הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.

מאמר שיטה

ניתוח מטבולומי של תהודה מגנטית גרעינית של מדיה של תרבית עוברים אנושיים משומשים: אימות שיטה ושיקולים טכניים

98 צפיות

⸱

DOI:

10.3791/71285

⸱

31 ביולי 2026

 ,  ,  ,  , 
1Department of Reproductive Medicine and Gynaecological Endocrinology, University Medical Centre Maribor, 2Faculty of Medicine, University of Ljubljana, 3National Institute of Chemistry, 4EN-FIST Centre of Excellence, 5Faculty of Chemistry and Chemical Technology, University of Ljubljana, 6Department of Reproductive Science, Manipal Academy of Higher Education

במאמר זה

סיכום

כאן אנו מציגים פרוטוקול לאיסוף, הכנה וניתוח מדיום תרבית עוברים אנושיים משומשים באמצעות ספקטרוסקופיית תהודה מגנטית גרעינית (NMR), המאפשר גילוי שכפול של מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך מדגימות בקנה מידה מיקרוליטר בתנאי תרבית קלינית שגרתית.

תקציר

מדיה של תרבית עוברים אנושית מנוצלת מכילה מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך שיכולים לספק קריאה לא פולשנית של פיזיולוגיית העובר לפני ההשרשה. עם זאת, ניתוח מטבולומי מבוסס תהודה מגנטית גרעינית (NMR) של דגימות אלו הוא אתגר טכני, שכן תנאי תרבית עוברים שגרתיים כוללים נפחי מיקרוליטרים, תוספי חלבון ושכבות שמן פרפין שמייצרות אותות רקע ופוגעות באיכות הספקטרום. כאן, אנו מציגים תהליך מטבולומיקה אופטימלי של NMR למדיות תרביות עוברים משומשות, הכולל איסוף טיפות מבוקר למזעור זיהום שמן, ציפוריים של צינור אתילן פרופילן (FEP) מפלואורים לבידוד כימי של הדגימה מהייחוס החיצוני (TMSP) תוך התאמת נפחי מיקרוליטרים, ורכישה באמצעות רצף פולס Carr-Purcell-Meiboom-Gill לדיכוי אותות רקע מקרומולקולריים. הפרוטוקול מאפשר גילוי וכימות עקבי של מטבוליטים בעלי משקל מולקולי נמוך מעוברים אנושיים שגודלו בנפרד, ותומך בניתוח שכפול בתנאי מעבדה שגרתיים. עקב אתגרים טכניים רבים, יש לאמת את השיטה כראוי לפני שניתן להשתמש בה למטרות מחקר או קליניות.

מבוא

במהלך התפתחות טרום-השתלשה במבחנה, העוברים צורכים ומשחררים באופן רציף מטבוליטים בעלי משקל מולקולי נמוך לתוך המדיום הסובב. לכן, הרכב מדיום תרבית עוברים משומש (SECM) משקף פעילות מטבולית של העובר ומספק קריאה תפקודית לא פולשנית של פיזיולוגיית העובר וכישורים התפתחותיים 1,2. ניתוח טביעת רגל מטבולית זו עשוי להשלים שיטות הערכה קונבנציונליות ולשפר אסטרטגיות בחירת עוברים בטכנולוגיית רבייה מסייעת 3,4. בפרט, שינויים בחוזות האמינו ובמחזור הפחמימות נקשרו לפוטנציאל ההתפתחות והחיוניות של העובר 5,6,7.

ספקטרוסקופיית תהודה מגנטית גרעינית (NMR) משמשת באופן נרחב לפרופילינג מטבוליטי לא ממוקד של דגימות ביולוגיות מגוונות, כולל מדיה של תרבית עוברים משומשים 8,9,10. עם זאת, ניתוח הדגימות הללו נותר מאתגר אנליטית11. בפרקטיקה קלינית שגרתית, עוברים מתרבים במיקרו-סביבות מוגדרות שנועדו לחקות מצבים פיזיולוגיים. מדיום תרבית מושלמים בחלבונים, בדרך כלל אלבומין, כדי לייצב לחץ אוסמוטי, לקשור תרכובות רעילות ולספק מולקולות נשא לליפידים ולגורמי גדילה התומכים בהתפתחות תקינה12. כדי למנוע אידוי ולשמור על ריכוזי מומס קבועים, טיפות תרבית מונחות על שמן פרפין סטרילי13.

ליפידים שמקורם ברכיבי שמן וחלבון שכביים מייצרים אותות רקע רחבים שמסתירים תהודה צרה של מטבוליטים בעלי משקל מולקולי נמוך כגון גלוקוז, פירובט וחומצות אמינו. יתרה מזאת, ניתוח נפחי דגימות מיקרוליטר בצינורות NMR סטנדרטיים בקוטר 5 מ"מ דורש דילול משמעותי כדי להגיע לנפח הפעיל של סליל ה-RF. ירידה זו בריכוז האנליטים מפחיתה קשות את יחס האות לרעש (S/N), מסתירה מטבוליטים בעלי שפע נמוך ומקשה על כימות שחזורי. למרות שמחקרים רבים יישמו מטבולומיקה מבוססת NMR על מדיות תרביות עוברים אנושיות משומשות, היעדר פרוטוקולי איסוף והכנה סטנדרטיים וניתנים לשחזור הגביל את השכפול ואת ההשוואה בין המחקרים 8,9,11.

כאן, אנו מציגים תהליך מטבולומיקה מבוסס NMR (איור 1) שנועד להתגבר על אתגרים טכניים הקשורים לדגימה וניתוח מדיה של תרבית עוברים אנושית. הגישה משלבת איסוף טיפות מבוקרת להפחתת העברת נפט, קליטת נפח מיקרוליטר באמצעות ציפוי אתילן פרופילן מפלואור (FEP) למניעת ארטיפקטים של דילול, והפחתת אותות מקרומולקולרית באמצעות רצף פולסים מסוג Carr-Purcell-Meiboom-Gill (CPMG).

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

פרוטוקול

מחקר זה נערך בין ינואר לאפריל 2023 במחלקה לרפואה רבייתית ואנדוקרינולוגיה גינקולוגית, במרכז הרפואי האוניברסיטאי מריבור, סלובניה. ניתוח NMR בוצע במכון הלאומי לכימיה בלובליאנה, סלובניה. התקבלה הסכמה מדעת בכתב מכל המשתתפים. הוא קיבל אישור הן מוועדת האתיקה המוסדית (מס' UKC-MB-KME-1/21) והן מהוועדה הלאומית לאתיקה רפואית (מס' 0120-37/2021/15).

1. עיצוב מחקר

הערה: המחקר ניתח מדיה של תרבית עוברים אנושית באמצעות מטבולומיקה מבוססת NMR.

  1. איסוף דגימות לאחר תרבית עוברים ממושכת לאחר הזרקת זרע תוך-ציטופלזמית (ICSI). אסוף מספר שווה של דגימות בקרה מודגרות שלא נוצלו.

2. איסוף דגימות

  1. אסוף דגימות מדיה של תרבית עוברים (SECM) לאחר דגירה של עוברים, כפי שמודגם באיור 2.
  2. לאחר הסרת העובר מטיפת התרבית, יש לשאוב בזהירות את שכבת השמן העודפת ממשטח הצלחת מבלי להפריע לתווך (איור 2, שלב 1).
  3. באמצעות פיפטה סטרילית, שואבים כ-35 מיקרו-ליטר של מדיום תרבית מהטיפה המקורית, ומשאירים כ-5 מיקרו-ליטר מאחור כדי למנוע משיכת שמן שטח שאריתי. העבר נפח זה לתבנית פטרי סטרילית ליצירת טיפה חדשה (איור 2, שלב 2).
  4. מתחת למיקרוסקופ סטריאו, בדוק ויזואלית את הטיפה החדשה. שואבים בזהירות כ-30 מיקרו-ליטר מהטיפה הזו, שוב להשאיר כ-5 מיקרו-ליטר מאחור כדי למזער את העברת הנפט. העבר נפח זה למקום סטרילי נוסף ליצירת טיפה נקייה יותר (איור 2, שלב 3).
  5. בדוק ויזואלית את הטיפה השנייה בהגדלה. זהה אזורים שבהם טיפות שמן הכי פחות בולטות. הכנס את קצה הפיפטה לאזור זה ושאוב כ-25 מיקרו-ליטר של מדיום, שוב משאיר כ-5 מיקרוליטר מאחור כדי למזער את העברת השמן (איור 2, שלב 4).
  6. העבר מיד את 25 המיקרולטר שנאספו לצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי וללא RNase. הימנעו ממגע בדפנות הפנימיות של הצינור בזמן הפיזור הדגימה כדי למנוע זיהום ואובדן דגימה. הקפיאו מיד את כל הדגימות שנאספו בחנקן נוזלי ואחסנו בטמפרטורה של -80°C עד לניתוח NMR (איור 2, שלב 5).
  7. איסוף טיפות בקרה מודגרות לא מנוצלות (מדיום מודגר ללא עוברים) שהוכנו, דגרו ועובדו בתנאי תרבית זהים תוך שימוש באותם צלחות תרבית, שמן שכבה, משך הדגירה, סביבת הדגירה והליך הטיפול שתוארו לעיל, כדי למזער שונות סביבתית והטיה שיטתית פוטנציאלית.
    הערה: הקפדה קפדנית על העברת טיפות רציפה ובדיקה ויזואלית מפחיתה משמעותית את זיהום השמן. בשלב זה, ניתן להשהות את הניסוי ולהמשיך לפני עיבוד דגימות נוסף לרכישת NMR.

3. הכנת דגימה לניתוח NMR

  1. הפשרה דגימות בטמפרטורת החדר למשך ~10 דקות.
  2. הכינו תערובת NMR:
    1. העבר 25 מיקרוליטר SECM לצינור מיקרוצנטריפוגה בנפח 1.5 מ"ל. הוסיפו 200 מיקרו-ליטר D₂O. מערבבים אותו במשך 10 שניות ואז צנטריפוגה ב-1000 × גרם ל-10 שניות בטמפרטורת החדר.
  3. הכנסת עומס: העבר 225 מיקרוליטר מהתערובת לתוך ציפוי FEP.
  4. הכן את צינור ההתייחסות החיצוני.
    1. מלאו צינור NMR בקוטר 5 מ"מ ב-150 מיקרוליטר D₂o המכיל 1 מ"מ 3-(טרימתילסילי)פרופיונית-2,2,3,3-d4 מלח נתרן (TMSP-d4).
  5. הרכבת הדגימה: הכנס את הכניסה של FEP לצינור ה-NMR ואוטם עם פרפילם.

4. רכישת NMR ועיבוד ספקטרלי

  1. השגת 1H-CPMG באמצעות רצף הפולסים של Bruker cpmgpr1d עם: 64 סריקות; 65,536 נקודות נתונים; עיכוב הרפיה: 8 שניות; רוחב ספקטרלי: 11.9 קילוהרץ; זמן הד: 400 מיקרושניות × 80 לולאות (מסנן T₂ אפקטיבי 32 מילישניות); זמן רכישה כולל: ~15 דקות.
    הערה: משך מסנן CPMG T₂ האפקטיבי של 64 מילישניות נבחר בהתבסס על פרוטוקולי מטבולומיקה מבוססים לדגימות ביולוגיות המכילות חלבונים, כאשר ערך זה מספק דיכוי יעיל של אותות מקרומולקולריים תוך שמירה על תהודות מטבוליטים במשקל מולקולר נמוך14.
  2. ביצוע עיבוד ספקטרלי:
    1. השגת ספקטרום טרנספורמציית פורייה.
    2. הפעילו הרחבת קו אקספוננציאלית של 0.3 הרץ.
    3. בצע תיקון פאזה ותיקון בסיס.
    4. ספקטרום הפניה ל-TMSP-d4 ב-0 ppm.
    5. הזזות כימיות ייחוס (δ) לאות TMSP-d4 החיצוני ב-0 ppm.
      הערה: מכיוון שתערובת הדגימה בתוך ציפוי ה-FEP (225 מיקרוליטר) ותמיסת ההתייחסות החיצונית TMSP-d4 בפער הקואקסיאלי החיצוני (150 מיקרוליטר) תופסות גאומטריות ונפחים פיזיקליים מובחנים בתוך חלון גילוי סליל NMR פעיל, עוצמות האות המוחלטות שלהם אינן מתייחסות ל-1:1. כימות מוחלט ישיר באמצעות ההתייחסות החיצונית דורש עקומת כיול גאומטרית ספציפית למערכת. לכן, בהתחשב בנפחי הדגימה הקבועים והדיוק הניתן לשחזור גבוה בפיפטינג של פרוטוקול זה, השתמשו באינטגרלים גולמיים של דלי ישירות למעקב אחר שינויים מטבוליים יחסיים בין הדגימות, תוך התעלמות מהצורך בנירמול חיצוני או בנירמול עוצמת סכום כולל.
  3. ביצוע סיבוב ספקטרלי:
    1. יש להוציא את אזור תהודת המים (למשל, 4.65–5.00 ppm) ואת אזור ההתייחסות של TMSP-d4 (למשל -0.05–+0.05 ppm) לפני התייחסות למים.
    2. חלק ספקטרום לדליים ברוחב משתנה כדי למנוע פיצול פסגות.
    3. השתמשו באינטגרלים גולמיים של דלי לניתוח סטטיסטי במקום לנרמול לאות TMSP-d4 החיצוני, שכן הייחוס מבודד פיזית בנפח הצינור החיצוני. גישה זו מונעת טעויות כימות הנובעות מהנפחים הפעילים השונים של האינסרט לעומת הצינור החיצוני.
    4. ייצוא אינטגרלי דלי כמטריצת נתונים נומרית לניתוח סטטיסטי.
      הערה: כל "bucket" (או bin) מייצג את האינטגרל המספרי המסוכם של כל אותות NMR בטווח ppm מוגדר. בעוד שאינטגרלים אלו משקפים את הריכוז היחסי של הקבוצות הכימיות בטווח זה, דלי בודד עשוי להכיל אותות ממספר מטבוליטים חופפים או רק חלק מהאות הכולל של מטבוליט מסוים.

5. ניתוח סטטיסטי

  1. ייבוא ספקטרום H-CPMG מעובד אחדלפייתון (v3.12) באמצעות nmrglue15.
  2. הסר מים ואזורים ספקטרליים של TMSP-d4.
  3. יצא אינטגרלים של bucket לניתוח.
  4. בצע בדיקות סטטיסטיות באמצעות SciPy (גרסה 1.14.1):
    1. הערך את הנורמליות של כל דלי ספקטרלי באמצעות מבחן שפירו–וילק.
    2. יישמו ANOVA חד-כיווני (עבור נתונים מבוזרים רגיל) או Kruskal-Wallis (עבור נתונים לא פרמטריים) לזיהוי דליים עם הבדלים סטטיסטיים משמעותיים בין מדיה בקרה מודגרת שלא מנוצלת לבין מדיה משומשת.
    3. לדליים המראים הבדלים משמעותיים, יש לבצע הקצאה מבנית באמצעות שילוב של ניסויי NMR חד-ממדי ודו-ממדי: 1 H-13C HSQC, 1 H-13C HMBC, ו-1 H-1H H COSY.
    4. השוו את הקורלציות הדו-ממדיות שנצפו לבין מסדי נתונים סטנדרטיים (למשל, HMDB) כדי לאמת את זהות המטבוליטים התורמים לדליים המפלים.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

תוצאות

תהליך העבודה האנליטי לפרופיל מטבולומי לא ממוקד של תרבית עוברים משומשת מסוכם באיור 1.

הסרת זיהום שמן במהלך הדגימה
איור 2 ממחיש את תהליך העברת הטיפות הסדרתי המשמש להפחתת העברת שמן שכבת הכיסוי. דגימות שנאספו ללא פיפטינג זהיר הראו תהודות רחבות של פחמימנים החוצה את האזור האליפטי של הספקטרום (δ 0.5–2.3 ppm), מה שגרם לעיוות בסיסי משמעותי ולהסתרת אותות מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך (איור 3A, עק...

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

במחקר זה, התמודדנו עם אתגרים אנליטיים מרכזיים הקשורים לזיהוי וכימות מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך במדיה של תרבית עוברים מנוצלת באמצעות מטבולומיקה NMR לא ממוקדת. התוצאות שלנו מראות כי זרימת העבודה האופטימלית מאפשרת רכישת ספקטרום איכותי ועשיר במידע, המתאימים לזיהוי אמין של מטבוליטים בעלי משקל מולקולרי נמוך.

העברת טיפות רציפה זהירה הוכיחה את עצמה כחיונית להפחתת זיהום שמן, אשר בדרך כלל יצרה תהודות רחבות שהסתירו אותות מטבוליטים בעלי משקל מולקולר נמוך שמעניינים....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

המחברים מצהירים שאין להם אינטרסים פיננסיים מתחרים.

תודות

עבודה זו נתמכה על ידי סוכנות המחקר והחדשנות הסלובנית (ARIS) [מספר פרויקט P3-0327].

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה
שםחברהמספר קטלוגהערות
5 mm FEP tube linerSP Wilmad-LabGlass4682701Inner insert for coaxial NMR
5 mm NMR tubeSP Wilmad-LabGlass535-PP-7-SBOuter tube
6-well culture plateOosafeOOPW-SW02Embryo culture dish
Cryogenic liquid nitrogenMesserContact manufacturerSample snap-freezing
Deuterium oxide (D2O)EurisotopD214LNMR solvent
Micropipette (10–100 µL)Eppendorf4924000053Adjustable volume pipette
Microcentrifuge tubes, 1.5 mL, RNase-freeEppendorfN216966NSample collection and storage
Mineral oilVitrolifeVTL-10029Culture droplet overlay
NMR spectrometer, 600 MHzBrukerhttps://www.bruker.com/en/products-and-solutions/mr/nmr/avance-nmr-spectrometer.htmlSpectral acquisition
Pasteur pipetteFalconFAL-357575Droplet transfer
Pipette, single-channel mechanicalSartorius728060Sample handling
Pipette tips, sterileEppendorf22491148Compatible with micropipette
Pipette tips, sterile filterSartorius790201FAerosol barrier
Sequential G-series culture mediaVitrolifeVTL-10143Embryo culture medium
TMSP-d4 (sodium 3-trimethylsilylpropionate-d4)Cambridge Isotope LaboratoriesDLM-48-1Chemical shift reference
Tubes, Safe-LockEppendorf0030121589Storage tubes

מקורות

  1. Seli E, Botros L, Sakkas D, Burns DH. Non-invasive metabolomic profiling of embryo culture media using proton nuclear magnetic resonance correlates with reproductive potential of embryos in women undergoing in vitro fertilization. Fertil Steril. 2008;90(6):2183-2189.
  2. Vergouw CG et al. Metabolomic profiling by near-infrared spectroscopy as a tool to assess embryo viability: a novel, non-invasive method for embryo selection. Hum Reprod. 2008;23(7):1499-1504.
  3. Eldarov C et al. LC-MS analysis revealed significantly different metabolic profiles in spent culture media of human embryos with distinct morphology, karyotype and implantation outcomes. Int J Mol Sci. 2022;23(5):2706.
  4. Simopoulou M et al. Editorial: The role of metabolomics in ART: from diagnosis to treatment. Front Endocrinol (Lausanne). 2025;16:1558561.
  5. Gardner DK et al. Human and mouse embryonic development, metabolism and gene expression are altered by an ammonium gradient in vitro. Reproduction. 2013;146:49-61.
  6. Sturmey RG, Hawkhead JA, Barker EA, Leese HJ. DNA damage and metabolic activity in the preimplantation embryo. Hum Reprod. 2009;24:81-91.
  7. Sturmey RG, Brison DR, Leese HJ. Assessing embryo viability by measurement of amino acid turnover. Reprod Biomed Online. 2008;17:27-33.
  8. Nadal-Desbarats L et al. Is NMR metabolic profiling of spent embryo culture media useful to assist in vitro human embryo selection? Magn Reson Mater Phy. 2013;26:193-202.
  9. Wallace M et al. 1H NMR-based metabolic profiling of Day 2 spent embryo media correlates with implantation potential. J Assist Reprod Genet. 2014;31:58-63.
  10. Salmerón AM et al. Solution NMR in human embryo culture media as an option for assessment of embryo implantation potential. NMR Biomed. 2021;34:e4536.
  11. Kirkegaard K et al. NMR metabolomic profiling of Day 3 and 5 embryo culture medium does not predict pregnancy outcome in good prognosis patients. Hum Reprod. 2014;29(11):2413-2420.
  12. Otsuki J, Nagai Y, Chiba K. Damage of embryo development caused by peroxidized mineral oil and its association with albumin in culture. Fertil Steril. 2009;91(5):1745-1749.
  13. Martinez CA et al. The overlaying oil type influences in vitro embryo production: differences in composition and compound transfer into incubation medium between oils. Sci Rep. 2017;7:10505.
  14. Beckonert O et al. Metabolic profiling, metabolomic and metabonomic procedures for NMR spectroscopy of urine, plasma, serum and tissue extracts. Nat Protoc. 2007;2:2692-2703.
  15. Helmus JJ, Jaroniec CP. Nmrglue: an open-source Python package for the analysis of multidimensional NMR data. J Biomol NMR. 2013;55:355-367.
  16. Siristatidis C et al. Why has metabolomics so far not managed to efficiently contribute to the improvement of assisted reproduction outcomes? Diagnostics (Basel). 2021;11(9):1602.
  17. Miao SB et al. Glutamine as a potential non-invasive biomarker for human embryo selection. Reprod Sci. 2022;29(6):1721-1729.
  18. Ferrick L, Lee YSL, Gardner DK. Metabolic activity of human blastocysts correlates with their morphokinetics, morphological grade, KIDScore and artificial intelligence ranking. Hum Reprod. 2020;35(9):2004-2016.
  19. Boyama BA et al. Homocysteine in embryo culture media as a predictor of pregnancy outcome in assisted reproductive technology. Gynecol Endocrinol. 2016;32(3):193-195.
  20. Yazdani A, Halvaei I, Boniface C, Esfandiari N. Effect of cytoplasmic fragmentation on embryo development, quality, and pregnancy outcome: a systematic review of the literature. Reprod Biol Endocrinol. 2024;22:1-40.
  21. Scott R et al. Non-invasive metabolomic profiling of human embryo culture media using Raman spectroscopy predicts embryonic reproductive potential: a prospective blinded pilot study. Fertil Steril. 2008;90:77-83.
  22. Vergouw CG et al. Day 3 embryo selection by metabolomic profiling of culture medium with near-infrared spectroscopy as an adjunct to morphology: a randomized controlled trial. Hum Reprod. 2012;27(8):2304-2311.
  23. Figoli CB et al. A robust metabolomics approach for the evaluation of human embryos from in vitro fertilization. Sci Rep. 2024;14(1):17447.
  24. Olcay IO et al. Non-invasive amino acid turnover predicts human embryo aneuploidy. Gynecol Endocrinol. 2022;38(8):461-466.
  25. Tesarik J. Non-invasive biomarkers of human embryo developmental potential. Int J Mol Sci. 2025;26(10):4928.
  26. Alizadeh Moghadam Masouleh A et al. Embryo metabolism as a novel non-invasive preimplantation test: nutrients turn over and metabolomic analysis of human spent embryo culture media (SECM). Hum Reprod Update. 2025;31(5):405-444.
  27. Hajnajafi K, Iqbal MA. Mass-spectrometry based metabolomics: an overview of workflows, strategies, data analysis and applications. Proteome Sci. 2025;23:5.
  28. Emwas AH et al. NMR spectroscopy for metabolomics research. Metabolites. 2019;9(7):123.
  29. Giera M, Yanes O, Siuzdak G. Metabolite discovery: biochemistry's scientific driver. Cell Metab. 2022;34(1):21-34.
  30. Lippi G et al. Influence of hemolysis on routine clinical chemistry testing. Clin Chem Lab Med. 2006;44:311-316.
  31. An Z, Shi C, Li P, Liu L. Stability of amino acids and related amines in human serum under different preprocessing and pre-storage conditions based on iTRAQ®-LC-MS/MS. Biol Open. 2021;10(2):bio055020.
  32. Fomenko MV, Yanshole LV, Tsentalovich YP. Stability of metabolomic content during sample preparation: blood and brain tissues. Metabolites. 2022;12(9):811.
  33. Wishart DS et al. HMDB 5.0: The Human Metabolome Database for 2022. Nucleic Acids Res. 2022;50(D1):D622-D631.

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

תגיות

רפואהגיליון 233גיליון 233ערך ריקגיליוןספקטרוסקופיית NMRמטבוליזומיקהזיהום בשמןCPMG
צרו קשר
המליצו לספרייה

פרטיות

תנאי שימוש

מדיניות

זכויות יוצרים © 2026 MyJoVE Corporation. כל הזכויות שמורות.