מאמר שיטה

הקמת מודל תא het-1A מושרה חומצה וניתוח פונקציונלי של ציר miR-107/FGFRL1

DOI:

10.3791/70874

⸱

29 במאי 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Gastroenterology, Longyan First Hospital, 2Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou Medical University, 3Department of Gastroenterology, The Affiliated TCM Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, 4Department of Gastroenterology, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 5Clinical Nutrition Department, Jiaozhou Central Hospital of Qingdao, 6Department of Gastroenterology, People's Hospital of Wenshang County

* These authors contributed equally

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כאן אנו מציגים פרוטוקול לקביעת מודל תאי דלקת ושט מושרה HCl באמצעות תאי Het-1A ולבחון את ציר miR-107/FGFRL1 באמצעות בדיקות מולקולריות ותאיות.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ראיות נרחבות מצביעות על כך שמיקרו-RNA (miRNAs) ממלאים תפקיד מרכזי בתהליכים פתופיזיולוגיים במערכת העיכול. עם זאת, המנגנונים הספציפיים שלהם בדלקת ושט רפלוקס (RE) עדיין לא מובנים היטב. כאן אנו מציגים פרוטוקול להקמת מודל RE מושרה על ידי חומצה ולבחינת ציר miR-107/FGFRL1 באמצעות בדיקות מולקולריות ותאיות. ביצענו ניתוחי דגימות קליניים, כולל איסוף סרום ממטופלים עם R E (n=94) וביקורת בריאה (n=94), ואחריהם זיהוי כמותי באמצעות RT-qPCR. במבחנה, הוקם מודל פגיעה שנגרם מחומצה באמצעות תאי Het-1A שנחשפו לחומצה הידרוכלורית. בנוסף, בוצע אימות פונקציונלי של התאים באמצעות בדיקות עמידות תאי MTT ובדיקות דו-לוסיפראז מדווח. תוצאות מייצגות מצביעות על כך ש-miR-107 היה מופחת בסרום של חולי RE ובתאי Het-1A שטופלו בחומצה. miR-107 מתווך שינויים שנגרמו על ידי חומצה הידרוכלורית בחיוניות וברמות הדלקת של תאי Het-1A על ידי מיקוד ישיר ב-FGFRL1 ומקושר לשינויים בחיוניות ובדלקת של התאים באמצעות מיקוד FGFRL1. פרוטוקול זה מאפשר חקירה של מנגנונים המתווכים על ידי miR-107/FGFRL1 ב-RE. גישה זו מספקת פלטפורמה ניתנת לשחזור לחקר מנגנונים מולקולריים ב-RE.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

דלקת ושט רפלוקס (RE) היא מחלת עיכול שבה חומצת הקיבה ותכולת הקיבה חוזרת שוב ושוב לוושט, מה שגורם לדלקת, סחיפה או אפילו כיב של רירית הוושט, שחומרתה קשורה לאופי החומר המוחזר, לתדירות הריפלוקס ולעמידות של רירית הוושט 1,2. כסוג נפוץ מאוד של מחלת רפלוקס קיבה וושטי (GERD), RE מציגה עלייה מתמדת בשכיחות והשפעה עולמית מתרחבת3. ההופעה הקלינית הלא ספציפית של RE בדרך כלל מובילה לאבחון שגוי או לאבחון חסר. יתרה מזאת, המסלול החוזר של המחלה מתקדם לעיתים קרובות לסיבוכים חמורים יותר במערכת העיכול, ומטיל עומס פיזיולוגי וסוציו-אקונומי משמעותי על הנפגעים4. הניהול הקליני הסטנדרטי של RE כולל בדרך כלל תרופות (כגון מעכבי משאבת פרוטון), פרוצדורות אנדוסקופיות זעיר-פולשניות, או ניתוח 5,6. עם זאת, היעילות הטיפולית מוגבלת לעיתים קרובות על ידי תופעות לוואי הקשורות לתרופות ותחלואה פרוצדורלית. בהינתן ההבנה הלא מלאה של הפתוגנזה המולקולרית של RE, הבהרת המנגנונים הבסיסיים שלה עשויה לחשוף מטרות טיפוליות חדשות ו-RE להנחות פיתוח אסטרטגיות טיפול יעילות יותר, ספציפיות למטופל. פרוטוקול זה נועד להקים מודל RE במבחנה ולחקור את תפקיד הרגולציה של ציר miR-107/FGFRL1 באמצעות בדיקות מולקולריות ותאיות.

מיקרו-RNA (miRNAs) תועדו רבות כמשתתפים בפתוגנזה של מחלות אנושיות רבות באמצעות יכולתם לווסת תרגום mRNA באמצעות קישור ספציפי לרצף7. לדוגמה, miR-3682-3p משפיע על מסלול Wnt/β-catenin על ידי ויסות ביטוי FHL1, מה שמוביל להתקדמות סרטן הוושט8. miR-21-5p ו-miR-223-3p משפיעים על מהלך הדלקת הוושט האאוזינופילית (EOE) על ידי תיווך ביטוי גני המטרה במורד הזרם9. miR-107 הוא miRNA המקודד על כרומוזום 10 בבני אדם, שזכה לתשומת לב מחקרית רבה בשל השלכותיו בתהליכים גידוליים שונים 10,11,12. עדויות עדכניות מצביעות על כך ש-miR-107 הוא מתווך נקודות חמות בסרטן הקיבה ובסרטן הוושט13,14, אך יש לחקור לעומק את תפקידיו הפתופיזיולוגיים ומנגנוני הוויסות שלו במחלות עיכול לא ניאופלסטיות. עם זאת, מודלים מתאימים במבחנה וגישות אנליטיות משולבות לחקר תפקוד miR-107 ב-RE נותרו מוגבלים.

רפלוקס חומצה קיבתית מוכר באופן נרחב כגורם פתוגני העיקרי האחראי לפגיעה ברירית הוושט ב-RE15. מחקרים עדכניים מציעים כי המנגנון הפתוגני של RE אינו עוסק בפגיעה ישירה ברירית על ידי מיצי קיבה, אלא בגירוי שחרור כימוקיני מתאי אפיתל הוושט, ומתחיל גל של נזק רקמתי המתווך על ידי דלקת16. כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שמאחורי התהליך הזה, טיפלנו בתאי Het-1A בחומצה כלורית כדי לקבוע מודל פגיעות חומצה חוץ-גופית המשחזר את התכונות הפתולוגיות המרכזיות של נזק אפיתל הנגרם על ידי רפלוקס חומצי. גישה זו מספקת מערכת מבוקרת וניתנת לשחזור המדמה פגיעה אפיתלית הנגרמת מחומצה במבחנה. חקרנו באופן שיטתי את התפקיד הרגולטורי של miR-107 בדלקת ובאפופטוזיס הקשורות ל-RE, וכן את הפוטנציאל האבחוני שלו. פרוטוקול זה מאפשר חקירת ויסות מתווך miRNA של מסלולים דלקתיים ואפופטוטיים בתאי אפיתל הוושט. בהשוואה למודלים מסורתיים של בעלי חיים בחיים ותרביות תאים ראשוניות, מודל Het-1A המושר על ידי HCl בשילוב עם בדיקות תפקודיות miR-107 מציע יציבות, שליטה ושחזור יוצאות דופן, מה שהופך אותו למתאים במיוחד לחקר נזק אפיתל שנגרם מחומצה, ויסות לאחר שעתוק על ידי miRNA, ותגובות דלקתיות בתאי הוושט17. שיטה זו מתאימה במיוחד למחקרים החוקרים מנגנונים מולקולריים של פגיעה אפיתלית הנגרמת מחומצה וויסות מתווך miRNA. כאשר משולבים עם ניתוחים קליניים של מטופלים, ניתן לשלב גישה זו עם נתונים קליניים לתמיכה במחקרים מכניים ב-RE.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. גיוס מטופלים

  1. לבצע את המחקר בהתאם להצהרת הלסינקי.
  2. קבל אישור לפרוטוקול המחקר מוועדת האתיקה של בית החולים המרכזי ג'יאוז'ואו בצ'ינגדאו (מספר אישור: 2023033-01).
  3. ודא שכל המשתתפים סיפקו הסכמה מדעת חתומה לפני תחילת המחקר.
  4. זהה ורשום 94 מטופלים עם דלקת ושט רפלוקס (RE) מבית החולים המרכזי ג'יאוז'ואו בצ'ינגדאו.
  5. כלול 94 מתנדבים בריאים כקבוצת הביקורת.
  6. אבחן את כל מטופלי ה-RE באמצעות גסטרוסקופיה כדי לאשר נגעים ושחיקה ברירית הוושט. קבץ את המטופלים לפי קריטריוני הסיווג של לוס אנג'לס18.
  7. נכללו מטופלי RE עם אי נוחות במערכת העיכול שנמשכה למעלה מ-3 חודשים, ללא היסטוריה של ניתוח במערכת העיכול העליונה, וסיפקו הסכמה מדעת חתומה למחקר זה.
  8. יש להוציא מטופלים עם וושט בארט, דליות וושט, היצרות הוושט, כיבים עמוקים או נגעים ממאירים בגידול באמצעות גסטרוסקופיה.

2. איסוף דגימות סרום

  1. אסוף 5 מ"ל דם ורידי בצום מכל משתתף בין 8:00 ל-10:00 בבוקר לאחר צום לילה של לפחות 8 שעות.
  2. צנטריפוגה את הדם שנאסף בטמפרטורה של 4°C ו-3000 × גרם למשך 15 דקות.
  3. אסוף את הסופרנטנט בזהירות לאחר הצנטריפוגה.
  4. אחסן את הסרום המופרד בטמפרטורה של -80°C במקפיא עד למדידה הבאה.
    הערה: ניתן לאחסן דגימות בטמפרטורה של −80°C לאחסון ארוך טווח ולעיבוד מאוחר יותר

3. תרבית תאים

  1. רכש קווי תאים קשקשיים של הוושט האנושי Het-1A מחברת תאים מסחרית. הפשרה מהירה של תאים באמבט מים של 37°C בתוך 1–2 דקות.
  2. החייאתם תאי Het-1A ותרבותם במדיום RPMI-1640 עם תוספת של 10% סרום בקר עוברי ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין.
  3. הגדר את פרמטרי האינקובטור ל-37°C ו-5% CO₂ לתחזוקת תרביות התאים.
  4. החלפת מדיום כל יומיים ותאי מעבר במפגש של 80–90% באמצעות 0.25% טריפסין-EDTA.

4. השראה תאית

  1. החריקו תאי Het-1A ללוחות של 6 בארות וכווננו את צפיפות התאים ל-2×105תאים·well-1 ב-2 מ"ל מדיום מלא.
  2. מדלל חומצה כלורית מרוכזת (HCl) עם מלח מפופר פוספט (PBS) וכיוון את ה-pH ל-4.0.
    אזהרה: חומצה כלורית היא קורוזיבית ומגרה. לטפל בחומצה כלורית באמצעות ציוד מגן אישי מתאים (כולל משקפי מגן, כפפות וחלוק מעבדה) ולעבוד עם מכסה אדים כימי
  3. הוסף 2 מ"ל מתמיסת HCl המוכנה לכל באר כדי לעורר את התאים.
  4. זרוק את תמיסת HCl ושוטף תאים פעמיים עם PBS מחומם מראש לפני הבדיקות בכל נקודת זמן.
  5. מדדו את חיוניות התאים באמצעות בדיקת MTT ב-0, 10, 20 ו-30 דקות.

5. תגובת שרשרת פולימראז כמותית בזמן אמת (RT-qPCR)

  1. חילוץ RNA כולל מתאי Het-1A באמצעות תגובת פנול-כלורופורם.
  2. הערכו את טוהר וריכוז ה-RNA באמצעות ספקטרופוטומטר NanoDrop, המאשר יחס A260/A280 בין 1.8 ל-2.0.
  3. הגדר את מערכת ההגברה של השעתוק ההפוך באמצעות ערכת השעתוק ההפוך.
  4. בצע תמלול הפוך במכשיר PCR בטמפרטורה של 37°C למשך 15 דקות, 85°C למשך 5 שניות, ואז שמור על 4°C.
  5. יצירת DNA מעגלי (cDNA) באמצעות שעתוק הפוך.
  6. בצע תגובות RT-qPCR בנפח תגובה של 20 מיקרוליטר באמצעות תערובת המאסטר של SYBR Green PCR.
  7. קבעו את תנאי מחזור ה-PCR כך: דנאטורציה ראשונית ב-95 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות, ואחריה 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס למשך 15 שניות ו-60 מעלות צלזיוס למשך דקה אחת.
  8. השתמש בגליצראלדהיד 3-פוספט דה-הידרוגנאז (GAPDH) וב-RNA גרעיני קטן (U6) כאמצעי בקרה פנימיים ל-miR-107 ו-FGFRL1.
  9. חשב נתונים באמצעות שיטת 2-ΔΔCt.
  10. כימות את תכולת ה-mRNA של גורמים דלקתיים (IL-6, IL-8) ומולקולות רגולטוריות הקשורות לאפופטוזיס (Fas, p53) באמצעות RT-qPCR.

6. טרנספקציה תאית

  1. תרבית תאי Het-1A סטטית בלוחות 6 בארות בצפיפות של 2×105 תאים·באר-1 עד שהם מגיעים לשלב הצמיחה הלוגריתמי.
  2. השגת אוליגונוקלאוטידים סינתטיים (miR-107 mimic/ov-FGFRL1; 50 ננומטר), פלסמידים מוורדים (מעכב miR-107; 100 ננומטר), ומקטעי הבקרה השליליים המתאימים להם מספק מסחרי.
  3. העבירו את השברים שהוזכרו לתאים באמצעות תגובת ליפופקטמין למשך 48 שעות.

7. חיוניות תאים

  1. זרעו תאי Het-1A ללוחות של 96 בארות בצפיפות של 5×103 תאים·באר-1 בתווך של 100 מיקרוליטר לבאר ותרבית במהלך הלילה.
  2. הוסף תמיסת מתיל תיאזוליל טטרזוליום (MTT) (20 מיקרוליטר, 5 מ"ג·מ"ל-1, ריכוז סופי 0.5 מ"ג·מ"ל-1) לתאי ה-Het-1A ודוגר במשך 4 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
  3. הוסיפו דימתיל סולפוקסיד (DMSO, 150 מיקרוליטר) ומעבירים את התערובת ל-10 דקות.
  4. מדדו את ערך הספיגה (490 ננומטר) של כל באר באמצעות קורא מיקרופלט.
  5. קבע 3 בארות שכפול לכל קבוצה וחזור על זה 3 פעמים בלתי תלויות.

8. מבחן ELISA

  1. לזהות IL-6 ו-IL-8 בתאים באמצעות ערכת ELISA, בהתאם לנהלים הסטנדרטיים של היצרן.
  2. חזור על ההליך שלוש פעמים באופן עצמאי.

9. חיזוי מטרות ובדיקת פעילות לוסיפראז

  1. חיזוי מטרות פוטנציאליות של miR-107 באמצעות מסדי נתונים miRDB ו-ENCORI. זהה מטרות חופפות ואמת אתרי קישור משלימים.
  2. זיהוי אתרי קישור משלימים בין miR-107 ל-FGFRL1.
  3. שכפלו וקבלו את FGFRL1 3'UTR פראי המכיל אתרי קישור miR-107 (wt-FGFRL1). יוצרים מוטנטים ספציפיים לאתר קישור (mut-FGFRL1).
  4. תאי Het-1A קו-טרנספקט עם wt/mut-FGFRL1 ו-miR-107 (או בקרות NC).
  5. מדדו פעילות לוסיפראז באמצעות מערכת בדיקת דו-לוסיפראז מדווח.

10. ניתוח סטטיסטי

  1. בצע ניתוח ROC באמצעות GraphPad Prism על ידי הזנת נתוני הביטוי, בחירת פונקציית עקומת ROC וייצוא התוצאות.
  2. הערכו הבדלים בין קבוצות באמצעות מבחן t של סטודנט (לשתי קבוצות) או ניתוח חד-כיווני של שונות (ANOVA; עבור מספר קבוצות) ואחריו מבחן פוסט-הוק של טוקי.
  3. נחשוב על p < 0.05 כמובהק סטטיסטית.
  4. המידע המפורט של הנתונים המקוריים סוכם בטבלה המשליחה 1.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

גיוס מטופלים ומאפייני בסיס תוצאות אלו מתארות את הביטוי והביצועים האבחנתיים של miR-107 בחולי RE. טבלה 1 מתעדת את המאפיינים הכלליים של ביקורת בריאה וחולי RE. התוצאות אינן מראות הבדלים מובהקים סטטיסטית בין שתי הקבוצות מבחינת מגדר, גיל והיסטוריה רפואית בסיסית (p > 0.05), מה שמעיד על השוואה.

ביטוי miR-107 בסרום וביצועי אבחון

רמות miR-107 בסרום היו נמוכות משמעותית בקבוצת RE בהשוו...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

RE. היא מחלה דלקתית של רירית הוושט הנגרמת על ידי רפלוקס קיבה וושטי, עם מגוון רחב של תסמינים העלולים להשפיע על איכות החיים ולהסתכן בסיבוכים חמורים19. בתנאים פיזיולוגיים רגילים, הקיבה נשארת מוגנת מפני חומצה קיבתית ומרה בזכות מנגנוני ההגנה הטבועים בה. לעומת זאת, הוושט, שחסרה מחסום ריר חזק, רגישה יותר לנזקמחומרים אלו. לכן, אנו להוטים להעריך את הופעת RE. על ידי זיהוי ביטוי של סמנים לא פולשניים על בסיס חקירת המנגנון הפתולוגי של RE. פרוטוקול זה מס...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים מתחרים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

פרויקט הרפואה הסינית המסורתית של גואנגג'ואו וטכנולוגיית הרפואה הסינית והמערבית המשולבת (מספר מענק: 20242A011007). פרויקט מחקר מדעי של מנהל הרפואה הסינית המסורתית של מחוז גואנגדונג (מספר מענק: 20262041).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
אוסף תרבות הטיפוס האמריקאי מנאסס, ארה"בבנק התאים המסחריים
דימתיל סולפוקסיד  סיגמא, גרמניהD4540
ערכת בדיקה לדיווח דו-לוסיפראזפרומגה, ארה"בE1910מערכת בדיקת דוח דו-לוסיפראז
ערכת מאסטר ירוקה FastStart Universal SYBRרוש, גרמניה4913850SYBR Green PCR master mix
סרום בקר עובריגיבקו, ניו יורק, ארה"ב10100147C
חברת ג'ין פארמהשנחאי, סין
כלוריד מימןסיגמא-אלדריץ', מיזורי, ארה"ב1099730001
IL-6 אליסה קיטR& D Systems, ארה"בD6050ערכת ELISA
IL-8 אליסה קיטR& D Systems, ארה"בD8000Cערכת ELISA
חממהפורמה סיינטיפיק, מסצ'וסטס, ארה"ב311 S/N29035
ליפופקטמין 3000אינויטרוגן, ארה"בL3000015תגובת ליפופקטמין
מתיל תיאזוליל טטרזוליוםסיגמא, גרמניהM5655
קורא מיקרופלטביו-טק, ורמונט, ארה"בELx808
ספקטרופוטומטר ננו-טיפהתרמו, מסצ'וסטס, ארה"בND-1000
פניצילין/סטרפטומיציןגיבקו, ניו יורק, ארה"ב15070063
ערכת PrimeScript RTטקארה, יפןDRR047Aערכת תמלול הפוך
טריזול תרמו, מסצ'וסטס, ארה"ב10296010תגובת פנול-כלורופורם
מקפיא בטמפרטורה אולטרה-נמוכה  הייר, צ'ינגדאו, סיןDW-86W100

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Guo, Z., et al. Integrated transcriptomic and metabolomic analyses reveal the mechanism by which quercetin inhibits reflux esophagitis in rats. PLoS One. 20 (5), e0321959(2025).
  2. Maev, I. V., Livzan, M. A., Mozgovoi, S. I., Gaus, O. V., Bordin, D. S. Esophageal Mucosal Resistance in Reflux Esophagitis: What We Have Learned So Far and What Remains to Be Learned. Diagnostics (Basel). 13 (16), 2664(2023).
  3. Quach, D. T., et al. Clinical characteristics and risk factors of gastroesophageal reflux disease in Vietnamese patients with upper gastrointestinal symptoms undergoing esophagogastroduodenoscopy. JGH Open. 5 (5), 580-584 (2021).
  4. Han, Y. M., et al. Inverse correlation between gastroesophageal reflux disease and atrophic gastritis assessed by endoscopy and serology. World J Gastroenterol. 28 (8), 853-867 (2022).
  5. Tanvir, F., et al. Gastroesophageal Reflux Disease: New Insights and Treatment Approaches. Cureus. 16 (8), e67654(2024).
  6. Bortolotti, M. Is patient satisfaction sufficient to validate endoscopic anti-reflux treatments? World J Gastroenterol. 28 (28), 3743-3746 (2022).
  7. Fabian, M. R., Sonenberg, N., Filipowicz, W. Regulation of mRNA translation and stability by microRNAs. Annu Rev Biochem. 79, 351-379 (2010).
  8. Cai, Y., et al. MiR-3682-3p promotes esophageal cancer progression by targeting FHL1 and activating the Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell Signal. 119, 111155(2024).
  9. Tarallo, A., et al. MiR-21-5p and miR-223-3p as Treatment Response Biomarkers in Pediatric Eosinophilic Esophagitis. Int J Mol Sci. 26 (7), 3111(2025).
  10. Liu, X., et al. Decreased PANK1 expression in kidney renal clear cell carcinoma: impact on cell apoptosis, invasion, migration, and epithelial-mesenchymal transition. Discov Oncol. 15 (1), 380(2024).
  11. Huang, F., Tang, W., Lei, Y. MicroRNA-107 promotes apoptosis of acute myelocytic leukemia cells by targeting RAD51. Arch Med Sci. 17 (4), 1044-1055 (2021).
  12. Zheng, J., et al. Applications of Exosomal miRNAs from Mesenchymal Stem Cells as Skin Boosters. Biomolecules. 14 (4), 459(2024).
  13. Wang, P., et al. miR-107 reverses the multidrug resistance of gastric cancer by targeting the CGA/EGFR/GATA2 positive feedback circuit. J Biol Chem. 300 (8), 107522(2024).
  14. Zhang, P., et al. MiR-107 inhibits the malignant biological behavior of esophageal squamous cell carcinoma by targeting TPM3. J Gastrointest Oncol. 13 (4), 1541-1555 (2022).
  15. Lee, H. W., et al. A Pharmacokinetic/Pharmacodynamic Study of Esomeprazole Comparing a Dual Delayed-Release Formulation (YYD601) to a Conventional Formulation Following Multiple Administrations in Healthy Adult Subjects. Drug Des Devel Ther. 19, 97-110 (2025).
  16. Wasielica-Berger, J., et al. Expression of VEGF, EGF, and Their Receptors in Squamous Esophageal Mucosa, with Correlations to Histological Findings and Endoscopic Minimal Changes, in Patients with Different GERD Phenotypes. Int J Environ Res Public Health. 19 (9), 5298(2022).
  17. Zou, Z., Fu, L., Liu, J., Huang, B. Establishment and Evaluation of Cell Models for Bronchopulmonary Dysplasia: Challenges and Prospects. Clin Respir J. 19 (8), e70118(2025).
  18. Lundell, L. R., et al. Endoscopic assessment of oesophagitis: clinical and functional correlates and further validation of the Los Angeles classification. Gut. 45 (2), 172-180 (1999).
  19. Wu, Y., Hussain, S. A., Luo, M. Columbianadin ameliorates experimental acute reflux esophagitis in rats via suppression of NF-κB pathway. Acta Cir Bras. 39, e391824(2024).
  20. Yao, P., Liao, X., Huang, J., Dang, Y., Jiang, H. Identifying causal relationships between gastroesophageal reflux and extraesophageal diseases: A Mendelian randomization study. Medicine (Baltimore). 103 (7), e37054(2024).
  21. Webb, J., et al. The microRNA Pathway of Macroalgae: Its Similarities and Differences to the Plant and Animal microRNA Pathways. Genes (Basel). 16 (4), 442(2025).
  22. Wu, Z., Yan, Y., Li, W., Li, Y., Yang, H. Expression Profile of miR-199a and Its Role in the Regulation of Intestinal Inflammation. Animals (Basel). 13 (12), 1979(2023).
  23. Wang, J., Liu, L. MiR-149-3p promotes the cisplatin resistance and EMT in ovarian cancer through downregulating TIMP2 and CDKN1A. J Ovarian Res. 14 (1), 165(2021).
  24. Wu, L., et al. Increased miR-214 expression suppresses cell migration and proliferation in Hirschsprung disease by interacting with PLAGL2. Pediatr Res. 86 (4), 460-470 (2019).
  25. Kim, S. Y., et al. Fexuprazan safeguards the esophagus from hydrochloric acid-induced damage by suppressing NLRP1/Caspase-1/GSDMD pyroptotic pathway. Front Immunol. 15, 1410904(2024).
  26. Liu, C., Gui, Y., Zeng, M., Zhou, Z. Effects of dexmedetomidine combined with intravenous general anesthesia on hemodynamics and inflammatory factors in patients undergoing laparoscopic colorectal cancer surgery. Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 19 (3), 391-398 (2024).
  27. Rjiba, K., et al. Disorders of sex development in Wolf-Hirschhorn syndrome: a genotype-phenotype correlation and MSX1 as candidate gene. Mol Cytogenet. 14 (1), 12(2021).
  28. Zhao, X., et al. Exploration of Potential Integrated Models of N6-Methyladenosine Immunity in Systemic Lupus Erythematosus by Bioinformatic Analyses. Front Immunol. 12, 752736(2021).
  29. Sharma, P., Kaushik, V., Saraya, A., Sharma, R. Aberrant Expression of FGFRL1 in Esophageal Cancer and Its Regulation by miR-107. Asian Pac J Cancer Prev. 24 (4), 1331-1341 (2023).
  30. Guo, Y., et al. Pancreatic cancer stem cell-derived exosomal miR-210 mediates macrophage M2 polarization and promotes gemcitabine resistance by targeting FGFRL1. Int Immunopharmacol. 127, 111407(2024).
  31. Jia, X., Zhao, Y., Li, H., Fan, S., Hu, H. Downregulation of MUC6 improves esophageal epithelial barrier dysfunction and inhibits epithelial-mesenchymal transition in reflux esophagitis. BMC Gastroenterol. 26 (1), 53(2026).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

Het 1AmiR 107RT qPCR

מאמרים קשורים