הגדלת שלפוחית השתן האילאלית הסטנדרטית לאנטרוציסטופלסטיה בעכברים באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע

סיכום

פרוטוקול זה מתאר מודל אנטרוציסטופלסטי סטנדרטי לעכברים, המשתמש בטלאי איאלי פדיקולרי, וסקולרי ומנותק עם סטיית שתן חיצונית זמנית באמצעות צינור קנולה להשגת הגדלת שלפוחית השתן הניתנת לשחזור.

תקציר

הגדלת שלפוחית השתן באמצעות מקטעי מעיים נותרה הליך שחזורי יסוד עבור מטופלים עם שלפוחית עם קיבולת נמוכה או תואמת לקויה כאשר טיפולים שמרניים נכשלים. למרות הרלוונטיות הקלינית שלה, ההתקדמות הניסיונית והמחקר המעמיק מוגבלים בשל היעדר פרוטוקולים סטנדרטיים וניתנים לשחזור שמדגימים באופן אמין עקרונות כירורגיים בסביבה מבוקרת לפני קליני. כאן, אנו מציגים פרוטוקול אנטרוציסטופלסטי של חולדות שלב אחר שלב, המשתמש בטלאי אילאל וסקולרי ומנותק כפלף פדיקלי להגדלת שלפוחית השתן הטבעית. ההליך כולל לפרוטומיה של קו האמצע, חשיפה מבוקרת, וייצוב שלפוחית השתן באמצעות תפרים מחזיקים, הסחת שתן באמצעות צינור קנולה חיצוני מסוג פולי, בידוד קטע אילי קצר עם פדיקלה מזנטרית שלמה, הסרת צינורות, ואנסטומוזה ללא מתח עם דופן השלפוחית. הדגש מושם על שמירה על פרפוזיה מזנטרית, מניעת פיתול בפדיקולה, הבטחת תפירה אטומה למים, והבטחת פטנטיות קטטר, שהם קריטיים להצלחה פרוצדורלית ולשחזור. אימות ייצוגי תוך ניתוחי באמצעות הדמיה היפרספקטרלית (HSI) בשמונה חולדות שאינן שורדות הדגים חמצון רקמתי שמור ופרפוזיה של מקטע המעי לאחר שלבים מרכזיים בניתוח, ותמך בחיוניות הרקמה בסיום ההליך. לכן, פרוטוקול זה מספק גישה ניסויים סטנדרטית ליישום ניתוחי שכפול של אנטרוציסטופלסטליה בעכברים. יישומים פוטנציאליים בהמשך של המודל כוללים חקירת שינויים מטבוליים ואלקטרוליטים, רגישות לזיהום, ייצור ריר והשראת דיספלזיה או ממאיריות, ועדיין יש לטפל בהם בחקירות הישרדות עתידיות.

מבוא

תפקוד פיזיולוגי של שלפוחית השתן הוא חיוני לשמירה על איכות חיים גבוהה, שכן אגירת שתן יעילה וריקון הם קריטיים לשליטה בשתן, רווחה חברתית ובריאות כללית. הפרעות המשפיעות על תפקוד שלפוחית השתן עלולות לגרום לתחלואה משמעותית, כולל אי שליטה בשתן, זיהומים חוזרים, פגיעה בכליות והשפעה שלילית עמוקה על חיי היומיום.

גם פתולוגיות מולדות וגם נרכשות בשלפוחית השתן עלולות לגרום לפגיעה תפקודית משמעותית, שלעיתים מחייבת התערבות ניתוחית כאשר טיפולים שמרניים ופרמקולוגיים אינם מספקים בהתאם. אנומליות מולדות כמו מסתמי שופכה אחוריים¹, שלפוחית השתן ואקסטורפיה קלואקלית, ואפיספדיות ^2,3 קשורות לעיתים קרובות לשלפוחית השתן בעלת קיבולת נמוכה וגמישות בצורה לקויה, ובכך מגבירה את הסיכון להידרדרות בדרכי השתן העליונות. באופן דומה, מצבים נוירולוגיים, כולל מיאלודיספלזיה⁴, טרשת נפוצה⁵, ופגיעת חוט השדרה⁶, מובילים לעיתים קרובות לתפקוד לקוי של שלפוחית השתן הנוירוגנית, הפוגעת הן במנגנוני האחסון והן במנגנוני הריקון. בנוסף, אתיולוגיות זיהומיות כמו שחפת⁷ ושיסטוזומיאזיס⁸ עלולות לגרום לפיברוזיס בדופן השתן, להפחית את הציות ולגרום לסיבוכים משניים. במקרים עמידים, הגדלת שלפוחית השתן משמשת כאסטרטגיה יעילה לשיפור קיבולת האגירה, הפחתת לחץ תוך-כלי ושימור תפקוד הכליה, ובסופו של דבר משפרת את איכות החיים ומפחתת סיבוכים ארוכי טווח.

על פי הנחיות האגודה האורולוגית האמריקאית (AUA) לגבי שלפוחית יתר פעילה, הגדלת שלפוחית השתן (אנטרוציסטופלסטיה) מיועדת למטופלים עם קיבולת שלפוחית ירודה, ציות לקוי או פעילות יתר של דטרוזר עמידה לניהול שמרני⁹. תוארה במקור על ידי Tizzoni ו-Foggi בשנת 1888 באמצעות דגם כלבי¹⁰ ובהמשך הותאמה לשימוש אנושי על ידי פון מיקוליץ' ב-1899-11, ואנטרוציסטופלסטיה נותרה הגישה הכירורגית הסטנדרטית להפחתת לחצים באגירת השתן ולהפחתת הסיכונים לנזק כלייתי ואי-שליטה הקשורים לתפקודים שונים של שלפוחית השתן, כולל שלפוחית נוירוגנית, אקסטרופיה של שלפוחית השתן ומסתמי שופכה אחוריים ^{12. 13}.

טכניקת האנטרוציסטופלסטיה הקונבנציונלית כוללת חיתוך שלפוחית השתן במישור הקורונלי או הסגיטלי עד לטריגונה, ואחר כך שילוב של מעי מסובך¹² שדה-צינורית. האיליאום הוא המקטע הנפוץ ביותר במעיים, בדרך כלל נקטף במרחק 25-40 ס"מ פרוקסימלי לשסתום האילאוסקלי¹². כאשר האילאום אינו מתאים, המעי הסיגמואידי משמש כחלופה^{המועדפת 12}.

בעוד שההליך מציע עמידות ארוכת טווח ושיעורי שביעות רצון גבוהים של מטופלים¹⁴, הכנסת רקמת מערכת העיכול למערכת השתן מציבה חסרונות בולטים, כולל הפרעות מטבוליות, היווצרות אבנים בשלפוחית וסיכון מוגבר לממארות 15,16,17.

בהינתן הסיבוכים הפוטנציאליים הללו, יש צורך קריטי במחקרים מבוקרים לחקור את המנגנונים הבסיסיים, לחדד טכניקות ניתוח ולהעריך חומרי הגדלה חלופיים. מודל מכרסמים מספק סביבה מובנית וניתנת לשחזור לחקר היבטים אלו, ומאפשר לחוקרים לנתח התאמות מטבוליות לאחר הגדלה, כולל איזון חומצה-בסיס והפרעות אלקטרוליטים. יתרה מזאת, היא מאפשרת בחינה של שיפוץ רקמת שלפוחית השתן לאורך זמן, ומספקת תובנות לגבי פיברוזיס, התחדשות האורותליאלית ואינטגרציה של מקטעים מוגברים. בנוסף, לאור הסיכון המוגבר לממארות הקשורה לאנטרוציסטופלסטיה, מודל מכרסמים מציע הזדמנות לחקור שינויים היסטופתולוגיים לאורך זמן ולזהות סימנים מוקדמים לקרצינוגנזה. חשוב לציין שמודל כזה גם מסייע במחקר ביישומי ביומטריה והנדסת רקמות, ועשוי לסלול את הדרך לחומרים מעשירים חלופיים עם סיכונים מסרטנים ואימונוגניים נמוכים^{יותר 12}.

למרות שדווחו מודלים ניסיוניים להגדלת שלפוחית השתן במכרסמים ומינים אחרים, חסר פרוטוקול סטנדרטי וסטנדרטי שלב אחר שלב לניתוח אנטרוציסטופלסטי איליאלי בעכברים באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע. מחקרים מוקדמים של עכברים קבעו את מודל ניסויי של ציסטופלסטיה עם הגברה קלאסית ותיארו וריאנטים כמו אנטרוציסטופלסטיה סרומוסקולרית וסיוע לייזר 18,19,20. עבודות מאוחרות יותר עסקו בשינויים היסטופתולוגיים ובקטריולוגיים ארוכי טווח, התפתחות גידול, פיזיולוגיה של הובלה ותוצאות פונקציונליות, בעוד שגם שינויים שחזוריים נוספים כגון השתלת שלפוחית חלקית והחלפה פוטודינמית של רירית המעי באורוטליום נבדקו^{גם הם} 21,22,23,24,25,26,27 . יחד, מחקרים אלו מראים כי קיימים מודלים להגדלת חולדות, אך בהיקפו הטרוגני ומתמקדים בעיקר בהיתכנות, השלכות ביולוגיות, פיזיולוגיה או שינויים שחזוריים ספציפיים 18,19,20,21,22,23,24,25,26,27. לכן, מטרת העבודה הזו היא להציג מדריך פרוצדורלי מפורט לביצוע אנטרוציסטופלסטיה סטנדרטית באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע בעכברים. הפרוטוקול הוקם בסביבה שאינה הישרדות. יישומים שדורשים תצפית ארוכת טווח אפשריים, אך עשויים לדרוש התאמת פרוטוקול זה לסביבת מחקר הישרדות עם החלמה לאחר הניתוח ומעקב לאורך זמן. אלה יכולים לכלול הערכת תוצאות פונקציונליות, מנגנוני כשל לאחר הניתוח, התחדשות רקמה לאורך זמן, או אינטגרציה של הנדסת רקמות.

המודל הנוכחי תוכנן לשחזר עקרונות טכניים מרכזיים של אנטרוציסטופלסטליה קלינית בסביבה מבוקרת של עכברים, תוך שמירה על יישום ניסויי סטנדרטי. נבחר טלאי אילאל מפורק משום שהדה-טובולריזציה מפחיתה את ההתכווצות הפנימית של המעי ומשקפת טוב יותר את העיקרון השחזורי הנפוץ בהגדלה קלינית. שימוש במקטע פדיקלי וכלי דם מאפשר שימור הפרפוזיה המזנטרית ומאפשר הערכה ישירה של חיוניות הרקמה במהלך ואחרי הכנת השתל. סטיית שתן חיצונית באמצעות צינור קנולה פולי שולבה כדי לספק ניקוז מבוקר של שלפוחית השתן במהלך ההליך ולהקל על הערכה סטנדרטית תוך ניתוחית של הקטע המשוחזר.

פרוטוקול

כל ההליכים המפורטים במסמך זה בוצעו במסגרת מתקנים מוסמכים וקיבלו אישור מוועדת טיפול ושימוש בבעלי חיים מוסדית (IACUC) של המועצה האזורית באדן-וירטמברג בקרלסרוהה, גרמניה (35-9185.81/G-62/23). בעלי החיים הניסיוניים טופלו בהתאם לפרוטוקולים מוסדיים ובהתאם לחקיקה הגרמנית המסדירה את רווחת בעלי החיים, וכן בהתאם להנחיות שנקבעו על ידי מועצת הקהילה האירופית (2010/63/EU) והנחיות ARRIVE. זכרים של חולדות ספרג-דולי (n = 8), בגילאי 8–12 שבועות ומשקל 400 גרם, שהושגו ממעבדות Janvier, שימשו לאחר תקופת הסתגלות של שבוע.

1. הרדמה ומשכך כאבים

1. השרה הרדמה על ידי הכנסת החיה לתא השראה ושימוש באיזופלורן 4% נפח מדולל ב-100% חמצן בקצב זרימה של 5 ליטר לדקה.
2. להרדמה דיסוציאטיבית, הקלה בכאבים והרדמה, יש להזריק תת-עורית של 100 מ"ג/ק"ג קטמין (תמיסה של 10%; שווה ל-0.35 מ"ל ל-400 גרם משקל גוף) ו-4 מ"ג/ק"ג קזילזין (דילול 1:10 של תמיסה של 2%; שווה 0.75 מ"ל ל-400 גרם)28,29,30,31 לאחר אובדן רפלקס היישרון. נתן את כל חומרי ההרדמה ומשככי הכאבים על בסיס מ"ג/ק"ג למשקל גוף.
   הערה: כל נפחי ההזרקה שצוינו הם דוגמה משוערת לעכברים במשקל גוף של 400 גרם ויש לחשב אותם בנפרד עבור כל בעל חיים.
3. אשר עומק משככי הכאבים בהיעדר תגובת צביטה חזקה באצבע באמצעות מלקחיים ומרח משחה קרנית למניעת ייבוש בקרנית.
4. השגת הקלה נוספת לכאבים באמצעות הזרקה תת-עורית של 5 מ"ג/ק"ג קרפרופן (דילול של 5% תמיסה ביחס 1:10; שווה ל-0.35 מ"ל ל-400 גרם).
5. שמרו על נרקוזה עם איזופלוראן משלים באמצעות מסכת פנים ליילודים לפי הצורך לאורך כל הניתוח.
6. בצע ניהול טמפרטורה במהלך הניתוח על ידי הנחת החיה על כרית חימום שמכוונת ל-40°C. בנוסף, יש למקם גלאי טמפרטורת רקטל, אך זה לא חובה.
7. מתן תמיכה נוזלית סביב הניתוח ואחרי הניתוח באמצעות הזרקה תת-עורית של תמיסת מלח איזוטונית בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס של 25 מ"ל/ק"ג לשעה (שווה ערך ל-10 מ"ל ל-400 גרם) המחולקת להזרקות כל 20 דקות. זה צריך לכלול הזרקה אחרונה לאחר סגירת הבטן, המחושבת עבור הנרקוזה הצפויה שנותרה בדרך כלל של 30 דקות.

2. אתר הפעלה והכנת מכשירים

1. הכינו את שולחן השיבוק עם כלים וחומרים, כולל:
   מלקחיים להכנה א-טראומטית
   מהדקי אוברהולט קהים
   מספרי הכנה
   תפר מונופילמנט 6-0 דו-זרועי שאינו נספג
   תפר פוליפילמנט 4-0 חד-זרועי מהיר ונספג
   קטטר 20 גייג' כקטטר פולי מאולתר
   מטליות צמר גפן לחות
   דגימות גזה
   תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית
2. התקן את החיה על מכשיר החשיפה למכרסמים כפי שתואר בפרסומים קודמים^30,31. לגלח את אזור הגישה לבטן ולחטא אותו על ידי ביצוע ניקוי משולש לסירוגין עם 70% אתנול ופובידון-יוד או מקלורקסידין, במעגלים קונצנטריים מאתר החתך החוצה. חזור על זה שלוש פעמים.
3. כסו את החיה בוילונות סטריליים, והשאירו רק את שדה הניתוח חשוף.

3. גישה כירורגית באמצעות לפרוטומיה בקו האמצע

1. בצע לפרוטומיה בטנית חציונית של כ-5 ס"מ באמצעות מספריים עדינים וחתוך את הלינאה אלבה לאורך הקו האמצעי כדי להגיע לחלל הפריטונאלי.
2. השתמשו בווים הכנה וקומפרסים לחים כדי למשוך את דופן הבטן ולחשוף את חלל הפריטונאלי.

4. זיהוי והכנה של המעי הדק ושלפוחית השתן (איור 1)

1. זהה את המעי הדק והנע בעדינות לולאה באמצעות מלקחיים א-טראומטיים ומטשיות כותנה לחות (איור 1A.1).
2. הערכו את לולאת המעי הדק לשלפוחית השתן כדי לזהות מיקום מתאים
3. קטע מעי דק באורך של כ-12 מ"מ לצורך ההגדלה (איור 1A.2). זו צריכה להיות לולאת המעי המתאימה הראשונה מבחינה מכנית באורך של לפחות 2 ס"מ פרוקסימלי לצומת האילאוצקאלי.
4. הנע את שלפוחית השתן על ידי ניתוח רקמת החיבור הסובבת באמצעות מספריים להכנה (איור 1B).
5. הנח את התפרים במקומות 3, 6, 9 ו-12 על קיר השלפוחית באמצעות תפרים חד-זרועים ובלתי נספחים 4-0 (איור 1C.1–1C.5).
6. אחזו בכיפת השלפוחית עם מלקחיים אטראומטיים וצרו פגם רוחבי בעובי כ-4 מ"מ בין התפרים באמצעות מספריים ניתוחים (איור 1D.1–1D.2).
7. החלף את ארבעת התפרים כדי לכלול את קצה החיתוך: מושך כל תפר ברצף. תפר אחד בכל פעם, הנחה את המחט סביב שולי החתך, קח נשיכה מהצד הלומינלי ישירות בקצה, ואז יוצא דרך השכבה הסרומוסקולרית הסמוכה כדי ללופ, למשוך ולחשוף את השוליים (איור 1E.1–1E.6).

5. מיקום וקיבוע צינור הקנולה פולי להסחת שתן חיצונית (איור 1)

1. מכניסים את הקנולה התוך-ורידית (G20) דרך לומן שלפוחית השתן ומקדמים אותה מהצד התוך-לומינלי דרך דופן הבטן אל החלק החיצוני (איור 1F.1–1F.3).
2. הסרת הקנולה המתכתית מהצינור תוך ייצוב צינור הקנולה באמצעות מלקחיים כקטטר פולי מאולתר (איור 1F.4–1F.5).
3. כדי לקבע את צינור הקנולה פולי לעור, העבירו תפר מונופילמנט 4-0 שאינו נספג דרך הלומן של הצינור ומעגנים אותו במרווח בטיחות מספק מהפתח החיצוני כדי למזער את הסיכון לניתוק נוסף (איור 1G.1–1G.6).
4. שטף את צינור הקנולה פולי במי מלח לאישור פטנטיות, באמצעות צינור של קנולה תוך-ורידית שנייה בגודל אחד גדול יותר (למשל, G18) מהקנולה הראשונית (איור 1G.1–1G.9).
5. תפר את צינור הקנולה בפולי תוך-כלי לדופן שלפוחית השתן באמצעות תפר פוליפילמנט 4-0 נספג במהירות, תוך שמירה על מרווח בטיחות מהציר של צינור הקנולה כדי להפחית את הסיכון לניתוק לא מקרי (איור 1H.1–1H.4).
6. אחוז בציר צינור הקנולה עם מלקחיים ונתק אותו מהצינור באמצעות מספריים (איור 1H.5–1H.7).
7. הכניסו את צינור הקנולה לתוך שלפוחית השתן (איור 1H.8–1H.9).

איור 1: הכנת המעי הדק ושלפוחית השתן עם מיקום צינור קנולה להסטת שתן חיצונית פולי. (א) זיהוי והערכה של המעי הדק ושלפוחית השתן (א.1–א.2). (ב) הנעת שלפוחית השתן על ידי כריתה של הפריטונאום (B.1–B.4). (ג) מיקום התפרים בכיפת השלפוחית (C.1–C.5). (D) כריתת דופן השלפוחית (ציסטוטומיה) (D.1–D.2). (ה) החלפת תפרים (E.1–E.6). (ו) מיקום הקנולה להסחת שתן חיצונית דרך הציסטוטומיה (F.1–F.5). (G) קיבוע קטע צינור הקנולה החיצוני בדופן הבטן (G.1–G.9). (H) קיבוע ומיקום תוך-כלי סופי של קצה צינור הקנולה (H.1–H.9). (I) איור סכמטי המסכם את ההכנה המתוארת ומיקום צינור הקנולה כפולי. הקו המקוקד העבה מתאר את המעי הדק. הקו הדק והמקוקד מציג את שלפוחית השתן. ריבועים שחורים מציגים את קטע התמונה המוגדל בתמונה הבאה. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

6. בידוד מקטע המעי הדק (איור 2)

1. מניחים את לולאת המעי הדק על מטוש גזה סטרילי, הערכו את התנועה שלה לכיוון שלפוחית השתן, ובחרו קטע מתאים באורך של כ-12 מ"מ (איור 2A.1–2A.4).
2. חתך את מקטע המעי הנבחר מהמעי הנותר תוך שמירה על אספקת הדם המזנטרית ושמירה על כיוון נכון כדי למנוע סיבוב נוסף של הפדיקולה הווסקולרית (איור 2B.1–1B.4).
3. יש להוציא בעדינות את שארית התוכן הלומינלי משני קצות המעי המועברים באמצעות מטלית כותנה (איור 2C.1–2C.6).
4. החזירו את שתי הגפיים הסמוכות של לולאת המעי הדק כלפי מעלה כך שרק הקטע הנבחר יישאר על מטוש הגזה (איור 2D–2E).

איור 2: זיהוי ובידוד של קטע מעי דק להגדלת שלפוחית השתן. (א) מוביליזציה וזיהוי קטע מעי דק מתאים להגדלת שלפוחית השתן (A.1–A.4). (B) חתך של מקטע המעי הדק שנבחר מהלולאה שנותרה במעי (B.1–B.4). (ג) פינוי תכולת לומינל שארית (C.1–C.4). (ד) הפרדה ומיקום של קצות הפה והאבור של לולאת המעי הדק שנותרה. (ה) קטע מעי דק מבודד שהוכן להרחבה נוספת. (ו) איור סכמטי המסכם את בחירת המקטעים ובידודם. הקו המקווקד העבה מציג את קטע המעי הדק המבודד. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

7. הכנת מקטע המעי והגדלת שלפוחית השתן (איור 3)

1. פתח את קטע המעי המבודד לאורך הגבול האטימסטרי באמצעות מספריים, וכך נוצר כתם מנותק באורך של כ-12 מ"מ × 8 מ"מ (איור 3A.1–3A.3).
2. כריתת קצוות הפינה החדשים של השתל (איור 3B.1–3B.3).
3. המשך עם אנסטומוזה של קטע המעי הדק באמצעות תפר מונופילמנט 6-0 דו-זרוע. במצב השעה 12, העבירו את המחט דרך דופן שלפוחית השתן מהצד החיצוני לצד התוך-לומינלי (איור 3C.1–3C.2).
4. העבר את המחט דרך הפינה הימנית התחתונה של מקטע המעי הדק, מהצד התוך-לומינלי לצד החיצוני. ודאו שהתפר הדו-זרועי נמשך עד לנקודת האמצע שלו, שכן זה מגדיר את נקודת העיגון העליונה (איור 3C.3–3C.4).
5. הדק את התפר כדי להתקרב להשתל המעי לשלפוחית, מה שמוביל לסיבוב של כ-45° נגד כיוון השעון של הקטע. קשור את הקשר בצד החוץ-אורי (איור 3D.1–3D.2) והעבר את המחט השנייה סביב המזנטריה של מקטע המעי כדי לאפשר תפירה היקפית של השתל משני הצדדים (איור 3E.1).
6. התחל באנסטומוזה ההיקפית של טלאי הגדלת שלפוחית השתן: תפר ברצף את מקטע המעי לתוך הפגם בשלפוחית השתן באמצעות נשיכה חיצונית לפנים בקצה השלפוחית, לאחר מכן עקיצה מפנים לחוץ דרך מקטע המעיים, ואז המשך לתפר הבא.
7. שחרר את התפרים ברצף (איור 3E.1–3E.15). השתמשו בנשיכות מעט גדולות יותר לטלאי המעי הדק מאשר לשלפוחית השתן; עם זאת, המטרה היא שיהיה אורך משמעותי יותר לכסות על החלקה, כך שאורך המעי הדק העודף שלא תפר יישאר.
8. לאחר סגירה היקפית של פגם השלפוחית, קושרים קצה תפר אחד. באמצעות התפר שנותר, סגרו את החלק החופשי שנותר של מקטע המעי בצורה חרוטית ("דמוית כובע מחודד") וקושרים את התפר (איור 3F.1–3F.6).
9. החזירו את שלפוחית השתן למקומה האנטומי ומקמו מחדש את המעי, כדי לוודא שהמעי לא יתפתל (איור 3G.1–3G.2).

איור 3: בניית טלאי המעי הדק והאנסטומוזה ההיקפית של שלפוחית השתן. (א) כריתה והכנת קטע המעי הדק (הכנת השתל) (א.1–א.3). (B) כריתת קצוות הפינה של השתל (B.1–B.3). (ג) התחלת האנסטומוזה על ידי הנחת תפר העיגון בין השתל לפתח השלפוחית (C.1–C.4). (D) קיבוע נקודת העיגון ליישור שולי השתל והציסטוטומיה (D.1–D.2). (ה) אנסטומוזה היקפית של כתם ההגדלה של שלפוחית השתן לדופן השלפוחית (E.1–E.15). (ו) סגירת רקמת המקטע הדק שנותרה בתצורה חרוטית עם כובע מחודד (F.1–F.6). (ז) מיקום מחדש של האיברים למיקומם האנטומי (G.1–G.2). (ח) איור סכמטי המסכם את הכנת השתל והגדלת שלפוחית האנסטומוזה. הקו המקווקו העבה מתאר את קטע המעי הדק. הקו המקוקד הדק מתאר את פתיחת קיר השלפוחית. החץ הלבן מציג את המחט. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

8. אנסטומוזה של המעי הדק מקצה לקצה (איור 4)

1. השתמש בתפר מונופילמנט 6-0 דו-זרועי שאינו נספג, שנחתך לשניים לאנסטומוזה. העבירי את המחט דרך הגבול האניטימצנטרי של שני קצות המעיים. אין להדק את הקשר עדיין, אלא להשתמש בטכניקת מצנח על ידי הנחת מהדק על קטע התפר בין קצות המעי כדי לשמור על הוויזואליזציה (איור 4A.3–4A.6).
2. הניחו תפר דרך הגבול המזנטרי של שני קצות המעי והדקו בצורה דומה (איור 4A.7–4A.10).
3. הנח שני תפרים דרך הקיר הקדמי של שני קצות המעי הדק כדי לאפשר סגירה נוספת, ואבטח את קצות התפר באמצעות מהדקים (איור 4B.1–4B.4).
4. החזירו את שני קצות המעי כלפי מעלה כדי לחשוף את דופן המעי הקטן האחורית. בדומה לדופן הקדמית, הניחו שני תפרים דרך הקיר האחורי ואבטחו את קצות התפר באמצעות מהדקים (איור 4C.1–4C.4).
5. לאחר שכל התפרים מונחים, יש לקשור את כל ששת התפרים ברצף (איור 4D.1–4D.6).
6. סגור את הפגם המזנטרי עם 2–3 תפרים 4-0 של פוליפילמנט סופגים מהירים ומופרעים כדי למנוע פריצת פרץ נוספת (איור 4F.1–4F.8).

איור 4: אנסטומוזה של המעי הדק מקצה לקצה וסגירת פגם מזנטרי. (א) מיקום תפרי היישור בגבולות האנימסנטריים והמזנטריים (A.1–A.10). (B) מיקום שני תפרי קירוב הקדמיים (B.1–B.4). (ג) חשיפת הקיר האחורי ומיקום שני תפרי קירוב דופן אחורי (C.1–C.4). (D) קשירה רציפה של כל ששת התפרים להשלמת האנסטומוזה (D.1–D.6). (ה) אנסטומוזה מקצה לקצה מוגדלת (E.1–E.2). (ו) סגירת הפגם המזנטרי עם תפרים מופרעים למניעת פריצת פנים (F.1–F.8). (G) איור סכמטי של אנסטומוזה המעי הדק מקצה לקצה. אנא לחצו כאן כדי לצפות בגרסה מוגדלת של הדמות הזו.

9. שלבים סופיים ושיקולים

1. סגור את דופן הבטן בצורה רב-שכבתית בתנאים סטריליים, בהתאם לפרוטוקולים שפורסמו^בעבר 29,30,31.
2. בהליכים שאינו הישרדותי או הפסקות מתוכננות לאחר מעקב, יש להמתים בעלי חיים בהרדמה עמוקה באמצעות קרדיקטומיה חדה, פריקת צוואר הרחם או כריתת ראש בגיליוטינה.
3. במידת הצורך, יש להסיר את השלפוחית להערכה אנטומית מאוחרת (למשל, הערכת אתר הגדלת שלפוחית השתן ואנסטומוזה של המעי), ניתוחים ביומולקולריים או הדמיה היסטופתולוגית.
4. למטרה זו, יש להסיר את שלפוחית השתן המוגדלת באחד על ידי ניתוח מדורג זהיר תחת הדגשה ישירה, עם שחרור עדין של ההידבקויות הסובבות, זיהוי שלפוחית השתן הטבעית, טלאי מעי מוגבר וגבולות אנסטומוטיים, ולאחר מכן חיתוך של יציאת השלפוחית הדיסטלית והחיבורים המזנטריים או המעיים הסמוכים לפי הצורך, תוך הימנעות מלחץ או עיוות של הדגימה כדי לשמור על ארכיטקטורת הרקמה לניתוח הבא.

תוצאות

כדי לאשר את חיוניות הרקמה לאחר פרוטוקול זה, הוערכו חמצון רקמתי והזרזת במהלך ההליך בשמונה חולדות (טבלה 1). לפני אנטרוציסטופלסטיה, בוצעה הדמיה היפרספקטרלית (HSI) של המעי הדק כדי להמחיש את רוויית החמצן ברקמות (StO₂) ואת הפרפוזיה (NIR) (איור 5A.1). כבקרה שלילית, היפופרפוזיה מקסימלית נגרמה על ידי הידוק האאורטה (איור 5A.2). HSI של אזורי רקמה מייצגים חזר על עצמו לאחר שלבים ניתוחיים מרכזיים להערכת פרפוזיה מתמשכת (

דיון

עבודה זו מספקת פרוטוקול ניתוחי לשחזור לאנטרוציסטופלסטיה בעכברים באמצעות לפרוטומיה אמצעית הקו, קנולציה חוץ-גופית ושילוב מקטע איאלי מנותק מהצינורות. הטכניקה פועלת לפי העקרונות שתיארו טיזוני ופוג'י להגדלת שלפוחית השתן ומותאמת אותם למודל מכרסמים על ידי שילוב של הרדמה מדויקת, הכנה אספטית, קנולציה חיצונית להסחת שתן, ואיסוף כתם מעי דק וסקולרי.

פרוטוקול זה בוצע ואומת לסביבה שאינה הישרדות. עם זאת, היא הקימה פלטפורמה תרגומית להגדלת שלפוחית השתן שהחוקרים אמורים להיות מסו...

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
מלקטות הכנה אטראומטיות	Aesculap	FB395R	DE BAKEY ATRAUMATA מלקטות אטראומטיות, ישרות
מלחצימי overholt קהים	Aesculap	BJ012R	מלחצימי הכנה וקשירה BABY-MIXTER, כפופים, 180 מ"מ
צינור קנולה פולי לשטיפה והסטה	Mdk Mart	23-CA-CD-UL-CD	צינור קנולה G18 (רק הצינור משמש לשטיפת קנולה להסטה)
קרפרופן	cp pharma	115	Carprofen 0,5% (5% עם 50 מ"ג/מ"ל מדולל 1:10) (Carprosol)
מקלות צמר גפן	Amazon	ASIN: B0FPDB8ZGS	מקלות צמר גפן לא סטריליים (אוטוקלב לניסויי הישרדות)
תפרי פוליפילמנט מהירי ספיגה 4-0	COVIDIEN	SV-494	תפר כירורגי פוליפילמנט חד-זרועי מפוליגלקטין מספיג פלסטיק עם מחט P-13 אחת
מוטות קיבוע	legefirm	‎500343896	מזלגות מתכת המשמשים כמוטות קיבוע בצורת Y
קטטר פולי	B. Braun	4242010-02	קטטר Introcan Safety 2 50 מ"מ 20 גאוג' כקנולה להסטה
מקלות גזה	Medrull	ASIN: B09164D1JG	מקלות גזה סטריליים
משטח חימום	Royal Gardineer	IP67	משטח חימום Royal Gardineer בגודל S, 20 וואט
מערכת מצלמת הדמיית היפר-ספקטרלית	Diaspective Vision	TIVITA Tissue Halogen	מערכת HSI לאימות
איזופלורן	Piramal Critical Care	PZN / EAN 09714675 / 4150097146757	איזופלורן 100% 250 מ"ל
אדים איזופלורן	UNO ROESTVASTSTAAL BV	180000002	אדים איזופלורן
תמיסת נתרן כלוריד איזוטונית	B. Braun	ASIN: B007PZJOQ4	תמיסת נתרן כלוריד 0,9%
קטמין	cp pharma	1202	קטמין 10% (100 מ"ג/מ"ל)
קנולה מתכתית	BD (Beckton, Dickinson)	301300	BD Microlance 3 קנולה 20 גאוג' כווכסני הכנה
מסכת פנים לתינוק	asia connection	ME03016-0	מסכת פנים לתינוק גודל #0
תפרי מונופילמנט לא מספיגים 4-0	COVIDIEN	SP-670	תפר כירורגי מונופילמנט חד-זרועי מפוליפרופילן לא מספיג עם מחט C-16 אחת
תפרי מונופילמנט לא מספיגים 6-0	COVIDIEN	VP-733-X	תפר כירורגי מונופילמנט דו-זרועי מפוליפרופילן לא מספיג עם שתי מחטים CV-22
משחה עיניים	Bayer Vital GmbH	1578681	5% דקספנטנול
צינור פרפוזור פלסטי	M. Schilling GmbH	S702NC150	צינור חיבור COEX 150 ס"מ
מספריים להכנה	Aesculap	BC177R	מספריים להכנה JAMESON, כפופים, דגם עדין, קהים/קהים, 150 מ"מ (6")
תא השראת עכברוש	wpiinc	EZ-1785	תא השריה לנרקוזה
לוחית פלדה	Maschinenbau Feld GmbH	C010206	לוחית גליון מגולוון, 40 על 50 ס"מ, עובי 4.0 מ"מ
קסילזין	cp pharma	1206	קסילזין 0,2% (2% עם 20 מ"ג/מ"ל מדולל 1:10) (Xylavet)