מודל עכברי לחתך סלקטיבי של עצבים אוטונומיים במעי

סיכום

פרוטוקול זה נועד לאפשר חיתוך מדויק וסלקטיבי של עצבים סימפתטיים ופאראסימפתטיים המעצבבים במעי בעכברים, תוך שימוש בעורק המזנטרי העליון כנקודת ציון אנטומית עקבית, ולספק מודל ממוקד וניתן לשחזור לחקר ויסות אוטונומי של פיזיולוגיה ומחלות במעי.

תקציר

העצבים האוטונומיים כוללים את המערכות הסימפתטיות והפאראסימפתטיות, הפועלות באופן אנטגוניסטי ברובו כדי לווסת פונקציות פיזיולוגיות מגוונות. עם העניין הגובר בתפקידי העצבוב האוטונומי בפיזיולוגיה ופתולוגיה של המעי, יש צורך גובר במודלים ניסיוניים המאפשרים מניפולציה מדויקת של קלטים סימפתטיים ופאראסימפתטיים מונחי מעיים. כאן אנו מציגים פרוטוקול ניתוחי לניתוח סלקטיבי של העצבים הסימפתטיים והפאראסימפתטיים המעצבבים את המעי. באמצעות העורק המזנטרי העליון (SMA) כסימן אנטומי שחוזר, גישה זו מאפשרת זיהוי אמין של חבילות עצבים אוטונומיים במעי וחתירה ממוקדת לאחר מכן. בניגוד לשיטות רחבות יותר כמו גנגליונקטומיה או וגוטומיה תת-דיאפרגמטית, גישה זו נועדה להשיג חיתוך אנטומי ממוקד יותר של חבילות אוטונומיות מכוונות למעי, מה שעשוי לסייע בהפחתת הפרעות חוץ-מעיים. הפציעה ניתנת לשליטה ובדרך כלל קשורה לדימום מינימלי, תמיכה בעקביות פרוצדורלית ובהחלמה לאחר הניתוח. למרות שהניתוח דורש הכשרה מיקרוכירורגית מתאימה, הפרוטוקול גמיש ומאפשר למשתמשים להתאים פרמטרים מרכזיים למטרות ניסוי ספציפיות. חשוב לציין שמודל זה מספק פלטפורמה מעשית לחקר תפקידי העצבים הסימפתטיים והפאראסימפתטיים בוויסות תפקוד המעי בתנאים פיזיולוגיים ומחלתיים כאחד. מאמר זה שואף לתאר את התהליך בפירוט כדי להקל על אימוצו על ידי משתמשים חדשים במחקרם.

מבוא

מערכת העיכול נמצאת תחת שליטה רציפה של מערכת העצבים האוטונומית (ANS), כאשר מסלולים סימפתטיים ופראסימפתטיים מתאמים היבטים יסודיים של פיזיולוגיית המעי, כולל תנועתיות, הפרשה, תפקוד מחסום אפיתל והומאוסטזיס החיסוני ^1,2. במעי הגס, קלטים סימפתטיים חיצוניים יכולים לגרום להשפעות תלויות אזור על פני מספר מחלקות תאיות, מה שמדגיש כי הפרעות רחבות של ANS עלולות להסתיר פנוטיפים מעיים ספציפיים לאתר¹. לעומת זאת, מעגלים פאראסימפתטיים, המתווכים קלאסית על ידי איתות וגאלי ומנגנונים כולינרגיים במורד הזרם, מוכרים יותר ויותר כחלק בלתי נפרד משמירה על איזון חיסוני במעי ולעיצוב תגובות ריריות, מה שממריץ אסטרטגיות ניסיוניות שיכולות להפריד בין תרומה סימפתטית לפאראסימפתטית בדיוק אנטומי².

מעבר לוויסות פיזיולוגי, פעילות אוטונומית הפכה למשאב רלוונטי בביולוגיה של מחלות מעיים, כולל סרטן המעי הגס (CRC). מחקר עדכני ב-CRC מראה תוכנית דו-כיוונית של עצב סימפתטי-מזנכימלית, שבה איתות β2-אדרנרגי ופיברובלסטים הקשורים לסרטן המבטאים NGF מחזקים אינטראקציות עצביות-סטרומליות ומקדמים התקדמות הגידול, ומספקות ראיות ישירות לכך שמעגלים סימפתטיים יכולים להיות מקושרים פונקציונלית לפתוגנזה^{CRC 3}. במקביל, איתות כולינרגי נקשר לגידול CRC ולתכונות חיסוניות הקשורות לגידולים, כפי שמודגם על ידי עיכוב פרמקולוגי של קולטן מוסקריני 3 במודל עכבר אורטופי ועל ידי חיבור איתות כולינרגי לביטוי נקודות ביקורת חיסונית וסימנים ממאירים נוספים ^4,5. חשוב לציין כי השפעות אוטונומיות על מחלות מעיים עשויות להתכנס גם עם מודולטורים אחרים, כגון לחץ פסיכולוגי ומיקרוביוטה של המעי. מערכת העצבים המעיים יכולה להעביר אותות לחץ לדלקת מעיים⁶, ואותות מיקרוביאליים יכולים להפעיל מעגלים בין מעי מוח לכיוון נוירונים סימפתטיים חיצוניים במעיים, ולתמוך במסגרת רב-גורמית שבה ויסות עצבי מצטלב עם האקולוגיה החיסונית והמיקרוביאלית ^6,7.

קווי הראיות המתכנסים הללו מדגישים את הצורך בגישות ניסיוניות שיכולות לבודד השפעות אוטונומיות מכוונות מעיים בדיוק אנטומי מספק כדי לתמוך בהסקת סיבתיות הן בסביבות פיזיולוגיות והן בסביבות פתולוגיות. למרות התקדמות מהירה במיפוי מעגלים ונוירומודולציה, התערבויות נפוצות רבות נותרות מוגבלות בספציפיות האיברים. מניפולציה פרמקולוגית מערכתית, סימפתקטומיה כימית ווגוטומיה תת-דיאפרגמטית יכולים להשפיע על תפוקות אוטונומיות רחבות ובכך לשנות נקודות מערכת חיסונית ומטבוליות מעבר למעי, מה שמסבך את הייחוס הסיבתי לקלטים עצביים ספציפיים למעי הגס⁸. לדוגמה, מעגלים וגאליים יכולים לדכא את ייצור הציטוקינים הדלקתיים⁹, וגירוי וגאלי יכול לווסת את תפקוד האנדוקרינים של הלבלב ואת דינמיקת התאים β, מה שממחיש כי התערבויות במעלה הזרם או לא סלקטיביות עלולות לגרום להשפעות חוץ-מעיים שמבלבלות את פרשנות הפנוטיפים של המעי¹⁰. מגבלות אלו משמעותיות במיוחד במחקרים שמטרתם לבודד מנגנונים אוטונומיים מוגבלים על ידי המעי הגס בפיזיולוגיה ובפתולוגיה. המטרה הכוללת של השיטה היא לאפשר חיתוך מונחה אנטומי סלקטיבי של סיבים סימפתטיים ופראסימפתטיים מונחי מעיים בעכברים, ולספק מודל מעשי לחקירת ויסות אוטונומי במעי עם פגיעה מופחתת מחוץ למטרה.

לסיכום, פרוטוקול זה מדווח על גישה מדויקת יותר של דננורציה אוטונומית במעי עכברים, עם הפרעה מינימלית לעצבוב האוטונומי של איברים בטניים אחרים, ובכך משפר את הפרשנות על ידי הפחתת הטיה פוטנציאלית מהשפעות איברים חוץ-מעיים.

פרוטוקול

כל ההליכים לבעלי חיים אושרו על ידי ועדת הטיפול והשימוש בבעלי חיים מוסדית (IACUC) של בית החולים בייג'ינג פרנדשיפ, אוניברסיטת קפיטל לרפואה (מס' 24-2026). עכברים בוגרים מסוג בר מסוג C57BL/6J שימשו במחקר זה (8–10 שבועות, 20–30 גרם). מידע מפורט על חומרים וציוד מסופק בטבלת החומרים.

קריטריוני הכללה: נעשה שימוש בעכברים מאותו זן, מין וטווח גילאים בכל ניסוי כדי למזער שונות ביולוגית. רק בעלי חיים בריאים שהפגינו פעילות תקינה, התנהגות טיפוח, צריכת מזון ומים ותפוקת צואה במהלך תקופת ההסתגלות נכללו. בנוסף, העכברים התרגלו למתקן בעלי החיים לפחות 7 ימים לפני הניתוח.

קריטריוני הוצאה: עכברים הוצאו במקרים של דימום לא מבוקר או פגיעה כלי דם חמורה במהלך ניתוח, חור במעי, או נזק משמעותי לרקמות שאינו תואם להישרדות. גם בעלי חיים שלא החלימו מהרדמה, שהוגדרה כלא להפוך לניידים תוך שעתיים לאחר הניתוח, הוצאו גם הם. קריטריונים נוספים להוצאה כללו סיבוכים לאחר ניתוח כגון התפתחות פצע מתמשכת, זיהום חמור, או ירידה במשקל העולה על 15% בתוך 48 שעות או 20% בכל תקופה של 72 שעות. עכברים עם זיהוי שגוי כירורגי של ענף העצב, שאושרה בהערכה היסטולוגית לאחר הוק, גם הם הוצאו מהמחקר.

1. הכנה לפני הניתוח

1. לחטא את כל כלי הניתוח.
2. מתן משכך כאבים מונע לכל העכברים 30 דקות לפני הניתוח כדי למנוע רגישות לכאב. מתן מלוקסיקאם (5 מ"ג/ק"ג למשקל גוף) בהזרקה תת-עורית.
3. חממו מראש את כרית החימום ל-37 מעלות צלזיוס והניחו אותה מתחת לפלטפורמת הניתוח.
4. רסס את אזור הניתוח (כולל תא ההרדמה) ב-75% אתנול, ונגב היטב עם מגבות נייר. הניחו מספיק מגבות נייר בתחתית תא ההשראה.
5. בדקו את תא ההרדמה ואת הצינור כדי לוודא שאין נזילות. למלא מחדש ולהבטיח אספקה מספקת של איזופלוראן. השרה הרדמה עם איזופלוראן של 3%–3.5% שמסופק ב-1 ליטר לדקה. לעקוב אחרי העכבר באופן רציף; בדרך כלל מגיעים למטוס ניתוחי תוך דקה עד שתיים.
6. הנח את העכבר על הגב עם כל ארבע הגפיים פרושות במלואן, ומאובטח עם סרט היפואלרגני. התקן וקבע את חרוט האף. הפחתת איזופלורן ל-1.5%–2.5% לצורך תחזוקה. העריכו עומק ההרדמה על ידי היעדר תגובת גמילה (ללא תגובה לצביטת האצבעות) ונשימה סדירה (55–65 נשימות לדקה).
   הערה: במהלך פרוצדורות מיקרוכירורגיות ממושכות, עומק ההרדמה מנוטר באופן רציף מעבר למישור הניתוח הראשוני. בנוסף להערכת רפלקס גמילה וקצב נשימה כל 5–10 דקות, אנו עוקבים אחרי דפוסי הנשימה (למשל, סדירות ועומק) וקצב הלב באמצעות תצפית ויזואלית או מגע עם דופן החזה. צבע הממברנה הרירית (שנמדד מהכפות או השפתיים) נבדק גם הוא מדי פעם כדי להבטיח חמצון מספק. אם העכבר מראה סימני הרדמה של ברק, כגון קצב נשימה מוגבר (>80 נשימות לדקה), תנועות ספונטניות או חזרה של רפלקס הפדל, ריכוז האיזופלוראן עולה בהדרגה של 0.25%–0.5% עד לשיקום מישור ניתוחי מתאים. לעומת זאת, אם הנשימה הופכת רדודה או לא סדירה, או אם קצב הלב יורד משמעותית, איזופלוראן יורד ב-0.25%–0.5% עד שתפקוד הלב-ריאה יציב חוזר. התאמה דינמית זו מבטיחה שהעכבר יישאר בעומק הרדמה מתאים לאורך כל ההליך תוך מזעור הדיכוי הקרדיו-נשימתי.
7. מרחו משחה עינית על שתי העיניים כדי למנוע ייבוש ופציעה בקרנית בהרדמה.
8. גילח את שיער הבטן מרמת הסימפיזה הערווה ועד לאזור שמתחת לשוליים הצלעיים באמצעות מכונת גילוח חשמלית. לאחר מכן, הזז את פלטפורמת הניתוח מתחת למיקרוסקופ סטריאו.
9. חטא את אתר הניתוח באמצעות מטוש פובידון-יוד בדפוס קונצנטרי החוצה (מהמרכז לפריפריה), מכסה את האזור מתחת לזיפואיד ועד הסימפיזיזה הערווה ולרוחב לשני הצדדים. חזור על זה 3 פעמים. ואז נגב עם 70% אתנול באותו אופן. ודא שהשדה נקי מכל שיער רופף.
10. לבשו מסכת ניתוח וכובע חד-פעמי, לבשו חלוק ניתוח סטרילי, ולבשו כפפות סטריליות.
11. כסו את העכבר בווילון סטרילי עם קוצות. כוונו את החלון לכ-2 × 3 ס"מ ויישרו אותו עם קו האמצע של הבטן כדי לחשוף במלואו את שדה הניתוח. אבטח את ארבע הפינות של הווילון.

2. לפרוטומיה וחשיפה

1. באמצעות מלקחיים סטריליים, הרימו בעדינות קפל קטן של עור ממש בראש הסימפיזה הערווית. עם מספריים סטריליים עם קצה חד, יש לבצע חתך ראשוני קטן בקצה (~0.3 ס"מ), ואז להאריך את חתך העור כלפי הגולגולת לאורך קו האמצע ל-1.5–2.0 ס"מ.
   הערה: לאחר הכנסת קצות המספריים החדים לפתח הראשוני, זווית את הקצוות כלפי מעלה וביצעו "דחיפה-חיתוך" מבוקרת לאורך החלק התחתון של העור כדי להימנע מחיתוך עמוק מדי ופגיעה בשרירי הבטן או באיברים הפנימיים. השתמשו במלקחיים ומספריים כדי לנתק בצורה קהה את רקמת החיבור התת-עורית הרופפת משרירי דופן הבטן התחתונה. נתח מעט רחב יותר מהחתך בעור כדי להקל על חשיפה נוספת.
2. כ-0.5 ס"מ זנב לתהליך הזיקפואיד, הכניסו בזהירות את קצות המלקחיים הדקים הסטריליים ללינאה אלבה והרימו אוהל קטן של רקמה.
3. באמצעות מספריים סטריליים עם קצה חד, יוצרים פתח קטן (2–3 מ"מ) באתר המורם. בשלב זה, הפריטונאום החלק ו/או האיברים שמתחתיו (למשל, אונה כבד) אמורים להיות גלויים.
4. הכנס להב אחד של מספריים סטריליים עם קצה קהה לחלל הפריטונאלי, תוך שמירה צמודה לדופן הבטן. בראייה ישירה, האריך את החתך לאורך הלינאה אלבה לכיוון הגולגולת עד שהאורך הכולל תואם לחתך העור.
   הערה: שמרו על קצה המספריים בזווית כלפי מעלה לאורך כל הדרך והמשיכו רק בראייה ישירה כדי לוודא שאין לולאות מעיים או כלי דם מתחת למספריים.

3. זיהוי העורק המזנטרי העליון והחתך העצבי

1. משכו בעדינות את דופן הבטן לרוחב באמצעות רצועות סטריליות לחשיפת חלל הפריטונאלי.
2. הפעילו לחץ מתון עם מטלית כותנה על דופן הבטן כדי לאפשר למעיים לצאת החוצה. העבר בעדינות את המעי הדק, המעי הגס והצ'אם-סקול לצד השמאלי של העכבר.
   הערה: כסו את המעי החשוף בכרית כותנה סטרילית או גזה רטובה במי מלח סטריליים חמים (≈37 מעלות צלזיוס) כדי למנוע ייבוש רקמות ואיבוד חום.
3. באמצעות יד ימין, הזיזו בעדינות את הקיבה, התריסריון והמעי הגס לכיוון הרבע העליון השמאלי באמצעות מטוש כותנה סטרילי ולח (או מלקחיים מיקרו-קהות). האאורטה הבטנית, הקדמית לעמוד השדרה, אמורה להיות נראית בבירור בשלב זה, לעיתים מכוסה חלקית בכמות קטנה של שומן רטרופריטוניאלי.
4. זהה את וריד הכליה השמאלי ואת הגזע הצליאקית. העורק המזנטרי העליון (SMA) נוצר כענף עורקי יחיד מהדופן הקדמית של האאורטה הבטנית, בדרך כלל בזנב ~2–4 מ"מ עד לגזע הצליאק ועל או מעט מעל גובה וריד הכליה השמאלי.
   הערה: וריד הכליה השמאלי הוא וריד כהה ועבה הזורם אופקית לאורך החלק הקדמי של האאורטה הבטנית לפני שהוא מתנקז לווריד הנוב התחתון. הגזע הצליאקי הוא בדרך כלל הענף העורקי הראשי הראשון היוצא מדופן הקדמית של האאורטה הבטנית, הממוקם רק בגולגולת (מעליון) לווריד הכליה השמאלי, ובדרך כלל מתפצל לעורק הכבד, הטחול והקיבה השמאלית. לעומת זאת, ה-SMA הוא גזע יחיד ללא ענפים כבדיים/טחוליים. הוא נכנס לשורש המזנטריה ומספק את הג'ג'ונום, האיליאום והמעי הגס הקרוב; מעקב אחר מסלולו אל תוך המזנטריה יכול לסייע באישור זיהוי נכון.
5. זהה את החבילות הלבנות-חלביות, דמויי חבל, המקבילות ל-SMA כסיבי העצב המטרה. חבילת העצבים הממוקמת מעל ה-SMA מתאימה לסיבים הפאראסימפתטיים, בעוד שהחבילה הממוקמת תחתונה ל-SMA מתאימה לסיבים הסימפתטיים (איור 1A).
6. באמצעות מיקרו-מלקחיים ומספריים מיקרו, הפרדו בעדינות את השומן והרקמה הלימפה סביב ה-SMA כדי לחשוף במלואם את סיבי העצב. הרימו בעדינות את צרור העצב הסימפתטי או הפאראסימפתטי עם מלקחיים מיקרו כדי להפריד אותו מה-SMA, ואז חתכו אותו במהירות ובזהירות (איור 1).
   הערה: במהלך הניתוח, שמרו על קצות המלקחיים והמספריים מכוונים לכיוון הדופן הצדדית של העורק והימנעו מהכוונת המכשירים אנכית למישורים עמוקים יותר. אם מתרחש דימום משמעותי (למשל, דימום מה-SMA או מאאורטה בטנית שלא ניתן לשלוט בו תוך 30 שניות על ידי הפעלת לחץ עם מטוש כותנה סטרילי), ההליך מפסיק מיד. החיה עוברת המתת חסד אנושית בזמן שהיא עדיין תחת הרדמה ואינה כלולה בכל הניתוחים הבאים. נקודת סיום זו מוגדרת מראש בהתאם לנקודות הומניות המאושרות על ידי IACUC כדי למנוע סבל מיותר. הנחיות נוספות לאיתור תקלות לסיבוכים תוך-ניתוחיים נפוצים מסופקות בתיק המשלים 1.

4. סגירת חלל הבטן

1. הסר את כל הגזה/פדים הכותנה התוך-בטניים. בדקו בקפידה את חלל הבטן לאיתור דימום פעיל, תוך תשומת לב מיוחדת לשדה הדיסקציה של ה-SMA, אתר חיתוך העצב וקצוות החתך בדופן הבטן.
2. השקה בעדינות את חלל הפריטונאלי בנפח קטן של מלח חמים וסטרילי (0.5–1.0 מ"ל), ואז ספג בזהירות את עודפי הנוזלים באמצעות מטלית כותנה יבשה סטרילית.
3. בצע ספירת מכשיר וגזה/כותנה כדי לוודא שאין חומר זר בחלל הבטן.
4. באמצעות תפר 6-0 נספג, סגרו את הפריטונאום ושכבת השריר בתפר רציף שמתחיל מקצה אחד של החתך. כל נשיכה חייבת לכלול את הפריטונאום ואת שרירי דופן הבטן משני הצדדים.
   הערה: הרימו את קצוות הפצע עם מלקחיים והניחו כל תפר תחת ויזואליזציה ישירה כדי למנוע תפיסת המעי התחתון או האומנטום. במידת הצורך, הזיזו בעדינות את המעי הרחק מהחתך באמצעות מטלית כותנה לחה.
5. סגרי את העור עם תפרים מופרעים באמצעות תפר משי קלוע 5-0 שאינו נספג. הנח תפרים במרווחי ~2 מ"מ וקשור קשרים במתח בינוני, תוך הערכה (אך לא חניק) קצוות העור כדי למנוע איסכמיה.
   הערה: מיקום לקוי של הפצע עלול לגרום לבקע חתך. ודאו ששכבת השרירים אטומה היטב, ושקצוות העור מיושרים היטב.
6. נקה בעדינות את חתך העור הסגור שוב עם מטוש פובידון-יוד.
7. סמנו את העכבר (אוזן או זנב) בתאריך הניתוח.
8. הסר את חרוט האף והעבר את העכבר לכלוב התאוששות נקי ורך הממוקם על כרית חימום של 37 מעלות צלזיוס (בית יחיד). לשמור על החיה בשכיבה צדדית כדי להפחית את הסיכון לשאיבה.
   הערה: ודאו שכרית החימום נשארת יציבה ב-37 מעלות צלזיוס כדי למנוע היפותרמיה. אם צריך, ניתן 1 מ"ל של תמיסת מלח חמים וסטרילית תת-עורית לתמיכה בנפח.
9. עקבו באופן רציף אחרי העכבר עד שיחזור להכרה במלואו ויוכל לשמור על מצב שכיבה באופן עצמאי.
   הערה: הקלה לאחר הניתוח נמשכה עם מלוקסיקאם (5 מ"ג/ק"ג, תת-עורית, פעם כל 24 שעות עד 48 שעות לאחר הניתוח), עם הערכה וטרינרית נוספת אם נצפו סימני כאב או מצוקה מתמשכים.

5. פרמטרי ניטור לאחר הניתוח

הערה: המעקב לאחר הניתוח בוצע פעמיים ביום במשך 72 השעות הראשונות ולאחר מכן יומי לאורך כל המחקר. הפרמטרים שנבדקו כללו:

1. לעקוב אחרי המראה הכללי, כולל טיפוח, מצב הפרווה שלה, יציבה ורמת פעילות.
2. למדוד משקל גוף מדי יום; הגדר ירידה של יותר מ-15% ממשקל הגוף לפני הניתוח בתוך 48 שעות או 20% בכל תקופה של 72 שעות כנקודת סיום הומנית.
3. בדוק את אתר הניתוח לסימני זיהום, התנתקות או הפרשה.
4. לעקוב אחרי התנהגות, כולל תנועה ספונטנית, תגובה לטיפול וסימני מצוקה (למשל, קולות וחוסר מנוחה).
5. העריכו כל בעל חיים שמראה סימני כאב או מצוקה מתמשכים למרות שיכוך כאבים על ידי צוות הווטרינר, ואם יש צורך, הורד את בעל החיים.

תוצאות

באמצעות ה-SMA כסימן אנטומי עקבי, ניתן לזהות חבילות עצבים אוטונומיים במעיים כמבנים דקים ולבנים כפנינה המקבילים לכלי הדם. בהתבסס על מיקומם האנטומי ביחס ל-SMA, החבילה העליונה סווגה כצרור הפאראסימפתטי המשוער והחבילה התחתונה כחבילה הסימפתטית המשוערת (איור 1A,D). תוצאה חיובית תוך ניתוחית מושגת כאשר חבילת המטרה נראית בבירור ומופרעת לחלוטין, ללא סיבים שאריתיים שמגשרים על מישור החיתוך. כל נוזל חלבי או לבנבן שנצפה מדי פעם באתר החיתוך לא נחשב לראיה מאש...

דיון

ה-SMA של העכברו נובע מדופן הקדמית של האאורטה הבטנית, התחתונה לגזע הצליאק, ומספק זרימה עורקית לויסריים הבטניים המרכזיים, כולל המעי¹⁴. קדמית ל-SMA נמצאים המעי הגס והמזנטריה שלו, בעוד שבחלק האחורי הוא קשור קשר הדוק לווריד הכליה השמאלי ולהאאורטה הבטנית; הווריד המזנטרי העליון בדרך כלל זורם לאורך צידו הימני. בעכברים, ה-SMA עדין מאוד ומוקף באיברים קריטיים ובכלי דם עיקריים. חשוב לציין, סיבי עצב סימפתטיים ופאראסימפתטיים דקים באותה מידה נדבקים היטב ורצים לצד ה-SMA. לכן, חית...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
5-0 silk braided non-absorbable suture	Ethicon	W500
6-0 PGA Suture	Jinhuan	CR631
Anesthesia Induction Chambers	RWD Life Science	V100
Animal Anesthesia Machine	RWD Life Science	R500IP
Anti-Choline Acetyltransferase antibody	Abcam	ab181023
Artificial Tears Lubricant Ophthalmic Ointment	Akorn	59399-162-35
C57BL/6J Mice	Shanghai Model Organisms CenterTechnology	SM-001
Cholera Toxin Subunit B (CTB), Alexa FluorTM 555 Conjugate	Thermo Scientific	C34776
Compound Microscope	Yuyan Instruments	512
DAPI and Hoechst Nucleic Acid Stains	Invitrogen	D3571
Fast Green	Thermo Scientific	F7252
Fine Hemostatic Forceps	Jinzhong surgical instrument	JCG020
Hypoallergenic Surgical Tape	3M Blenderm	70200419342
Isoflurane	RWD Life Science	R510-22-10
Micro Forceps(Curved)	Jinzhong surgical instrument	WCC200
Micro Forceps(Straight)	Jinzhong surgical instrument	WCC190
Micro Needle holders	Jinzhong surgical instrument	WBA050
Micro scissors	Jinzhong surgical instrument	Y3F010
Micro syringe	Hamilton	7632-01
Ophthalmic Scissors(pointed tip)	Jinzhong surgical instrument	JC2303
Ophthalmic Scissors(rounded tip)	Jinzhong surgical instrument	JC2303
Povidone-Iodine Swabstick	Winner Medical	206
Tissue and Cell Fixative (4% Paraformaldehyde, PFA)	MedChemExpress	HY-DY3003
Tissue OCT-Freeze Medium	Sakura	C2077
Tyrosine Hydroxylase (E2L6M) Rabbit Monoclonal Antibody	Cell Signaling Technology	58844S