הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר מחקר

MiR-483-3p כסמן פרוגנוסטי בסרטן ריאות לא קטן: דיכוי התקדמות הגידול באמצעות ירידה ב-KIF3B

143 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/71006

⸱

5 ביוני 2026

 , 
1Department of Respiratory and Critical Care Medicine, The Affiliated Taizhou People's Hospital of Nanjing Medical University, Taizhou School of Clinical Medicine, Nanjing Medical University, 2Department of Oncology, The Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University

במאמר זה

סיכום

ירידה ברגולציה של miR-483-3p היא סימן פרוגנוסטי גרוע ב-NSCLC. הביטוי המופרז של miR-483-3p מדכא את הפנוטיפים הממאירים של תאי NSCLC, שתפקידם התהפך בשל ביטוי יתר של KIF3B.

תקציר

מיקרו-RNA ממלאים תפקידים נרחבים בסרטן ריאות לא תאים קטנים (NSCLC). כדי לחקור את הערך הקליני של miR-483-3p ב-NSCLC ואת היעד המולקולרי שלו, גויסו למחקר זה 350 מטופלי NSCLC. תוצאות RT-qPCR הראו כי הביטוי ההיסטולוגי של miR-483-3p בגידול ירד בהדרגה ככל ששלב הגרורות של הצומת (TNM) גדל. עקומת מאפיין הפעולה של המקלט (ROC) הראתה כי רמת miR-483-3p היסטולוגית יכולה להבחין ביעילות בין מטופלי NSCLC עם שלב TNM גבוה (III) לבין אלו עם שלב נמוך (I+II) (שטח מתחת לעקומת ROC = 0.869). עקומת קפלן-מאייר הראתה כי מטופלי NSCLC עם ביטוי נמוך ב-miR-483-3p הראו שיעור הישרדות כללי נמוך יותר במשך 5 שנים. לאחר התאמת גורמים מבלבלים נוספים, ניתוח קוקס רב-משתני זיהה עוד יותר את miR-483-3p כגורם הגנה עצמאי להישרדות NSCLC. מבחינה מכנית, בדיקת RNA pull-down הראתה כי העלאת ה-riR-483-3p הייתה מוקפת ב-kif3B mRNA ועיכבה את ביטואו, ובכך דיכאה את הפנוטיפים הממאירים של תאי NSCLC וגרמה לאפופטוזיס. לסיכום, ירידה בוויסות של miR-483-3p משמשת כסמן פרוגנוסטי חלש ב-NSCLC, ועלול להשפיע על התקדמות הסרטן על ידי ויסות שלילי של KIF3B.

מבוא

מבין מקרי המוות הקשורים לסרטן, סרטן ריאות לא תאים קטנים (NSCLC) הוא אחד הגורמים המרכזיים. שיעור התמותה הגבוה מיוחס בעיקר לצמיחה אגרסיבית של גידולים, גרורות מוקדמות, והתפתחות עמידות נרכשת 1,2,3. למרות ההתקדמות באסטרטגיות הקליניות הנוכחיות, התחזית הכוללת עבור מטופלי NSCLC נותרה חלשה 4,5,6. בנוסף לאתגרים הביולוגיים, מטופלי NSCLC חווים לעיתים נטל תסמינים כבד, כולל כאב, קוצר נשימה, עייפות ומצוקה נפשית, אשר פוגעים משמעותית באיכות חייהם ומסבכים את הניהול הקליני. טיפול סיעודי אפקטיבי—כגון הערכת תסמינים, חינוך מטופלים, תמיכה פסיכוסוציאלית ותיאום טיפול רב-תחומי—ממלא תפקיד מרכזי בשיפור תוצאות המטופלים ובשמירה על הטיפול. לכן, חקירה מעמיקה של המנגנונים המולקולריים המרכזיים המניעים את התפתחות והתקדמות NSCLC היא בעלת חשיבות עליונה לפיתוח סמנים ביולוגיים פרוגנוסטיים חדשים ואסטרטגיות טיפוליות יעילות, וכן להנחיית התערבויות סיעודיות ממוקדות המטפלות הן בצרכים ממוקדי מחלה והן בצרכים ממוקדי מטופל.

מיקרו-RNA (miRNAs) דווחו באופן נרחב כמסדיר ביטוי גנים על ידי עיכוב תרגום mRNA המטרה או קידום התדרדרותם ברמה7 לאחר השעתוק. מחקרים נרחבים מראים כי ל-miRNA יש תפקיד רגולטורי חיוני בסוגי סרטן שונים, כולל NSCLC. הדיסרווילציה שלהם קשורה קשר הדוק לפנוטיפ הממאיר של תאי הגידול ולעמידות לכימותרפיה 7,8,9,10,11. לכן, זיהוי miRNA שמתבטאים באופן חריג ב-NSCLC ובעלי תפקידים פונקציונליים משמעותיים הפך לנושא חם במחקר הגידולים הנוכחי. הניתוח הביואינפורמטי הראשוני שלנו חשף ירידה עקבית ב-miR-483-3p הן בחולי NSCLC והן בקווי תאים עמידים לתרופות, מה שמרמז על קשר פוטנציאלי להתקדמות שלילית של המחלה. לכן, מחקר זה מתמקד ב-miR-483-3p כדי לחקור את תפקידו ב-NSCLC. הראיות הקיימות מצביעות על כך ש-miR-483-3p פועל כגן מדכא גידולים בסוגי סרטן אנושיים שונים 12,13,14,15, אשר ההשתקה שלהם נחשבת קשורה לעמידות לגפיטיניב ב-NSCLC16. עם זאת, דפוס הביטוי הספציפי שלו ב-NSCLC, ערכו הפרוגנוסטי הקליני והמנגנונים המולקולריים הבסיסיים עדיין אינם מובנים במלואם.

מטרת המחקר הייתה להבהיר באופן שיטתי את המשמעות הקלינית והתפקודים הביולוגיים של miR-483-3p ב-NSCLC, ולהבהיר את תפקיד חבר משפחת הקינסין היעד במורד הזרם 3B (KIF3B). כדי להשיג זאת, ניתחנו תחילה את ביטויו בדגימות רקמה קליניות ואת הקורלציה עם המאפיינים הקליניים-פתולוגיים והפרוגנוזה של המטופלים. בהמשך, נערכו בדיקות תפקודיות חוץ-גופיות לחקר השפעות miR-483-3p על תפקודי תאי NSCLC. יתרה מזאת, זיהינו את KIF3B כגן יעד מרכזי במורד הזרם של miR-483-3p באמצעות ניסויים בחיזוי ביואינפורמטיקה וביולוגיה מולקולרית, ואישרנו את הקשר הרגולטורי באמצעות בדיקות חילוץ פונקציונליות. ביטוי גבוה של KIF3B קשור להגברת התפשטות, נדידה מוגברת ועמידות לכימותרפיה בתאי סרטן 17,18,19,20,21,22, אך תפקידו התפקודי ב-NSCLC נותר לא ברור. למיטב ידיעתנו, מחקר זה הוא הראשון שמאופיין את תפקידו וחשיבות הקלינית של ציר miR-483-3p/KIF3B ב-NSCLC משלוש נקודות מבט — פרוגנוזה קלינית, זיהוי גנים מטרה ומנגנונים תפקודיים — ובכך עשוי לספק תובנות חדשות להערכת פרוגנוזה של NSCLC וטיפול ממוקד.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

ועדת האתיקה של בית החולים השני המסונף של אוניברסיטת נאנג'ינג אישרה מחקר זה. העקרונות הבסיסיים של הצהרת הלסינקי יושמו בעקביות לאורך כל תהליך המחקר. התקבלה הסכמה מדעת בכתב מכל המשתתפים הכלולים במחקר. מידע מפורט על כל החומרים והתגובות סופק בטבלת החומרים.

ניתוח ביואינפורמטיקה:

מסד הנתונים Gene Expression Omnibus (www.ncbi.nlm.nih.gov) הוחל לחיפוש במאגרי הנתונים הקשורים ל-NSCLC. GSE171517 ניתוח RNA לא מקודד המבוסס על דגימות סרום של מטופלי NSCLC וביקורת בריאה. GSE110815 ניתוח מערך RNA לא מקודד המתבצע על תאי NSCLC עמידים לגפיטיניב ורגישים. ה-miRNAs המובעים באופן דיפרנציאלי בשני מערכי הנתונים הללו נבדקו על ידי קביעת סף של |log2FC| ≥ 2, עמוד < 0.05. למרות שמאגרי נתונים אלו מגיעים מאזורים שונים (סרום, קווי תאים), השתמשנו באסטרטגיה משלימה: miRNA שמקורם בסרום לפוטנציאל ביומרקר לא פולשני, ו-miRNA עמידים לתרופות שמקורם בקו תאים לרלוונטיות תפקודית להתקדמות ועמידות. החיתוך מינה את miR-483-3p לאימות רקמות, בהנחה שדיסרגולציה חוצה תאים מצביעה על רלוונטיות ביולוגית איתנה ל-NSCLC.

מטרות פוטנציאליות של miR-483-3p נחזו בו-זמנית במאגרי הנתונים miRDB (https://mirdb.org/custom.html) ו-starbase (https://rnasysu.com/encori/index.php). סף הסינון בשני מסדי הנתונים הללו היה Target Score ≥ 60 ו-TDMDScore ≥ 1, בהתאמה. לאחר מכן, נעשה שימוש בפלטפורמת ניתוח ביואינפורמטיקה (www.bioinformatics.com.cn) לניתוח GO באמצעות הצטלבות המטרות הללו.

הכללת מדגם קליני:

מחקר זה הוא מחקר קוהורט תצפיתי רטרוספקטיבי המבוסס על דגימות NSCLC שנלקחו בניתוח. מחקר זה כלל 350 מטופלי NSCLC שעברו טיפול כירורגי בבית החולים, כולל 96 מטופלים עם מחלת גרורות בלוטות גידול (TNM) שלב I, 96 מטופלים עם מחלת שלב II, ו-158 מטופלים עם מחלת שלב III. המאפיינים הקליניים המפורטים שלהם הוצגו בטבלה 1. כל המטופלים הללו אובחנו עם NSCLC באמצעות בדיקה היסטולוגית. קריטריוני ההדרה כוללים פגיעה בתפקוד הלב, הכבד או הכליה, זיהומים פעילים או מחלות אוטואימוניות, הפרעות פסיכיאטריות חמורות או פגיעה קוגניטיבית, תיעוד קליני חסר או לא שלם, ואי קבלת הסכמה מדעת מהמטופלים. הניתוח הקליני בוצע על ידי איסוף דגימות רקמת הגידול ומצב ההישרדות שלהם בתוך חמש שנים לאחר האבחנה. שיטת המעקב היא כדלקמן: כל המטופלים עברו מעקב ממועד הניתוח ועד מותם, אובדן המעקב או סיום המחקר. בשנה הראשונה נערך מעקב כל 3 חודשים. לאחר מכן, הוא בוצע כל 6 חודשים באמצעות בדיקות אמבולטוריות וראיונות טלפוניים. בכל מעקב נרשם מידע על מצב הישרדות, סיבת המוות, הישנות המחלה והטיפול שבא לאחר מכן. תקופת ההישרדות הכוללת הוגדרה כתקופה ממועד הניתוח ועד לתאריך המוות מכל סיבה שהיא.

עיבוד תאים:

BEAS-2B, קו תאים אפיתל ריאתי תקין של האדם, תורב ב-DMEM שכלל 10% סרום בקר עוברי (FBS) ו-1% פניצילין/סטרפטומיצין (P/S). כל קווי התאים של NSCLC (HCC827, H1299, H520, A549) גודלו במדיום גידול ייעודי שסופק על ידי אותו ספק. הניסוח הבסיסי של המדיה המיוחדת ל-HCC827, H1299 ו-H520 הוא RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S, ועבור A549 הוא F-12K של Ham + 10% FBS + 1% P/S. תאים מוקפאים מופשרים במהירות באמבט מים בטמפרטורה של 37°C, מוצבים בצנטריפוגה להסרת מדיום השימור הקריופרי, ומועברים לתלייה חדשה בתרבית. כאשר התאים מגיעים ל-90% מפגש תגובה, הם מתעכלים עם 0.25% TRYPSIN-EDTA ומועברים ביחס של 1:3. כל קווי התאים אומתו באמצעות ניתוח STR (קובץ משלים 1), והם נקיים מזיהום מיקופלסמה. כל הניסויים במבחנה השתמשו בתאים מהדור הרביעי ועד העשירי.

האגוניסט miR-483-3p והבקרה השלילית שלו (אגוניסט-NC), ה-RNA הקטן והמפריע של KIF3B (si-KIF3B) והבקרה השלילית שלו (si-NC), וכן וקטור הביטוי היתר של KIF3B (oe-KIF3B) והבקרה הריקה שלו (oe-NC) הועברו באמצעות תגובת טרנספקציה. ריכוז העבודה של האגוניסט miR-483-3p או אגוניסט NC היה 100 ננומטר, וכמות הפלסמיד oe-KIF3B הייתה 2.5 מיקרוגרם (לוח 6 בארות). התאים נקטפו 48 שעות לאחר ההעברה לניסויים הבאים.

RT-qPCR:

סך ה-RNA בדגימות רקמת הגידול ובתאים הוצא באמצעות תגובת טריזול. ה-cDNA המועתק הפוך הוכן באמצעות ערכת תגובת RT, ולאחר מכן בוצע qPCR על מערכת 7500 Fast RT-PCR באמצעות SYBR Green Pro Taq HS Premix. הביטוי היחסי של miR-483-3p ו-KIF3B נורמל באמצעות מערכת ניקיון U6 ו-GAPDH באמצעות שיטת 2-ΔΔCT . רצפי הפריימרים המתאימים הם כדלקמן:

miR-483-3p (F), 5'-ACACTCCAGCTGGGTCACTCTCCTCCTCCTCC-3'

miR-483-3p (R), 5'-CTCAACTGGTGTGTGTGTGGGAGTCGGCAATTCAGTGAGAGAGGG-3'

KIF3B (F), 5'-ATCCTGGAGCAGAAACGACGAGG-3'

KIF3B (R), 5'-GTTCCAAGGTCTCCTCATCG-3'

U6 (F), 5'-ATGTTCCAGTATGACTTA-3'

U6 (R), 5'-ATGTTCCAGTATGACTTA-3'

GAPDH (F), 5'-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3'

GAPDH (R), 5'-CCATCCAATCGGTAGTAGCG-3'

RT-qPCR בוצע עם שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים.

כחיות תאים:

תאי HCC827 (3000 תאים לבאר) ו-A549 (2000 תאים לבאר), עם או בלי טרנספקציה, הוזרעו ללוח של 96 בארות לתקופות תרבית משתנות. לאחר שהתאים נצמדו לפני השטח, הוערכה עמידות התאים בנקודות זמן מסוימות בבארות ייעודיות. במיוחד, נוספו לבארות 10 מיקרוליטר של ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8) ו-90 מיקרוליטר של מדיום לדגירה של 2 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. הספיגה של כל באר נמדדה לאחר מכן ב-450 ננומטר באמצעות קורא מיקרופלט. חיוניות התאים בוצעה באמצעות שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים.

בדיקת טרנסוול:

מכשיר תא טרנסוול מצופה מטריצה או לא מצופה ממברנת הבסיס (8 מיקרון) שימש לבדיקת פלישה/נדידה. לאחר שהחדר העליון נזרע בתאי NSCLC שהועברו (8 × 10,4, 500 מיקרוליטר), והתא התחתון מולא ב-700 מיקרוליטר DMEM (10% FBS). בוצעה דגירה של 24 שעות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. לאחר שהתאים בשכבה העליונה של ממברנת התא נוקו בעדינות באמצעות מטלית כותנה, התאים על פני השטח התחתונים של הממברנה קיבעו ב-4% פרפורמלדהיד למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר, ואז צובעו בתמיסת קריסטל סגולת 0.1% למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שטיפה קצרה במי ברז זורמים להסרת כתמים עודפים. התאים המועברים נספרו ידנית באמצעות מיקרוסקופ אופטי. לכל תא טרנסוול נבחרו באקראי שלושה שדות ראייה לא חופפים, ומספר התאים המוכתמים בכל שדה נספר. לאחר מכן, חושב ספירת התאים הממוצעת. ספירה זו בוצעה על ידי שני חוקרים עצמאיים שלא היו מודעים לתנאי הניסוי, והערכים הממוצעים שהתקבלו שימשו לניתוח סטטיסטי. בדיקת הטרנסוול בוצעה עם שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים.

זיהוי אפופטוזיס תאים

ערכת צביעת Annexin V-FITC/PI שימשה לזיהוי אפופטוזיס תאי NSCLC. בקצרה, הוכן תחילה מתלה המכיל 6 × 104 תאים באמצעות 195 מיקרוליטר של בופר קישור Annexin V-FITC. לאחר מכן נוספו Annexin V-FITC (5 מיקרוליטר) ותמיסת צביעת PI (10 מיקרוליטר) ברצף לדגירה של 20 דקות בטמפרטורת החדר בחושך. לאחר סיום הדגירה, ציטומטר הזרימה שימש מיד לזיהוי התאים הנבדקים. לכל דגימה נרכשו 10,000 אירועים. אסטרטגיית השער הייתה כדלקמן: תחילה תאים הוסגרו ב-FSC-A מול SSC-A כדי להוציא פסולת, ואחריה שער סינגלט ב-FSC-A מול FSC-H. תאים אפופטוטיים זוהו לאחר מכן בגרפים של Annexin V-FITC לעומת PI dot. הרבעים נקבעו באמצעות בקרות לא מוכתמות וחד-צבועות. אחוז האפופטוזיס חושב כסכום התאים האפופטוטיים המוקדמים (Annexin V⁺/PI⁻) והאפופטוטיים המאוחרים (Annexin V⁺/PI⁺). זיהוי אפופטוזיס תאים בוצע באמצעות שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים.

משיכת RNA למטה

המקטע של ה-mRNA של KIF3B (KIF3B/NM004798.4/NP004789.1: 32334713–32334791, 5'-AGAAATCTCTGTCACCTTCTGCCTGCCCTTGGTTCCTGAATGAATGAATGCTTGGTTTTATATATGAAGGAGTGATCCT-3', 78 nt) סונתז במבחנה וסומן בביוטין באמצעות ערכת RNA 3' End Desthiobiotinylation. לאחר שתמציות התא נדגרו עם mRNA מסומן בביוטין KIF3B למשך 1.5 שעות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס, נוספו חרוזי מגנטיות של סטרפטווידין לדגירה של 2 שעות בטמפרטורת החדר. לבסוף, רמת miR-483-3p בכל תגובה זוהתה על ידי RT-qPCR, עם שלושה שכפולים ביולוגיים עצמאיים.

ניתוח סטטיסטי

המשתנים הרציפים במחקר זה הוצגו כסטיית תקן ממוצעת ± (ממוצע ± SD), בעוד שהנתונים הקטגוריים הוצגו כספירה. תוכנת ניתוח סטטיסטית מתאימה שימשה לניתוח סטטיסטי. ANOVA חד-כיווני/דו-כיווני שימש לניתוח נתונים ניסיוניים, ואחריו מבחן פוסט-הוק של טוקי. p < 0.05 נחשב למובהק סטטיסטית.

בוצע ניתוח עקומת מאפיין פעולה של מקלט (ROC) כדי לקבוע את יכולת הביטוי miR-483-3p להבחין בין מטופלי NSCLC עם שלב גבוה (III) לבין אלו עם סיווג TNM בשלב נמוך (I + II). מדד יודן (רגישות + ספציפיות – 1) שימש לזיהוי ערך החיתוך שמקסם את האיזון בין רגישות לספציפיות. השטח מתחת לעקומה (AUC) חושב כדי להעריך את יכולת ההבחנה הכוללת של ביטוי miR-483-3p. AUC > 0.7 נחשב למקובל. כל ניתוחי ROC בוצעו באמצעות GraphPad Prism.

לניתוח הישרדות, שיטת קפלן-מאייר שימשה להערכת עקומות הישרדות כוללות. מבחן ה-log-rank יושם להשוואת התפלגויות הישרדות בין קבוצות (miR-483-3p קבוצות בעלות ביטוי גבוה לעומת נמוך). עקומות קפלן-מאייר צוירו עם רווח אמון (CI) של 95%. במודל הרגרסיה של סיכונים פרופורציונליים של קוקס הרב-משתני, יושמה אסטרטגיית בחירת משתנים הבאה: בוצעה תחילה ניתוח חד-משתני לכל משתנה מועמד. משתנים עם ערך p < 0.10 בניתוח חד-משתני נלקחו בחשבון כמנבאים פוטנציאליים ובהמשך הוכנסו למודל הרגרסיה הרב-משתני של קוקס. הניתוח הרב-משתני בוצע באמצעות שיטת בחירה קדימה (מותנית) בהתבסס על מבחן יחס ההסתברות, כאשר קריטריוני הכניסה וההסרה נקבעו ב-p < 0.05 ו-p > 0.10, בהתאמה. הנחת הסיכונים הפרופורציונליים אושרה עבור כל משתנה באמצעות שאריות שונפלד (p > 0.05 הצביעו על כך שאין הפרה). התוצאות דווחו כיחסי סיכון (HR) עם רווח סמך של 95%. כל המבחנים היו דו-צדדיים, וערך p < 0.05 נחשב מובהק סטטיסטית אלא אם צוין אחרת.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

ירידה ב-miR-483-3p מייצג פרוגנוזה לקויה ב-NSCLC

דיאגרמת ון (איור משלים 1) מצביעה על כך ש-miR-483-3p נראה מופחת הן בדגימות סרום של חולי NSCLC והן בקווי תאים עמידים לכימותרפיה. ניתוח ANOVA חד-כיווני הראה כי ביטוי miR-483-3p בגידול ירד בהדרגה עם עלייה בשלב TNM (איור 1A). ניתוח עקומת ROC בוצע כדי להעריך את דיוק ביטוי miR-483-3p בהבחנה בין מטופלים עם שלב גבוה (III) לבין אלו עם סיווג T...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

מחקר זה חקר באופן שיטתי את תפקיד ה-miR-483-3p בדיכוי גידולי NSCLC והמנגנון הבסיסי שלהם באמצעות ניתוח דגימות קליני וחקר מנגנונים מולקולריים. מטרת המחקר הייתה כפולה: (1) לקבוע האם miR-483-3p משמש כסמן פרוגנוסטי עצמאי ב-NSCLC, ו-(2) להבהיר את המנגנון המולקולרי שבאמצעותו miR-483-3p עשוי לדכא פנוטיפים ממאירים באמצעות מיקוד ב-KIF3B. ממצאינו מצביעים על הערך הקליני של miR-483-3p כסמן פרוגנוסטי עצמאי ועשויים לסייע בהבהרת המסלול המולקולרי שלו להשפעה על פנוטיפים ממאירים של גידול על ידי מיקוד ב-KIF3...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

למחברים אין מה לחשוף.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
0.1% קריסטל סגולסולארביו/סיןG1064
0.25% trypsin-EDTAGibco/USA25200056
4% פאראפורמלדהידביוטיים/סיןP0099
מערכת RT-PCR מהירה 7500מערכות ביולוגיות יישומיות/ארה"ב4351106
A549פרוסל/סיןCL-0016
מדיום ספציפי ל-A549פרוסל/סיןCM-0016
ערכת צביעת ANNEXIN V-FITC/PIביוטיים/סיןC1062S
BEAS-2BSTEM RECELL/סיןSTM-CL-5102
ערכת ספירת תאים-8 (CCK-8)סולארביו/סיןCA1210
מדיום DMEMמיילוןביו/סיןPWL003
סרום בקר עובריGibco/USAA5256701
תוכנת GraphPad Prism  GraphPadגרסה 7.0
H1299פרוסל/סיןCL-0165
מדיום ספציפי ל-H1299פרוסל/סיןCM-0165
H520פרוסל/סיןCL-0402
מדיום ספציפי ל-H520פרוסל/סיןCM-0402
HCC827פרוסל/סיןCL-0094
מדיום ספציפי ל-HCC827פרוסל/סיןCM-0094
mRNA KIF3BGenscript Biotech/סיןמותאם אישית
תגובת Lipo6000ביוטיים/סיןC0526
miR-483-3p אגוניסטים/אגוניסטים-NCMedChemExpress/USAHY-R01451A 
oe-KIF3B/oe-NCריבוביו/סיןמותאם אישית
פניצילין/סטרפטומיציןסולארביו/סיןP1400
פירס RNA 3' ערכת End Desthiobiotinylationתרמו פישר סיינטיפיק/USA20163
ערכת ריאגנט PrimeScript RT (זמן אמת מושלם)טאקארה/יפןRR037A
si-KIF3B/si-NCריבוביו/סיןמותאם אישית
SPSS IBMגרסה 23.0
חרוזים מגנטיים של סטרפטווידיןניו אינגלנד ביולאבס/ארה"בS1420S
SYBR Green  Pro Taq  HS Premixביולוגיה מדויקת/סיןAG11701
תא טרנסוולקורנינג/ארה"ב3428
ריאגנט טריזולInvitrogen/USA15596026CN

מקורות

  1. Lee, J. W., et al. Characterization of chemoresistant human non-small cell lung cancer cells by metabolic and lipidomic profiling. Metabolomics. 19 (9), 80(2023).
  2. Ziolkowska-Suchanek, I., Rozwadowska, N. Advancements in gene therapy for non-small cell lung cancer: current approaches and future prospects. Genes Basel. 16 (5), 569(2025).
  3. Zhang, W., et al. Investigating the mechanism of beta-elemene-mediated LINC00511 modulation to suppress cisplatin resistance in lung cancer. J Vis Exp. (222), e68825(2025).
  4. Miller, M., Hanna, N. Advances in systemic therapy for non-small cell lung cancer. BMJ. 375, n2363(2021).
  5. Qian, D., et al. Potentially functional genetic variants in the complement-related immunity gene-set are associated with non-small cell lung cancer survival. Int J Cancer. 144 (8), 1867-1876 (2019).
  6. Liu, Y., Sun, Y., Chen, N. A nursing intervention combining case management and CBT for postoperative NSCLC patients: effects on anxiety, depression, and quality of life. J Vis Exp. (228), e69622(2026).
  7. Mao, X., Peng, S., Lu, Y., Song, L. Regulatory functions of microRNAs in cancer stem cells: mechanism, facts, and perspectives. Cells. 14 (14), 1073(2025).
  8. Hassanein, S. S., Ibrahim, S. A., Abdel-Mawgood, A. L. Cell behavior of non-small cell lung cancer is at EGFR and microRNAs hands. Int J Mol Sci. 22 (22), 12496(2021).
  9. He, B., et al. miRNA-based biomarkers, therapies, and resistance in cancer. Int J Biol Sci. 16 (14), 2628-2647 (2020).
  10. Salunkhe, S. S., Ghatage, T., Prabhakar, B. S. Multi-oncogene targeting in cancer therapy: a miRNA-driven pharmacological approach. Biochem Pharmacol. 242, 117417(2025).
  11. Samson, J. S., Parvathi, V. D. Prospects of microRNAs as therapeutic biomarkers in non-small cell lung cancer. Med Oncol. 40 (12), 345(2023).
  12. Li, W., et al. Curcumin inhibits prostate cancer by upregulating miR-483-3p and inhibiting UBE2C. J Biochem Mol Toxicol. 38 (2), e23645(2024).
  13. Liang, H., et al. MiR-483-3p regulates oxaliplatin resistance by targeting FAM171B in human colorectal cancer cells. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 47 (1), 725-736 (2019).
  14. Menbari, M. N., et al. miR-483-3p suppresses the proliferation and progression of human triple negative breast cancer cells by targeting the HDAC8 oncogene. J Cell Physiol. 235 (3), 2631-2642 (2020).
  15. Wu, W., et al. circZNF609 promotes the proliferation and migration of gastric cancer by sponging miR-483-3p and regulating CDK6. Onco Targets Ther. 12, 8197-8205 (2019).
  16. Yue, J., et al. Epigenetic silencing of miR-483-3p promotes acquired gefitinib resistance and EMT in EGFR-mutant NSCLC by targeting integrin beta3. Oncogene. 37 (31), 4300-4312 (2018).
  17. Gu, R., Li, X., Yan, X., Feng, Z., Hu, A. Circular RNA circ_0032462 enhances osteosarcoma cell progression by promoting KIF3B expression. Technol Cancer Res Treat. 19, 1533033820943217(2020).
  18. He, Z. C., Zhao, J. J., Yan, T. miR-127-3p inhibits cell stemness and docetaxel resistance in triple-negative breast cancer by targeting KIF3B. Kaohsiung J Med Sci. 42 (3), e70113(2025).
  19. Liu, Z. H., Dong, S. X., Jia, J. H., Zhang, Z. L., Zhen, Z. G. KIF3B promotes the proliferation of pancreatic cancer. Cancer Biother Radiopharm. 34 (6), 355-361 (2019).
  20. Wang, C., et al. Silencing of KIF3B suppresses breast cancer progression by regulating EMT and Wnt/beta-catenin signaling. Front Oncol. 10, 597464(2020).
  21. Ji, L., Zhu, Z. N., He, C. J., Shen, X. MiR-127-3p targets KIF3B to inhibit the development of oral squamous cell carcinoma. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 23 (2), 630-640 (2019).
  22. Yao, F. Z., Kong, D. G. Identification of kinesin family member 3B (KIF3B) as a molecular target for gastric cancer. Kaohsiung J Med Sci. 36 (7), 515-522 (2020).
  23. Chen, Y., Fu, D., Zhao, H., Cheng, W., Xu, F. GSG2 (Haspin) promotes development and progression of bladder cancer through targeting KIF15 (Kinase-12). Aging Albany NY. 12 (10), 8858-8879 (2020).
  24. Lafanechere, L. The microtubule cytoskeleton: an old validated target for novel therapeutic drugs. Front Pharmacol. 13, 969183(2022).
  25. Merino-Casallo, F., Gomez-Benito, M. J., Hervas-Raluy, S., Garcia-Aznar, J. M. Unravelling cell migration: defining movement from the cell surface. Cell Adh Migr. 16 (1), 25-64 (2022).
  26. Simoes-da-Silva, M. M., Barisic, M. How does the tubulin code facilitate directed cell migration? Biochem Soc Trans. 53 (1), BST20240841(2025).
  27. Zheng, C., et al. YY1 modulates the radiosensitivity of esophageal squamous cell carcinoma through KIF3B-mediated Hippo signaling pathway. Cell Death Dis. 14 (12), 806(2023).
  28. Zhou, L., Ouyang, L., Chen, K., Wang, X. Research progress on KIF3B and related diseases. Ann Transl Med. 7 (18), 492(2019).
  29. Guan, L. Y., Lv, J. Q., Zhang, D. Q., Li, B. Collective polarization of cancer cells at the monolayer boundary. Micromachines Basel. 12 (2), 112(2021).
  30. Lopez-Charcas, O., et al. Pharmacological and nutritional targeting of voltage-gated sodium channels in the treatment of cancers. iScience. 24 (4), 102270(2021).
  31. Saadh, M. J., et al. The emerging role of kinesin superfamily proteins in Wnt/beta-catenin signaling: implications for cancer. Pathol Res Pract. 269, 155904(2025).
  32. Pupo, E., et al. Kinesin-2 controls the motility of RAB5 endosomes and their association with the spindle in mitosis. Int J Mol Sci. 19 (9), 2575(2018).
  33. Zhou, M., Han, Y., Jiang, J. Ulk4 promotes Shh signaling by regulating Stk36 ciliary localization and Gli2 phosphorylation. Elife. 12, RP88637(2023).
  34. Wang, B., Liang, Z., Liu, P. Functional aspects of primary cilium in signaling, assembly and microenvironment in cancer. J Cell Physiol. 236 (5), 3207-3219 (2021).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

גלה מאמרים נוספים

RT-qPCRRNA Pull-Downעקומת קפלן-מייראנליזת קוקסהשראת אפופטוזיס
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.