodynamic validation. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 920931 (2022).
  25. Liu, F., et al. Mechanism of flavonoids in the treatment of gouty arthritis (review). Mol Med Rep. 30 (2), 132 (2024).
  26. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology analysis and experimental validation to investigate the mechanism of total flavonoids of Rhizoma Drynariae in treating rheumatoid arthritis. Drug Des Devel Ther. 16, 1743-1766 (2022).
  27. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae restore the MMP/TIMP balance in models of osteoarthritis by inhibiting the activation of the NF-λB and PI3K/AKT pathways. Evid Based Complement Alternat Med. 2021, 6634837 (2021).
  28. Chen, G. Y., et al. Total flavonoids of Rhizoma Drynariae treat osteoarthritis by inhibiting arachidonic acid metabolites through AMPK/NFλB pathway. J Inflamm Res. 16, 4123-4140 (2023).
  29. Ru, J., et al. TCMSP: a database of systems pharmacology for drug discovery from herbal medicines. J Cheminform. 6, 13 (2014).
  30. Chen, G. Y., et al. Mechanisms of total glucosides of paeony in alleviating methotrexate-induced liver injury. Drug Des Devel Ther. 19, 3407-3423 (2025).
  31. Zhang, P., et al. Network pharmacology: towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518 (2023).
  32. Luo, W., et al. Integration of molecular docking, molecular dynamics, and network pharmacology to explore the multi-target pharmacology of fenugreek against diabetes. J Cell Mol Med. 27 (14), 1959-1974 (2023).
  33. UniProt Consortium. UniProt: the universal protein knowledgebase in 2023. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D523-D531 (2023).
  34. Stelzer, G., et al. The GeneCards suite: from gene data mining to disease genome sequence analyses. Curr Protoc Bioinformatics. 54, 1.30.1-1.30.33 (2016).
  35. Chen, G. Y., et al. Integrating network pharmacology and experimental validation to explore the key mechanism of Gubitong Recipe in the treatment of osteoarthritis. Comput Math Methods Med. 2022, 7858925 (2022).
  36. Szklarczyk, D., et al. The STRING database in 2023: protein-protein association networks and functional enrichment analyses for any sequenced genome of interest. Nucleic Acids Res. 51 (D1), D638-D646 (2023).
  37. Chen, G. Y., et al. Network pharmacology-based strategy to investigate the mechanisms of Cibotium barometz in treating osteoarthritis. Evid Based Complement Alternat Med. 2022, 1826299 (2022).
  38. Robinson, M. D., McCarthy, D. J., Smyth, G. K. edgeR: a Bioconductor package for differential expression analysis of digital gene expression data. Bioinformatics. 26 (1), 139-140 (2010).
  39. Jin, Q., et al. Network and experimental pharmacology to decode the action of Wendan Decoction against generalized anxiety disorder. Drug Des Devel Ther. 16, 3297-3314 (2022).
  40. Pang, Z., et al. MetaboAnalyst 6.0: towards a unified platform for metabolomics data processing, analysis, and interpretation. Nucleic Acids Res. 52 (W1), W398-W406 (2024).
  41. Kim, S., et al. PubChem in 2021: new data content and improved web interfaces. Nucleic Acids Res. 49 (D1), D1388-D1395 (2021).
  42. Pillinger, M. H., Mandell, B. F. Therapeutic approaches in the treatment of gout. Semin Arthritis Rheum. 50 (3S), S24-S30 (2020).
  43. Yao, T. K., et al. Advances in gouty arthritis management: integration of established therapies, emerging treatments, and lifestyle interventions. Int J Mol Sci. 25 (19), 10853 (2024).
  44. Li, W., et al. Effects of total flavonoids of Rhizoma Drynariae on biochemical indicators of bone metabolism: a systematic review and meta-analysis. Front Pharmacol. 15, 1443235 (2024).
  45. Mohammed, H. S., et al. Investating the involvement of the NLRP3/ASC/caspase-1 and NF-λB/MAPK pathways in the pathogenesis of gouty arthritis: insights from irradiated and non-irradiated Trifolium alexandrium L. extracts and some metabolites. J Ethnopharmacol. 334, 118566 (2024).
  46. Shi, M. F., et al. Study on the effect and mechanism of Zexie Decoction in treating MSU-induced acute gouty arthritis model through PI3K-AKT-mTOR signaling pathway. Int Immunopharmacol. 150, 114214 (2025).
  47. Cui, L., et al. Selenium suppressed the LPS-induced inflammation of bovine endometrial epithelial cells through NF-λB and MAPK pathways under high cortisol background. J Cell Mol Med. 27 (10), 1373-1383 (2023).
  48. Balakin, E., et al. Regulation of stress-induced immunosuppression in the context of neuroendocrine, cytokine, and cellular processes. Biology (Basel). 14 (1), 76 (2025).
  49. Chen, L., et al. AMPK signaling in osteoarthritis: from mechanisms to targeted therapeutics. Front Pharmacol. 16, 1681610 (2025).
  50. FitzGerald, J. D., et al. 2020 American College of Rheumatology guideline for the management of gout. Arthritis Care Res (Hoboken). 72 (6), 744-760 (2020).
  51. Limbachia, V., et al. The effect of different types of oral or intravenous corticosteroids on capillary blood glucose levels in hospitalized inpatients with and without diabetes. Clin Ther. 46 (2), e59-e63 (2024).
  52. Xue, Y., et al. Association of serum glucocorticoids with various blood pressure indices in patients with dysglycemia and hypertension: the Henan Rural Cohort Study. Biomed Environ Sci. 34 (12), 952-962 (2021).
  53. Uson, J., et al. EULAR recommendations for intra-articular therapies. Ann Rheum Dis. 80 (10), 1299-1305 (2021).
  54. Lucenti, L., et al. Do preoperative corticosteroid injections increase the risk of infection after shoulder arthroscopy or shoulder arthroplasty? A systematic review. Healthcare (Basel). 12 (5), 543 (2024).
  55. Feng, W., Cui, D., Yang, T. Interpretation of key points of Chinese guidelines for diagnosis and management of hyperuricemia and gout (2019). J Clin Intern Med. 37 (07), 528-531 (2020).
  56. Lin, Y., et al. Luteolin-4'-O-glucoside and its aglycone, two major flavones of Gnaphalium affine D. Don, resist hyperuricemia and acute gouty arthritis activity in animal models. Phytomedicine. 41, 54-61 (2018).
  57. Wang, Y., et al. A luteolin-loaded electrospun fibrous implantable device for potential therapy of gout attacks. Macromol Biosci. 16 (11), 1598-1609 (2016).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

צור קשר
המלצה לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

2026 © זכויות יוצרים MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.