ניתוחים ציבוריים של קוהורטים וניסויים מבוססי תאי גליומה מזהים את MRC2 כסמן פרוגנוזה לקוי הקשור להגברת התפשטות, נדידה, פלישה ושינויים הקשורים ל-β-קטנין/EMT בגליומה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר מחקר
* These authors contributed equally
ניתוחים ציבוריים של קוהורטים וניסויים מבוססי תאי גליומה מזהים את MRC2 כסמן פרוגנוזה לקוי הקשור להגברת התפשטות, נדידה, פלישה ושינויים הקשורים ל-β-קטנין/EMT בגליומה.
גליומה נותרה ממאיר קטלני במערכת העצבים המרכזית, ועדיין נדרשים סמנים ביולוגיים נוספים המשפרים את הסטרטיפיקציה הפרוגנוסטית ומנחים חקירה טיפולית. מחקר זה העריך את קולטן המנוז C-type 2 (MRC2/Endo180) על ידי שילוב קבוצות טרנסקריפטומיות ציבוריות עם אימות במבחנה . פרופילי ביטוי והערות קליניות תואמות התקבלו מאטלס הגנום של הסרטן (TCGA) ומפרויקט ביטוי גנוטיפ-רקמה (GTEx) להשוואות בין גידולים לנורמות ולסקר פאן-סרטן, ואסוציאציות פרוגנוסטיות נבדקו בהמשך בקבוצת CGGA הסינית (CGGA). ביטוי MRC2 הוערך בקווי תאי גליומה באמצעות שעתוק הפוך, PCR כמותי (RT-qPCR) ואימונובלוטינג, ו-MRC2 יציב הוכח ב-MRC2 בתאי U87 ו-U251 באמצעות RNA קצר לנטיויראלי (shRNAs). צמיחת תאים וקלונוגניות הוערכו באמצעות בדיקות CCK-8 ויצירת מושבות, בעוד שהנדידה והפלישה הוערכו באמצעות בדיקות החדרה עם ממברנה נקבובית. סמנים הקשורים ל-CDK4, CDK6 ו-β-קטנין/מעבר אפיתלי–מזנכימי (EMT) נותחו באמצעות אימונובלוטינג. בין מערכי הנתונים, MRC2 היה גבוה בגליומה, והביטוי הגבוה יותר היה קשור להישרדות כוללת נמוכה יותר, הישרדות ספציפית למחלה וטווח ללא התקדמות. במבחנה, דלדול MRC2 הפחית התפשטות, קלונוגניות, נדידה ופלישה, בליווי ירידה ברמות חלבוני CDK4 ו-CDK6 ובשינויים בסמנים הקשורים ל-β-קטנין וב-EMT. יחד, ממצאים אלו תומכים ב-MRC2 כסמן ביולוגי פרוגנוסטי מועמד הקשור לפנוטיפים אגרסיביים של גליומה ומצדיקים מחקר מכני נוסף ו-in vivo .
גליומות מייצגות את הגידולים הראשוניים הנפוצים ביותר המתפתחים במערכת העצבים המרכזית ומהוות חלק משמעותי מניאופלזמות תוך-גולגולתיות 1,2. מחקרים אפידמיולוגיים מעריכים שכיחות בסדר גודל של כמה מקרים לכל 100,000 אנשים בשנה, עם הבדלים גאוגרפיים ומגדריים שדווחו בין אוכלוסיות 3,4. קלינית, גליומות משתרעות על פני מגוון רחב של התנהגות: גליומות בדרגה נמוכה יכולות לעבור מסלול ממושך, בעוד שמחלה בדרגה גבוהה — במיוחד גליובלסטומה — נשארת קטלנית במהירות עבור רוב המטופלים 5,6,7,8. סיווגי WHO מודרניים משלבים היסטולוגיה עם תכונות מולקולריות מרכזיות (למשל, מוטציה של IDH, שינוי פרומוטר TERT, מתילציה של פרומוטר MGMT, ומחיקה משותפת של 1p/19q), שמחדדים את האבחון ומנחים את הפרוגנוזה 9,10. למרות ניהול רב-מודלי המשלב ניתוח, רדיותרפיה וכימותרפיה, הישנות היא נפוצה, והתוצאות ארוכות הטווח של גידולים בדרגה גבוהה נשארות גרועות. לכן, זיהוי סמנים פרוגנוסטיים נוספים ופגיעויות ניתנות למטרה נותר עדיפות דחופה.
MRC2 (קולטן מנוז C-type 2; המכונה גם Endo180/CD280/uPARAP) הוא חבר טרנסממברנלי ממשפחת קולטני הלקטין מסוג C11. הוא מועשר בתחומים סטרומליים וחיסוניים, כגון פיברובלסטים ומאקרופאגים, ומשתתף במחלוקת מטריצה חוץ-תאית (ECM), בעיצוב מחדש הקשור לפיברוזיס, ובאינטראקציות בין גידול למיקרו-סביבה12,13. מבחינה מבנית, MRC2 מכיל אזור עשיר בציסטאין בקצה N, דומיין פיברונקטין מסוג II הקושר לקולגן, מספר דומיינים דמויי לקטין מסוג C, מקטע טרנסממברני, וזנב ציטופלזמי14,15. באמצעות הפנמת ועיצוב מחדש של קולגן, MRC2 יכול להקל על תנועתיות תאים ופלישה לרקמות, ו-MRC2 מוגבר נקשר להתנהגות אגרסיבית במספר סוגי סרטן, כולל שד, לבלב, ערמונית, מלנומה וגליובלסטומה 11,14,16,17,18 . עבודות קודמות גם מצביעות על קשרים בין MRC2 לתוכניות איתות פרו-פולשניות (למשל, מסלולים הקשורים ל-TGF-β), פעילות מטריצת מטאלופרוטאינאז ושינויים פנוטיפיים דמויי EMT, וכן תפקידים במצבים של פיברובלסטים ומאקרופאגים הקשורים לסרטן 17,18,19,20,21. עם זאת, המשמעות הקלינית של MRC2 בגליומה וההשלכות התפקודיות של חוסר ויסות MRC2 בתאי גליומה נותרות לא ברורות.
למרות ש-MRC2 היה מעורב בשינוי מטריצות חוץ-תאיות ובהתנהגות פולשנית במספר ממאירים, המשמעות הקלינית שלו בגליומה לא הוכחה באופן שיטתי בין קבוצות טרנסקריפטומיות עצמאיות, והשפעותיו הקשורות לפנוטיפ בתאי גליומה לא הוערכו במסגרת משולבת המשלבת ניתוח מערכי נתונים ציבוריים עם אימות תפקודי. לכן, מחקר זה הניח כי MRC2 קשור לתוצאות קליניות שליליות ולפנוטיפים ממאירים בגליומה. כדי להתמודד עם שאלה זו, שולבו סקרים פאן-סרטניים, אימות עצמאי של קבוצת גליומה וניסויי הדחפה יציבים בקווי תאי גליומה כדי להעריך את המשמעות הפרוגנוסטית של MRC2 והקשר שלו להתרבות רבות, נדידה, פלישה ושינויים בסמנים הקשורים ל-β-קטנין/EMT. מכיוון ש-MRC2 שייך למשפחת קולטני המנוז והתקדמות הגליומה מעוצבת גם היא על ידי מיקרו-סביבת הגידול, נכלל ניתוח חקר נוסף של ביטוי MRC1 לפי סטטוס IDH כדי לספק מידע הקשרי על הבדלים במערכת החיסון בין תת-סוגי גליומה.
החידוש בעבודה זו טמון בהערכה משולבת של MRC2 במאגרי גליומה ציבוריים ובבדיקות פונקציונליות מבחץ , ובכך מספקת ראיות קליניות וניסיוניות משלימות לרלוונטיותו בגליומה. בהשוואה לניתוחים חד-קבוצה או מחקרים על תאים בלבד, תהליך עבודה משולב זה מציע מספר יתרונות מעשיים. שילוב TCGA, GTEx ו-CGGA מאפשר אימות בין קבוצות ומפחית תלות במערך נתונים יחיד. בנוסף, שילוב ניתוחים ציבוריים-קוהורטים עם בדיקות הפלת תאי גליומה מקשר קשרים קליניים לראיות ברמת הפנוטיפ. לבסוף, השימוש בקריאות משלימות, כולל RT-qPCR, אימונובלוטינג, CCK-8, יצירת מושבות ובדיקות החדרת ממברנה נקבובית, מאפשר הערכה של שינויים שעתוקיים, ברמת חלבון, רבייה ושינויים הקשורים לתנועתיות במקביל. עיצוב המחקר הכולל וזרימת העבודה האנליטית מסוכמים באיור 1. ביחד, אסטרטגיה זו משפרת את החוסן והיכולת לפרשנות הביולוגית של הממצאים ביחס לגישות הביואינפורמטיקה בלבד או לבדיקות בודדות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מחקר זה השתמש במאגרי נתונים ציבוריים, לא מזוהים (TCGA, GTEx ו-CGGA) והקים קווי תאים מסחריים. לא היו מעורבים משתתפים אנושיים חדשים שגויסו, מידע מזוהה על מטופלים או דגימות שמקורן במטופל. כל הניתוחים בוצעו בהתאם להנחיות מוסדיות ובינלאומיות רלוונטיות לשימוש בנתונים זמינים לציבור. לכן, לא נדרשה אישור אתי מוסדי נוסף או הסכמה מדעת למחקר זה.
1. תהליכי עבודה ביואינפורמטיים ועיבוד נתונים מוקדם
פרופילי ביטוי גנים והערות קליניות תואמות התקבלו ממשאבים זמינים לציבור, כולל אטלס הגנום לסרטן (TCGA), פרויקט ביטוי גנוטיפ-רקמה (GTEx), ואטלס הגנום הסיני לגליומה (CGGA). מטריצות ביטוי ומטא-דאטה קלינית יובאו ל-R והתאמרו לפי מזהי המדגם. רשומות כפולות או לא תואמות הוסרו, ומדגמים ללא מידע הישרדות חיוני הוצאו מניתוחי הישרדות. ערכי הביטוי של MRC2 והמשתנים הקליניים-פתולוגיים המתאימים הוצאו לניתוחים בהמשך. להשוואות בין גידול לנורמליות, ביטוי MRC2 הושווה בין סוגי סרטן באמצעות נתוני TCGA בלבד כאשר רקמות תקינות תואמות היו זמינות, ובאמצעות נתוני TCGA–GTEx משולבים כאשר נדרשו ביקורת תקינה נוספת. בניתוחים ממוקדי גליומה, מטופלים בקבוצות TCGA-LGG ו-CGGA חולקו לקבוצות ביטוי גבוה ונמוך לפי רמת הביטוי החציונית של MRC2. לאחר מכן בוצעו ניתוח הישרדות קפלן-מאייר, ניתוח תכונות פעולה של מקלט תלוי זמן (ROC) ורגרסיית סיכונים פרופורציונליים של קוקס כדי להעריך את הרלוונטיות הפרוגנוסטית של MRC2. מודלים של קוקס כללו משתנים זמינים כגון גיל, מין, דרגת ארגון הבריאות העולמי ומשתנים קליניקופתולוגיים נוספים, בהתאם לשלמות הנתונים בכל קבוצה. ניתוחי תת-קבוצות בוצעו בהתאם למשתנים כגון גיל, תת-סוג היסטולוגי, דרגת WHO, מצב מוטציות IDH, מצב קודלציה של 1p/19q, ומידע הקשור לטיפול, כאשר זמין. האיורים נוצרו באמצעות זרימות עבודה סטנדרטיות של גרפטינג סטטיסטי ב-R וב-GraphPad Prism.
2. ניתוחי ביטוי והישרדות פאן-סרטניים
ביטוי MRC2 הושווה בין גידול לרקמות תקינות בסוגי סרטן באמצעות מערכי נתונים של TCGA ו-GTEx. ההבדלים הוצגו באמצעות תרשימי קופסה וסיכומו באמצעות תרשימי רדאר. ניתוחי רגרסיה של סיכונים פרופורציונליים בוצעו כדי להעריך קשרים בין ביטוי MRC2 להישרדות כוללת (OS), הישרדות ספציפית למחלה (DSS) ואינטרוול ללא התקדמות (PFI) בין סוגי סרטן. יחסי סיכון ורמות מובהקות מתאימות הוצגו באמצעות גרפים של יער ומפות חום.
3. אימות פרוגנוסטי וניתוחי תת-קבוצות בקבוצות גליומה
בקוהורט TCGA-LGG של גליומה בדרגה נמוכה (TCGA-LGG), החולים חולקו לקבוצות ביטוי MRC2 גבוה ונמוך. בוצעו ניתוחי הישרדות של קפלן–מאייר להשוואה בין OS, DSS ו-PFI בין קבוצות. נוצרו עקומות מאפיין תפעול מקלט תלויות זמן (ROC) כדי להעריך ביצועים חיזויים. בוצעו ניתוחי רגרסיה חד-משתניים ורב-משתניים של Cox כדי להעריך את הערך הפרוגנוסי העצמאי של MRC2. אימות חיצוני בוצע באמצעות מאגר הנתונים של CGGA גליומה, כולל ניתוח הישרדות קפלן–מאייר, ניתוח ROC ורגרסיית קוקס. ניתוחי תת-קבוצות נערכו להערכת ביטוי MRC2 במשתנים קליניים-פתולוגיים, כולל גיל, דרגת גידול, תת-סוג היסטולוגי, מצב מוטציה של IDH, מצב קודלציה של 1p/19q, ומשתנים הקשורים לטיפול.
4. ביטוי MRC1 בגליומות IDH-מוטנטיות לעומת IDH-wildtype
הקשר בין ביטוי MRC1 למצב מוטציות IDH הוערך באמצעות פלטפורמת האינטרנט GlioVis ומאגר הנתונים TCGA GBMLGG. המקרים חולקו על בסיס סטטוס IDH עם הערות לגליומות IDH-מוטנטיות ו-IDH-wildtype. ביטוי mRNA של MRC1 נשאלה בתוך מאגר הנתונים הנבחר, ורמות הביטוי בין שתי הקבוצות הושוו באמצעות פונקציית הניתוח הסטטיסטי המובנית של הפלטפורמה. התפלגויות ביטויים לפי קבוצות הוצגו כפי שנוצרו על ידי הפלטפורמה, והמובהקות הסטטיסטית הוגדרה כ-P < 0.05.
5. תרבית תאים
קווי תאים של גליומה אנושית ואסטרוציטים אנושיים תקינים התקבלו ממאגרי תאים מבוססים. התאים גודלו במדיום Eagle's Modified (DMEM) של Dulbecco, בתוספת 10% סרום בקר עוברי (FBS) ונשמרו בטמפרטורה של 37°C באינקובטור לח המכיל 5% CO₂ וכ-95% לחות יחסית. תאי U87 ו-U251 נבחרו לניסויי אובדן תפקוד, משום שסקר בסיסי על פני לוח תאי הגליומה שנבדק הראה כי שני קווי התאים הללו מבטאים רמות MRC2 גבוהות יחסית ולכן מתאימים לניתוחים פונקציונליים מבוססי knockdown.
6. הפלת MRC2 בלנטויראל
RNA קצרים (shRNAs) שכוונו ל-MRC2 ולבקרה שאינה מכוונת שוכפלו לווקטורים לנטיוויראלים. חלקיקי לנטיויראליים נוצרו על ידי קו-טרנספקציה של תאי HEK293T עם פלסמידים של העברה ופלסמידים ארוזים באמצעות תגובת טרנספקציה סטנדרטית. סופרנטנטים ויראליים נאספו ב-48 שעות ו-72 שעות לאחר הטרנספקציה, צנטריפוגה ב-2,100 × גרם למשך 5 דקות להסרת תאי אריזה ופסולת תאים, ולאחר מכן עברו דרך מסנן של 0.45 מיקרון לפני שימוש מיידי או אחסון בטמפרטורה של −80 מעלותצלזיוס 19. סופרנטנטים המכילים וירוסים שימשו מיד או אוחסנו בטמפרטורה של −80°C. נמנעו ממחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים. תאי גליומה נדבקו בחלקיקי לנטיויראל בנוכחות פוליברן. לאחר ההדבקה, נבחרו תאים עם פורומיצין כדי להקים קווי תאים יציבים של הפלה. הרצפים ששימשו היו כדלקמן: sh-MRC2-1: 5′-GAAATGAATGAGCAGCAAGAA-3′; sh-MRC2-2: 5′-CCGGTATTGCTATAAGGTGTT-3′; SH-NC: 5′-TTCTCCGAACGTGTGTCACGT-3′.
7. אימות של הפלת MRC2 באמצעות RT-qPCR ואימונובלוטינג
סך ה-RNA הופק באמצעות תגובת טריזול, ו-cDNA סונתז באמצעות ערכת שעתוק הפוך לפי הוראות היצרן. PCR כמותי בוצע באמצעות כימיה של SYBR Green בתנאי מחזור הבאים: דנאטורציה ראשונית ב-95 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, ואחריה 40 מחזורים של 95 מעלות צלזיוס ל-5 שניות ו-60 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות, עם ניתוח עקומת דיסוציאציה בסוף ההגברה. רצפי הפריימר היו כדלקמן: MRC2 קדימה, 5′-GGCAAGGACAAGAAGTGCGT-3′; הפוך MRC2, 5′-CTTTGGTGACGTGCTGCCTT-3′; חלוץ GAPDH, 5′-TCCACCCATGGCAATTCC-3′; והיפוך GAPDH, 5′-TCGCCCCACTTGATTTGG-3′. ביטוי mRNA יחסי חושב באמצעות שיטת Ct ההשוואתי (2^-ΔΔCt) עם GAPDH כבקרה פנימית20. אימונובלוטינג בוצע במקביל לאישור הפלת MRC2 ברמת החלבון. עבור RT-qPCR, נותחו שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים, וכל דגימה הופעלה בשלושה עותקים טכניים.
8. בדיקת התרבות תאים
התרבות התאים הוערכה באמצעות מבחן CCK-8. התאים נזרעו ללוחות של 96 בארות בצפיפות מתאימה ותורבו לתקופות הזמן המצוינות. בכל נקודת זמן נוסף תגובת CCK-8 לכל באר ודגרה לפי הוראות היצרן, ולאחר מכן נמדדה הספיגה ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט. לפחות שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים בוצעו.
9. מבחן היווצרות מושבה
התאים הוזרעו בצפיפות נמוכה ללוחות של שישה בארות וגודלו במשך 10–14 ימים. המושבות קיבעו ב-4% פרפורמלדהיד במשך 15 דקות בטמפרטורת החדר וצבועו ב-0.1% קריסטל סגול למשך 15 דקות. המושבות נשטפו עם מלח מפוזר פוספט (PBS), יובשו באוויר, ונספרו ידנית או באמצעות תוכנת ניתוח תמונה21. לפחות שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים בוצעו.
10. מבחני נדידת תאים ופלישה
נדידת תאים ופלישה הוערכו באמצעות בדיקות הכנסת ממברנה נקבוביות22. לבדיקות פלישה, ההכנסות העליונות צופו מראש בג'ל מטריצה חוץ-תאי; לבדיקות הגירה, השתמשו בהכנסות לא מצופות. תאים תלויים במדיום חופשי מסרום נוספו לתא העליון, וחומר המכיל סרום הונח בתא התחתון ככימואטרטקט. לאחר הדגירה, תאים לא נודדים על פני הממברנה העליונה הוסרו בעדינות באמצעות מטוש כותנה. תאים שהיגרו או פלשו למשטח התחתון קיבעו עם 4% פרפורמלדהיד למשך 15 דקות, צובעו ב-0.1% קריסטל סגול למשך 15 דקות, נשטפו במלח קר עם בופר פוספט, יובשו באוויר וצולמו תחת מיקרוסקופ הפוך בהגדלה של ×200. תאים נספרו בחמישה שדות מיקרוסקופיים שנבחרו באקראי בכל הכנסה. לפחות שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים בוצעו.
11. ניתוח כתם מערבי
התאים נבדקו בבופר RIPA עם תוספת מעכבי פרוטאז, וריכוז החלבון נקבע באמצעות מבחן BCA. כמויות שוות של חלבון כולל הופרדו על ידי SDS-PAGE והועברו לממברנות PVDF. הממברנות נחסמו בחלב דל שומן 5% למשך שעה בטמפרטורת החדר ודגרו בנוגדנים ראשוניים במהלך הלילה בטמפרטורה של 4°C. הנוגדנים הראשוניים והמדללים הפעילים הבאים שימשו ל-Western blotting: אנטי-MRC2 (1:5,000), אנטי-CDK4 (1:1,000), אנטי-CDK6 (1:2,000), אנטי-β-קטנין (1:5,000), אנטי-E-קדרין (1:10,000), אנטי-N-קדרין (1:3,000), ואנטי-β-אקטין (1:5,000). לאחר הכביסה, הממברנות דגרו עם נוגדנים משניים IgG נגד עכבר עם פרוקסידאז של חזרת או נוגדנים משניים נגד ארנב IgG (1:5,000) למשך שעה בטמפרטורת החדר. האותות הוצגו באמצעות כימיליומינסנציה, ועוצמות הרצועה נמדדו ונרמלו ל-β-אקטין. לפחות שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים בוצעו.
12. ניתוח סטטיסטי
ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות R ו-GraphPad Prism. עקומות ההישרדות הושוו באמצעות מבחן ה-log-rank. מודלים של רגרסיה לסיכונים פרופורציונליים של Cox שימשו לניתוחים חד-משתניים ורב-משתניים. בניסויים מבוססי תאים, הנתונים מוצגים כממוצע ± SD. לפני בדיקות פרמטריות, נורמליות הוערכה באמצעות מבחן שפירו–וילק. לנתונים המפוזרים באופן תקין, הוערכו הבדלים בין שתי קבוצות באמצעות מבחן הסטודנט t, והשוואות בין קבוצות מרובות בוצעו באמצעות ANOVA חד-כיווני. אם הנחות הנורמליות לא התקיימו, נעשה שימוש במבחנים הלא-פרמטריים המתאימים. ערכי P הותאמו לבדיקות מרובות באמצעות פרוצדורת שיעור גילוי שגוי Benjamini–Hochberg23,24. P דו-צדדי < 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
ביטוי פאן-סרטני ונוף פרוגנוסטי של MRC2
ניתוחים פאן-סרטניים בוצעו לראשונה כדי לאפיין את דפוס הביטוי והרלוונטיות הפרוגנוסטית של MRC2 בין ממאירות אנושיות. השוואות המבוססות על מאגרי TCGA ו-GTEx הראו כי ביטוי MRC2 היה שונה באופן משמעותי בין גידול לרקמות תקינות במספר סוגי סרטן (איור 2A, 2B). סיכום תרשים רדאר המחיש עוד יותר את השונות הרחבה בביטוי MRC2 בין סוגי סרטן (איור 2C). כדי להעריך האם ביטוי MR...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
טיפול סטנדרטי בגליומה מתבסס על כריתה בטוחה מקסימלית, ואחריה רדיותרפיה וכימותרפיה, בדרך כלל טמוזולומיד4. עם זאת, חדירה מפוזרת לעיתים קרובות מגבילה את ההסרה הכירורגית המלאה ותורמת להישנות בלתי נמנעת, במיוחד במחלה בדרגה גבוהה 3,25. מספר תכונות מולקולריות — כולל מתילציה של מקדם MGMT, מוטציה של IDH, מחיקה משותפת של 1p/19q ושינויים ב-EGFR — משמשות קלינית לפרוגנוזה ותכנון טיפול 26,27,28.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
המחברים מדווחים שאין אינטרסים מתחרים.
עבודה זו זכתה לתמיכה כספית מקרן המחקר למדעי הרפואה והטכנולוגיה של מחוז גואנגדונג (מס' A2024508), מתוכנית תחנת העבודה המומחים למדע וטכנולוגיה במחוז בבית החולים המרכזי של חואיג'ואו, ומפרויקט הכישרונות המובילים במדע וטכנולוגיה ויזמות בהוייז'ואו (מס' 2025EQ050012).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| נוגדן אנטי-CDK4 | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 11026-1-AP | נוגדן ראשי ל-Western blotting. RRID: AB_2078702. |
| נוגדן אנטי-CDK6 | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 66278-1-Ig | נוגדן ראשי ל-Western blotting. RRID: AB_2881661. |
| נוגדן אנטי-E-קדרין | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 20874-1-AP | נוגדן ראשי ל-Western blotting. RRID:AB_10697811. |
| נוגדן אנטי-MRC2 | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 86028-1-RR | נוגדן ראשי ל-Western blotting. RRID: AB_2879692. |
| נוגדן אנטי-N-קדרין | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 22018-1-AP | נוגדן ראשי ל-Western blotting. RRID:AB_2813891. |
| נוגדן אנטי-ובטא;-אקטין | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 66009-1-Ig | נוגדן בקרה טעינה עבור ווסטרן בלוטינג. RRID: AB_2687938. |
| נוגדן אנטי&בטא;-קטנין | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | 51067-2-AP | נוגדן ראשי ל-Western blotting. RRID: AB_2086128. |
| ערכת בדיקת חלבון BCA | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | P0012 | ערכת בדיקת חלבון BCA לקביעת ריכוז חלבון. |
| ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8) | מעבדות דוג'ינדו, יפן | CK04-500T | בדיקת חיוניות/התרבות של תאים. |
| מערכת הדמיה כימלומינסצנטית | יוביטק בע"מ, צרפת | מדריך מתקדם של Alliance Q9 | מערכת רכישת תמונה לזיהוי כתם מערבי. |
| חממת CO2 | ציוד מעבדה גנרי | לא צוין | אינקובטור CO2 המשמש לתרבית תאים בטמפרטורה 37 > C ו-5% CO2. |
| תמיסת קריסטל סגול (0.1%) | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | C0121-100 מ"ל | תמיסת צביעה בצבע קריסטל סגול בשימוש בריכוז עבודה של 0.1%. |
| DMEM, סוכר גבוה | Gibco, Thermo Fisher Scientific, ארה"ב | C11995500BT | מדיום בסיסי לתרבות תאי גליומה. |
| סרום בקר עוברי (FBS) | ExCell Bio, סין | FSP500 | תוסף סרום לתרבות תאים. |
| GlioVis | gliovis.bioinfo.cnio.es | לא רלוונטי | פלטפורמה מבוססת רשת להמחשה וניתוח של מערכי נתוני ביטוי גידולי מוח, במיוחד גליומות. |
| פריזמת GraphPad | GraphPad Software, ארה"ב | גרסה 10.4.0 | תוכנות לניתוח סטטיסטי וגרפים. RRID: SCR_002798. |
| HEK293T תאים | אוסף תרבות הטיפוס של האקדמיה הסינית למדעים, שנגחאי, סין | GNHu43 | קו תאי אריזה המשמש לייצור לנטיווירוס. RRID:CVCL_0063. |
| IgG נגד עכבר עזים עם HRP קונצוגה (H+L) | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | SA00001-1 | נוגדן משני ל-Western blotting. RRID: AB_2722565. |
| IgG נגד ארנב עזים עם HRP (H+L) | Proteintech Group, Inc., ארה"ב | SA00001-2 | נוגדן משני ל-Western blotting. RRID: AB_2722564. |
| אסטרוציטים אנושיים | אוסף תרבות הטיפוס של האקדמיה הסינית למדעים, שנגחאי, סין | לא זמין לציבור | אסטרוציטים אנושיים רגילים משמשים כאמצעי בקרה שאינם גידולים; מספר הקטלוג אינו זמין לציבור. |
| מיקרוסקופ הפוך | ציוד מעבדה גנרי | לא צוין | מיקרוסקופ הפוך המשמש לרכישת תמונות במבחני הגירה ופלישה. |
| מטריצת מאטריגל | קורנינג, ארה"ב | 354234 | מטריצת ממברנת בסיס המשמשת לציפוי תוספות לבדיקות פלישה. |
| קורא מיקרופלט | ציוד מעבדה גנרי | לא צוין | קורא מיקרופלט המשמש למדידת ספיגה ב-450 ננומטר במבחני CCK-8. |
| ערכת הכנת ג'ל PAGE, 10% | אפיזימה, סין | PG212 | ערכת הכנת ג'ל SDS-PAGE. |
| ערכת הכנת ג'ל של PAGE, 7.5% | אפיזימה, סין | PG111 | ערכת הכנת ג'ל SDS-PAGE. |
| תמיסת פאראפורמלדהיד (4%) | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | P0099-100 מ"ל | 4% פאראפורמלדהיד מקבע ליצירת מושבות ובדיקות נדידה/פלישה. |
| תמיסת פניצילין-סטרפטומיצין | Gibco, Thermo Fisher Scientific, ארה"ב | 15140163 | תוסף אנטיביוטיקה לתרבות תאים. |
| פוליברן | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | C0351-1 מ"ל | תמיסת הקסדימטרין ברומיד (10 מ"ג/מ"ל) משמשת להקלה על העברת לנטיוויראל. |
| סמן חלבון מודבק מראש | Elabscience, סין | E-IR-R331 | סמן משקל מולקולרי של חלבון. |
| ערכת ריאגנט PrimeScript RT | Takara Bio Inc., יפן | RR047A | ערכת שעתוק הפוך לסינתזת cDNA. |
| פורומיצין | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | ST551-10 מ"ג | פורומיצין דיהידרוכלוריד משמש לבחירת תאי נוקאאוט יציבים. |
| ממברנת PVDF | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | FFP20 | ממברנת PVDF הידרופילית (0.45 ומיקרו; m) להעברת כתם מערבי. |
| R | קרן R למחשוב סטטיסטי, אוסטריה | גרסה 4.5.1 | סביבת מחשוב סטטיסטית המשמשת לניתוחים ביואינפורמטיים. RRID: SCR_001905. |
| מאגר ניתוק RIPA | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | P0013B | RIPA ליזיס (חזק) להפקת חלבון. |
| בופר טעינה SDS-PAGE (5×) | ביוטכנולוגיה ביוטיים, סין | P0015L | בופר טעינת דגימות חלבון. |
| SYBR Premix Ex Taq II | Takara Bio Inc., יפן | RR066A | qPCR master mix. |
| הכנסות טרנסוול, 8.0 ומיקרו; גודל נקבוביות M | קורנינג, ארה"ב | 3422 | תוספות תרבית תאים עם רמה 8.0 ומיקרו; ממברנת פוליקרבונט בגודל נקבוביות; פורמט סטנדרטי של 24 בארות לבדיקות הגירה ופלישה. |
| ריאגנט טריזול | Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, ארה"ב | 10296010CN | תגובת חילוץ RNA. |
| תאי גליומה U251 | האוסף הלאומי של תרביות תאים מאומתות, סין | SCSP-559 | קו תאי גליומה אנושי המשמש לבדיקות הנקה ותפקודיות. RRID:CVCL_0021. |
| תאי גליומה U87 | האוסף הלאומי של תרביות תאים מאומתות, סין | SCSP-5432 | קו תאי גליומה אנושי המשמש לבדיקות הנקה ותפקודיות. RRID:CVCL_0022. |