מאמר מחקר

ניתוח רנדומיזציה מנדלית של תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs, סוכרת מסוג 2 וסיבוכיה

DOI:

10.3791/71230

⸱

21 באוגוסט 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Laboratory Medicine, Zhongshan People's Hospital, 2Department of Advanced Diagnostic and Clinical Medicine, Zhongshan People's Hospital

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר MR של שני מדגמים זה זיהה קשרים פוטנציאליים בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs שנחזו גנטית לבין סיבוכים של T2DM. IL-6 שנחזה גנטית נמצא בקשר הפוך עם CAD סוכרתית, בעוד ש-NETs היו קשורים לסיבוכים כלייתיים ובסירקולציה הפריפריאלית ב-T2DM. ניתוחי רגישות תמכו באופן כללי ביציבותם של קשרים משמעותיים אלו.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מאפייני דלקת הקשורים למלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים (NETs) ממלאים תפקיד משמעותי בסוכרת מסוג 2 (T2DM) ובסיבוכיה. בפרט, IL-6, ציטוקין דלקתי מרכזי, קשור באופן 긴 mật להיווצרות NETs ולפתוגנזה של T2DM וסיבוכיו. מחקר זה נועד לבחון את הקשר הסיבתי בין מאפייני דלקת הקשורים ל-NETs לבין T2DM וסיבוכיו, באמצעות גישת רנדומיזציה מנדלית (MR). המחקר השתמש במערך MR של שני דגימות עם נתונים ממחקרי אסוציאציה גנומיים רחבים (GWAS), הכוללים מטה-אנליזה רחבה מבוססת אוכלוסייה אירופאית עבור T2DM וסיבוכיו. שיטת הניתוח העיקרית הייתה גישת המשקל ההפוך לשונות (IVW), שהושלמה על ידי רגרסיית MR-Egger, שיטת החציון המשוקלל ושיטת השכיח המשוקלל. ניתוחי רגישות כללו את שיטות MR-Egger, MR-PRESSO, Cochran’s Q ושיטת leave-one-out כדי להעריך את חוסנו של הממצאים. המחקר הצביע על כך שרמות של interleukin-6 (IL-6) שנחזו גנטית היו קשורות באופן הפוך למחלה עורית של העורקים הכליליים (CAD) סוכרתית (OR = 0.8997, 95% CI: 0.8257–0.9803, P = 0.0158). בנוסף, NETs הראו קשרים מובהקים עם T2DM עם סיבוכים כלייתיים (OR=0.97, 95% CI 0.9428–0.998, P = 0.0358) ו-T2DM עם סיבוכים של מחזור הדם ההיקפי (OR = 1.0342, 95% CI 1.002–1.0673, P = 0.037). קשרי IVW המובהקים לא הראו עדות להטרוגניות או לפליאוטרופיה אופקית. מחקר זה מרמז כי מאפייני דלקת הקשורים ל-NETs שנחזו גנטית קשורים לסיבוכים ספציפיים של T2DM. רמות IL-6 שנחזו גנטית היו קשורות באופן הפוך ל-CAD סוכרתית, בעוד ש-NETs היו קשורים לסיבוכים כלייתיים והיקפיים של מחזור הדם ב-T2DM.

מבוא

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

סוכרת מסוג 2 (T2DM), המאופיינת בעמידות לאינסולין ולעיתים קרובות מלווה בתפקוד לקוי הולך וגובר של תאי בטא, הגיעה לממדיים של מגפה ברחבי העולם1,2. סיבוכים אלו של T2DM, הכוללים מחלות קרדיווסקולריות, איסוף כלייתי, נוירופתיה ורטינופתיה, מטילים נטל משמעותי לא רק על הפרטים מבחינת בריאותם ואיכות חייהם, אלא גם על מערכות הבריאות ברחבי העולם, תוך הרצפת משאבים והעלאת עלויות, וכן על הכלכלות3,4. בהתחשב באופיה הרב-גוני של T2DM, נדרשת בחינה מעמיקה של הגורמים האטיולוגיים שלה. ראיות מצטברות מעידות על מעורבותם של מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים (NETs) בפתופיזיולוגיה של הפרעות מטבוליות שונות, במיוחד כאלו הקשורות ל-T2DM.

מלכודות חוץ-תאיות של נויטרופילים (NETs) הן רשתות חוץ-תאיות של DNA דקומפרסי (decondensed) וחלבוני גרנולה בעלות תכונות מיקרוביצידיות חזקות5,6. סמנים כגון DNA חופשי (cell-free DNA) והיסטון H3 ציטרולינציוני משמשים כאינדיקטורים מרכזיים ל-NETosis, ומשקפים פעילות דלקתית במחלות שונות7,8. ראיות מצטברות מצביעות על כך שסוכרת מעודדת את היווצרותן של NETs, ובכך מפיצה דלקת ופגיעה רקמתית9,10. מבחינה קלינית, רמות גבוהות של סמני NETs נמצאות במתאם עם היפרגליקמיה ותוצאות שליליות במספר סיבוכים של סוכרת. לדוגמה, רמות מוגברות של dsDNA קשורות לדיסרגולציה של גלוקוז בחולים עם STEMI11, בעוד שמרכיבי NETs קשורים להתקדמות של רטינופתיה סוכרתית12 ומנבאים סיכון לקטיעה בכיריים סוכרתית13. למרות קשרים אלו, הקשר הסיבתי המדויק בין NETs לבין התפתחות T2DM וסיבוכיו טרם הובהר במלואו. ראיות מצטברות מדגישות אינטראקציה דו-כיוונית בין IL-6 ל-NETs בדלקת מטבולית. היפרגליקמיה מכינה (primes) נויטרופילים ל-NETosis, כאשר IL-6 משמש כמשרה חזק של תהליך זה, התלוי באנרגיה14. מבחינה קלינית, IL-6 מנבא באופן עצמאי רמות גבוהות של סמני NETs (למשל, H3Cit ו-DNA חופשי) בסוכרת מסוג 2, אשר נמצאים במתאם חזק עם מצבים פרו-תרומבוטיים וסיבוכים מיקרו-וסקולריים כגון רטינופתיה סוכרתית15,16. יתרה מכך, NETosis המושרה על ידי זיהום יכולה להגביר את ה-trans-signaling של IL-6, ובכך לבסס לולאת בקרה הדדית17. יחד, ממצאים אלו מדגישים את הפתופיזיולוגיה השזורה באופן הדוק של IL-6 ו-NETs, במיוחד בסביבה הסוכרתית.

רנדומיזציה מנדלית (Mendelian Randomization - MR) היא שיטה סטטיסטית רבת עוצמה המשתמשת בווריאנטים גנטיים המתרחשים באופן טבעי כמשתנים מכשירים (instrumental variables) להערכת השפעות סיבתיות של חשיפות הניתנות לשינוי על תוצאות בריאותיות, ובכך מספקת תובנות לגבי נתיבים של מחלות מורכבות18. גישה זו, המעוגנת בחוקי התורשה של מנדל, מאפשרת לחוקרים להסיק סיבתיות במחקרים תצפיתיים על ידי ניצול ההפרדה האקראית של אללים במהלך המיוזה, ובכך עוקפת חלק מהמגבלות של שיטות אפידמיולוגיות מסורתיות בביסוס קשרי סיבה ותוצאה19.

עד כה, קיימים דיווחים מוגבלים על מחקרי MR הבוחנים את הקשר הסיבתי בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs שנחזו גנטית לבין T2DM וסיבוכיו. לפיכך, המחקר הנוכחי שואף לבחון את הקשרים הסיבתיים הפוטנציאליים בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs לבין T2DM, וכן לסיבוכיו, באמצעות שיטת ניתוח MR של שני דגימות.

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מערך המחקר

מחקר זה השתמש בגישת MR של שני מדגמים כדי לבחון את הקשר הסיבתי בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs לבין T2DM וסיבוכיו. מסגרת ה-MR נשענת על שלוש הנחות מפתח20: 1) הווריאנט הגנטי חייב להיות קשור באופן חסון לחשיפה, 2) הווריאנט הגנטי חייב להשפיע על התוצאה רק באמצעות החשיפה (שללילת פליאוטרופיה), ו-3) הווריאנט הגנטי לא יכול להיות קשור לגורמים מתבלבלים כלשהם. לסקירה מפורטת של תהליך המחקר, אנא עיינו ב-איור 1. כתב היד עומד בהנחיות MR-STROBE לדיווח על מחקרי MR, ובכך מבטיח סטנדרטים קפדניים של שקיפות ויכולת שחזור21.

מקורות נתונים

נתוני מחקרי אסוציאציה גנומיים רחבי-גנום (GWAS) ששימשו בניתוח MR זה נלקחו ממאגרי נתוני GWAS ציבוריים. בכל הנוגע לנתוני סיכום של GWAS עבור T2DM, שולבה מטא-אנליזה רחבה של אוכלוסייה אירופאית, הכוללת 74,124 חולים ו-824,006 ביקורות, לצד מחקר מקרי-עקבה מקונן פרוספקטיבי שנערך באירופה, שכלל 9,978 חולים ו-12,348 ביקורות22. עבור סיבוכים סוכרתיים, הכוללים T2DM עם סיבוכים כלייתיים ו-T2DM עם סיבוכים במחזור הדם ההיקפי, מחקר זה השתמש בסטטיסטיקות סיכום של GWAS ממחקרים שבהם קבוצת החולים הייתה מטופלי T2DM עם הסיבוך הספציפי וקבוצת הביקורת הייתה אנשים ללא T2DM. מידע מפורט על מקורות הנתונים ניתן למצוא ב-Supplementary Table 1.

נתוני GWAS עבור תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs הושגו מקטלג ה-GWAS (ראה טבלה משלימה 2כדי להתמודד עם ההטרוגניות בספציפיות הביולוגית, מחקר זה סיווג את החשיפות שנכללו לשתי קבוצות נפרדות, בהתבסס על תפקידיהן התפקודיים בביולוגיה של נויטרופילים: (1) גורמים מרכזיים הקשורים ל-NETosis: קטגוריה זו כוללת סמנים המעורבים ישירות ביצירת המבנה של NETs או בתהליך האנזימטי של דה-קומפקציה של כרומטין. באופן ספציפי, מחקר זה כלל את ה-NETs עצמם, Myeloperoxidase (MPO), Neutrophil Elastase (NE), ואת קומפלקס ה-MPO-DNA. MPO ו-NE הם אנזימים חיוניים לפירוק היסטונים ולדה-קומפקציה של כרומטין, בעוד שקומפלקס ה-MPO-DNA הוא סמן חלופי ספציפי ל-NETs.23(2) מתווכי דלקת הקשורים ל-NETs: קטגוריה זו כוללת ציטוקינים ומתווכים הפועלים כרגולטורים במעלה הזרם (upstream) או כאפקטורים במורד הזרם (downstream) הקשורים באופן הדוק ל-NETosis, אך מעורבים גם במסלולי דלקת רחבים יותר. קבוצה זו כוללת את Interleukin-6 (IL-6).24, גורם נמק גידולי אלפא (TNF-alpha)α)25, רמות ליפוקלין הקשור לג'לטינאז של נויטרופילים (NGAL)26, וגורם רשת תקשורת תאית 1 (CCN1)27.

הנתונים ששימשו במחקר זה נלקחו ממאגרי מידע בגישה חופשית או מ-GWAS שפורסמו במחקרים קודמים; לפיכך, לא נדרש אישור אתי למחקר זה.

בחירת כלים גנטיים הקשורים ל-NETs

בהינתן שהיווצרות NETs מהווה תהליך ביולוגי דינמי שאינו נמדד באופן ישיר ב-GWAS קונבנציונלי, מחקר זה השתמש בגישה מבוססת גנים כדי לזהות כלים גנטיים עבור תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs. קבוצה מקיפה של 257 גנים הידועים כמעורבים באופן קריטי בהיווצרות ובביסלוג של NETs, כגון MPO, יחד עם גנים המקודדים להיסטונים ולחלבונים של גרנולות בנויטרופילים, נאספה ממחקרים מכניסטיים מבוססים ומספרת הספרות שפורסמה28.

בחירת משתנים אינסטרומנטליים

כדי לזהות כלים גנטיים חסונים עבור תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs, מחקר זה יישם זרימת עבודה של סינון רצפי תוך שימוש בסטטיסטיקות סיכום של GWAS. השלבים התפעוליים הספציפיים היו כדלקמן:

סינון ראשוני: וריאנטים גנטיים בעלי קשר מובהק למאפייני החשיפה הוצאו29 על בסיס סף מובהקות של P < 5 × 10⁻6.

סינון תדירות אלל נמוכה (MAF): כדי להבטיח עוצמה סטטיסטית, פולימורפיזם של נוקלאוטיד יחיד (SNPs) עם MAF ≤ 0.01 הוצאו מהניתוח30.

קיבוב (Clumping) של חוסר שיווי משקל קישורי (LD): כדי לצמצם את השפעת התערבות חוסר השיווי המשקלי הקישורי (LD), נבחרו SNP-ים בלתי תלויים באמצעות פונקציית הקיבוב עם פרמטרים שהוגדרו כ-r2 < 0.001 בתוך חלון של 10,000 kb31.

הערכת חוזק המכשיר: חוזקו של כל IV שנותר כומת באמצעות ה-F-statistic, שחושב כ-F = R2 × (N-2) / (1-R2). רק SNPs עם F-statistic > 10 נשמרו כדי למזער הטיות הנובעות ממכשירים חלשים32.

זיהוי SNP פרוקסי והרמוניזציה של נתונים

כדי לטפל ב-SNPs חסרים במערך נתוני התוצאה, מחקר זה ביצע חיפוש פרוקסי (proxy search) ותהליך הרמוניזציה של נתונים:

החלפה ב-Proxy: כאשר SNP מטרה מ-GWAS החשיפה לא היה זמין ב-GWAS של התוצאה, מחקר זה השתמש בפונקציית ()LDproxy המבוססת על פנל הייחוס האירופאי של פרויקט 1,000 Genomes. SNP פ proxy מועמד נבחר רק אם הפגין LD גבוה עם ה-SNP המקורי (r2> 0.8). אם לא נמצא proxy מתאים, ה-SNP הוצא מהניתוח.

הרמוניזציה: מערכי נתוני החשיפה והתוצאה הותאמו באמצעות הפונקציה ()harmonise_data מחבילת TwoSampleMR (גרסת R 4.0.5). במחקר זה נקבע הפרמטר action = 2 כדי להתאים באופן אוטומטי את כל ה-SNPs לגדיל הקדמי (forward strand) ולהסיר SNPs פלינדרומיים בעלי אוריינטציית גדיל מעורפלת.

אימות: לאחר ההרמוניזציה, מחקר זה בחן ידנית את מערך הנתונים ההרמוני כדי לאשר שתדירויות אלל האפקט היו עקביות בין נתוני החשיפה לנתוני התוצאה.

ניתוח MR ובדיקות רגישות

הסקה סיבתית בוצעה באמצעות חבילת TwoSampleMR (גרסת R 4.0.5).

ניתוחים ראשוניים ומשניים: מחקר זה יישם את שיטת השקלול לפי השונות ההפוכה (Inverse Variance Weighted - IVW) כגישה הראשונית33. ניתוחים משלימים בוצעו באמצעות שיטות MR-Egger34, חציוני משוקלל ושכיח משוקלל כדי להבטיח את חסון התוצאות35.

הערכות רגישות: הטרוגניות בין המשתנים הכליים (IVs) הוערכה באמצעות מבחן Q של Cochran36 באמצעות הפונקציה mr_heterogeneity(). פליאוטרופיה אופקית הוערכה באמצעות מבחן החסיכה (intercept test) של MR-Egger34 (הפונקציה mr_pleiotropy_test()).

זיהוי ערכים חריגים: במחקר זה נעשה שימוש בחבילת MR-PRESSO לצורך זיהוי ערכים חריגים פוטנציאליים37. פונקציית mr_presso() הופעלה עם 1,000 סימולציות. SNP-ים שזוהו כערכים חריגים (P < 0.05) הוסרו, והערכות הסיבתיות חושבו מחדש כדי לאמת את יציבות התוצאות. בנוסף, בוצע ניתוח leave-one-out כדי להבטיח שהקשר הסיבתי לא נבע מ-SNP בודד38.

תיקון סטטיסטי

כדי לתקן עבור בדיקות מרובות, ערכי P שהתקבלו מניתוחי ה-MR תוקנו באמצעות שיטת FDR (False Discovery Rate). פעולה זו בוצעה באמצעות הפונקציה P.adjust() בתוכנת R עם הפרמטר method = "fdr". קשרים עם ערך P מתוקן (PFDR) < 0.05 נחשבו למשמעותיים סטטיסטית.

תוצאות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

משתנים מכשירים נבחרים

מחקר זה ביצע ניתוח MR תוך שימוש במאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NETs כחשיפה. סך כולל של 106 IVs זוהו למטרה זו, והפרטים מופיעים ב-טבלה משלימה 3. ל-F-statistics של IVs אלו היה ערך ממוצע של 26.46, בטווח שבין מינימום של 20.6 למקסימום של 250.4.

בעת אימוץ T2DM והסיבוכים השונים שלו (חמצת קטונית סוכרתית, סיבוכים כלייתיים, סיבוכים אופתלמולוגיים, סיבוכים נוירולוגיים וסיבוכים של מחזור הדם ההיקפי) כתוצאים, לא ניתן היה להתאים מידע עבור שלושה SNPs בנתוני הסיכום. במחקר זה נעשה שימוש ב-Proxy SNPs (טבלה משלימה 4).

קשר סיבתי בין מאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NETs לבין T2DM וסיבוכיו

הממצאים העיקריים משיטת ה-IVW מוצגים ב-Table 1, בעוד ש-Supplementary Table 5 מפרט את אומדני ה-MR המשלימים שהופקו באמצעות גישות ה-MR-Egger, החציון המשוקלל (weighted median) והשכיח המשוקלל (weighted mode). באופן בולט, תוצאות ה-IVW חשפו קשרים מובהקים סטטיסטית בין רמות interleukin-6 (IL-6) לבין CAD סוכרתי (OR = 0.8997, 95% CI 0.8257–0.9803, P = 0.0158), בדומה לתוצאת שיטת החציון המשוקלל. ממצאים אלו הצביעו על כך ש-IL-6 קשור גנטית לסיבוכים קרדיווסקולריים של סוכרת. בנוסף, תוצאות ניתוח ה-IVW הצביעו על כך ש-NETs קשורים באופן מובהק ל-T2DM עם סיבוכים כלייתיים (OR = 0.97, 95% CI 0.9428–0.998, P=0.0358) ול-T2DM עם סיבוכים במחזור הדם ההיקפי (OR = 1.0342, 95% CI 1.002–1.0673, P = 0.037). תרשים הפיזור (scatter plot) ותרשים היער (forest plot) עבור התוצאות החיוביות שהוזכרו לעיל מוצגים ב-Figure 2.

תוצאות רגרסיית MR Egger העידו על היעדר ראיות לפליאוטרופיה אופקית בניתוח, כפי שמפורט בטבלה 2. בהתבסס על תוצאות ההטרוגניות המוצגות במבחן Cochran’s Q (טבלה 2) וב תרשימי המשפך (Funnel plots) (איור 3A–C), נראה כי אף אחד מערכי ה-P עבור סטטיסטיקת ה-Q אינו נמוך מהסף המקובל של 0.05, מה שמעיד על היעדר הטרוגניות משמעותית בין ה-IVs עבור תוצאי המפתח שנבחנו במחקר זה.

בנוסף, ניתוח MR-PRESSO (טבלה 3) זיהה ערך חריג (rs139237904) כאשר CCN1 נבחר כחשיפה ו-T2DM כתוצאה; התוצאות נותרו לא משמעותיות לאחר השמיטתו. באופן דומה, כאשר MPO היה החשיפה ו-T2DM התוצאה, זוהו שני ערכים חריגים (rs10916508 ו-rs6544660), והתוצאות הלא משמעותיות נמשכו לאחר הסרתם. עבור NGAL כחשיפה עם T2DM כתוצאה, נמצא ערך חריג אחד (rs10497219), והתוצאות השליליות נשמרו לאחר השמיטתו. במקרה של TNF-α כחשיפה ו-T2DM עם קטואצידוזיס כתוצאה, נכח ערך חריג יחיד (rs10103048), והשמיטה לא שינתה את התוצאה הלא משמעותית. עם זאת, כאשר NGAL נקשר ל-T2DM ולסיבוכים נוירולוגיים, זוהו שני ערכים חריגים (rs10497219 ו-rs1287048), ולאחר הסרתם התוצאות הפכו לחיוביות, מה שמעיד על קשר משמעותי. ניתוח ה-‘leave-one-out’ (איור 3D–F) מספק ראיות נוספות לחוסנו של הממצאים. לסיכום, ניתוח MR זה מרמז על תפקיד פוטנציאלי של IL-6 ו-NETs באטיולוגיה של סיבוכים סוכרתיים, דבר המצדיק חקירה נוספת.

זמינות נתונים:

כל הנתונים שהופקו או נותחו במהלך מחקר זה כלולים במאמר זה ו- טבלה משלימה 1, טבלה משלימה 2, טבלה נלווית 3, טבלה נלווית 4ו- טבלה משלימה 5.

figure-results-1
איור 1: מבנה המחקר במחקר MR זה. (A) ניתוחי MR מתבססים על שלוש הנחות יסוד. (B) שרטוט של מבנה המחקר. NETs: neutrophil extracellular traps; T2DM: type 2 diabetes mellitus; SNP: single nucleotide polymorphism; MR: Mendelian randomization; IVW: inverse variance weighted; MR-PRESSO: Mendelian Randomization Pleiotropy RESidual Sum and Outlier אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-2
איור 2: קשר סיבתי בין מאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NETs לבין T2DM וסיבוכיו. (A) תרשים פיזור המראה את הקשר בין רמות IL-6 לבין CAD סוכרתי. (B) תרשים פיזור המראה את הקשר בין NETs לבין T2D עם סיבוכים כלייתיים. (C) תרשים פיזור המראה את הקשר בין NETs לבין T2D עם סיבוכים במחזור הדם הפריפרי. (D) תרשים יער (Forest plot) של רמות IL-6 ב-CAD סוכרתי. (E) תרשים יער של NETs ב-T2D עם סיבוכים כלייתיים. F: תרשים יער של NETs ב-T2D עם סיבוכים במחזור הדם הפריפרי. אנא לחצו כאן כדי להצגת גרסה גדולה יותר של איור זה.

figure-results-3
איור 3: תוצאות ניתוח הרגישות. (A) תרשים משפך (Funnel plot) של רמות IL-6 ב-CAD סוכרתי. (B) תרשים משפך של NETs ב-T2D עם סיבוכים כלייתיים. (C) תרשים משפך של NETs ב-T2D עם סיבוכים במחזור הדם ההיקפי. (D) ניתוח רגישות מסוג leave-one-out של רמות IL-6 ב-CAD סוכרתי. (E) ניתוח רגישות מסוג leave-one-out של NETs ב-T2D עם סיבוכים כלייתיים. (F) ניתוח רגישות מסוג leave-one-out של NETs ב-T2D עם סיבוכים במחזור הדם ההיקפי. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של איור זה.

טבלה 1: קשר סיבתי ראשוני של מאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NETs לסוכרת מסוג 2 (T2DM) ולסיבוכיה אנא לחצו כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה 2: תוצאות של הטרוגניות ופליאוטרופיה של משתנים מכשירים אנא לחצו כאן להורדת טבלה זו.

טבלה 3: תוצאות של MR-PRESSO אנא לחצו כאן כדי להוריד טבלה זו.

טבלה משלימה 1: מקור נתונים של T2DM וסיבוכיו אנא לחץ כאן כדי להוריד קובץ זה.

טבלה נלווית 2: מקור הנתונים של תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs אנא לחץ כאן להורדת קובץ זה.

טבלה משלימה 3: בחירת משתנים אינסטרומנטליים (IVs) אנא לחצו כאן להורדת קובץ זה.

טבלה משלימה 4: רשימת SNP-proxy ששימשו בניתוח ה-MR אנא לחצו כאן להורדת קובץ זה.

טבלה משלימה 5: הערכות MR משלימות לקשרי סיבתיות בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs לבין סיבוכים של T2DM אנא לחצו כאן כדי להוריד קובץ זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחקר זה עושה שימוש בגישת MR של שני מדגמים כדי לבחון את הקשרים בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs לבין T2DM, וכן לסיבוכיו. הממצאים העיקריים מצביעים על קשר הפוך מובהק סטטיסטית בין רמות IL-6 שנחזו גנטית לבין CAD סוכרתית. ממצא זה עשוי לשקף את הארכיטקטורה הגנטית המורכבת של מסלולי האיתות של IL-6, ולא השפעה מגנה ישירה של IL-6 במחזור הדם על סיבוכים קרדיווסקולריים של סוכרת. בנוסף, מחקר זה חושף קשרים בין NETs לבין סיבוכים סוכרתיים שונים, כולל סיבוכים כלייתיים וסיבוכים של מחזור הדם ההיקפי בחולי T2DM. קשרים אלו מדגישים את חשיבות ה-NETs בפתוגנזה של סיבוכים הקשורים לסוכרת ועשויים להנחות אסטרטגיות טיפוליות עתידיות המכוונות למסלולים דלקתיים אלו.

הקשר בין IL-6 לבין CAD סוכרתי היה נושא לוויכוחconsiderable, כאשר מחקרים הציגו נקודות מבט משתנות על תפקידו של IL-6. מחקר זה מציע כי ל-IL-6 עשוי להיות קשר מורכב ושלילי עם סיבוכים קרדיווסקולריים הקשורים לסוכרת. Cupido et al.39 מאששים ממצאים אלו, ומקשרים הפרעה באותות של IL-6 להפחתה בסיכון למחלות קרדיומטבוליות. לעומת זאת, Indumathi et al.40 הבחינו בהיפומתילציה של IL-6 ובביטוי יתר בנבדקים סוכרתיים, מה שמרמז על תפקיד פתוגני ב-CAD. ממצא זה עולה בקנה אחד עם Shrivastav et al.41 ו-Chittaragi et al.42, שזיהו רמות גבוהות של IL-6 כגורמים פרו-דלקתיים וכסממנים פרוגנוסטיים ב-CAD סוכרתי. עם זאת, Liu et al.43 מדגישים את הטבע הדואלי של אדיפוקינים כמו IL-6 באתרוסקלרוזיס; דואליות זו, התלויה בהקשר, מסבירה ככל הנראה את הראיות הסותרות במחקרים השונים. ניתן לייחס את חוסר ההסכמה בממצאים למספר גורמים. ראשית, ההטרוגניות בעיצובי המחקרים, באוכלוסיות החולים ובשיטות ששימשו למדידת רמות ה-IL-6 עשויה להוביל למסקנות משתנות44. שנית, הקשר הכרונולוגי בין IL-6 לבין התפתחות CAD הוא מורכב ועשוי לכלול מרכיבים סיבתיים ותגובתיים כאחד, אשר ייתכן שאינם נתפסים במלואם במחקרי חתך או אפילו בחלק מהמחקרים האורכיים45.

בעוד שהמחקר הנוכחי ומספר מחקרים אחרים מצביעים על קשר משמעותי בין IL-6 לבין CAD סוכרתי, אופיו המדויק של קשר זה נותר מורכב ועשוי להיות מושפע מגורמים ביולוגיים ומתודולוגיים שונים. ראוי לציין כי ניתוח MR זה מעיד על קשר שלילי מובהק סטטיסטית בין רמות IL-6 שנחזו גנטית לבין CAD הקשור לסוכרת (OR=0.8997), דבר העומד בניגוד להשקפה המקובלת לפיה IL-6 מקדם פתולוגיה קרדיווסקולרית. פער זה עשוי להיות מיוחס לתפקיד הכפול והמורכב של IL-6 בדלקת ובתיקון רקמות46, או לאפשרות שהכלים הגנטיים ששימשו בניתוח ה-MR משקפים מסלול ביולוגי ספציפי של סיגנלינג IL-6 השונה מהשפעתו הסיסטמית הכוללת. אין לפרש את הקשר השלילי שנצפה במחקר זה פשוט כמעיד על כך ש-IL-6 בעל אפקט קרדיופרוטקטיבי; אלא, סביר שהוא משקף את המכניזמים הגנטיים המורכבים העומדים בבסיס סיגנלינג של קולטני IL-6. לחלופין, ייתכן שהקשר השלילי שנצפה הושפע ממכניזמים מפצים או מלולאות משוב שליליות בתוך הרשת הדלקתית, שאינן נלכדות במלואן במחקרים תצפיתיים קונבנציונליים. מחקרים עתידיים יעמדו במטרה להבהיר מורכבויות אלו באמצעות מחקרי אורך המתוכננים היטב ועל ידי בחינת הטבע הרב-גורמי של הפתוגנזה של CAD.

תפקידם של NETs בסיבוכים סוכרתיים, ובמיוחד בהקשר של מחלות כליות, מזוהה יותר ויותר כמתווך משמעותי של דלקת ונזק לרקמות. Magaña-Guerrero et al.12 קושרים בין NETs להיפרגליקמיה ולאי-ספיקת כליות ברטינופתיה סוכרתית, וממצבים אותם כסמנים להתקדמות המחלה. בהקשר של מחלת כליות סוכרתית (DKD), Liu et al.47 מדגימים כי ויסות למעלה (upregulation) של midkine מקדם פגיעה בכליות על ידי הגברת היווצרות NETs, בעוד ש-Zheng et al.48 מראים כי NETs משרים תפקוד לקוי של אנדותל הגלומרולרי ופירופטוזיס, השפעות המופחתות על ידי טיפול ב-DNase I. מעבר לממצאים ניסיוניים אלו, ניתוחי MR וטרנסקריפטומיקה שנעשו לאחרונה זיהו גנים ספציפיים הקשורים ל-NETs (למשל, CLIC3, GBP2) כגורמי סיכון סיבתיים לרטינופתיה סוכרתית פרוליפרטיבית28. באופן מעניין, ראיות גנטיות אלו עומדות בניגוד גמור לממצאים אלה של קשר שלילי עם סיבוכים כליתיים, מה שמדגיש את המנגנונים הספציפיים לרקמה של NETs. באופן כולל, המחקר משלים תמונה זו על ידי הדגמת קשר סיבתי משמעותי בין NETs לבין סיבוכים במערכת ההסעה הפריפרית ב-T2DM. מחקר נוסף חיוני כדי לפענח את השילוב המורכב של גורמים שעשויים להשפיע על תפקידם של NETs בנפרופתיה סוכרתית.

אף על פי שמעמד זה זיהה קשר פוטנציאלי בין IL-6 לבין CAD סוכרתית, וכן מתאם משמעותי בין NETs לבין סיבוכים סוכרתיים אחרים, האינטראקציה בין שני המתווכים הדלקתיים הללו מחייבת מחקר נוסף. למרות שבמחקר זה לא נערך ניתוח MR ייעודי לבדיקת נתיב הסיבתי מ-IL-6 ל-NETs, גוף רב של ראיות ניסיוניות מצביע על כך ש-IL-6 עשוי לשמש כגורם מניע ששפיעו נמצא במעלה הזרם של מאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NETs.

מבחינה ביולוגית, IL-6 הוא ציטוקין מרכזי בתגובת הפאזה החריפה49 ונמצא כי הוא מכין נויטרופילים ליצירת NETs50. רמות גבוהות של IL-6, הנצפות לעיתים קרובות במיקרו-סביבה ההיפרגליקמית של סוכרת51, יכולות להפעיל את נתיב השסגנול JAK/STAT3 בתוך נויטרופילים52. הפעלה זו היא שלב קריטי בביטוי יתר תעתוקי של peptidylarginine deiminase 4 (PAD4)53, האנזים האחראי על ציטרולינציה של היסטונים ודה-קונדנסציה של כרומטין54, המהווים סימני היכר של NETosis54. לפיכך, סביר ביולוגית להניח קיומו של ציר פתולוגי רצפי: ביטוי יתר סיסטמי של IL-6 מקדם יצירה מופרזת של NETs, אשר בתורה מחמירה נזק אנדותליאלי ותרומבוזה, ומובילה לסיבוכים סוכרתיים מגוונים, כולל CAD סוכרתי ונגעים כלייתיים. נדרשים מחקרים עתידיים המשתמשים ב-MR רב-משתני או בניתוח תיווך כדי לכמת באופן פורמלי את המידה שבה ההשפעות המזיקות של IL-6 מתווכות על ידי NETs.

למסגרת האנליטית המוצגת כאן יש פוטנציאל משמעותי ליישומים עתידיים. מבחינה מתודולוגית, ניתן להרחיב את זרימת העבודה הזו ל-Multivariable MR (MVMR) כדי לנתח את ההשפעות הסיבתיות העצמאיות של חשיפות מתואמות, ובכך להתייחס למסלולים ביולוגיים מורכבים באופן מקיף יותר. יתרה מכך, שילוב של אנליזות קולוקליזציה (colocalization) באיטרציות עתידיות יסייע באימות העובדה שהחשיפה והתוצאה חולקים את אותו וריאנט סיבתי, ובכך יפחית עוד יותר את הסיכון להטיה של שיווי משקל קישור (linkage disequilibrium bias). מבחינה קלינית, גישה זו מספקת תוכנית עבודה איתנה לתיקוף מטרות תרופתיות. על ידי סינון שיטתי של פליאוטרופיה אופקית (horizontal pleiotropy) והבטחת תקינות הכלי (instrument validity), מסגרת זו יכולה לתעדף מטרות טיפוליות עם סבירות גבוהה יותר להצלחה קלינית. בסופו של דבר, תרגום של תובנות גנטיות אלו למודלים של חיזוי סיכונים עשוי לקדם אסטרטגיות של רפואה מותאמת אישית, על ידי זיהוי תתי-קבוצות בסיכון גבוה אשר יפיקו את המירב מהתערבות מוקדמת.

מחקר זה עושה שימוש בגישת MR של שני מדגמים, המנצלת וריאנטים גנטיים כ-IVs כדי לבסס סיבתיות, ובכך מספקת מסגרת חסונה לבחינת הקשר בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs לבין T2DM והסיבוכים שלו. גישה זו משפרת מחקרים תצפיתיים על ידי שימוש ב-MR כדי להפחית השפעות של משתנים מתבלים וסיבתיות הפוכה. בניגוד ליישומים סטנדרטיים של MR הנשענים אך ורק על אומדני IVW, מחקר זה שילב ניתוחי רגישות חסונים (weighted median, MR-Egger) ובדיקות פליאוטרופיה. מסגרת רב-שיטתית זו מבטיחה שהאומדנים הסיבתיים אינם מונעים על ידי כלים לא תקפים, ובכך מציעה תוקף גבוה יותר מאשר ניתוחים בשיטה אחת. יתרה מכך, השחזור של גישה זו מובטח באמצעות פרוטוקול סטנדרטי ושקוף להרמוניזציה של נתונים ובקרת איכות, המעניק מענה ל"משבר השחזור" הנראה לעיתים קרובות בניתוחים גנטיים מורכבים. מבחינת יעילות וישימות, תהליך עבודה יעיל זה מפחית את העומס החישוב הקשור לאוצרות נתונים ידנית, ומאפשר סריקה מהירה של פנוטיפים מרובים. סקאלביליות זו הופכת את המסגרת לחלה באופן רחב על ניתוחים, אך גם על סריקות אסוציאציה רחבות-פנום (phenome-wide association scans) בעוצמה גבוהה, ומציעה כלי רב-גוני יותר לחקירת רשתות ביולוגיות מורכבות מאשר גישות תצפיתיות קשיחות בעלות שלב יחיד.

עם זאת, המחקר אינו נטול מגבלות. השימוש בכלים גנטיים נשען על ההנחה שהוריאנטים הנבחרים קשורים לחשיפה הנבדקת ולתוצאה דרך נתיב יחיד, דבר שעשוי שלא לשקף באופן מלא את המורכבות של מערכות ביולוגיות. שנית, מכיוון שמחקר זה התבסס בעיקר על נתונים מאוכלוסיות אירופאיות לצורך ניתוח ה-MR, יכולת ההכללה של הממצאים לאוכלוסיות אתניות או גיאוגרפיות אחרות עשויה להיות מוגבלת. שלישית, למרות שמחקר זה זיהה קשרים פוטנציאליים בין תכונות דלקתיות הקשורות ל-NETs לבין T2DM וסיבוכיו, הרשתות הרגולטוריות המולקולריות הספציפיות והמנגנונים הביולוגיים הבסיסיים דורשים הבהרה נוספת באמצעות מחקרים ניסוייים עוקבים. חשוב לציין כי קשרים סיבתיים מובהקים הוגבלו לסיבוכים ספציפיים, כגון CAD סוכרתי, וסיבוכים כלייתיים ומסחרים פריפריים, ולא נצפו באופן אחיד בכל תוצאות הסוכרת שנבדקו. בנוסף, בעוד ש-MR יכול להפחית משתנים מתערבים, הוא אינו יכול להסביר את כל מקורות ההטיה הפוטנציאליים, כגון גורמים סביבתיים שלא נמדדו או סטרטיפיקציה של האוכלוסייה.

יתרה מכך, היכולת להכליל את הממצאים עשויה להיות מוגבלת בשל האוכלוסיות הספציפיות מהן נגזרו הנתונים הגנטיים, ושחזור של התוצאות באוכלוסיות מגוונות נחוץ כדי לאשר אותן. בעוד שמחקר זה רותם סטטיסטיקות סיכום של GWAS בקנה מידה רחב, היעדר נתוני רצף מולטי-אומיקה משלימים מקוהורטים קליניים או ממודלים ניסיוניים מגבילה את היכולת לתקף את המנגנוסים המולקולריים והשינויים התעתוקיים העומדים בבסיס הקשרי הסיבתיות שנצפו. זרימת העבודה של MR זו דרשה התאמות ספציפיות כדי להתמודד עם אתגרים אנליטיים, במיוחד בנוגע להרמוניזציה של אללים ופליאוטרופיה. כדי לצמצם עמימות של גדילים ב-SNPs פלינדרומיים, מחקר זה שינה את תהליך העבודה כך שיחריג באופן קפדני וריאנטים עם תדרי אללים בינוניים (>0.42). בנוסף, כדי לפתור בעיות של פליאוטרופיה אופקית פוטנציאלית, מחקר זה שילב את מבחן השאריות MR-PRESSO בתוך זרימת העבודה. דבר זה אפשר הסרה איטרטיבית של משתנים מכשירים (instrumental variables) שאינם תקפים, ובכך הובטח כי ההערכות הסיבתיות הסופיות היו חסונות ולא הושפעו משאריות פליאוטרופיות.

תקפותם של ממצאי ה-MR נשענת במידה רבה על מספר שלבים אנליטיים קריטיים. ראשית, בחירה קפדנית של משתנים אינסטרומנטליים (IVs) היא חיונית. על ידי הקפדה על ספי thresholds של מובהקות גנומית רחבה (P<5×10-6) וביצוע clumping עבור חוסר שיווי משקל קישור (r2<0.001), מחקר זה צמצם את הסיכון להטיה של כלי מדידה חלש, ובכך הבטיח כי ה-SNPs שנבחרו קשורים באופן חזק לחשיפה. שנית, חסינותם של האומדנים הסיבתיים מותנית בטיפול בפליאוטרופיה אופקית. מחקר זה הסתמך על מספר שיטות משלימות, ובמינה MR-Egger, weighted median ו-MR-PRESSO, אשר סיפקו הגנה נחוצה; העקביות בין שיטות אלה, לצד חיתוכים (intercepts) לא מובהקים ב-MR-Egger, תומכת בהנחה שה-IVs משפיעים על התוצאה אך ורק דרך החשיפה. על אף שוריאציות גנטיות יכולות לשמש כפרוקסי (proxies) לתכונות דלקתיות הקשורות ל-NET, הן עשויות שלא לשקף באופן מלא את התנודות הדינמיות ובזמן אמת של NETosis in vivo, שכן מסלולי הבקרה מהגנוטיפ של קו הנבט (germline) ועד להפעלה תעתוקית ושחרור חלבונים כרוכים בתהליכים ביולוגיים מורכבים שאינם ליניאריים לחלוטין. בנוגע לשחזור, השימוש בסטטיסטיקות סיכום של GWAS בקנה מידה רחב הזמינות לציבור מבטיח שניתן יהיה לאמת ניתוח זה באופן בלתי תלוי. השקיפות של תהליך הניתוח, כולל הפרמטרים הספציפיים להרמוניזציה ולהסרת חריגים, מאפשרת שחזור מדויק של תוצאות אלו. שלבים אלו מחזקים יחד את התקפות הפנימית של מחקר זה ומספקים מסגרת שניתנת לשחזור עבור חקירות עתידיות.

לסיכום, מחקר זה עושה שימוש בגישת MR של שני מדגמים כדי לבחון את הקשר בין מאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NET לבין T2DM וסיבוכיו. הממצאים מצביעים על קשר משמעותי בין רמות IL-6 לבין CAD סוכרתי, ומדגישים תפקיד פוטנציאלי של IL-6 בסיבוכים קרדיווסקולריים של סוכרת. בנוסף, מחקר זה חושף קשרים בין NETs לבין סיבוכים סוכרתיים שונים, כולל סיבוכים כלייתיים וסיבוכים של זרימת דם פריפריאלית, ומדגיש את חשיבותם של מאפיינים דלקתיים הקשורים ל-NET בפתוגנזה של מצבים הקשורים לסוכרת. תובנות אלו תורמות להבנת הגומלין המורכב בין דלקת, מטבוליזם של גלוקוז ובריאות כלי הדם ב-T2DM. בעוד שהמחקר מספק ראיות בעלות ערך לתפקידם של NETs בסיבוכים סוכרתיים, הוא מכיר גם במורכבות של המנגנונים הביולוגיים המעורבים ובצורך במחקר נוסף כדי להבהיר את המסלולים המדויקים ואת המטרות הטיפוליות הפוטנציאליות.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחברים מצהירים כי אין להם ניגודי ברים.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

המחקר נתמך על ידי פרויקט המחקר המרכזי למדעי החברה וטכנולוגיה של Zhongshan (מספר מענק: 2021B3013) ועל ידי פרויקט המחקר למדעי החברה וטכנולוגיה של Zhongshan (מספר מענק: 2022B1080). לממממנים לא היה תפקיד בתכנון המחקר, באיסוף וניתוח הנתונים, בהחלטה לפרסם או בהכנת כתב היד.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
CCN1GWAS CatalogGCST90277805http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90277001-GCST90278000/GCST90277805/harmonised/GCST90277805.h.tsv.gz
Diabetic CADGWAS CatalogGCST006405http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST006001-GCST007000/GCST006405/Fall_gwas_results_any_chd_tab.txt.gz
IL-6GWAS CatalogGCST90010146http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90010001-GCST90011000/GCST90010146/harmonised/33303764-GCST90010146-EFO_0007937.h.tsv.gz
MPOGWAS CatalogGCST90087967http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90087001-GCST90088000/GCST90087967/harmonised/35078996-GCST90087967-EFO_0011039.h.tsv.gz
MPO-DNAGWAS CatalogGCST90013658http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90013001-GCST90014000/GCST90013658/harmonised/33717105-GCST90013658-EFO_0005243.h.tsv.gz
MR-PRESSO PackageGitHub (rondolab)Version 1.0R package used to detect and pleiotropy-corrected causal estimates.
NEGWAS CatalogGCST90162366http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90162001-GCST90163000/GCST90162366/harmonised/GCST90162366.h.tsv.gz
NETsGWAS CatalogGCST90137414http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90137001-GCST90138000/GCST90137414/harmonised/GCST90137414.h.tsv.gz
NGALGWAS CatalogGCST90161504http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST90161001-GCST90162000/GCST90161504/harmonised/GCST90161504.h.tsv.gz
R SoftwareR Foundation for Statistical ComputingVersion 4.0.5Main statistical computing environment used for all analyses.
T2DFINN R9T2Dhttps://storage.googleapis.com/finngen-public-data-r9/summary_stats/finngen_R9_T2D.gz
T2D with ketoacidosisFINN R9E4_DM2KETOhttps://storage.googleapis.com/finngen-public-data-r9/summary_stats/finngen_R9_E4_DM2KETO.gz
T2D with neurological complicationsFINN R9E4_DM2NEUhttps://storage.googleapis.com/finngen-public-data-r9/summary_stats/finngen_R9_E4_DM2NEU.gz
T2D with ophthalmic complicationFINN R9E4_DM2OPTHhttps://storage.googleapis.com/finngen-public-data-r9/summary_stats/finngen_R9_E4_DM2OPTH.gz
T2D with peripheral circulatoryFINN R9E4_DM2PERIPHhttps://storage.googleapis.com/finngen-public-data-r9/summary_stats/finngen_R9_E4_DM2PERIPH.gz
T2D with renal complicationsFINN R9E4_DM2RENhttps://storage.googleapis.com/finngen-public-data-r9/summary_stats/finngen_R9_E4_DM2REN.gz
TNF-aGWAS CatalogGCST004426http://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/gwas/summary_statistics/GCST004001-GCST005000/GCST004426/harmonised/27989323-GCST004426-EFO_0004684.h.tsv.gz
TwoSampleMR PackageGitHub (MRCIEU)Version 0.6.22R package used for performing the Mendelian Randomization analysis.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tanase DM, et al. The intricate relationship between type 2 diabetes mellitus (T2DM), insulin resistance (IR), and nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). J Diabetes Res. 2020;2020:3920196.
  2. Yan Y, et al. Prevalence, awareness and control of type 2 diabetes mellitus and risk factors in Chinese elderly population. BMC Public Health. 2022;22(1):1382.
  3. Dugani SB, Mielke MM, Vella A. Burden and management of type 2 diabetes in rural United States. Diabetes Metab Res Rev. 2021;37(5):e3410.
  4. Rodriquez IM, O'Sullivan KL. Youth-onset type 2 diabetes: Burden of complications and socioeconomic cost. Curr Diab Rep. 2023;23(5):59-67.
  5. Zhang H, et al. Neutrophil, neutrophil extracellular traps and endothelial cell dysfunction in sepsis. Clin Transl Med. 2023;13(1):e1170.
  6. Hidalgo A, et al. Neutrophil extracellular traps: From physiology to pathology. Cardiovasc Res. 2022;118(13):2737-53.
  7. Goggs R, Jeffery U, Levine DN, Li RHL. Neutrophil-extracellular traps, cell-free DNA, and immunothrombosis in companion animals: A review. Vet Pathol. 2020;57(1):6-23.
  8. Tilley DO, et al. Histone H3 clipping is a novel signature of human neutrophil extracellular traps. Elife. 2022;11.
  9. Shafqat A, et al. Emerging role of neutrophil extracellular traps in the complications of diabetes mellitus. Front Med (Lausanne). 2022;9:995993.
  10. Njeim R, et al. NETosis contributes to the pathogenesis of diabetes and its complications. J Mol Endocrinol. 2020;65(4):R65-76.
  11. Helseth R, et al. Glucose associated NETosis in patients with ST-elevation myocardial infarction: An observational study. BMC Cardiovasc Disord. 2019;19(1):221.
  12. Magana-Guerrero FS, et al. Spontaneous neutrophil extracellular traps release are inflammatory markers associated with hyperglycemia and renal failure on diabetic retinopathy. Biomedicines. 2023;11(7).
  13. Ibrahim I, et al. Neutrophil extracellular traps (NETs) are associated with type 2 diabetes and diabetic foot ulcer related amputation: A prospective cohort study. Diabetes Ther. 2024;15(6):1333-48.
  14. Joshi MB, et al. High glucose modulates IL-6 mediated immune homeostasis through impeding neutrophil extracellular trap formation. FEBS Lett. 2013;587(14):2241-6.
  15. Bryk AH, et al. Predictors of neutrophil extracellular traps markers in type 2 diabetes mellitus: Associations with a prothrombotic state and hypofibrinolysis. Cardiovasc Diabetol. 2019;18(1):49.
  16. Park JH, et al. Evaluation of circulating markers of neutrophil extracellular trap (NET) formation as risk factors for diabetic retinopathy in a case-control association study. Exp Clin Endocrinol Diabetes. 2016;124(9):557-61.
  17. Winslow S, et al. Multi-omics links IL-6 trans-signalling with neutrophil extracellular trap formation and Haemophilus infection in COPD. Eur Respir J. 2021;58(4).
  18. Bowden J, Holmes MV. Meta-analysis and Mendelian randomization: A review. Res Synth Methods. 2019;10(4):486-96.
  19. Birney E. Mendelian randomization. Cold Spring Harb Perspect Med. 2022;12(4).
  20. Sanderson E, et al. Mendelian randomization. Nat Rev Methods Primers. 2022;2.
  21. Skrivankova VW, et al. Strengthening the reporting of observational studies in epidemiology using Mendelian randomization: The STROBE-MR statement. JAMA. 2021;326(16):1614-21.
  22. Liang YC, et al. Association of circulating inflammatory proteins with type 2 diabetes mellitus and its complications: A bidirectional Mendelian randomization study. Front Endocrinol (Lausanne). 2024;15:1358311.
  23. Papayannopoulos V, Metzler KD, Hakkim A, Zychlinsky A. Neutrophil elastase and myeloperoxidase regulate the formation of neutrophil extracellular traps. J Cell Biol. 2010;191(3):677-91.
  24. Kindberg KM, et al. IL-6R signaling is associated with PAD4 and neutrophil extracellular trap formation in patients with STEMI. Int J Mol Sci. 2025;26(11).
  25. Mao CL, et al. Neutrophil extracellular traps in rheumatoid arthritis: Pathogenic mechanisms and therapeutic potential. Front Immunol. 2025;16:1717671.
  26. Li H, et al. Hepatocytes and neutrophils cooperatively suppress bacterial infection by differentially regulating lipocalin-2 and neutrophil extracellular traps. Hepatology. 2018;68(4):1604-20.
  27. Li T, et al. Cellular communication network factor 1 promotes retinal leakage in diabetic retinopathy via inducing neutrophil stasis and neutrophil extracellular traps extrusion. Cell Commun Signal. 2024;22(1):275.
  28. Hao L, et al. Transcriptome sequencing and Mendelian randomization analysis identified biomarkers related to neutrophil extracellular traps in diabetic retinopathy. Front Immunol. 2024;15:1408974.
  29. Wang S, et al. Association between periodontitis and temporomandibular joint disorders. Arthritis Res Ther. 2023;25(1):143.
  30. Yin KJ, et al. No genetic causal association between periodontitis and arthritis: A bidirectional two-sample Mendelian randomization analysis. Front Immunol. 2022;13:808832.
  31. Genomes Project C, et al. A map of human genome variation from population-scale sequencing. Nature. 2010;467(7319):1061-73.
  32. Burgess S, Thompson SG, Collaboration CCG. Avoiding bias from weak instruments in Mendelian randomization studies. Int J Epidemiol. 2011;40(3):755-64.
  33. Burgess S, Butterworth A, Thompson SG. Mendelian randomization analysis with multiple genetic variants using summarized data. Genet Epidemiol. 2013;37(7):658-65.
  34. Burgess S, Thompson SG. Interpreting findings from Mendelian randomization using the MR-Egger method. Eur J Epidemiol. 2017;32(5):377-89.
  35. Bowden J, Davey Smith G, Haycock PC, Burgess S. Consistent estimation in Mendelian randomization with some invalid instruments using a weighted median estimator. Genet Epidemiol. 2016;40(4):304-14.
  36. Greco MF, Minelli C, Sheehan NA, Thompson JR. Detecting pleiotropy in Mendelian randomisation studies with summary data and a continuous outcome. Stat Med. 2015;34(21):2926-40.
  37. Verbanck M, Chen CY, Neale B, Do R. Publisher correction: Detection of widespread horizontal pleiotropy in causal relationships inferred from Mendelian randomization between complex traits and diseases. Nat Genet. 2018;50(8):1196.
  38. Cheng H, Garrick DJ, Fernando RL. Efficient strategies for leave-one-out cross validation for genomic best linear unbiased prediction. J Anim Sci Biotechnol. 2017;8:38.
  39. Cupido AJ, et al. Dissecting the IL-6 pathway in cardiometabolic disease: A Mendelian randomization study on both IL6 and IL6R. Br J Clin Pharmacol. 2022;88(6):2875-84.
  40. Indumathi B, Oruganti SS, Sreenu B, Kutala VK. Association of promoter methylation and expression of inflammatory genes IL-6 and TNF-alpha with the risk of coronary artery disease in diabetic and obese subjects among Asian Indians. Indian J Clin Biochem. 2022;37(1):29-39.
  41. Shrivastav D, et al. Comparative analysis of Nε-carboxymethyl-lysine and inflammatory markers in diabetic and non-diabetic coronary artery disease patients. World J Diabetes. 2023;14(12):1754-65.
  42. Chittaragi GH, Ambali AP, Honnutagi R, Ganesh V. Interleukin-6 and uric acid among type 2 diabetes mellitus patients with coronary artery disease. Bioinformation. 2023;19(12):1134-8.
  43. Liu L, et al. Adipokines, adiposity, and atherosclerosis. Cell Mol Life Sci. 2022;79(5):272.
  44. Hua MJ, Butera G, Akinyemi O, Porterfield D. Biases and limitations in observational studies of long COVID prevalence and risk factors: A rapid systematic umbrella review. PLoS One. 2024;19(5):e0302408.
  45. Savitz DA, Wellenius GA. Can cross-sectional studies contribute to causal inference? It depends. Am J Epidemiol. 2023;192(4):514-6.
  46. Hirano T. IL-6 in inflammation, autoimmunity and cancer. Int Immunol. 2021;33(3):127-48.
  47. Liu G, Ren X, Li Y, Li H. Midkine promotes kidney injury in diabetic kidney disease by increasing neutrophil extracellular traps formation. Ann Transl Med. 2022;10(12):693.
  48. Zheng F, et al. Neutrophil extracellular traps induce glomerular endothelial cell dysfunction and pyroptosis in diabetic kidney disease. Diabetes. 2022;71(12):2739-50.
  49. Schmidt-Arras D, Rose-John S. IL-6 pathway in the liver: From physiopathology to therapy. J Hepatol. 2016;64(6):1403-15.
  50. Xiao Y, et al. Cathepsin C promotes breast cancer lung metastasis by modulating neutrophil infiltration and neutrophil extracellular trap formation. Cancer Cell. 2021;39(3):423-37.e427.
  51. Sater MS, et al. Plasma IL-6, TREM1, uPAR, and IL6/IL8 biomarkers increment further witnessing the chronic inflammation in type 2 diabetes. Horm Mol Biol Clin Investig. 2023;44(3):259-69.
  52. Martino N, et al. Endothelial SOCS3 maintains homeostasis and promotes survival in endotoxemic mice. JCI Insight. 2021;6(14).
  53. Akboua H, Eghbalzadeh K, Keser U, Wahlers T, et al. Impaired non-canonical transforming growth factor-β signalling prevents profibrotic phenotypes in cultured peptidylarginine deiminase 4-deficient murine cardiac fibroblasts. J Cell Mol Med. 2021;25(20):9674-84.
  54. Thiam HR, et al. NETosis proceeds by cytoskeleton and endomembrane disassembly and PAD4-mediated chromatin decondensation and nuclear envelope rupture. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020;117(13):7326-37.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

6

מאמרים קשורים